CN112294993B - 一种有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法及其应用，属于脐带血采集前消毒处理技术领域。一种有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法，包括以下步骤：(1)将脐带放在无菌巾上，用含消毒剂的纱布对脐带进行包裹消毒；(2)另取含消毒剂的纱布，选择胎盘断端的脐带4～5cm位置作为穿刺部位，对穿刺部位擦拭消毒，由脐带胎盘短端向胎盘方向擦拭穿刺点，不能来回擦拭。本发明所选用的材料为含消毒剂的纱布或有尾纱条，材料容易获得。本消毒方法操作的用时不超过3分钟，不会对医护人员正常的治疗措施造成影响，也不会对脐带血的质量造成影响。

Description

一种有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法及其 应用
技术领域
本发明属于脐带血采集前消毒处理技术领域，特别涉及一种有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法及其应用。
背景技术
长久以来，脐带血被认为是生物废物直接丢弃，随着科学研究的不断进步，人们才渐渐意识到脐带血的重要性。1988年，法国开展了世界上首例同胞脐带血移植治疗范可尼贫血，由此人们开始认识到脐带血的医用价值，脐带血逐渐发展成为继骨髓和外周血后的第三大造血干细胞来源。脐带血富含各种干细胞和各种细胞因子，目前已被广泛开展应用于再生医疗、神经修复的临床试验中。
由于脐带血从开始采集到完成处理要经过很多步骤，整个过程难有微生物污染的风险，因此所有的移植用脐带血都必须进行微生物检测，包括需氧菌、厌氧菌和真菌，检测结果阴性是脐带血造血干细胞合格的条件之一。在不同分娩方式里，顺产后采集的脐带血，其受污染的可能性是最高的。虽然国内外已有先后文献报道脐带血不同消毒方法，但根据广东省脐带血造血干细胞库的实际对比发现，其消毒方法并未能完全满足广东省脐带血造血干细胞库的脐血污染率要求。因此，严格规范分娩后脐带血采集深度消毒操作方式，是降低脐带血采集时的微生物污染率的最重要一环。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种可有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒处理方法。
本发明的另一目的在于提供上述可有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒处理方法得到的脐带的应用。
本发明的上述目的通过以下技术方案实现：
一种有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法，包括以下步骤：
(1)将脐带放在无菌巾上，用含消毒剂的纱布对脐带进行包裹消毒；
(2)另取含消毒剂的纱布，选择胎盘断端的脐带4～5cm位置作为穿刺部位，对穿刺部位擦拭消毒，由脐带胎盘短端向胎盘方向擦拭穿刺点，不能来回擦拭。
步骤(1)中所述的脐带优选为整条脐带。
步骤(1)中所述的纱布包括有尾纱条。
步骤(1)中所述的消毒剂包括碘伏和75％酒精中的至少一种。
步骤(1)中所述的含消毒剂的纱布由消毒剂浸泡纱布得到。
步骤(1)中所述的对脐带进行包裹消毒的次数优选为1～2次；更优选1次。
步骤(1)中所述的包裹消毒的时间为3～7s；优选为5s。
步骤(1)中所述的含消毒剂的纱布对脐带进行包裹消毒后进行废弃处理。
步骤(2)中所述的擦拭消毒次数优选为2～3次；更优选2次。
由所述的有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法得到的脐带在临床医学中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下优点及有益效果：
(1)本发明所选用的材料为含消毒剂的纱布或有尾纱条，材料容易获得。本消毒方法操作的用时不超过3分钟，不会对医护人员正常的治疗措施造成影响，也不会对脐带血的质量造成影响。本方法操作步骤简单方便，可行性高，且能有效降低脐带血在采集过程中导致的污染率，并不会影响脐带血质量，采集的脐带血符合正常临床应用需求。
(2)本发明所述的有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法安全、省时、可重复性高，消毒采集后的脐带血污染率低且不影响脐带血质量符合临床需求，能够有效减少脐带血入库的废弃率，为脐带血库提供了更多优质脐带血，提高入库量。
