CN112245413A - 一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，包括以下实验原料：小鼠若干，LPS药剂，HYD试剂，GA甘草酸和生理盐水，通过对小鼠注射LPS刺激，模拟小鼠急性心肺损伤并建立多组模型，同时对不同模型分别进行无干预、HYD预防干预、病后HYD治疗和病后HYD+GA治疗等不同处理方法进行对比验证，综合实验数据得出：羟基酪醇对急性心肺损伤具有一定预防作用，在急性心肺损伤发生后具有较佳的治疗效果，在急性心肺损伤后与甘草酸配合使用，可以显著提升治疗效果。
Description
技术领域
本发明涉及羟基酪醇研究工艺，更具体地说，尤其涉及一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法。
背景技术
羟基酪醇是一种天然多酚类化合物，具有很强的抗氧化活性，主要以酯类的形式存在于橄榄的果实和枝叶中，具有多种生物和药理活性，可以来源于橄榄油和加工橄榄油产生的废水中，国外学者对羟基酪醇在抗癌、抗血栓、调血脂和抗动脉硬化、抗病原微生物、防治视网膜黄斑变性、保护软骨和抗骨质疏松等多方面的药理作用进行了很好的研究，部分研究还在分子水平上探讨了羟基酪醇的药理作用机制，急性心肺损伤主要是由肺动脉主干或其主要分支突然栓塞，肺循环大部受阻，以致肺动脉压急剧增高、急性右心室扩张和右心室功能衰竭的心脏及肺部疾病，发病快，致死率高。
羟基酪醇在现有技术运用时，通常应用于美容产品保健品，提高人体对矿物质的吸收，防治肺癌、乳腺癌、子宫癌、前列腺癌等以及对动脉硬化、高血压、心脏病、脑溢血等的预防与治疗，但是在对急性心肺损伤的预防和治疗作用上缺乏实践研究，为此，我们提出一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，通过对小鼠注射LPS刺激，模拟小鼠急性心肺损伤并建立多组模型，同时对不同模型分别进行无干预、HYD预防干预、病后HYD治疗和病后HYD+GA治疗等不同处理方法进行对比验证，从实验结果可得，注射LPS后小鼠左心室的EF和FS值显著降低，病理观察可得心肺组织含水量加大，心肺组织病理学改变，肺泡壁毛细血管扩张，充血，部分肺泡壁萎缩，肺泡壁增厚，灌洗液离心检测即心脏炎症因子检测后可得小鼠注射LPS后心肺炎症因子表达显著升高，达到模型急性心肺损伤的效果，实验后正常组各项指标正常；模型组小鼠出现发病死亡，左心室EF和FS值降低，心肺病理发生病变，心肺炎症因子表达升高等症状；HYD治疗组小鼠在HYD治疗后左心室EF和FS值明显升高，心肺病理病变现象显著减缓，心肺炎症因子表达显著降低，小鼠存活时间延长；预防组小鼠左心室EF和FS值轻微降低，心肺病理发生轻微病变，心肺炎症因子表达轻微降低，小鼠存活时间长于模型组，少于HYD治疗组；双重治疗组小鼠左心室EF和FS值显著升高并高于HYD治疗组，心肺病理病变现象显著减缓，心肺炎症因子表达显著降低低于HYD治疗组，小鼠存活时间长于HYD治疗组，综合实验数据得出：羟基酪醇对急性心肺损伤具有一定预防作用，在急性心肺损伤发生后具有较佳的治疗效果，在急性心肺损伤后与甘草酸配合使用，可以显著提升治疗效果。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，包括以下实验原料：小鼠若干，LPS药剂，HYD试剂，GA甘草酸和生理盐水。
优选的，包括如下步骤：
S1、实验分组：小鼠在实验室环境中饲养一周后对小鼠进行分组，按照随机原则分成正常组、模型组、预防组、单一治疗组和双重治疗组；
S2、实验建模：模型组、预防组、单一治疗组和双重治疗组进行LPS药剂注射，用碘伏消毒小鼠腹部皮肤，用棉花擦除碘伏，按照5mg/KG小鼠体重的剂量对小鼠腹腔注射LPS药剂，LPS药剂浓度为0.5mg/mL，正常组按照与其他小组LPS剂量相同的剂量注射生理盐水，预防组在进行LPS给药前按照1-3mg/KG小鼠体重的剂量对小鼠投喂HYD试剂2天；
