CN112285355B - Viridiflorin检测试剂在制备COPD诊断试剂盒中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了Viridiflorin检测试剂在制备COPD诊断试剂盒中的用途，属于肺部疾病检测领域。本发明可借助检测Viridiflorin在血清中的含量，实现COPD的快速辅助诊断。

Description

Viridiflorin检测试剂在制备COPD诊断试剂盒中的用途
技术领域
本发明属于肺部疾病检测领域。
背景技术
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一种具有气流阻塞特征的慢性支气管炎和(或)肺气肿，可进一步发展为肺心病和呼吸衰竭的常见慢性疾病。COPD的致残率和病死率很高，全球40岁以上发病率已高达9％～10％。
慢性阻塞性肺病的确切病因不清楚，一般认为与慢性支气管炎和阻塞性肺气肿发生有关的因素都可能参与慢性阻塞性肺病的发病。已经发现的危险因素大致可以分为外因(即环境因素)与内因(即个体易患因素)两类。外因包括吸烟、粉尘和化学物质的吸入、空气污染、呼吸道感染及社会经济地位较低的人群(可能与室内和室外空气污染、居室拥挤、营养较差及其他与社会经济地位较低相关联的因素有关)。内因包括遗传因素、气道反应性增高、在怀孕期、新生儿期、婴儿期或儿童期由各种原因导致肺发育或生长不良的个体。
目前COPD的诊断主要依靠肺功能检查、胸部X线检查、胸部CT检查等，检测复杂耗时
因此，急需一种能够对COPD进行快速诊断的工具。
化合物Viridiflorin，系统命名5，7，4′-三羟基-2′，5′-二甲氧基-6-戊烯黄酮，化学式C22H22O7，LIPID MAPS(http://www.lipidmaps.org)的编号为LMPK12050292。其化学结构式如下：
Figure BDA0002733730880000011
目前，尚未见Viridiflorin与COPD关系的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种COPD诊断试剂盒。
本发明的技术方案如下：
检测血清中Viridiflorin含量的试剂在制备检测慢性阻塞性肺疾病试剂盒中的用途。
如前述的用途，所述检测血清中Viridiflorin含量的试剂为液相色谱-质谱联用方法用试剂。
如前述的用途，所述检测血清中Viridiflorin含量的试剂为液相色谱方法用试剂。
如前述的用途，所述检测血清中Viridiflorin含量的试剂为液相色谱-质谱联用代谢组学方法用试剂。
一种慢性阻塞性肺疾病检测试剂盒，它包括检测血清中Viridiflorin含量的试剂。
如前述的试剂盒，所述检测血清中Viridiflorin含量的试剂为液相色谱-质谱联用方法用试剂。
如前述的试剂盒，所述检测血清中Viridiflorin含量的试剂为液相色谱方法用试剂。
如前述的试剂盒，所述检测血清中Viridiflorin含量的试剂为液相色谱-质谱联用代谢组学方法用试剂。
发明人发现，COPD患者血清中Viridiflorin的含量远高于健康人群。常规化合物检测方法例如液相色谱(比如高效液相色谱、超高效液相色谱)、液相色谱-质谱联用以及液相色谱-质谱联用代谢组学方法均可对Viridiflorin进行检测，用已有的液相色谱、液相色谱-质谱联用或液相色谱-质谱联用代谢组学(LC-MS代谢组学)方法检测数据作为参照，即可进行COPD进行辅助诊断。
进一步地，本发明实施例1中使用的LC-MS代谢组学方法，检测了COPD患者和健康人群血清中Viridiflorin的具体量化的数值，并作出了ROC分析，得到的曲线下面积(AUC)为0.725，当检测临界值(cut-off值)为0.077时，其特异性为1.000，灵敏度为0.450。因此，如果以LC-MS代谢组学方法用试剂盒对COPD进行检测，即可以Viridiflorin检测值与检测临界值的大小关系为判定依据，当检测值大于检测临界值时，判定为COPD。
本发明的COPD检测试剂盒，可以通过检测血清中Viridiflorin，实现COPD客观、准确、快速的诊断。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1是Viridiflorin浓度与COPD的ROC曲线图。
具体实施方式
实施例1 COPD患者血清中Viridiflorin的检测
1.被检对象
COPD患者(A组)60人，健康对照(B组)30人。被检对象人群在实验前均已经知情并同意。
2.方法
将被检对象血清分别进行样品预处理、代谢物提取、LC-MS全扫描检测、数据预处理及统计分析。基于UPLC-VION IMS Q-Tof高分辨质谱仪的代谢组学功能，结合代谢组学数据处理软件Progenesis QI v2.3，对原始数据进行定性及相对定量分析，并对原始数据进行标准化预处理。
