CN112210594A - 一种逆转录试剂的冻干保护剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种逆转录试剂的冻干保护剂。该冻干保护剂的成分为沙鲁胺。逆转录试剂中添加所述冻干保护剂后试剂本身性能不受影响，且冻干不损失活性。冻干后的试剂可以在常温保存，有利于逆转录试剂的保存和运输。

Description

一种逆转录试剂的冻干保护剂
技术领域
本发明属于分子生物学领域，涉及一种用于逆转录试剂冻干的冻干保护剂和一种可冻干的逆转录试剂。
背景技术
分子诊断是应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平而做出诊断的技术，常见的分子诊断方法有PCR、等温扩增、测序等，这些方法的检测靶标均为DNA。当检测对象的遗传物质为RNA时(如新型冠状病毒2019-nCoV)，上述检测方法不能直接对RNA进行检测，需先将RNA转化为DNA，再对转化得到的DNA进行检测。
这种将RNA转化为DNA的方法被称为逆转录，需要逆转录酶的参与。由于逆转录酶在常温下容易失活，故逆转录试剂需要在低温环境下(如-20℃)储存和运输，为逆转录试剂的使用造成了诸多不便。而由于试剂保存不当失活更是可能导致临床上假阴性的检测结果。
真空冷冻干燥(简称冻干)是一种能有效提升生物制品保存稳定性的方法，为防止有效成分在冻干过程中丢失生物学活性，冻干试剂往往需要添加冻干保护剂，如甘露醇、蔗糖、PEG、白蛋白等。但这些常用的冻干保护剂均对逆转录反应本身有较大程度的抑制，故不能作为逆转录试剂的冻干保护剂。
发明内容
本发明要解决的技术问题是为了克服现有技术中的上述缺陷，提供一种用于逆转录试剂冻干的冻干保护剂和一种可冻干的逆转录试剂。
本发明是通过下述技术方案来解决上述技术问题：
一种用于逆转录试剂冻干的冻干保护剂，所述冻干保护剂的成分为沙鲁胺(Salubrinal)。
在本方案中，逆转录试剂中添加所述冻干保护剂后试剂本身性能不受影响，且冻干不损失活性。冻干后的试剂可以在常温保存，为逆转录试剂的保存和运输提供了极大的便利。
较佳地，所述冻干保护剂中沙鲁胺(Salubrinal)的工作浓度为1％～10％。
一种可冻干的逆转录试剂，所述逆转录试剂使用了上述冻干保护剂。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明的积极进步效果在于：本发明通过在逆转录试剂中添加工作浓度为1％～10％的沙鲁胺(Salubrinal)，既不影响逆转录试剂本身的性能，又使得试剂可以冻干而不影响活性。冻干后的试剂可以在常温保存，为逆转录试剂的保存和运输提供了极大的便利。
附图说明
图1为实施例1中逆转录试剂中加入常规冻干保护剂(甘露醇)和加入沙鲁胺(Salubrinal)后，逆转录试剂的性能示意图。
图2为实施例1中逆转录试剂中加入沙鲁胺(Salubrinal)后，冻干前后逆转录试剂的性能对比图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：配制不同保护剂的逆转录试剂
1)配制使用甘露醇作为冻干保护剂的逆转录试剂(甘露醇+)
量取35μL 1M Tris-HCL(pH＝7.6)、75μL 3M KCl、65μL 0.5M MgCl2、20μL 10mMdNTP、10μL随机引物、5μL逆转录酶和250μL 20％甘露醇，混合均匀后用DEPC水补足1mL得到使用甘露醇作为保护剂的逆转录试剂(甘露醇+)。
2)配制使用沙鲁胺作为冻干保护剂的逆转录试剂(沙鲁胺+)
量取35μL 1M Tris-HCL(pH＝7.6)、75μL 3M KCl、65μL 0.5M MgCl2、20μL 10mMdNTP、10μL随机引物、5μL逆转录酶和500μL 10％沙鲁胺，混合均匀后用DEPC水补足1mL得到使用沙鲁胺作为保护剂的逆转录试剂(沙鲁胺+)。
实施例2：比较冻干保护剂对逆转录试剂性能的影响
取提取的甲型流感病毒RNA产物，用实施例1中配制的两种逆转录试剂进行逆转录，再用甲型流感病毒检测试剂盒(实时荧光PCR法)进行检测。
检测结果如图1所示，从结果可以看出，使用甘露醇作为冻干保护剂，对逆转录试剂的性能有较大程度的抑制，而使用沙鲁胺作为冻干保护剂，几乎对逆转录试剂的性能没有影响。
实施例3：比较使用沙鲁胺作为冻干保护剂，逆转录试剂冻干前后性能的影响。
取实施例1中配制逆转录试剂(沙鲁胺+)，按照下表冻干条件进行冻干。
步骤 预冻 一次升华 解析干燥
温度 -45℃ -25℃ 30℃
时间 3h 8h 5h
真空度 / 1Pa 1Pa
取提取的甲型流感病毒RNA产物，用冻干后的试剂进行逆转录，再用甲型流感病毒检测试剂盒(实时荧光PCR法)进行检测。
检测结果如图2所示，从结果可以看出，使用沙鲁胺作为冻干保护剂，逆转录试剂冻干前后的性能几乎没有变化。

Claims (4)

1.一种用于逆转录试剂冻干的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂的成分为沙鲁胺。
2.如权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂的工作浓度为1％～10％。
3.一种可冻干的逆转录试剂，其特征在于，其包括如权利要求1或2所述的冻干保护剂。
4.如权利要求3所述的可冻干的逆转录试剂，其特征在于，所述可冻干的逆转录试剂中还包括随机引物、dNTP、逆转录酶。
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