CN112285338A - 一种copd诊断试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种慢性阻塞性肺疾病(COPD)诊断试剂盒，属于肺部疾病检测领域。本发明提供了检测血清中GlcAbeta‑Cer(d18:1/18:0)含量的试剂在制备检测COPD试剂盒中的用途。本发明还提供了对应的COPD检测试剂盒。本发明可借助检测GlcAbeta‑Cer(d18:1/18:0)在血清中的含量，实现COPD的快速辅助诊断。
Description
技术领域
本发明属于肺部疾病检测领域。
背景技术
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是一 种具有气流阻塞特征的慢性支气管炎和(或)肺气肿，可进一步发展为肺心 病和呼吸衰竭的常见慢性疾病。COPD的致残率和病死率很高，全球40岁以 上发病率已高达9％～10％。
慢性阻塞性肺病的确切病因不清楚，一般认为与慢性支气管炎和阻塞性 肺气肿发生有关的因素都可能参与慢性阻塞性肺病的发病。已经发现的危险 因素大致可以分为外因(即环境因素)与内因(即个体易患因素)两类。外 因包括吸烟、粉尘和化学物质的吸入、空气污染、呼吸道感染及社会经济地 位较低的人群(可能与室内和室外空气污染、居室拥挤、营养较差及其他与 社会经济地位较低相关联的因素有关)。内因包括遗传因素、气道反应性增高、 在怀孕期、新生儿期、婴儿期或儿童期由各种原因导致肺发育或生长不良的个体。
目前COPD的诊断主要依靠肺功能检查、胸部X线检查、胸部CT检查等， 检测复杂耗时
因此，急需一种能够对COPD进行快速诊断的工具。
化合物GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)，又称GlcAβ-Cer(d18:1/18:0)，系统命名 N-(十八烷酰基)-1-β-葡萄糖醛酸-鞘氨醇4-烯，化学式C42H79NO9，LIPID MAPS(http://www.lipidmaps.org)的编号为LMSP06030001。其化学结构式 如下：
目前，尚未见GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)与COPD关系的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种COPD诊断试剂盒。
本发明的技术方案如下:
检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂在制备检测慢性阻塞性 肺疾病试剂盒中的用途。
如前述的用途，所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂为 液相色谱-质谱联用方法用试剂。
如前述的用途，所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂为 液相色谱方法用试剂。
如前述的用途，所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂为 液相色谱-质谱联用代谢组学方法用试剂。
一种慢性阻塞性肺疾病检测试剂盒，它包括检测血清中 GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂。
如前述的试剂盒，所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂 为液相色谱-质谱联用方法用试剂。
如前述的试剂盒，所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂 为液相色谱方法用试剂。
如前述的试剂盒，所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂 为液相色谱-质谱联用代谢组学方法用试剂。
发明人发现，COPD患者血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)的含量远高于健 康人群。常规化合物检测方法例如液相色谱(比如高效液相色谱、超高效液 相色谱)、液相色谱-质谱联用以及液相色谱-质谱联用代谢组学方法均可对 GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)进行检测，用已有的液相色谱、液相色谱-质谱联用 或液相色谱-质谱联用代谢组学(LC-MS代谢组学)方法检测数据作为参照， 即可进行COPD进行辅助诊断。
进一步地，本发明实施例1中使用的LC-MS代谢组学方法，检测了COPD 患者和健康人群血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)的具体量化的数值，并作出 了ROC分析，得到的曲线下面积(AUC)为0.864，当检测临界值(cut-off 值)为0.087时，其特异性为0.967，灵敏度为0.767。因此，如果以LC-MS 代谢组学方法用试剂盒对COPD进行检测，即可以GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0) 检测值与检测临界值的大小关系为判定依据，当检测值大于检测临界值时， 判定为COPD。
本发明的COPD检测试剂盒，可以通过检测血清中 GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)，实现COPD客观、准确、快速的诊断。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段， 在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、 替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步 的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。 凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1是GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)浓度与COPD的ROC曲线图。
具体实施方式
实施例1 COPD患者血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)的检测
1.被检对象
COPD患者(A组)60人，健康对照(B组)30人。被检对象人群在实 验前均已经知情并同意。
