CN112179876B - 一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴和酪氨酸酶的方法 - Google Patents
一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴和酪氨酸酶的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴和酪氨酸酶的方法，属于纳米生物传感技术领域。该方法包括：基于左旋多巴和聚乙烯亚胺反应生成蓝色荧光共聚物到绿色荧光共聚物的变换来实现对左旋多巴的检测；基于酪氨酸在酪氨酸酶的作用下反应生成左旋多巴，再与聚乙烯亚胺反应生成蓝色荧光共聚物到绿色荧光共聚物的变换来实现对酪氨酸酶的检测。此外，该方法还能够应用在复杂体系中对左旋多巴和酪氨酸酶的检测以及对帕金森药物中左旋多巴含量的检测。本发明中的检测左旋多巴和酪氨酸酶的原位荧光方法合成条件温和、合成步骤简便、荧光强且生物相容性高，而且该方法对左旋多巴和酪氨酸酶的检测具有分析快速、选择性好和灵敏度高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴和酪氨酸酶的方法，属于生物传感技术领域。
背景技术
荧光共聚物(FCP)是把小分子荧光化合物引入聚合物侧链、链段或通过非荧光功能单体的聚合制备的。这类物质不仅克服了荧光小分子的缺点，还具有耐用性好、荧光寿命长、低毒性等特点。因此，其在材料化学、生命科学、医学研究等研究领域有广泛的应用。
近年来，荧光共聚物在作为化学和生物传感器来识别离子、重要的生物小分子和生物大分子等方面的应用研究引起了广泛的关注。Zhang等人于2019年在AnalyticaChimica Acta上提出了一种简便、无需标记的鉴别和检测肾上腺素和多巴胺的荧光分析法。该方法主要是通过聚乙烯亚胺与待分析物原位生成荧光共聚物的激发光谱形状和峰位的差异来区分单个的肾上腺素、多巴胺及其混合物。Li等人于2019年在Sensors andActuators B：Chemical上报道了一步法合成甘露糖改性的聚乙烯亚胺共聚物粒子的方法，并将其作为荧光探针成功地应用于选择性和敏感性检测大肠杆菌。Zhong等人于2019年在Talanta上提出了室温下通过多巴胺的自聚合与聚乙烯亚胺交联制备水溶性多巴胺-聚乙烯亚胺共聚物点的方法，并以多巴胺-聚乙烯亚胺共聚物点为荧光探针对Cu2+进行敏感度和选择性检测，检测限为1.6nM，线性范围为0.0016～80μM，灵敏度高，选择性好。Lin等人于2018年在Analytical Chemistry上研发了一种新型的鼻/舌模拟化学传感器，该传感器主要是基于原位合成的多巴胺/聚乙烯亚胺共聚物，可用于无标记荧光法测定生物流体中的金属离子。该传感器可以区分不同浓度的金属离子，以及生物流体中不同金属离子的混合物，甚至不同价态的混合物，在诊断金属传染病中具有潜在的应用价值。因此，荧光共聚物在化学和生物传感器方面具有潜在的应用价值，值得我们去进一步研究开发。
左旋多巴和酪氨酸酶都是与一些人体疾病息息相关的物质。左旋多巴是多巴胺最重要的前体，在帕金森病等神经性疾病的治疗中发挥着重要作用。酪氨酸酶是一种与人体黑色素合成息息相关的酶，是临床监测白癜风活动性的一个重要指标。因此，实现对左旋多巴和酪氨酸酶的高选择性和高灵敏度检测将有利于临床相关疾病的诊断、监测与治疗。
这里我们将采用温和的合成条件、简便的合成步骤构建一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴和酪氨酸酶的方法，并成功实现对左旋多巴和酪氨酸酶的检测，该检测方法兼具效果明显、反应快速、选择性好和灵敏度高的优点。
发明内容
本发明的目的在于，为了克服现有技术的不足，提出一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴和酪氨酸酶的方法。所述方法可以通过温和的合成条件、简单的合成步骤、便宜的合成原料制备出具有荧光颜色变换的FCP，通过蓝色荧光到绿色荧光的变换以及荧光强度与浓度的线性关系能有效、快速地实现对左旋多巴和酪氨酸酶的高选择性和高灵敏度检测。
本发明的技术方案之一是，一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，加入一定量的聚乙烯亚胺和不同浓度的左旋多巴，反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，通过这种荧光颜色的转变来实现对左旋多巴的高选择性检测，并且FCP的荧光强度随着左旋多巴浓度的增加而逐渐增加，进而实现对左旋多巴的定量检测。