(3)本发明所述方法能够有效降低采集的脐带血的污染率，提高脐带血入库的比例，减少脐带血制备好了但却因污染而导致的需要废弃所带来的检测费用、制备人工以及冻存血袋等的费用损失。
附图说明
图1为用含碘伏的纱布包裹消毒整条脐带的示意图。
图2为由脐带胎盘短端向胎盘方向对穿刺部位进行擦拭消毒的示意图。
图3为脐带血采集过程示意图。
图4为本实施例1的方法(深度消毒组)与对比例1的常规方法(对照组)所采集的脐带血污染率对比图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例中所涉及的试剂、方法，如无特殊说明，均为本领域常用的试剂和方法，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
脐带血采血袋(含28mL血液保存液)购自山东威高集团医用高分子制品股份有限公司；脐带来自广东省取得《医疗机构执业许可证》的二级以上妇产医院或综合医院。
实施例1：
一种有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法，包括如下步骤：
(1)采集用脐带和胎盘置于采血台
产妇分娩时，先在采血台上铺一张无菌巾，将脐带放在无菌巾上，然后开始消毒采集脐带血。
(2)对脐带进行深度消毒
用含碘伏的纱布，包裹消毒整条脐带1次，维持包裹消毒5秒，如图1所示。废弃包裹消毒的纱布或有尾纱条，取一条新的含碘伏的纱布，选择胎盘断端的脐带4～5cm位置作为穿刺部位，对穿刺部位实行擦拭消毒2次，由脐带胎盘短端向胎盘方向擦拭穿刺点，不能来回擦拭，如图2所示。
(3)采集后的脐带血运送回脐带血库进行制备与检测
采集后的脐带血运输回脐血库进行常规有核细胞制备，并对脐带血进行总有核细胞数，病毒五项，细菌/霉菌污染率，有核细胞活率，CD34+细胞含量，CFU-GM细胞计数等常规检测。
自体脐带血有核细胞制备方法：自体脐带血采血袋经过传送窗进入万级无菌操作室，将脐血转移至三联塑料血袋，血袋倒置并通过低温离心机进行倒置离心，倒置离心的条件为4～15℃，离心力50g，时间为8min，去掉离心出来的红细胞；闭合血夹，血袋正置，通过低温离心机进行正置离心，正置离心的条件为4～15℃，离心力400g，时间为10min，分离出有核细胞与血浆后，用分浆夹排去多余血浆，获得有核细胞。取约0.5mL有核细胞血样用于有核细胞活率及CD34+细胞含量分析。
自体脐带血五项病毒指标检测：脐血制备过程中，留取脐带血约5mL，分离出血浆，采用酶联免疫吸附试验，根据乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)诊断试剂盒(购自北京万泰生物药业股份有限公司)、人丙肝抗体(HCV-Ab)ELISA试剂盒(购自北京万泰生物药业股份有限公司)、人类免疫缺陷病毒抗原抗体HIV-Ab ELISA试剂盒(购自北京万泰生物药业股份有限公司)、梅毒螺旋体抗体(TP-Ab)ELISA检测试剂盒(购自北京万泰生物药业股份有限公司)和人巨细胞毒抗体IgM(CMV-IgM)ELISA检测试剂盒(购自北京贝尔生物工程股份有限公司)说明书的操作步骤对HBsAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab、CMV-IgM进行检测。
细菌/霉菌污染检测：在万级无菌操作室内，脐带血有核细胞制备完后，将脐血分离出脐血血浆联袋，抽取脐血血浆10ml分别接种至需氧瓶和厌氧瓶，采用全自动细菌培养仪培养7天，检测是否有细菌污染。
制备后的自体脐带血有核细胞活率及CD34+细胞含量检测：采用流式细胞术对步骤(3)获得的有核细胞进行细胞活率测定。每份标本准备2支试管，1管为对照管，1管为测试管。往对照管中依次加入单抗CD45-FITC 5μL(购自BD Biosciences)、IgG1-PE(CD34-PE阴性对照)5μL(购自BD Biosciences)，测试管依次加入单抗CD45-FITC 5μL、单抗CD34-PE 5μL(购自BD Biosciences)，加完后放入2℃-8℃冰箱内避光暂存。取出已加入CD45-FITC、CD34-PE和IgG1-PE的试管架，往测试管中依次加入7-AAD 10μL。去红去浆的浓缩血样(即有核细胞血样)依次往对照管和测试管各加入100μL血量。涡旋振荡器上充分混匀，室温避光孵育16分钟。孵育完成后，分别往2个试管加入2.5mL 1％溶血素并轻轻混匀，室温避光反应10～15分钟后500g离心力下室温离心3分钟，弃上清液并用纸巾控干管口。再分别用1.5mLPBS缓冲液(pH 7.2±0.1，购自吉诺生物医药技术有限公司；下同)洗涤细胞、离心、去上清，最后各加0.5mL PBS缓冲液轻轻混匀，检查是否有凝块，则待上机样本制备完成。