S3、小鼠处理：正常组小鼠在注射生理盐水后按照饲喂标准正常投喂，模型组小鼠在注射LPS后按照饲喂标准正常投喂，预防组小鼠在注射LPS后按照饲喂标准正常投喂，同时停止投喂HYD，单一治疗组在注射LPS10-20min后对小鼠进行灌胃给药一次，按照10-20mg/KG体重的剂量灌胃HYD，双重治疗组在注射LPS10-20min后对小鼠进行灌胃给药一次，按照10-20mg/KG体重的HYD剂量和30-50mg/KG体重的GA剂量对小鼠进行灌胃，同时对建模后的各组小鼠进行肺泡灌洗，灌洗液于-20℃保存；
S4、实验分析a：各组建模24h后对小鼠进行超声心动检测，观察并记录各组左心室功能的变化情况，获取左心室二维图像和M型超声心动图，测量计算后得出左心室的EF和FS；
S5、实验分析b：各组建模24h后对小鼠进行麻醉，取右肺中叶，测量肺系数，切片后同时用HE进行染色，观察小鼠肺组织病理学变化情况；
S6、实验分析c：各组小鼠灌洗液进行离心处理，去除灌洗液中的炎症细胞，离心10-16min后取上清液进行TNF-α、IL-6、IL-1β、cox-2和HMGB-1蛋白表达进行检测，同时对小鼠心脏组织提取RNA，采用Real-time PCR法检测各组表达差异；
S7、小鼠处理：实验完成后对小鼠进行分类冻存于-80℃并向，并统一进行无害焚化处理。
优选的，小鼠实验前进行筛选，选取成年雄性小鼠，取6-8周龄，体重为19-23g进行实验。
优选的，小鼠建模注射过程中在5min内完成，全程无菌作业，使用一次性耗材，避免因操作导致实验各组模型差异。
本发明的技术效果和优点：
本发明通过对小鼠注射LPS刺激，模拟小鼠急性心肺损伤并建立多组模型，同时对不同模型分别进行无干预、HYD预防干预、病后HYD治疗和病后HYD+GA治疗等不同处理方法进行对比验证，从实验结果可得，注射LPS后小鼠左心室的EF和FS值显著降低，病理观察可得心肺组织含水量加大，心肺组织病理学改变，肺泡壁毛细血管扩张，充血，部分肺泡壁萎缩，肺泡壁增厚，灌洗液离心检测即心脏炎症因子检测后可得小鼠注射LPS后心肺炎症因子表达显著升高，达到模型急性心肺损伤的效果，实验后正常组各项指标正常；模型组小鼠出现发病死亡，左心室EF和FS值降低，心肺病理发生病变，心肺炎症因子表达升高等症状；HYD治疗组小鼠在HYD治疗后左心室EF和FS值明显升高，心肺病理病变现象显著减缓，心肺炎症因子表达显著降低，小鼠存活时间延长；预防组小鼠左心室EF和FS值轻微降低，心肺病理发生轻微病变，心肺炎症因子表达轻微降低，小鼠存活时间长于模型组，少于HYD治疗组；双重治疗组小鼠左心室EF和FS值显著升高并高于HYD治疗组，心肺病理病变现象显著减缓，心肺炎症因子表达显著降低低于HYD治疗组，小鼠存活时间长于HYD治疗组，综合实验数据得出：羟基酪醇对急性心肺损伤具有一定预防作用，在急性心肺损伤发生后具有较佳的治疗效果，在急性心肺损伤后与甘草酸配合使用，可以显著提升治疗效果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，包括以下实验原料：小鼠若干，LPS药剂，HYD试剂，GA甘草酸和生理盐水。
优选的，包括如下步骤：
S1、实验分组：小鼠在实验室环境中饲养一周后对小鼠进行分组，按照随机原则分成正常组、模型组、预防组、单一治疗组和双重治疗组；
S2、实验建模：模型组、预防组、单一治疗组和双重治疗组进行LPS药剂注射，用碘伏消毒小鼠腹部皮肤，用棉花擦除碘伏，按照5mg/KG小鼠体重的剂量对小鼠腹腔注射LPS药剂，LPS药剂浓度为0.5mg/mL，正常组按照与其他小组LPS剂量相同的剂量注射生理盐水，预防组在进行LPS给药前按照2mg/KG小鼠体重的剂量对小鼠投喂HYD试剂2天；
S3、小鼠处理：正常组小鼠在注射生理盐水后按照饲喂标准正常投喂，模型组小鼠在注射LPS后按照饲喂标准正常投喂，预防组小鼠在注射LPS后按照饲喂标准正常投喂，同时停止投喂HYD，单一治疗组在注射LPS15min后对小鼠进行灌胃给药一次，按照15mg/KG体重的剂量灌胃HYD，双重治疗组在注射LPS15min后对小鼠进行灌胃给药一次，按照15mg/KG体重的HYD剂量和40mg/KG体重的GA剂量对小鼠进行灌胃，同时对建模后的各组小鼠进行肺泡灌洗，灌洗液于-20℃保存；
