CN112285232B - Ulexin C检测试剂在制备COPD诊断试剂盒中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了Ulexin C检测试剂在制备COPD诊断试剂盒中的用途，属于肺部疾病检测领域。本发明可借助检测Ulexin C在血清中的含量，实现COPD的快速辅助诊断。

Description

Ulexin C检测试剂在制备COPD诊断试剂盒中的用途

技术领域

本发明属于肺部疾病检测领域。

背景技术

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一 种具有气流阻塞特征的慢性支气管炎和(或)肺气肿，可进一步发展为肺心 病和呼吸衰竭的常见慢性疾病。COPD的致残率和病死率很高，全球40岁以 上发病率已高达9％～10％。

慢性阻塞性肺病的确切病因不清楚，一般认为与慢性支气管炎和阻塞性 肺气肿发生有关的因素都可能参与慢性阻塞性肺病的发病。已经发现的危险 因素大致可以分为外因(即环境因素)与内因(即个体易患因素)两类。外 因包括吸烟、粉尘和化学物质的吸入、空气污染、呼吸道感染及社会经济地 位较低的人群(可能与室内和室外空气污染、居室拥挤、营养较差及其他与 社会经济地位较低相关联的因素有关)。内因包括遗传因素、气道反应性增高、 在怀孕期、新生儿期、婴儿期或儿童期由各种原因导致肺发育或生长不良的个体。

目前COPD的诊断主要依靠肺功能检查、胸部X线检查、胸部CT检查等， 检测复杂耗时

因此，急需一种能够对COPD进行快速诊断的工具。

化合物Ulexin C，化学式C₂₅H₂₂O₆，LIPID MAPS(http：//www.1ipidmaps.org) 的编号为LMPK12050179。其化学结构式如下：

目前，尚未见Ulexin C与COPD关系的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种COPD诊断试剂盒。

本发明的技术方案如下：

检测血清中Ulexin C含量的试剂在制备检测慢性阻塞性肺疾病试剂盒中 的用途。

如前述的用途，所述检测血清中Ulexin C含量的试剂为液相色谱-质谱联 用方法用试剂。

如前述的用途，所述检测血清中Ulexin C含量的试剂为液相色谱方法用 试剂。

如前述的用途，所述检测血清中Ulexin C含量的试剂为液相色谱-质谱联 用代谢组学方法用试剂。

一种慢性阻塞性肺疾病检测试剂盒，它包括检测血清中Ulexin C含量的 试剂。

如前述的试剂盒，所述检测血清中Ulexin C含量的试剂为液相色谱-质谱 联用方法用试剂。

如前述的试剂盒，所述检测血清中Ulexin C含量的试剂为液相色谱方法 用试剂。

如前述的试剂盒，所述检测血清中Ulexin C含量的试剂为液相色谱-质谱 联用代谢组学方法用试剂。

发明人发现，COPD患者血清中Ulexin C的含量远高于健康人群。常规化 合物检测方法例如液相色谱(比如高效液相色谱、超高效液相色谱)、液相色 谱-质谱联用以及液相色谱-质谱联用代谢组学方法均可对Ulexin C进行检测， 用已有的液相色谱、液相色谱-质谱联用或液相色谱-质谱联用代谢组学 (LC-MS代谢组学)方法检测数据作为参照，即可进行COPD进行辅助诊断。

进一步地，本发明实施例1中使用的LC-MS代谢组学方法，检测了COPD 患者和健康人群血清中Ulexin C的具体量化的数值，并作出了ROC分析，得 到的曲线下面积(AUC)为0.884，当检测临界值(cut-off值)为0.064时， 其特异性为1.000，灵敏度为0.783。因此，如果以LC-MS代谢组学方法用试 剂盒对COPD进行检测，即可以Ulexin C检测值与检测临界值的大小关系为判 定依据，当检测值大于检测临界值时，判定为COPD。

本发明的COPD检测试剂盒，可以通过检测血清中Ulexin C，实现COPD 客观、准确、快速的诊断。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段， 在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、 替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步 的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。 凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1是Ulexin C浓度与COPD的ROC曲线图。

