CN112266976A - 基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记、引物、检测方法、检测试剂盒与应用 - Google Patents

基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记、引物、检测方法、检测试剂盒与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记、引物、检测方法、检测试剂盒与应用，属于植物分子生物技术领域。为解决现有番茄灰叶斑病抗性基因连锁的分子标记存在带型不稳定，特异性不强的问题，本发明提供了基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记及其扩增引物、包括利用该扩增引物PCR扩增和对扩增产物酶切的检测方法以及含有该扩增引物的检测试剂盒。本发明提供的CAPS分子标记带型稳定、易于区分、准确率高、特异性强；检测方法操作简捷、扩增结果精准度高、成本低，在田间抗病性鉴定中具有较高的稳定性，基因型和田间表型吻合率高达90.19％，能够应用于选育番茄灰叶斑病抗性种质资源。

Description

基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记、引物、检测方 法、检测试剂盒与应用
技术领域
本发明属于植物分子生物技术领域，尤其涉及基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记、引物、检测方法、检测试剂盒与应用。
背景技术
番茄是在世界范围内广泛种植的重要蔬菜之一，其在生长过程中常常会受到病虫的危害。番茄灰叶斑病(Tomato gray leaf spot)是近年来流行的一种病害，该病病原为匍柄霉(Stemphylium)真菌，为半知菌亚门丝孢纲成员，可引起多种蔬菜病害。番茄灰叶斑病在世界范围内均有发生，温暖潮湿地区尤为严重。番茄灰叶斑病爆发严重，可导致番茄减产20％～80％，影响番茄的产量和质量。
目前，已被发现并可利用的番茄灰叶斑病抗性基因只有Sm基因，为单基因不完全显性遗传。该基因虽已被转育到栽培品种中，但至今其抗性仍未被克服。近年来，前人利用一些抗病材料对番茄灰叶斑病的抗性遗传规律及分子标记也进行了初步探究。例如RFLP标记CT55、C2_At4g10050和C2_At2g14260均与Sm基因连锁较为紧密。JI等利用RFLP标记CT55，经限制内切酶酶切，开发出一个隐性CAPS标记，只可区分抗病纯合。随后，高建昌等建立的与抗性基因Sm连锁的IndeI标记能区分抗病纯合体与抗病杂合体，但抗病条带与感病条带相距很近，不易区分。而高存等建立的T050标记与抗性基因Sm紧密连锁，但是这些标记与抗性基因Sm仍存在一定的遗传距离。同样，金凤媚等人利用HPM方法开发出的无需酶切检测灰叶斑病抗性基因的标记虽可在一定程度上区分不同番茄抗、感材料，但是田间鉴定吻合率不高。
发明内容
为解决现有番茄灰叶斑病抗性基因连锁的分子标记存在带型不稳定，特异性不强的问题，本发明提供了基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记、引物、检测方法、检测试剂盒与应用。
本发明的技术方案：
一种基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示。
如本发明所述基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的扩增引物，所述扩增引物的核苷酸序列为：
正向引物序列：5’-GTCCGAGCAACATAGCTCCC-3’
反向引物序列：5’-ATGGACCAACCTTGCAAACG-3’。
一种番茄灰叶斑病抗性基因Sm的检测方法，包括如下步骤：
步骤一、以待测番茄材料的基因组DNA为模板，利用基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的扩增引物进行PCR扩增，所述扩增引物的核苷酸序列为：
正向引物序列：5’-GTCCGAGCAACATAGCTCCC-3’、
反向引物序列：5’-ATGGACCAACCTTGCAAACG-3’；