具体实验步骤：
(1)样本前处理
1)将-80℃下保存的样本取出，在室温下解冻，移取100μL血清，加入内标(L-2-氯苯丙氨酸，0.3mg/mL；C-17，0.01mg/mL，均为甲醇配置)各10μL，涡旋震荡10s；
2)加入300μL的蛋白沉淀剂甲醇-乙腈(V∶V＝2∶1)，涡旋震荡1min；
Figure BDA0002733730880000031
3)冰水浴中超声提取10min；
4)-20℃下静置30min；
5)离心10min(13000rpm，4℃)，用注射器吸取200μL的上清液，使用0.22μm的有机相针孔过滤器过滤后，转移到LC进样小瓶，-80℃下保存，直到进行LC-MS分析。
6)质控样本(QC)由所有样本的提取液等体积混合制备而成，每个QC的
体积与样本相同。
备注：所有提取试剂使用前均在-20℃进行预冷。质控(QC)样本：等量取各组样本混合为QC。每10个样本中插入一个QC，QC样本用于评价整个实验过程中系统稳定性。
(2)液相色谱-质谱分析条件
本次实验的分析仪器为沃特世的I-Class超高效液相串联VION IMS Q-Tof高分辨质谱仪组成的液质联用系统。
色谱条件：
色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18(100mm×2.1mm，1.7um)；柱温：45℃；流动相：A-水(含0.1％甲酸)，B-乙腈/甲醇(2/3)(v/v)(含0.1％甲酸)；流速：0.4mL/min；
进样体积：1μL。
质谱条件：离子源：ESI；样品质谱信号采集分别采用正负离子扫描模式。
3.结果
A、B组血清中Viridiflorin的检测结果如下表所示：
Figure BDA0002733730880000041
备注：FC(fold change)指A组均值/B组均值。
可见，COPD患者血清中的Viridiflorin的含量显著高于健康对照。
对A、B组血清中Viridiflorin含量的ROC分析结果如图1所示，ROC的曲线下面积(AUC)为0.725；当检测临界值(cut-off值)为0.077时，其特异性为1.000，灵敏度为0.450。
基于Viridiflorin在COPD患者血清中的含量的检测，可开发出COPD试剂盒。如果以LC-MS代谢组学方法(如本实施例)用试剂盒对COPD进行检测，即可以Viridiflorin检测值与0.077的大小关系为判定依据，当检测值大于0.077时，判定为COPD，当检测值小于0.077时，判定为非COPD。
当然，LC-MS代谢组学方法仅仅是检测化合物的常规手段，理论上，能够检测Viridiflorin在COPD患者血清中的含量的各种试剂盒(例如液相色谱方法试剂盒，液相色谱-质谱联用方法试剂盒)都能实现COPD检测。以液相色谱方法试剂盒为例，只需事先检测已知COPD患者和健康人群各自的血清内Viridiflorin含量，作为参照标准；用同样的试剂盒检测待检对象的血清得到Viridiflorin含量数值，与参考标准相比较，即可对待检对象是否患COPD进行判断：当待检对象血清Viridiflorin含量接近或低于健康人群，则判定为非COPD，当待检对象血清Viridiflorin含量接近或高于COPD患者，则判定为COPD。
实施例2本发明的试剂盒
1.本发明试剂盒的组成
甲醇、甲酸、乙腈和L-2-氯苯丙氨酸。
2.试剂盒使用方法
实验操作同实施例1的第2节。
当血清中Viridiflorin的检测值为0.077以上，可判别为COPD；否则，可判别为非COPD。
综上，本发明的试剂盒通过对Viridiflorin的定量检测，可实现对COPD的辅助诊断，可简单快捷地为临床医生提供有价值的参考信息，便于对症下药，应用前景良好。

Claims (4)

1.检测血清中Viridiflorin含量的试剂在制备检测慢性阻塞性肺疾病试剂盒中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测血清中Viridiflorin含量的试剂为液相色谱-质谱联用方法用试剂。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测血清中Viridiflorin含量的试剂为液相色谱方法用试剂。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测血清中Viridiflorin含量的试剂为液相色谱-质谱联用代谢组学方法用试剂。
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