CN112195116B - 一种海洋硝化细菌及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种海洋硝化细菌及其制备方法与应用，通过提供对盐分耐受性高并可在好氧条件下去除污染水源中六价铬和氨氮的可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04对皮革废水进行处理，解决了现有硝化细菌受皮革废水中有毒物质的抑制对六价铬和氨氮的去除能力降低的问题，且通过实验证明可疑亚硫酸盐杆菌PT04自身有较高的生物安全性，利用酶促反应对将Cr(VI)和氨氮转化为毒性更低的产物，皮革废水的氨氮和六价铬处理中显示出良好的效果，具有还原效果好、硝化效率高、绿色环保的优点，在生物修复领域具有良好的应用前景。

Description

一种海洋硝化细菌及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及皮革废水处理技术领域，具体涉及一种海洋硝化细菌及其制备方法与应用。
背景技术
皮革是我国轻工业重要支柱产业，但所带来的污染也对环境造成了损害，皮革废水具有高盐度、高氨氮、低营养、高重金属铬含量等特点，其中含铬废水主要来自铬鞣环节，由于六价铬毒性是三价铬的100倍，所以通常处理六价铬污染的方法是将六价铬转化为三价铬，常见处理六价铬废水的方法中，以微生物法具有投资小、运行费用低、无二次污染等优点引起越来越多重视；
高氨氮废水输入引起湖泊富营养化、水生生物死亡扰乱了正常的生态系统平衡，对生态环境造成严重危害；制革废水氨氮浓度较高，一方面制革过程是各种动物原皮的机械、化学(含生化)处理过程；动物原皮本身含大量的胶原蛋白，制革水场各工序中，本身就释放大量有机氮；另一方面在制革的脱灰工序中还要投加硫酸铵、氯化铵等含氨氮化学品，导致皮革废水对于环境的影响巨大；
且在皮革废水的处理过程中，生物处理对氨氮降解彻底，运行费用低，是目前应用最广泛的脱氮技术；制革废水成分复杂，加上氨氮、六价铬、盐分等对微生物生长有抑制作用的有毒物质，在生物法除氨氮过程中，会对微生物产生抑制作用从而影响处理效果，导致现有的硝化细菌并不能有效地去除皮革废水中的氨氮和六价铬，而在目前尚未发现具有异养硝化或六价铬还原能力的亚硫酸杆菌属菌株。
发明内容
针对上述存在的问题，本发明旨在提供一种海洋硝化细菌及其制备方法与应用，通过提供对盐分耐受性高并可在好氧条件下去除污染水源中六价铬和氨氮的可疑亚硫酸盐杆菌Sulfitobacter dubius PT04对皮革废水进行处理，解决了现有硝化细菌受皮革废水中有毒物质的抑制对氨氮的去除能力降低的问题，且通过实验证明可疑亚硫酸盐杆菌PT04自身有较高的生物安全性，利用酶促反应对将Cr(VI)和氨氮转化为毒性更低的产物，皮革废水的氨氮和六价铬处理中显示出良好的效果，具有还原效果好、硝化效率高、绿色环保的特点，在生物修复领域具有良好的应用前景。
为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
一种海洋硝化细菌，该硝化细菌为可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)可疑亚硫酸盐杆菌PT04，其于2020年6月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.20074。
优选的，所述的可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04的16S rDNA序列为SEQ ID NO:1所示核苷酸序列。
一种海洋硝化细菌的制备方法，包括步骤：
S1.可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04菌株的分离纯化，得到生长良好且菌落直径>4mm的具有Cr(VI)和氨氮耐受性的菌落；
S2.对纯化得到的PT01-PT05菌株的六价铬还原及氨氮降解性能进行鉴定，得到可疑亚硫酸盐杆菌PT04的六价铬及氨氮去除率最高；
S3.对可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04菌株进行PCR扩增和鉴定。