S4、实验分析a：各组建模24h后对小鼠进行超声心动检测，观察并记录各组左心室功能的变化情况，获取左心室二维图像和M型超声心动图，测量计算后得出左心室的EF和FS；
S5、实验分析b：各组建模24h后对小鼠进行麻醉，取右肺中叶，测量肺系数，切片后同时用HE进行染色，观察小鼠肺组织病理学变化情况；
S6、实验分析c：各组小鼠灌洗液进行离心处理，去除灌洗液中的炎症细胞，离心13min后取上清液进行TNF-α、IL-6、IL-1β、cox-2和HMGB-1蛋白表达进行检测，同时对小鼠心脏组织提取RNA，采用Real-time PCR法检测各组表达差异；
S7、小鼠处理：实验完成后对小鼠进行分类冻存于-80℃并向，并统一进行无害焚化处理。
优选的，小鼠实验前进行筛选，选取成年雄性小鼠，取7周龄，体重为21g进行实验。
优选的，小鼠建模注射过程中在5min内完成，全程无菌作业，使用一次性耗材，避免因操作导致实验各组模型差异。
实施例2
一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，包括以下实验原料：小鼠若干，LPS药剂，HYD试剂，GA甘草酸和生理盐水。
优选的，包括如下步骤：
S1、实验分组：小鼠在实验室环境中饲养一周后对小鼠进行分组，按照随机原则分成正常组、模型组、预防组、单一治疗组和双重治疗组；
S2、实验建模：模型组、预防组、单一治疗组和双重治疗组进行LPS药剂注射，用碘伏消毒小鼠腹部皮肤，用棉花擦除碘伏，按照5mg/KG小鼠体重的剂量对小鼠腹腔注射LPS药剂，LPS药剂浓度为0.5mg/mL，正常组按照与其他小组LPS剂量相同的剂量注射生理盐水，预防组在进行LPS给药前按照1mg/KG小鼠体重的剂量对小鼠投喂HYD试剂2天；
S3、小鼠处理：正常组小鼠在注射生理盐水后按照饲喂标准正常投喂，模型组小鼠在注射LPS后按照饲喂标准正常投喂，预防组小鼠在注射LPS后按照饲喂标准正常投喂，同时停止投喂HYD，单一治疗组在注射LPS10min后对小鼠进行灌胃给药一次，按照10mg/KG体重的剂量灌胃HYD，双重治疗组在注射LPS10min后对小鼠进行灌胃给药一次，按照10mg/KG体重的HYD剂量和30mg/KG体重的GA剂量对小鼠进行灌胃，同时对建模后的各组小鼠进行肺泡灌洗，灌洗液于-20℃保存；
S4、实验分析a：各组建模24h后对小鼠进行超声心动检测，观察并记录各组左心室功能的变化情况，获取左心室二维图像和M型超声心动图，测量计算后得出左心室的EF和FS；
S5、实验分析b：各组建模24h后对小鼠进行麻醉，取右肺中叶，测量肺系数，切片后同时用HE进行染色，观察小鼠肺组织病理学变化情况；
S6、实验分析c：各组小鼠灌洗液进行离心处理，去除灌洗液中的炎症细胞，离心10min后取上清液进行TNF-α、IL-6、IL-1β、cox-2和HMGB-1蛋白表达进行检测，同时对小鼠心脏组织提取RNA，采用Real-time PCR法检测各组表达差异；
S7、小鼠处理：实验完成后对小鼠进行分类冻存于-80℃并向，并统一进行无害焚化处理。
优选的，小鼠实验前进行筛选，选取成年雄性小鼠，取6周龄，体重为19g进行实验。
优选的，小鼠建模注射过程中在5min内完成，全程无菌作业，使用一次性耗材，避免因操作导致实验各组模型差异。
实施例3
一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，包括以下实验原料：小鼠若干，LPS药剂，HYD试剂，GA甘草酸和生理盐水。
优选的，包括如下步骤：
S1、实验分组：小鼠在实验室环境中饲养一周后对小鼠进行分组，按照随机原则分成正常组、模型组、预防组、单一治疗组和双重治疗组；
S2、实验建模：模型组、预防组、单一治疗组和双重治疗组进行LPS药剂注射，用碘伏消毒小鼠腹部皮肤，用棉花擦除碘伏，按照5mg/KG小鼠体重的剂量对小鼠腹腔注射LPS药剂，LPS药剂浓度为0.5mg/mL，正常组按照与其他小组LPS剂量相同的剂量注射生理盐水，预防组在进行LPS给药前按照3mg/KG小鼠体重的剂量对小鼠投喂HYD试剂2天；