以下对本发明做出进一步说明。
构建一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法时，所述Tris-HCl缓冲溶液的pH为7.4，Tris-HCl的浓度为10mM，聚乙烯亚胺的浓度为50mg/mL；
取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入25mg聚乙烯亚胺和0-2mM的不同浓度的左旋多巴，震荡摇匀，反应10min后，通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加左旋多巴前后荧光强度变化情况；反应120min后，再次通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加左旋多巴前后荧光强度变化情况。
本发明的技术方案之二是，基于一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法在复杂环境体系中检测左旋多巴的应用，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中加入一定量的人体血清，再加入一定量的聚乙烯亚胺和不同浓度的左旋多巴，反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，通过这种荧光颜色的转变来实现对左旋多巴的高选择性检测，并且FCP的荧光强度随着左旋多巴浓度的增加而逐渐增加，进而实现在复杂环境体系中对左旋多巴的定量检测。
以下对本发明做出进一步说明。
基于一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法在复杂环境体系中检测左旋多巴的应用时，所述Tris-HCl缓冲溶液的pH为7.4，Tris-HCl的浓度为10mM，聚乙烯亚胺的浓度为50mg/mL；
取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入1-30％的人体血清，再加入25mg聚乙烯亚胺和不同浓度的左旋多巴，震荡摇匀，反应10min后，通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加左旋多巴前后荧光强度变化情况；反应120min后，再次通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加左旋多巴前后荧光强度变化情况。
本发明的技术方案之三是，基于一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法检测帕金森药物中左旋多巴含量的应用，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，加入一定量的聚乙烯亚胺和不同浓度的左旋多巴药物，反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，通过这种荧光颜色的转变来实现对左旋多巴的高选择性检测，并且FCP的荧光强度随着左旋多巴浓度的增加而逐渐增加，进而实现对帕金森药物中左旋多巴含量的检测。
以下对本发明做出进一步说明。
基于一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法检测帕金森药物中左旋多巴含量的应用时，所述Tris-HCl缓冲溶液的pH为7.4，Tris-HCl的浓度为10mM，聚乙烯亚胺的浓度为50mg/mL；
取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入25mg聚乙烯亚胺和不同浓度的左旋多巴药物，震荡摇匀，反应10min后，通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加左旋多巴药物前后荧光强度变化情况；反应120min后，再次通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加左旋多巴药物前后荧光强度变化情况。
本发明的技术方案之四是，基于一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法在复杂体系中检测帕金森药物中左旋多巴含量的应用，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中加入一定量的人体血清，再加入一定量的聚乙烯亚胺和不同浓度的帕金森药物，反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，通过这种荧光颜色的转变来实现对帕金森药物中左旋多巴的高选择性检测，并且FCP的荧光强度随着左旋多巴浓度的增加而逐渐增加，进而实现对帕金森药物中左旋多巴含量的检测。