优选的，步骤S1所述的可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04菌株的分离纯化的过程包括：
S101.取深海沉积物样品1g，接入100mL添加有100mg/L Cr(VI)的异养硝化液体培养基中，于30℃，170rpm摇床富集培养5d；
S102.然后以1％比例转接到新的富集培养基中，继续富集5d；
S103.富集后，用稀释涂布平板法以10倍梯度稀释，各吸取0.2mL涂布在含同样浓度Cr(VI)和氨氮的异养硝化固体培养基上，在30℃倒置培养24h；
S104.观察记录不同单菌落特征，用接种针挑出挑取不同形态的单菌落，以三线法在分离培养基上纯化3-4次，得到5株生长良好且菌落直径>4mm的具有Cr(Ⅵ)和氨氮耐受性的菌落，分别编号PT01-PT05。
优选的，步骤S2所述的对步骤S1纯化得到的菌株的六价铬还原及氨氮降解性能进行鉴定的过程包括：
S201.获得的纯化菌株以170rpm、30℃在异养硝化液体培养基中过夜预培养后，以1％的接种量接种到添加有100mg/L Cr(VI)的100mL异养硝化液体培养基；
S202.每组三个平行样，同时设立两个对照组，一个对照组没有接种；另一个对照组接种经过高压灭菌的菌株，将预培养的菌液经5000g离心5min后，在121℃环境下，灭菌20min，并在异养硝化液体培养基中重悬，然后接种到添加Cr(VI)的异养硝化液体培养基中；
S203.各菌株于170rpm、30℃培养3天后，菌液经4000g离心5min，去除菌体；
S204.用纳氏试剂光度法测定上清液中氨氮含量，并采用二苯碳酰二肼分光光度法测定Cr(VI)浓度，计算氨氮降解率和Cr(VI)还原率，得到PT04氨氮降解率最高。
优选的，步骤S101和步骤S201所述的异养硝化液体培养基的制备过程包括：
异养硝化细菌液体培养基中：(NH4)2SO4 1g，葡萄糖5g,蔗糖5g，酵母膏0.2g，NaH2PO4 0.5g,过滤海水定容至1L，pH 7.0，并在高压灭菌锅中121℃灭菌15分钟；
其中：如果是固体培养基，需加入2％琼脂，所有培养基在高压灭菌锅中121℃灭菌15分钟。
优选的，步骤S3所述的对可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04菌株进行PCR扩增和鉴定的具体过程包括：
S301.设计细菌16SrDNA基因引物，扩增可疑亚硫酸盐杆菌PT04的16S rDNA序列，经过扩增产物测序得到大小为1362bp的基因片段，碱基序列如SEQ ID NO:1所示；
S302.将测序结果与NCBI及EzBioCloud数据库中的16SrDNA序列进行同源性比对，结果显示菌株可疑亚硫酸盐杆菌PT04与可疑亚硫酸盐杆菌DSM16472T亲缘关系最近，同源性达到98.3％；
S303.选取菌株可疑亚硫酸盐杆菌PT04及同源性相近菌株的16S rDNA序列，试用MEGA 4.0、NJ算法构建系统进化树，得到菌株PT04的进化树。
优选的，步骤S301所述的基因引物包括正向引物和反向引物：
正向引物为27F：5’-AGA GTT TGA TC(C/A)TGG CTC AG-3’；
反向引物为1492R：5’-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3’。
一种海洋硝化细菌的应用，所述的可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04可用于皮革废水中六价铬的还原和氨氮的消除。
本发明的有益效果是：本发明公开了一种海洋硝化细菌及其制备方法与应用，与现有技术相比，本发明的改进之处在于：
本发明通过设计了一种海洋硝化细菌可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter
dubius)PT04，对皮革废水中的六价铬进行还原处理，解决了现有硝化细菌受皮革废水中有毒物质的抑制对氨氮的去除能力降低的问题；同时通过实验证明可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04自身有较高的生物安全性，利用酶促反应对将Cr(VI)和氨氮转化为毒性更低的产物，而不是靠菌体自身吸收或富集有毒成分，因此具有好的还原效果和生物修复效果；且由于细菌在生长过程中不断繁殖和代谢，不断将有毒底物进行转化，不会出现反应饱和现象，该菌株在皮革废水的氨氮和六价铬处理中显示出良好的效果，具有还原效果好、硝化效率高、绿色环保的优点，在生物修复领域具有良好的应用前景。