S3、小鼠处理：正常组小鼠在注射生理盐水后按照饲喂标准正常投喂，模型组小鼠在注射LPS后按照饲喂标准正常投喂，预防组小鼠在注射LPS后按照饲喂标准正常投喂，同时停止投喂HYD，单一治疗组在注射LPS20min后对小鼠进行灌胃给药一次，按照20mg/KG体重的剂量灌胃HYD，双重治疗组在注射LPS20min后对小鼠进行灌胃给药一次，按照20mg/KG体重的HYD剂量和50mg/KG体重的GA剂量对小鼠进行灌胃，同时对建模后的各组小鼠进行肺泡灌洗，灌洗液于-20℃保存；
S4、实验分析a：各组建模24h后对小鼠进行超声心动检测，观察并记录各组左心室功能的变化情况，获取左心室二维图像和M型超声心动图，测量计算后得出左心室的EF和FS；
S5、实验分析b：各组建模24h后对小鼠进行麻醉，取右肺中叶，测量肺系数，切片后同时用HE进行染色，观察小鼠肺组织病理学变化情况；
S6、实验分析c：各组小鼠灌洗液进行离心处理，去除灌洗液中的炎症细胞，离心16min后取上清液进行TNF-α、IL-6、IL-1β、cox-2和HMGB-1蛋白表达进行检测，同时对小鼠心脏组织提取RNA，采用Real-time PCR法检测各组表达差异；
S7、小鼠处理：实验完成后对小鼠进行分类冻存于-80℃并向，并统一进行无害焚化处理。
优选的，小鼠实验前进行筛选，选取成年雄性小鼠，取8周龄，体重为23g进行实验。
优选的，小鼠建模注射过程中在5min内完成，全程无菌作业，使用一次性耗材，避免因操作导致实验各组模型差异。
综上所述：本发明提供的一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，通过对小鼠注射LPS刺激，模拟小鼠急性心肺损伤并建立多组模型，同时对不同模型分别进行无干预、HYD预防干预、病后HYD治疗和病后HYD+GA治疗等不同处理方法进行对比验证，从实验结果可得，注射LPS后小鼠左心室的EF和FS值显著降低，病理观察可得心肺组织含水量加大，心肺组织病理学改变，肺泡壁毛细血管扩张，充血，部分肺泡壁萎缩，肺泡壁增厚，灌洗液离心检测即心脏炎症因子检测后可得小鼠注射LPS后心肺炎症因子表达显著升高，达到模型急性心肺损伤的效果，实验后正常组各项指标正常；模型组小鼠出现发病死亡，左心室EF和FS值降低，心肺病理发生病变，心肺炎症因子表达升高等症状；HYD治疗组小鼠在HYD治疗后左心室EF和FS值明显升高，心肺病理病变现象显著减缓，心肺炎症因子表达显著降低，小鼠存活时间延长；预防组小鼠左心室EF和FS值轻微降低，心肺病理发生轻微病变，心肺炎症因子表达轻微降低，小鼠存活时间长于模型组，少于HYD治疗组；双重治疗组小鼠左心室EF和FS值显著升高并高于HYD治疗组，心肺病理病变现象显著减缓，心肺炎症因子表达显著降低低于HYD治疗组，小鼠存活时间长于HYD治疗组，综合实验数据得出：羟基酪醇对急性心肺损伤具有一定预防作用，在急性心肺损伤发生后具有较佳的治疗效果，在急性心肺损伤后与甘草酸配合使用，可以显著提升治疗效果。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，其特征在于：包括以下实验原料：小鼠若干(长沙市天勤生物技术有限公司)，LPS药剂(上海沪鼎生物科技有限公司)，HYD试剂(桂林益天成生物科技有限公司)，GA甘草酸(湖北信康医药化工有限公司)和生理盐水(上海一研生物科技有限公司)。
2.根据权利要求1所述的一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1、实验分组：小鼠在实验室环境中饲养一周后对小鼠进行分组，按照随机原则分成正常组、模型组、预防组、单一治疗组和双重治疗组；
S2、实验建模：模型组、预防组、单一治疗组和双重治疗组进行LPS药剂注射，用碘伏消毒小鼠腹部皮肤，用棉花擦除碘伏，按照5mg/KG小鼠体重的剂量对小鼠腹腔注射LPS药剂，LPS药剂浓度为0.5mg/mL，正常组按照与其他小组LPS剂量相同的剂量注射生理盐水，预防组在进行LPS给药前按照1-3mg/KG小鼠体重的剂量对小鼠投喂HYD试剂2天；
