CN112180099B - 子宫内膜异位症血清标志物的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了子宫内膜异位症血清标志物在制备子宫内膜异位症的筛查和诊断产品中的应用，属于生物医药技术领域，所述子宫内膜异位症血清标志物为血管紧张素原(AGT)和/或硬化蛋白域蛋白1(SOSTDC1)。将AGT和SOSTDC1作为靶点分别进行血清蛋白的检测时，均具有较高的灵敏度和特异度，因此，可将其作为子宫内膜异位症的筛查靶点。

Description

子宫内膜异位症血清标志物的应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一组子宫内膜异位症血清标志物的应用。
背景技术
子宫内膜异位症是一种良性妇科疾病，是指子宫内膜组织在子宫腔外生长。通常子宫内膜异位组织会植入卵巢和盆腔，但子宫内膜异位组织也发现于肝脏、下肢、大脑、胸膜。此外，子宫内膜异位症类似于恶性肿瘤，如侵袭性生长、进行性转移。目前，在子宫内膜异位细胞中发现了大量的去调控基因，其功能包括细胞凋亡、免疫系统调节、血管形成和细胞粘附。现在，仍然没有治疗子宫内膜异位症的特效药。
当前子宫内膜异位症的血清筛查，主要以CA125和CA199为主要检测靶点。但由于CA125和CA199会在卵巢癌患者中显著升高，从而导致筛查灵敏度、特异度下降。而且在治疗子宫内膜异位症时，CA125的表达也没有显示出下降的相关性，这不仅影响诊断的准确性，而且作为疗效的监测指标也存在明显缺陷。
因此，找寻子宫内膜异位症相关的候选基因，从而为子宫内膜异位症诊断提供新的生物标志物，具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一组子宫内膜异位症血清标志物，并将其用于制备子宫内膜异位症的筛查和诊断产品。
为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
子宫内膜异位症血清标志物在制备子宫内膜异位症的筛查和诊断产品中的应用，所述血清标志物为血管紧张素原和/或硬化蛋白域蛋白1。
进一步地，所述血清标志物血管紧张素原和/或硬化蛋白域蛋白1在子宫内膜异位症癌患者中显著升高。
一种子宫内膜异位症的筛查和诊断产品，所述诊断产品包括检测血管紧张素原和/或硬化蛋白域蛋白1的试剂。
微阵列技术现在已经相当成熟，并已用于各种疾病的研究和测试。因此，本发明希望通过基因表达芯片对子宫内膜异位症进行分析，进而找到子宫内膜异位症相关的候选基因。寻找肿瘤和子宫内膜异位症诊断的生物标志物。
在142名子宫内膜异位症病人、62名非子宫内膜异位症病人及39名卵巢癌病人中，对筛选出的血管紧张素原(AGT)和硬化蛋白域蛋白1(SOSTDC1)进行血清蛋白的检测。发现AGT作为新靶点单独使用时，若截断值(cut off值)取1.851ng/mL，则曲线下面积为0.931，灵敏度与特异度分别为0.915和0.823；SOSTDC1作为新靶点单独使用时，若cut off值取1.741ng/mL，则曲线下面积为0.831，灵敏度与特异度分别为0.894和0.710。同时，AGT和SOSTDC1在卵巢癌病人血清中都没有显著升高。故此靶点可作为新的临床检测靶点，进行子宫内膜异位症的筛查。
附图说明
图1为实施例1中GSE25628的差异基因鉴定结果的火山图。
图2和图3为实施例1中AGT作为新靶点的血清蛋白检测结果。
图4和图5为实施例1中SOSTDC1作为新靶点的血清蛋白检测结果。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照本领域常规条件。
实施例1
1.候选基因鉴定
数据处理基因表达微阵列数据集用R语言处理。在GSE25628中，用r语言用limma软件包(3.32.10)进行分析。在8个异位子宫内膜样本和8个在位子宫内膜样本中鉴定出了GSE25628的差异基因。结果如图1所示。
2.血清蛋白检测
在选取142名子宫内膜异位症病人、62名非子宫内膜异位症病人及39名卵巢癌病人中，对筛选出的血管紧张素原(AGT)和硬化蛋白域蛋白1(SOSTDC1)进行血清蛋白的检测。
病人临床基本信息如下：
Figure BDA0002683422350000021
Figure BDA0002683422350000031
表中：r-AFS，美国生育协会分级(修订版)；BMI，体重指数；NA，缺失值。
2.1检测原理
采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包含AGT或SOSTDC1抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的AGT或SOSTDC1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。
2.2样品收集
2.2.1血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞剌激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.2.2血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分抽取上清。
2.2.3保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
3.结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
由图2和图3可知，AGT作为新靶点单独使用时，若cut off值取1.851ng/mL，则曲线下面积为0.931，灵敏度与特异度分别为0.915和0.823。由图4和图5可知，SOSTDC1作为新靶点单独使用时，若cut off值取1.741ng/mL，则曲线下面积为0.831，灵敏度与特异度分别为0.894和0.710。同时，AGT和SOSTDC1在卵巢癌病人血清中都没有显著升高。故此靶点可作为新的临床检测靶点，进行子宫内膜异位症的筛查。

Claims (1)

1.子宫内膜异位症血清标志物在制备子宫内膜异位症的筛查和诊断产品中的应用，所述血清标志物为硬化蛋白域蛋白1。
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