步骤二、经PCR扩增得到如SEQ ID No.1所示CAPS分子标记的植株为携带抗性基因Sm的植株，其所得扩增产物经限制性内切酶TaqⅠ酶切，当酶切获得长度分别为589bp和208bp的两条特异性谱带时，待测番茄材料携带番茄灰叶斑病抗性基因Sm且为阳性纯合基因型；当酶切获得长度分别为589bp、208bp和797bp的三条特异性谱带时，待测番茄材料携带番茄灰叶斑病抗性基因Sm且为阳性杂合基因型；
经PCR扩增未得到如SEQ ID No.1所示CAPS分子标记的植株为不携带抗性基因Sm的植株，其所得扩增产物经限制性内切酶TaqⅠ酶切，当酶切获得的是长度为797bp的一条特异性谱带时，待测番茄材料不携带番茄灰叶斑病抗性基因Sm且为阴性纯合基因型。
进一步的，步骤一所述PCR扩增的反应体系为：1μL正向引物，1μL反向引物，1μL模板DNA，10μL 2×Taq PCR StarMix，7μL dd H2O。
进一步的，步骤一所述PCR扩增的扩增程序为：首先94℃预变性2min；其次94℃变性30s，57.5℃退火30s，72℃延伸40s，35个循环；最后72℃延伸5min；保存温度4℃。
进一步的，步骤二所述限制性内切酶TaqⅠ酶切的酶切体系为：TaqI 0.6μL，10×Taq I Buffer 1.2μL，0.1％BSA 1.2μL，PCR产物2μL，灭菌水5μL，酶切条件为65℃孵育6小时。
进一步的，不携带抗性基因Sm的植株的PCR扩增产物核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
一种基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的番茄灰叶斑病抗性基因检测试剂盒，包括基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的扩增引物，所述扩增引物的核苷酸序列为：
正向引物序列：5’-GTCCGAGCAACATAGCTCCC-3’
反向引物序列：5’-ATGGACCAACCTTGCAAACG-3’。
进一步的，还包括Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、限制性内切酶TaqⅠ、Taq I Buffer、0.1％BSA和灭菌水。
一种基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记在选育番茄灰叶斑病抗性种质资源上的应用，包括番茄灰叶斑病抗性基因Sm检测或标记辅助育种。
本发明的有益效果：
本发明提供的如SEQ ID No.1所示的CAPS分子标记与番茄灰叶斑病抗性基因Sm完全连锁，是一个基于PCR技术的共显性标记，通过PCR扩增、酶切和凝胶电泳检测考察不同植株DNA间的多态性，具有带型稳定、易于区分、准确率高、特异性强的特点。与RFLP、AFLP等标记相比，本发明在CAPS分子标记基础上提供的番茄灰叶斑病抗性基因Sm的检测方法及检测试剂盒操作简捷、扩增结果精准度高、成本低、在田间抗病性鉴定中具有较高的稳定性，基因型和田间表型吻合率高达90.19％。
将本发明CAPS分子标记及检测方法应用于苗期选择，不仅可以减少工作量，而且能够快速、准确的筛选出具有番茄灰叶斑病抗性基因的个体植株，从而为抗番茄灰叶斑病分子标记辅助选择育种提供有力的技术支撑。
附图说明
图1为SEQ ID No.1所示抗病材料CAPS分子标记和SEQ ID No.2所示感病材料扩增片段的部分核苷酸序列对比图，其中P1为抗病材料，P2为感病材料；
图2为实施例4以抗感亲本及F2代群体为检测对象进行番茄灰叶斑病抗性基因Sm检测得到的酶切片段电泳图，其中P1为抗病亲本，P2为感病亲本，1-40为F2代单株；
图3为实施例6以40份不同番茄种质材料为检测对象进行番茄灰叶斑病抗性基因Sm检测得到的酶切片段电泳图，其中P1为抗病亲本，P2为感病亲本，1-40为不同番茄种质材料；
图4为实施例6以11份不同番茄种质材料为检测对象进行番茄灰叶斑病抗性基因Sm检测得到的酶切片段电泳图，其中P1为抗病亲本，P2为感病亲本，41-51为不同番茄种质材料。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置，若未特别指明，本发明实施例中所用的原料等均可市售获得；若未具体指明，本发明实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1