S3、小鼠处理：正常组小鼠在注射生理盐水后按照饲喂标准正常投喂，模型组小鼠在注射LPS后按照饲喂标准正常投喂，预防组小鼠在注射LPS后按照饲喂标准正常投喂，同时停止投喂HYD，单一治疗组在注射LPS10-20min后对小鼠进行灌胃给药一次，按照10-20mg/KG体重的剂量灌胃HYD，双重治疗组在注射LPS10-20min后对小鼠进行灌胃给药一次，按照10-20mg/KG体重的HYD剂量和30-50mg/KG体重的GA剂量对小鼠进行灌胃，同时对建模后的各组小鼠进行肺泡灌洗，灌洗液于-20℃保存；
S4、实验分析a：各组建模24h后对小鼠进行超声心动检测，观察并记录各组左心室功能的变化情况，获取左心室二维图像和M型超声心动图，测量计算后得出左心室的EF和FS；
S5、实验分析b：各组建模24h后对小鼠进行麻醉，取右肺中叶，测量肺系数，切片后同时用HE进行染色，观察小鼠肺组织病理学变化情况；
S6、实验分析c：各组小鼠灌洗液进行离心处理，去除灌洗液中的炎症细胞，离心10-16min后取上清液进行TNF-α、IL-6、IL-1β、cox-2和HMGB-1蛋白表达进行检测，同时对小鼠心脏组织提取RNA，采用Real-time PCR法检测各组表达差异；
S7、小鼠处理：实验完成后对小鼠进行分类冻存于-80℃并向，并统一进行无害焚化处理。
3.根据权利要求2所述的一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，其特征在于：小鼠实验前进行筛选，选取成年雄性小鼠，取6-8周龄，体重为19-23g进行实验。
4.根据权利要求2所述的一种羟基酪醇对小鼠急性心肺损伤保护作用的方法，其特征在于：小鼠建模注射过程中在5min内完成，全程无菌作业，使用一次性耗材，避免因操作导致实验各组模型差异。
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| LUCIA RECINELLA等: "Protective Effects Induced by Two Polyphenolic Liquid Complexes from Olive (Olea europaea, mainly Cultivar Coratina) Pressing Juice in Rat Isolated Tissues Challenged with LPS", 《MOLECULES》 * |
| SEO EH等: "Effects of Glycyrrhizin on the Differentiation of Myeloid Cells of the Heart and Lungs in Lipopolysaccharide-Induced Septic Mice", 《SHOCK》 * |
| X. YANG等: "Hydroxytyrosol Attenuates LPS-Induced Acute Lung Injury in Mice by Regulating Autophagy and Sirtuin Expression", 《CURRENT MOLECULAR MEDICINE》 * |
| YUTAKA YONEZAWA等: "Anti-inflammatory effects of olive-derived hydroxytyrosol on lipopolysaccharideinduced inflammation in RAW264.7 cells", 《J VET MED SCI》 * |
| 彭美玉等: "羟基酪醇对脓毒症诱导的急性心肺损伤的保护作用及机制", 《中国免疫学杂志》 * |
| 瞿利花;陈阳晔;李懿;何炜;张冉: "甘草酸对 LPS 诱导的小鼠急性肺损伤中ACE2的影响", 《湖南师范大学学报(医学版)》 * |
| 魏静元: "羟基酪醇对LPS引起的小鼠急性肺损伤的保护作用", 《食品与机械》 * |
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