以下对本发明做出进一步说明。
基于一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法在复杂体系中检测帕金森药物中左旋多巴含量时，所述Tris-HCl缓冲溶液的pH为7.4，Tris-HCl的浓度为10mM，聚乙烯亚胺的浓度为50mg/mL；
取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入1-30％的人体血清，再分别加入25mg聚乙烯亚胺和不同浓度的帕金森药物，震荡摇匀，反应10min后，通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加左旋多巴药物前后荧光强度变化情况；反应120min后，再次通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加帕金森药物前后荧光强度变化情况。
本发明的技术方案之五是，一种原位形成荧光共聚物检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，加入一定量的酪氨酸与不同浓度的酪氨酸酶孵化反应生成左旋多巴，再加入聚乙烯亚胺，反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，通过这种荧光颜色的转变来实现对酪氨酸酶的高选择性检测，并且FCP的荧光强度随着酪氨酸酶浓度的增加而逐渐增强，可实现对酪氨酸酶的定量检测。
以下对本发明做出进一步说明。
构建一种原位形成荧光共聚物检测酪氨酸酶的方法时，所述Tris-HCl缓冲溶液的pH为7.4，Tris-HCl的浓度为10mM，聚乙烯亚胺的浓度为50mg/mL，酪氨酸的浓度为500μM；
取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入500μM的酪氨酸与0-5U/mL酪氨酸酶，在37℃条件下孵化反应30min后，再加入25mg的聚乙烯亚胺，震荡摇匀，反应10min后，通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加酪氨酸酶前后荧光强度变化情况；反应120min后，再次通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加酪氨酸酶前后荧光强度变化情况。
本发明的技术方案之六是，基于一种原位形成荧光共聚物检测酪氨酸酶的方法在复杂环境体系中检测酪氨酸酶的应用，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中加入一定量的人体血清，再加入一定量的酪氨酸与不同浓度的酪氨酸酶孵化反应生成左旋多巴，再加入聚乙烯亚胺，10min内反应快速生成具有蓝色荧光的FCP，随着反应的进行，120min后得到具有绿色荧光的FCP，通过FCP的荧光强度与酪氨酸酶浓度的线性关系，计算复杂体系中对酪氨酸酶浓度检测的恢复效率。
以下对本发明做出进一步说明。
基于一种原位形成荧光共聚物检测酪氨酸酶的方法在复杂环境体系中检测酪氨酸酶的应用时，所述Tris-HCl缓冲溶液的pH为7.4，Tris-HCl的浓度为10mM，聚乙烯亚胺的浓度为50mg/mL；
取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入1-30％的人体血清，再加入500μM的酪氨酸与0-5U/mL酪氨酸酶，在37℃条件下孵化反应30min后，再加入25mg的聚乙烯亚胺，震荡摇匀，反应10min后，通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加酪氨酸酶前后荧光强度变化情况；反应120min后，再次通过荧光光谱仪测量绘制荧光强度图，记录加酪氨酸酶前后荧光强度变化情况。
本发明的有益效果：
本发明的方法一为在室温条件下左旋多巴和聚乙烯亚胺反应生成具有从蓝色荧光到绿色荧光变换的FCP，通过这种荧光颜色的转变来实现对左旋多巴的高选择性检测，此外FCP的荧光强度随着左旋多巴浓度的增加而逐渐增强，可实现对左旋多巴的定量检测。本发明的方法二为酪氨酸在酪氨酸酶的作用下反应生成左旋多巴，再与聚乙烯亚胺反应生成具有从蓝色荧光到绿色荧光变换的FCP，通过这种荧光颜色的转变来实现对酪氨酸酶的高选择性检测，此外FCP的荧光强度随着酪氨酸酶浓度的增加而逐渐增强，可实现对酪氨酸酶的定量检测。此外，该方法还能够应用在人体血清的复杂体系中对左旋多巴和酪氨酸酶的检测，以及对帕金森药物中左旋多巴含量的检测和在人体血清的复杂体系中对帕金森药物中左旋多巴含量的检测。本发明中的原位形成荧光共聚物检测左旋多巴和酪氨酸酶的方法合成条件温和、合成步骤简便、荧光强且生物相容性高，而且该方法对左旋多巴和酪氨酸酶的检测具有分析快速、选择性好和灵敏度高等优点。这些研究为实现对左旋多巴和酪氨酸酶的高灵敏度和高选择性检测提供了新的方法。