本实施例提供了一种基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记及其扩增引物。
番茄灰叶斑病抗性基因Sm被定位于11号染色体上，本实施例将标记的目标区域定位于整条11号染色体上。利用番茄灰叶斑病抗病、感病亲本基因组重测序数据，通过DNAMAN软件对亲本核苷酸序列进行比对，对SNP位点进行验证，最终发现番茄灰叶斑病抗病材料核苷酸序列有一个SNP位点位于TaqI的酶切位点。
如图1所示，P1抗病亲本核苷酸序列中存在TaqI酶切位点，而P2感病亲本核苷酸序列中不存在该TaqI酶切位点。
选取该位于TaqI的酶切位点的SNP位点前、后大约500bp-800bp碱基序列，即为如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，将该段核苷酸序列作为CAPS分子标记。
利用在线引物设计软件NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)设计CAPS分子标记的引物序列，获得正向引物序列：5’-GTCCGAGCAACATAGCTCCC-3’反向引物序列：5’-ATGGACCAACCTTGCAAACG-3’。
实施例2
本实施例提供了一种番茄灰叶斑病抗性基因Sm的检测方法，包括如下步骤：
步骤一、以待测番茄材料的基因组DNA为模板，利用实施例1提供的CAPS分子标记的扩增引物进行PCR扩增，所述扩增引物的核苷酸序列为：
正向引物序列：5’-GTCCGAGCAACATAGCTCCC-3’、
反向引物序列：5’-ATGGACCAACCTTGCAAACG-3’；
PCR扩增的反应体系为：1μL正向引物，1μL反向引物，1μL模板DNA，10μL 2×TaqPCR StarMix，7μL dd H2O。
PCR扩增的扩增程序为：首先94℃预变性2min；其次94℃变性30s，57.5℃退火30s，72℃延伸40s，35个循环；最后72℃延伸5min；保存温度4℃。
步骤二、经PCR扩增得到如SEQ ID No.1所示CAPS分子标记的植株为携带抗性基因Sm的植株，其所得扩增产物经限制性内切酶TaqⅠ酶切，具体酶切体系为：TaqI 0.6μL，10×Taq I Buffer 1.2μL，0.1％BSA 1.2μL，PCR产物2μL，灭菌水5μL，酶切条件为65℃孵育6小时。
实施例3
本实施例提供了一种基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的番茄灰叶斑病抗性基因检测试剂盒，该试剂盒中包括基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的扩增引物，所述扩增引物的核苷酸序列为：
正向引物序列：5’-GTCCGAGCAACATAGCTCCC-3’
反向引物序列：5’-ATGGACCAACCTTGCAAACG-3’。
该试剂盒中还包括Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、限制性内切酶TaqⅠ、Taq I Buffer、0.1％BSA和灭菌水。
实施例4
本实施例利用实施例3提供的检测试剂盒和实施例2提供的检测方法对番茄灰叶斑病抗病材料、易感材料和F2代材料进行验证。
(1)供试材料
番茄灰叶斑抗病材料Motelle-含抗病基因Sm、番茄易感材料Moneymaker，将抗病亲本与易感亲本杂交获得F1，F1自交获得F2。
(2)检测方法
1、将所涉及的番茄材料——抗病亲本、感病亲本、F1代以及F2代的基因组DNA从已长至4～5片真叶的幼苗叶片中用CTAB法提取。
2、以提取所得各番茄基因组DNA为模板与实施例1提供的CAPS分子标记的引物进行PCR扩增。
CAPS分子标记的PCR反应体系的总体积为20μL：1μL正向引物，1μL反向引物，1μL模板DNA，10μL 2×Taq PCR StarMix，7μL dd H2O。
总体积20μL的PCR扩增程序为：首先94℃预变性2min；其次94℃变性30s，57.5℃退火30s，72℃延伸40s，35个循环；最后72℃延伸5min。
取2μLPCR产物，在1％琼脂糖凝胶上电泳检测扩增结果。确认无误后，保存于4℃备用。
3、对不同番茄个体基因组DNA的PCR扩增产物进行酶切。
总体积10μL的酶切体系为：TaqI 0.6μL，10×Taq I Buffer 1.2μL，0.1％BSA 1.2μL，PCR产物2μL，灭菌水5μL；酶切条件为65℃孵育6小时。