具体实施方式

实施例1 COPD患者血清中Ulexin C的检测

1.被检对象

COPD患者(A组)60人，健康对照(B组)30人。被检对象人群在实 验前均已经知情并同意。

2.方法

将被检对象血清分别进行样品预处理、代谢物提取、LC-MS全扫描检 测、数据预处理及统计分析。基于UPLC-VION IMS Q-Tof高分辨质谱仪的 代谢组学功能，结合代谢组学数据处理软件Progenesis QI v2.3，对原始数据 进行定性及相对定量分析，并对原始数据进行标准化预处理。

具体实验步骤：

(1)样本前处理

1)将-80℃下保存的样本取出，在室温下解冻，移取100μL血清，加 入内标(L-2-氯苯丙氨酸，0.3mg/mL；C-17，0.01mg/mL，均为甲醇配 置)各10μL，涡旋震荡10s；

2)加入300μL的蛋白沉淀剂甲醇-乙腈(V:V＝2:1)，涡旋震荡1min；

3)冰水浴中超声提取10min；

4)-20℃下静置30min；

5)离心10min(13000rpm，4℃)，用注射器吸取200μL的上清液， 使用0.22μm的有机相针孔过滤器过滤后，转移到LC进样小瓶， -80℃下保存，直到进行LC-MS分析。

6)质控样本(QC)由所有样本的提取液等体积混合制备而成，每个QC 的 体积与样本相同。

备注：所有提取试剂使用前均在-20℃进行预冷。质控(QC)样本：等量取 各组样本混合为QC。每10个样本中插入一个QC，QC样本用于评价整 个实验过程中系统稳定性。

(2)液相色谱-质谱分析条件

本次实验的分析仪器为沃特世的I-Class超高效液相串联VION IMS Q-Tof高分辨质谱仪组成的液质联用系统。

色谱条件：

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18(100mm×2.1mm，1.7um)；柱 温：45℃；流动相：A-水(含0.1％甲酸)，B-乙腈/甲醇(2/3)(v/v)(含0.1％甲酸)； 流速：0.4mL/min；

进样体积：1μL。

质谱条件：离子源：ESI；样品质谱信号采集分别采用正负离子扫描模式。

3.结果

A、B组血清中Ulexin C的检测结果如下表所示：

备注：FC(fold change)指A组均值/B组均值。

可见，COPD患者血清中的Ulexin C的含量显著高于健康对照。

对A、B组血清中Ulexin C含量的ROC分析结果如图1所示，ROC的 曲线下面积(AUC)为0.884；当检测临界值(cut-off值)为0.064时，其 特异性为1.000，灵敏度为0.783。

基于Ulexin C在COPD患者血清中的含量的检测，可开发出COPD试剂 盒。如果以LC-MS代谢组学方法(如本实施例)用试剂盒对COPD进行检 测，即可以Ulexin C检测值与0.064的大小关系为判定依据，当检测值大于 0.064时，判定为COPD，当检测值小于0.064时，判定为非COPD。

当然，LC-MS代谢组学方法仅仅是检测化合物的常规手段，理论上，能 够检测Ulexin C在COPD患者血清中的含量的各种试剂盒(例如液相色谱方 法试剂盒，液相色谱-质谱联用方法试剂盒)都能实现COPD检测。以液相色 谱方法试剂盒为例，只需事先检测已知COPD患者和健康人群各自的血清内 Ulexin C含量，作为参照标准；用同样的试剂盒检测待检对象的血清得到 Ulexin C含量数值，与参考标准相比较，即可对待检对象是否患COPD进行 判断：当待检对象血清Ulexin C含量接近或低于健康人群，则判定为非COPD， 当待检对象血清Ulexin C含量接近或高于COPD患者，则判定为COPD。

实施例2本发明的试剂盒

1.本发明试剂盒的组成

甲醇、甲酸、乙腈和L-2-氯苯丙氨酸。

2.试剂盒使用方法

实验操作同实施例1的第2节。

当血清中Ulexin C的检测值为0.064以上，可判别为COPD；否则，可 判别为非COPD。

综上，本发明的试剂盒通过对Ulexin C的定量检测，可实现对COPD的 辅助诊断，可简单快捷地为临床医生提供有价值的参考信息，便于对症下药， 应用前景良好。

Claims (4)

1.检测血清中Ulexin C含量的试剂在制备检测慢性阻塞性肺疾病试剂盒中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测血清中Ulexin C含量的试剂为液相色谱-质谱联用方法用试剂。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测血清中Ulexin C含量的试剂为液相色谱方法用试剂。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测血清中Ulexin C含量的试剂为液相色谱-质谱联用代谢组学方法用试剂。

Images