附图说明
下面结合附图对本发明的实施例作进一步说明。
图1为实施例1中制得的蓝色FCP的吸收光谱图；
图2为实施例1中制得的蓝色FCP的荧光激发光谱图；
图3为实施例1中制得的蓝色FCP的荧光发射光谱图；
图4为实施例1中制得的绿色FCP的吸收光谱图；
图5为实施例1中制得的绿色FCP的荧光激发光谱图；
图6为实施例1中制得的绿色FCP的荧光发射光谱图；
图7为实施例2中制得的FCP的TEM表征图；
图8为实施例2中制得的FCP的粒径分布图；
图9为实施例3中制得的FCP的时间扫描图；
图10为实施例4中制得的FCP的时间扫描图；
图11为实施例5中不同的左旋多巴干扰物质制得的荧光相对强度变化柱状图；
图12为实施例6中不同浓度的左旋多巴制得的蓝色FCP的荧光发射光谱图；
图13为实施例6中不同浓度的左旋多巴制得的蓝色FCP的荧光相对强度散点图；
图14为实施例6中不同浓度的左旋多巴制得的蓝色FCP的标准曲线图；
图15为实施例6中不同浓度的左旋多巴制得的绿色FCP的荧光发射光谱图；
图16为实施例6中不同浓度的左旋多巴制得的绿色FCP的荧光相对强度散点图；
图17为实施例6中不同浓度的左旋多巴制得的绿色FCP的标准曲线图；
图18为实施例7中不同的酶制得的FCP的荧光相对强度变化柱状图；
图19为实施例7中不同浓度的酪氨酸酶制得的蓝色FCP的荧光发射光谱图；
图20为实施例8中不同浓度的酪氨酸酶制得的蓝色FCP的荧光相对强度散点图；
图21为实施例8中不同浓度的酪氨酸酶制得的蓝色FCP的标准曲线图；
图22为实施例8中不同浓度的酪氨酸酶制得的绿色FCP的荧光发射光谱图；
图23为实施例8中不同浓度的酪氨酸酶制得的绿色FCP的荧光相对强度散点图；
图24为实施例8中不同浓度的酪氨酸酶制得的绿色FCP的标准曲线图；
图25为一种检测左旋多巴和酪氨酸酶的原位荧光试剂盒的示意图。
表1为为实施例9中血清样品中左旋多巴浓度的恢复效率；
表2为为实施例10中帕金森药中左旋多巴含量的恢复效率；
表3为为实施例11中血清样品中帕金森药中的左旋多巴含量的恢复效率；
表4为为实施例12中血清样品中酪氨酸酶活度的恢复效率；
具体实施方式
以下结合附图对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述实施例。
实施例1：室温下，取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入25mg聚乙烯亚胺和2mM左旋多巴，震荡摇匀。反应10min后，在紫外灯照射情况下，观察到蓝色荧光，表示蓝色FCP制备成功。通过紫外吸收光谱仪对蓝色FCP进行吸收强度检测，绘制吸收光谱图，如图1。通过荧光光谱仪对蓝色FCP进行荧光强度检测，激发波长为345nm，发射波长为430nm，绘制荧光激发光谱图和荧光发射光谱图，如图2和图3。反应120min后，在紫外灯照射情况下，观察到绿色荧光，表示绿色FCP制备成功。通过紫外吸收光谱仪对绿色FCP进行吸收强度检测，绘制吸收光谱图，如图4。通过荧光光谱仪对绿色FCP进行荧光强度检测，激发波长为385nm，发射波长为535nm，绘制荧光激发光谱图和荧光发射光谱图，如图5和图6。
实施例2：室温下，取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入25mg聚乙烯亚胺和2mM左旋多巴，震荡摇匀，反应120min后，冷冻干燥。取一定量的FCP，使用透射电子显微镜(TEM)进行表征，得到TEM图并绘制粒径分布图，如图7和图8。
实施例3：室温下，取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入25mg聚乙烯亚胺和2mM左旋多巴，震荡摇匀，通过荧光光谱仪对FCP进行时间扫描，激发波长为345nm，发射波长为430nm，绘制时间扫描图，如图9。
实施例4：室温下，取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入25mg聚乙烯亚胺和2mM左旋多巴，震荡摇匀，通过荧光光谱仪对FCP进行时间扫描，激发波长为385nm，发射波长为535nm，绘制时间扫描图，如图10。