流式细胞仪检测已标记好的样本，根据ISHAGE标准，利用CD45、CD34+单克隆抗体(CD45是有核细胞的特异性标志物，CD34+是造血干祖细胞的特异性标志物)来对脐带血进行检测。利用流式细胞仪对制备的脐带血样品进行检测，根据造血干祖细胞的4个特征(CD34+阳性，CD45弱阳性，低SSC，FSC与淋巴细胞相似)圈选出造血干祖细胞占有核细胞的含量，即得到CD34+细胞含量。根据7-AAD可使死细胞染色的原理来检测脐带血中活细胞占有核细胞的含量，即有核细胞活率。
CFU-GM集落细胞培养分析：脐带血样本抽取约0.1ml加入RPMI-1640培养液制备成稀释约10倍的细胞悬液，根据标本细胞悬液浓度及最终培养体系为3.3ml，结合计算所需加入的甲基纤维素培养基及细胞悬液的各自体积，制成有核细胞终浓度定量为5×104个/ml的培养体系。将培养板放入37℃、5％CO2、湿度>95％的CO2培养箱中培养14天。培养结束取出培养板在倒置显微镜下观察，统计每份脐带血培养的3个孔的集落数，取其均值作为该份脐带血的CFU-GM细胞计数结果。
实施例2：
本实施例与实施例1基本相同，不同之处在于，本实施例用的消毒剂是75％酒精；包裹消毒整条脐带的为含75％酒精的有尾纱条。
对比例1：对脐带进行常规消毒后送回脐血库进行制备与检测
用含75％酒精的棉球，选择胎盘断端的脐带4～5cm位置作为穿刺部位，对穿刺部位实行擦拭消毒2次，由脐带胎盘短端向胎盘方向擦拭穿刺点，不能来回擦拭。采集后的脐带血运输回脐血库进行常规有核细胞制备，并对脐带血进行总有核细胞数，病毒五项，细菌/霉菌污染率，有核细胞活率，CD34+细胞含量，CFU-GM细胞计数等常规检测，同实施例1(3)的步骤。同时比较实施例1和对比例1所述的消毒方法对脐带血的污染率。
上述检测结果如下表1：
表1不同脐带消毒方式对脐带血质量的影响对比
Figure BDA0002473383330000051
实施例1和对比例1测得的病毒五项检测结果均为阴性。
本实施例1和对比例1所述的消毒方法对脐带血的污染率结果如图4所示，从图4可以看出，本发明所述消毒方法对脐带血的污染率大大降低。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将脐带放在无菌巾上，用含消毒剂的纱布对脐带进行包裹消毒；
(2)另取含消毒剂的纱布，选择胎盘断端的脐带4～5cm位置作为穿刺部位，对穿刺部位擦拭消毒，由脐带胎盘短端向胎盘方向擦拭穿刺点，不能来回擦拭；
步骤(1)中所述的脐带为整条脐带；
步骤(1)中所述的消毒剂包括碘伏和75％酒精中的至少一种；
步骤(1)中所述的对脐带进行包裹消毒的次数为1～2次；
步骤(1)中所述的包裹消毒的时间为3～7s；
步骤(2)中所述的擦拭消毒次数为2～3次。
2.根据权利要求1所述的消毒方法，其特征在于，步骤(1)中所述的纱布包括有尾纱条。
3.根据权利要求1所述的消毒方法，其特征在于，步骤(1)中所述的含消毒剂的纱布由消毒剂浸泡纱布得到。
4.根据权利要求1所述的消毒方法，其特征在于，步骤(1)中所述的含消毒剂的纱布对脐带进行包裹消毒后进行废弃处理。
5.由权利要求1～4任一所述的有效降低脐带血采集污染率的脐带深度消毒方法得到的脐带在临床医学中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN1107486C (zh) * 1999-09-23 2003-05-07 北京奥泰生物工程有限公司 垂直采集脐带血的装置及其方法
CN103263440A (zh) * 2013-02-08 2013-08-28 周胜利 从胎盘、脐带中提、制同源性间充质干细胞注射剂的方法
CN108048396A (zh) * 2017-12-29 2018-05-18 山西农业大学 一种绵羊肌肉干细胞的分离方法
CN110731969A (zh) * 2019-10-27 2020-01-31 北京中广天一生物科技有限公司 一种间充质干细胞的制备及在制备疼痛药中的应用

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