4、结果分析
将所得酶切产物分别在1.0％的琼脂糖凝胶上进行电泳，然后在凝胶成像仪上观察、记录实验结果。图2为本实施例以抗感亲本及F2代群体为检测对象进行番茄灰叶斑病抗性基因Sm检测得到的酶切片段电泳图，其中P1为抗病亲本，P2为感病亲本，1-40为F2代单株。
由图2可以证实双亲间以及子代间存在多态性。经CAPS分子标记引物PCR扩增并酶切，结果表明抗病纯合材料扩增出两条长度分别为589bp和208bp的特异性谱带，抗病杂合材料扩增出三条长度分别为589bp、208bp和797bp的特异性谱带，而感病材料中只扩增出一条长度为797bp的特异性谱带，然后进一步在F2群体中验证其可靠性。
实施例5
本实施例利用实施例3提供的检测试剂盒和实施例2提供的检测方法进一步检测实施例4中232株F2群体的中番茄灰叶斑病抗性基因Sm携带情况，并通过苗期接种验证检测结果的可靠性。
(1)供试材料
由番茄灰叶斑抗病材料Motelle-含抗病基因Sm和番茄易感材料Moneymaker亲本杂交获得F1，F1自交获得F2。
(2)检测方法
1、将所涉及的232株F2代的基因组DNA从已长至4～5片真叶的幼苗叶片中用CTAB法提取。
2、以提取所得各番茄基因组DNA为模板与实施例1提供的CAPS分子标记的引物进行PCR扩增。
CAPS分子标记的PCR反应体系的总体积为20μL：1μL正向引物，1μL反向引物，1μL模板DNA，10μL 2×Taq PCR StarMix，7μL dd H2O。
总体积20μL的PCR扩增程序为：首先94℃预变性2min；其次94℃变性30s，57.5℃退火30s，72℃延伸40s，35个循环；最后72℃延伸5min。
取2μLPCR产物，在1％琼脂糖凝胶上电泳检测扩增结果。确认无误后，保存于4℃备用。
3、对不同番茄个体基因组DNA的PCR扩增产物进行酶切。
总体积10μL的酶切体系为：TaqI 0.6μL，10×Taq I Buffer 1.2μL，0.1％BSA 1.2μL，PCR产物2μL，灭菌水5μL；酶切条件为65℃孵育6小时。
4、结果分析
将所得酶切产物分别在1.0％的琼脂糖凝胶上进行电泳，然后在凝胶成像仪上观察、记录实验结果。
该CAPS分子标记处基因型为纯合阳性，同时存在589bp和208bp两条特异谱带的单株有80株；该CAPS分子标记处基因型为杂合阳性，同时存在797bp、589bp和208bp三条特异谱带的单株110株；该CAPS分子标记处基因型为纯合阴性，只存在797bp一条特异谱带的单株有39株。
5、苗期接种鉴定
待番茄植株有4～5片真叶完全展开后可进行抗病性鉴定。将番茄抗感亲本以及F2代植株移到接种室，温度为28℃，自然光照。采用喷雾法进行接种，用喷壶将番茄灰叶斑病孢子悬浮液均匀喷洒于叶片直至有水滴滴落，保证每株叶片都能接上。接种后覆黑膜避光、保证湿度，48小时后揭开黑膜。每天早晚各喷一次水，保证接种室的高湿环境。7天后调查发病情况。
6、验证结果
检测为纯合阳性和杂合阳性的单株，接种鉴定结果均为抗病；检测为纯合阴性的单株，接种鉴定结果均为感病。
实施例6
本实施例利用在东北农业大学向阳基地采集的51份不同番茄种质材料进行番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的验证。
(1)供试材料
番茄灰叶斑抗病材料Motelle-含抗病基因Sm、番茄易感材料Moneymaker，采集自东北农业大学向阳基地的自有的普通栽培番茄品种中大果番茄和樱桃番茄共51份不同番茄种质材料。
(2)检测方法
1、将所涉及的番茄材料——抗病亲本、感病亲本、采集自东北农业大学向阳基地的51份不同番茄种质材料的基因组DNA从已长至4～5片真叶的幼苗叶片中用CTAB法提取。
2、以提取所得各番茄基因组DNA为模板与实施例1提供的CAPS分子标记的引物进行PCR扩增。
CAPS分子标记的PCR反应体系的总体积为20μL：1μL正向引物，1μL反向引物，1μL模板DNA，10μL 2×Taq PCR StarMix，7μL dd H2O。
总体积20μL的PCR扩增程序为：首先94℃预变性2min；其次94℃变性30s，57.5℃退火30s，72℃延伸40s，35个循环；最后72℃延伸5min。
取2μLPCR产物，在1％琼脂糖凝胶上电泳检测扩增结果。确认无误后，保存于4℃备用。
3、对不同番茄个体基因组DNA的PCR扩增产物进行酶切。