附图说明
图1为本发明可疑亚硫酸盐杆菌PT04的系统进化分析图。
图2为本发明不同菌株对异养硝化液体培养基中氨氮和Cr(VI)的去除百分率对比图。
图3为本发明pH对可疑亚硫酸盐杆菌PT04氨氮降解和Cr(VI)还原效率的影响对比图。
图4为本发明温度对可疑亚硫酸盐杆菌PT04氨氮降解和Cr(VI)还原效率的影响对比图。
图5为本发明NaCl浓度对可疑亚硫酸盐杆菌PT04氨氮降解和Cr(VI)还原效率的影响对比图。
图6为本发明可疑亚硫酸盐杆菌PT04不同细胞组分中氨氮降解和氨氮降解酶和Cr(VI)还原酶的酶活图。
图7为本发明可疑亚硫酸盐杆菌PT04对皮革废水的生物修复效果图。
其中：在图3中：温度：30℃；NaCl浓度:5％；在图4中：pH:7.0，NaCl浓度：5％；在图5中：pH:7.0，温度：30℃；在图7中：温度:30℃，pH:7.0，NaCl浓度:4％。
具体实施方式
为了使本领域的普通技术人员能更好的理解本发明的技术方案，下面结合附图和实施例对本发明的技术方案做进一步的描述。
参照附图1-7所示的一种海洋硝化细菌及其制备方法与应用；
一种海洋硝化细菌，该硝化细菌为可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04，其于2020年6月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.20074。
所述的可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04的16S rDNA序列为SEQID NO:1所示核苷酸序列。
实施例1：上述可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04的制备方法包括：
S1.可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04菌株的分离纯化：
S101.取深海沉积物样品1g，接入100mL添加有100mg/L Cr(VI)的异养硝化液体培养基中，于30℃，170rpm摇床富集培养5d；
S102.然后以1％比例转接到新的富集培养基中，继续富集5d；
S103.富集后，用稀释涂布平板法以10倍梯度稀释，各吸取0.2mL涂布在含同样浓度Cr(VI)和氨氮的异养硝化固体培养基上，在30℃倒置培养24h；
S104.观察记录不同单菌落特征，用接种针挑出挑取不同形态的单菌落，以三线法在分离培养基上纯化3-4次，得到5株生长良好且菌落直径>4mm的具有Cr(VI)和氨氮耐受性的菌落，分别编号PT01-PT05
其中：所述深海沉积物样品由“大洋一号”考察船26航次于2012年8月获得，采集自中大西洋DY26-3TVG10站位(15.16S，13.35W)，水深2770m，由电视抓斗采样器采集，样品采集后立刻转移到4℃保存；
步骤S101所述的异养硝化液体培养基的制备过程包括：(NH4)2SO4 1g，葡萄糖5g,蔗糖5g,酵母膏0.2g,NaH2PO4 0.5g，过滤海水定容至1L，pH 7.0，并在高压灭菌锅中121℃灭菌15分钟；如果是固体培养基，需加入2％琼脂，所有培养基在高压灭菌锅中121℃灭菌15分钟。
S2.对纯化得到的PT01-PT05菌株的六价铬还原及氨氮降解性能进行鉴定：
S201.获得的纯化菌株以170rpm、30℃在异养硝化液体培养基中过夜预培养后，以1％的接种量接种到添加有100mg/L Cr(VI)的100mL异养硝化液体培养基；
S202.每组三个平行样，同时设立两个对照组，一个对照组没有接种；另一个对照组接种经过高压灭菌的菌株，将预培养的菌液经5000g离心5min后，在121℃环境下，灭菌20min，并在异养硝化液体培养基中重悬，然后接种到添加Cr(VI)的异养硝化液体培养基中；
S203.各菌株于170rpm、30℃培养3天后，菌液经4000g离心5min，去除菌体；