2.方法
将被检对象血清分别进行样品预处理、代谢物提取、LC-MS全扫描检 测、数据预处理及统计分析。基于UPLC-VION IMS Q-Tof高分辨质谱仪的 代谢组学功能，结合代谢组学数据处理软件Progenesis QI v2.3，对原始数据 进行定性及相对定量分析，并对原始数据进行标准化预处理。
具体实验步骤:
(1)样本前处理
1)将-80℃下保存的样本取出，在室温下解冻，移取100μL血清，加 入内标(L-2-氯苯丙氨酸，0.3mg/mL；C-17，0.01mg/mL，均为甲醇配 置)各10μL，涡旋震荡10s；
2)加入300μL的蛋白沉淀剂甲醇-乙腈(V:V＝2:1)，涡旋震荡1min；
3)冰水浴中超声提取10min；
4)-20℃下静置30min；
5)离心10min(13000rpm，4℃)，用注射器吸取200μL的上清液， 使用0.22μm的有机相针孔过滤器过滤后，转移到LC进样小瓶， -80℃下保存，直到进行LC-MS分析。
6)质控样本(QC)由所有样本的提取液等体积混合制备而成，每个QC 的
体积与样本相同。
备注:所有提取试剂使用前均在-20℃进行预冷。质控(QC)样本:等量取 各组样本混合为QC。每10个样本中插入一个QC，QC样本用于评价整 个实验过程中系统稳定性。
(2)液相色谱-质谱分析条件
本次实验的分析仪器为沃特世的I-Class超高效液相串联VION IMS Q-Tof高分辨质谱仪组成的液质联用系统。
色谱条件:
色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18(100mm×2.1mm,1.7um)；柱 温:45℃；流动相:A-水(含0.1％甲酸)，B—乙腈/甲醇(2/3)(v/v)(含0.1％甲酸)； 流速:0.4mL/min；
进样体积:1μL。
质谱条件:离子源:ESI；样品质谱信号采集分别采用正负离子扫描模式。
3.结果
A、B组血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)的检测结果如下表所示：
备注：FC(fold change)指A组均值/B组均值。
可见，COPD患者血清中的GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)的含量显著高于健 康对照。
对A、B组血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的ROC分析结果如图1 所示，ROC的曲线下面积(AUC)为0.864；当检测临界值(cut-off值)为 0.087时，其特异性为0.967，灵敏度为0.767。
基于GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)在COPD患者血清中的含量的检测，可开 发出COPD试剂盒。如果以LC-MS代谢组学方法(如本实施例)用试剂盒 对COPD进行检测，即可以GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)检测值与0.087的大小 关系为判定依据，当检测值大于0.087时，判定为COPD，当检测值小于0.087 时，判定为非COPD。
当然，LC-MS代谢组学方法仅仅是检测化合物的常规手段，理论上，能 够检测GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)在COPD患者血清中的含量的各种试剂盒 (例如液相色谱方法试剂盒，液相色谱-质谱联用方法试剂盒)都能实现 COPD检测。以液相色谱方法试剂盒为例，只需事先检测已知COPD患者和 健康人群各自的血清内GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量，作为参照标准；用同 样的试剂盒检测待检对象的血清得到GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量数值，与 参考标准相比较，即可对待检对象是否患COPD进行判断：当待检对象血清GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量接近或低于健康人群，则判定为非COPD，当 待检对象血清GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量接近或高于COPD患者，则判定 为COPD。
实施例2本发明的试剂盒
1.本发明试剂盒的组成
甲醇、甲酸、乙腈和L-2-氯苯丙氨酸。
2.试剂盒使用方法
实验操作同实施例1的第2节。
当血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)的检测值为0.087以上，可判别为 COPD；否则，可判别为非COPD。
综上，本发明的试剂盒通过对GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)的定量检测，可 实现对COPD的辅助诊断，可简单快捷地为临床医生提供有价值的参考信息， 便于对症下药，应用前景良好。
Claims (8)
1.检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂在制备检测慢性阻塞性肺疾病试剂盒中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂为液相色谱-质谱联用方法用试剂。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂为液相色谱方法用试剂。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂为液相色谱-质谱联用代谢组学方法用试剂。
5.一种慢性阻塞性肺疾病检测试剂盒，其特征在于：它包括检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂为液相色谱-质谱联用方法用试剂。
7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂为液相色谱方法用试剂。
8.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述检测血清中GlcAbeta-Cer(d18:1/18:0)含量的试剂为液相色谱-质谱联用代谢组学方法用试剂。
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