总体积10μL的酶切体系为：TaqI 0.6μL，10×Taq I Buffer 1.2μL，0.1％BSA 1.2μL，PCR产物2μL，灭菌水5μL；酶切条件为65℃孵育6小时。
4、结果分析
将所得酶切产物分别在1.0％的琼脂糖凝胶上进行电泳，然后在凝胶成像仪上观察、记录实验结果。图3和图4为实施例6以51份不同番茄种质材料为检测对象进行番茄灰叶斑病抗性基因Sm检测得到的酶切片段电泳图，其中P1为抗病亲本，P2为感病亲本，1-51为不同番茄种质材料。
如图3所示，抗病番茄材料表现为阳性纯合或杂合基因型，可以被限制性内切酶TaqI完全或部分酶切，酶切结果应为2条长度为589bp和208bp的特异性谱带或3条长度为797bp、589bp和208bp的特异性谱带；而感病番茄材料表现为阴性纯合基因型，酶切结果表现为1条长度为797bp的特异性谱带。对51份不同番茄材料进行验证，结果表明M14标记验证基因型和田间表型的吻合率可达90.19％。
SEQUENCE LISTING
<110> 东北林业大学
<120> 基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记、引物、检测方法、检测试剂
盒与应用
<130> 1
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1079
<212> DNA
<213> 番茄
<400> 1
acttataagc aaactactgg aagttgtgaa ggcggaagat catatacctt atttcacaaa 60
attagtattt agtttatcaa cagaatgtcg gaagttaaga aagaagtggt tcctttttcc 120
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attagtattt agtttatcaa cagaatgtcg gaagttaaga aagaagtggt tccttttttc 120
ccccatgcaa tctttattat ttattcaagg tactattata tgtttttcac gtgcgtattc 180
ccttcctaag ttgctcggac tctccagaag tgttgccgca cccgtgttgg atccttcaaa 240
aatagtgtat ttttggagga tccgacatgc acttatcaac atctttgaag agtccgagca 300
acatagctcc cttcatgcat tcttgaatct tctacattta taagtgacac ttaaacatgg 360
atttagaagg aaattaagaa agctaaagtc tatttggctt ccttgtacac aaaaaacgga 420
tcaggcaatg acttatgctc tcatcttttg atagaaatta aaatgcttag gaagaaaatc 480
atacttttgc agggaacttt gaaaactgta attagagaac agtcagttgg atcggatcac 540
atggtggttt tttcccctag ggactgcagt tctagatggt tctgttacta aatcactttc 600
aactcacttt gttgattcct agtctaaaag aattatcatt gtgaaaaatc agtaggatat 660
tatataacca ctcagaatta acacaatgaa aatttgactt gctatgattt gatgccgtaa 720
catcaggtat tctagttatt gtggcctacc attgtttcat tcagttcctt gagcttacat 780
tgtgactttc tatattatag agaacattta cagtatacta tgtttatttt gggttttcca 840
aaaatgttgt tttcatttaa tttaccaaga tgttgttttc ttttgtagag gaatgtgttg 900
gatgagaaaa taaagcgcaa ggaagaacaa gaggaaatga aggtacactt ttttgtgtcc 960
cattgggtat gaagattact caaaacactc ttgactacgg atctattaac acaagatttg 1020