S204.用纳氏试剂光度法测定上清液中氨氮含量，并采用二苯碳酰二肼分光光度法测定Cr(VI)浓度，计算氨氮降解率和Cr(Ⅵ)还原率；结果如图2所示，五株菌株都具备氨氮降解能力，其中可疑亚硫酸盐杆菌PT04氨氮降解率最高，该菌株同时具有较高的Cr(VI)还原能力，因此对可疑亚硫酸盐杆菌PT04做进一步研究；
其中：步骤S201所述的异养硝化液体培养基的制备过程包括：(NH4)2SO41g，葡萄糖5g,蔗糖5g,酵母膏0.2g,NaH2PO4 0.5g,过滤海水定容至1L，pH7.0，并在高压灭菌锅中121℃灭菌15分钟；如果是固体培养基，需加入2％琼脂，所有培养基在高压灭菌锅中121℃灭菌15分钟。
S3.对可疑亚硫酸盐杆菌PT04菌株进行PCR扩增和鉴定：
S301.设计细菌16SrDNA基因引物，扩增可疑亚硫酸盐杆菌PT04的16S rDNA序列，经过扩增产物测序得到大小为1362bp的基因片段，碱基序列如SEQ ID NO:1所示；
S302.将测序结果与NCBI及EzBioCloud数据库中的16SrDNA序列进行同源性比对，结果显示可疑亚硫酸盐杆菌PT04与可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)DSM16472T亲缘关系最近，同源性达到98.3％；
S303.然后，选取菌株可疑亚硫酸盐杆菌PT04及同源性相近菌株的16S rDNA序列，试用MEGA 4.0、NJ算法构建系统进化树，得到菌株可疑亚硫酸盐杆菌PT04的进化树如图1所示。
实施例2：对于可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04应用于皮革废水中六价铬的还原作用的研究，具体为探索pH、温度和盐度对可疑亚硫酸盐杆菌PT04氨氮降解和Cr(VI)还原的影响：
S1.探索PH值对氨氮降解和Cr(VI)还原的影响：
不同微生物都有其自身最适生长的pH，pH过高过低都会影响其生长代谢，进而影响微生物对生物处理能力；
用NaOH和HCl将培养基的初始pH值调整为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0；异养硝化液体培养基中添加的Cr(VI)浓度为100mg/L，NaCl浓度为5％；接种PT04，于170rpm、30℃培养3天后,检测不同pH值对菌株可疑亚硫酸盐杆菌PT04氨氮降解和Cr(VI)还原效率的影响；
结果如图3所示，B30脱色和Cr(VI)还原效率随着初始pH值的增大呈现出先增后减的趋势，其中初始pH7.0时Cr(VI)的还原和氨氮降解率都达到最高水平。
S2.探索温度对氨氮降解和Cr(VI)还原的影响：
为了探究温度对氨氮降解和Cr(VI)还原的影响，将可疑亚硫酸盐杆菌PT04培养温度设为20、25、30、35、40℃，异养硝化液体培养基中添加的初始Cr(VI)浓度为100mg/L，初始pH设置为7，于170rpm培养3天后，检测不同温度对菌株可疑亚硫酸盐杆菌PT04氨氮降解和Cr(VI)还原效率的影响；
结果如图4所示，其氨氮降解最佳温度为30℃，Cr(VI)还原最佳温度为25℃。
S3.探索盐度对氨氮降解和Cr(VI)还原的影响：
为探究盐度对可疑亚硫酸盐杆菌PT04氨氮降解和Cr(VI)还原的影响，将培养基原始盐度调在0～8范围内，如图5所示，在低于6％NaCl浓度下，PT04氨氮降解率和六价铬还原能力保持在较高位置，说明该菌具有良好的耐盐性，在高盐度废水的处理方面具有应用潜力。
实施例3：对于可疑亚硫酸盐杆菌(Sulfitobacter dubius)PT04的还原原理、生物安全性、生物修复和对卤虫的急性毒性效应进行探究：
S1.探究Cr(VI)还原酶和氨氮降解酶的定位
PT04在异养硝化液体培养基中培养24h后，6000g离心10min；菌液上清在测定酶活前保存在4℃。菌体沉淀用冷藏的PBS缓冲液洗涤两次后重悬至终浓度0.1g/mL。菌悬液在冰浴环境中进行超声处理。750W 40％功率，10秒超声，10秒间隔超声20min。获得细胞裂解液在4℃条件下用175000g离心30min。细胞裂解上清液用0.22μm滤膜过滤。获得无细胞滤液为可溶性酶来源，而细胞膜和细胞碎片离心后留在沉淀中，用同体积的PBS进行重悬。分别测定菌液上清、细胞裂解上清、无细胞滤液和细胞碎片中Cr(VI)还原酶和氨氮降解酶的活性。单位酶活定义为28℃下1min催化还原1μmol底物所需要的酶量。酶的比活力为每毫克质量的蛋白质中所含的酶的催化活力。以不加菌体组分的反应液作为阴性对照，以菌体组分于100℃加热30min的样品作为非生物对照。所有酶活反应都采用三个重复实验。结果发现非生物对照不存在Cr(VI)还原和氨氮降解能力，说明Cr(VI)和氨氮浓度的降低是由酶活反应而不是化学反应或物理吸附引起的。
不同细胞组分的氨氮降解酶和Cr(VI)还原酶的活性如图6所述，氨氮降解酶活性主要存在于细胞裂解上清和无细胞滤液中，说明可溶性氨氮降解酶存在于细胞质等细胞可溶组分中；Cr(VI)还原活性主要存在于细胞碎片中，说明Cr(VI)还原酶是膜结合酶。
S2.探究可疑亚硫酸盐杆菌PT04的生物安全性：
采用浸浴实验判断可疑亚硫酸盐杆菌PT04对实验动物南美白对虾的生物安全性；
南美白对虾在实验室动物房连续充气的水箱中于28℃饲养两周以适应环境；对虾喂食基础饲料，每日头尾饲料3次，日投饵量为对虾体重5％；每日清理粪便并换水1次，日换水量20％；挑选初始均重为(1.6±0.2g)的健康个体90尾，随机分成2组，每组3个重复，第一组为实验组，水体中添加107CFU/mL可疑亚硫酸盐杆菌PT04菌液，第二组为不添加菌液的对照组。浸浴实验进行7d，7d后统计南美白对虾死亡率；结果表明在107CFU/mL菌液浸浴下，南美白对虾死亡率为零，说明可疑亚硫酸盐杆菌PT04对南美白对虾是安全的。
S3.探究可疑亚硫酸盐杆菌PT04对皮革废水的生物修复：
对可疑亚硫酸盐杆菌PT04在实际生产皮革废水中六价铬和染料的去除能力进行分析；
从皮革厂获取废水样品呈红褐色，对水质进行鉴定发现，其化学需氧量(COD)为3800mg/L，总溶解固体(TDS)为84g/L，NH4-N为270mg/L，Cr(VI)为160mg/L，pH＝7.8；废水样品用滤纸过滤后，pH值调到7.0；然后100mL废水加入到100mL过夜培养的可疑亚硫酸盐杆菌PT04培养液中；废水中加入同样体积未接种培养液作为对照组。实验组和对照组在30℃下170rpm培养7天，每过24小时取样分析；
如图7所示：结果显示，在第7天氨氮降解率达到73％；对照组在培养7天后脱色率为3.4％；对废水中六价铬浓度分析结果显示，处理7天后实验组Cr(VI)去除率为67％，而对照组去除率为2.8％，说明废水中已有的微生物对可疑亚硫酸盐杆菌PT04的氨氮去除和六价铬还原能力没有显著影响。
S4.探究染料、Cr(VI)和皮革废水对卤虫的急性毒性效应：
为分析PT04生物修复的安全性，以对有毒物质高敏感型的实验动物卤虫为受试动物比较氨氮、Cr(VI)和皮革废水在处理前后的急性毒性的大小；
一期卤虫在人工海水(34g/L)中孵化后分别与可疑亚硫酸盐杆菌PT04处理前和处理后的氨氮(初始浓度1g/L)、Cr(VI)(初始浓度100mg/L)和废水样品共孵育，未接种可疑亚硫酸盐杆菌PT04的培养基为阴性对照；孵育24小时候后统计卤虫的死亡率；由于样品毒性过高会导致卤虫100％的死亡率，因此Cr(VI)和废水的急毒性检测需要将样品分别稀释8倍和4倍进行；
结果如表1所示，可疑亚硫酸盐杆菌PT04处理过的样品的毒性均显著低于未处理样品，进一步说明了该菌株在试剂废水处理中应用的可行性；
表1：卤虫暴露在氨氮、Cr(VI)和皮革废水中24小时后的死亡率
Figure BDA0002680864300000121
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
序列表
<110> 闽江学院
<120> 一种海洋硝化细菌及其制备方法与应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1362
<212> DNA
<213> 可疑亚硫酸盐杆菌 PT04 (Sulfitobacter dubius PT04)
<400> 1
gaggggcagc taccatgcag tcgagcgaga ccttcgggtc tagcggcgga cgggttagta 60
acgcgtggga acgtgccctt ctctgcggaa tagccactgg aaacggtgag taataccgca 120