gttctgtagg cagaattaca agctatgcgt gaagctgccc agtggagacg tttgcaaggt 1080

Claims (10)

1.一种基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.如权利要求1所述基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的扩增引物，其特征在于，所述扩增引物的核苷酸序列为：
正向引物序列：5’-GTCCGAGCAACATAGCTCCC-3’
反向引物序列：5’-ATGGACCAACCTTGCAAACG-3’。
3.一种番茄灰叶斑病抗性基因Sm的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、以待测番茄材料的基因组DNA为模板，利用基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的扩增引物进行PCR扩增，所述扩增引物的核苷酸序列为：
正向引物序列：5’-GTCCGAGCAACATAGCTCCC-3’、
反向引物序列：5’-ATGGACCAACCTTGCAAACG-3’；
步骤二、经PCR扩增得到如SEQ ID No.1所示CAPS分子标记的植株为携带抗性基因Sm的植株，其所得扩增产物经限制性内切酶TaqⅠ酶切，当酶切获得长度分别为589bp和208bp的两条特异性谱带时，待测番茄材料携带番茄灰叶斑病抗性基因Sm且为阳性纯合基因型；当酶切获得长度分别为589bp、208bp和797bp的三条特异性谱带时，待测番茄材料携带番茄灰叶斑病抗性基因Sm且为阳性杂合基因型；
经PCR扩增未得到如SEQ ID No.1所示CAPS分子标记的植株为不携带抗性基因Sm的植株，其所得扩增产物经限制性内切酶TaqⅠ酶切，当酶切获得的是长度为797bp的一条特异性谱带时，待测番茄材料不携带番茄灰叶斑病抗性基因Sm且为阴性纯合基因型。
4.根据权利要求3所述一种番茄灰叶斑病抗性基因Sm的检测方法，其特征在于，步骤一所述PCR扩增的反应体系为：1μL正向引物，1μL反向引物，1μL模板DNA，10μL 2×Taq PCRStarMix，7μL dd H2O。
5.根据权利要求3或4所述一种番茄灰叶斑病抗性基因Sm的检测方法，其特征在于，步骤一所述PCR扩增的扩增程序为：首先94℃预变性2min；其次94℃变性30s，57.5℃退火30s，72℃延伸40s，35个循环；最后72℃延伸5min；保存温度4℃。
6.根据权利要求5所述一种番茄灰叶斑病抗性基因Sm的检测方法，其特征在于，步骤二所述限制性内切酶TaqⅠ酶切的酶切体系为：TaqI 0.6μL，10×Taq I Buffer 1.2μL，0.1％BSA 1.2μL，PCR产物2μL，灭菌水5μL，酶切条件为65℃孵育6小时。
7.根据权利要求6所述一种番茄灰叶斑病抗性基因Sm的检测方法，其特征在于，不携带抗性基因Sm的植株的PCR扩增产物核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
8.一种基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的番茄灰叶斑病抗性基因检测试剂盒，其特征在于，包括基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的扩增引物，所述扩增引物的核苷酸序列为：
正向引物序列：5’-GTCCGAGCAACATAGCTCCC-3’
反向引物序列：5’-ATGGACCAACCTTGCAAACG-3’。
9.根据权利要求8所述一种基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记的番茄灰叶斑病抗性基因检测试剂盒，其特征在于，还包括Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、限制性内切酶TaqⅠ、Taq I Buffer、0.1％BSA和灭菌水。
10.一种基于番茄灰叶斑病抗性基因Sm的CAPS分子标记在选育番茄灰叶斑病抗性种质资源上的应用。
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