tacgcccttc gggggaaaga tttatcggag aaggatcggc ccgcgttaga ttagatagtt 180
ggtggggtaa tggcctacca agtctacgat ctatagctgg ttttagagga tgatcagcaa 240
cactgggact gagacacggg cccaggactc ctacgggagg cagcagtggg ggaatcttag 300
acaatgggcg caagcctgat ctagccatgc cgcgtgtgtg atgaaggtct taggatcgta 360
aagcactttc gccagggatg ataatgacag tacctggtaa agaaaccccg gctaactccg 420
tgccagcagc cgcggtaata cggagggggt tagcgttgtt cggaattact gggcgtaaag 480
cgtacgtagg cggatcagaa agttgggggt gaaatcccgg ggctcaaccc cggaactgcc 540
tccaaaactc ctggtcttga gttcgagaga ggtgagtgga attccaagtg tagaggtgaa 600
attcgtagat atttggagga acaccagtgg cgaaggcggc tcactggctc gatactgacg 660
ctgaggtacg aaagtgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacaccgtaa 720
acgatgaatg ccagtcgtcg ggcagtatac tgttcggtga cacacctaac ggattaagca 780
ttccgcctgg rgagtacggt cgcaagatta aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac 840
aagcggtgga gcatgtggtt taattcgaag caacgcgcag aaccttacca acccttgaca 900
tcctgtgcta acccgagaga tcgggcgttc acttcggtga cgcagtgaca ggtgctgcat 960
ggctgtcgtc agctcgtgtc gtgagatgtt cggttaagtc cggcaacgag cgcaacccac 1020
atccttagtt gccagcagtt cggctgggca ctctaaggaa actgcccgtg ataagcggga 1080
ggaargtgtg gatgacgtca agtcctcatg gcccttacgg gttgggctac acacgtgcta 1140
caatggcagt gacaatgggt taatccccaa aagctgtctc agttcggatt ggggtctgca 1200
actcgacccc atgaagtcgg aatcgctagt aatcgtggaa cagcatgcca cggtgaatac 1260
gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca caccatggga gttggttcta cccgacggcc 1320
gtgcgccaac cttcgaggag gcagcgacca cgtagatagc ac 1362

Claims (3)

1.一种海洋硝化细菌，其特征在于：该硝化细菌为可疑亚硫酸盐杆菌PT04，其于2020年6月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCC No.20074。
2.根据权利要求1所述的一种海洋硝化细菌，其特征在于：所述的可疑亚硫酸盐杆菌PT04的16S rDNA序列为SEQ ID NO:1所示核苷酸序列。
3.根据权利要求1所述的一种海洋硝化细菌的应用，其特征在于：所述的可疑亚硫酸盐杆菌PT04可用于皮革废水中六价铬的还原和氨氮的消除。
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