实施例5：室温下，取13份500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入25mg聚乙烯亚胺，震荡摇匀，再分别加入2mM不同物质：0、空白；1、葡萄糖；2、苯丙氨酸；3、色氨酸；4、酪氨酸；5、抗坏血酸；6、血清胺盐酸盐；7、间苯二酚；8、肾上腺素；9、多巴胺；10、甲基多巴胺；11、去甲肾上腺素；12、左旋多巴，震荡摇匀。反应10min后，通过荧光光谱仪进行荧光强度检测，激发波长为345nm，发射波长为430nm。反应120min后，再次通过荧光光谱仪进行荧光强度检测，激发波长为385nm，发射波长为535nm。绘制荧光相对强度柱状图，如11。
实施例6：室温下，取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入25mg聚乙烯亚胺和0-2mM的左旋多巴，震荡摇匀。反应10min后，在紫外灯照射情况下，观察到蓝色荧光，表示蓝色FCP制备成功。通过荧光光谱仪对蓝色FCP进行荧光强度检测，激发波长为345nm，绘制绘制荧光发射光谱图、荧光相对强度散点图和标准曲线图，如图12、图13和图14。反应120min后，在紫外灯照射情况下，观察到绿色荧光，表示绿色FCP制备成功。再次通过荧光光谱仪对绿色FCP进行荧光强度检测，激发波长为385nm，绘制荧光发射光谱图、荧光相对强度散点图和标准曲线图，如图15、图16和图17。
实施例7：室温下，取8份500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入500μM的酪氨酸，震荡摇匀，再分别加入5U/mL的不同物质：0、空白；1、酪氨酸酶；2、脱羧酶；3、胰蛋白酶；4、胃蛋白酶；5、牛血清白蛋白；6、谷胱甘肽；7、细胞色素c，震荡摇匀，在37℃条件下孵化反应30min后，再分别加入25mg的聚乙烯亚胺，震荡摇匀。反应10min后，通过荧光光谱仪进行荧光强度检测，激发波长为345nm，发射波长为430nm。反应120min后，再次通过荧光光谱仪进行荧光强度检测，激发波长为385nm，发射波长为535nm。绘制荧光相对强度柱状图，如图18。
实施例8：室温下，取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入500μM的酪氨酸与0-5U/mL的酪氨酸酶，震荡摇匀，在37℃条件下孵化反应30min后，再分别加入25mg的聚乙烯亚胺，震荡摇匀。反应10min后，通过荧光光谱仪对蓝色FCP进行荧光强度检测，激发波长为345nm，绘制绘制荧光发射光谱图、荧光相对强度散点图和标准曲线图，如图19、图20和图21。反应120min后，再次通过荧光光谱仪对绿色FCP进行荧光强度检测，激发波长为385nm，绘制荧光发射光谱图、荧光相对强度散点图和标准曲线图，如图22、图23和图24。
实施例9：取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入1-30％的人体血清，再加入25mg的聚乙烯亚胺与不同浓度的左旋多巴(15μM、25μM和40μM)，震荡摇匀，反应10min后，通过荧光光谱仪对蓝色FCP进行荧光强度检测；反应120min后，再次通过荧光光谱仪对绿色FCP进行荧光强度检测。计算左旋多巴的恢复效率，如表1。
实施例10：取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入25mg的聚乙烯亚胺与不同浓度的帕金森药物(左旋多巴浓度为15μM、25μ<和40μM)，震荡摇匀，反应10min后，通过荧光光谱仪对蓝色FCP进行荧光强度检测；反应120min后，再次通过荧光光谱仪对绿色FCP进行荧光强度检测。计算左旋多巴的恢复效率，如表2。
实施例11：取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入10％的人体血清，再分别加入25mg的聚乙烯亚胺与不同浓度的帕金森药物(左旋多巴浓度为15μM、25μM和40μM)，震荡摇匀，反应10min后，通过荧光光谱仪对蓝色FCP进行荧光强度检测；反应120min后，再次通过荧光光谱仪对绿色FCP进行荧光强度检测。计算左旋多巴的恢复效率，如表3。
实施例12：取500μL Tris-HCl缓冲溶液，分别加入1-30％的人体血清，再加入500μM的酪氨酸与不同浓度的酪氨酸酶(0.6U/mL、1U/mL和2U/mL)，在37℃条件下孵化反应30min后，再加入25mg的聚乙烯亚胺，震荡摇匀，反应10min后，通过荧光光谱仪对蓝色FCP进行荧光强度检测；反应120min后，再次通过荧光光谱仪对绿色FCP进行荧光强度检测。计算酪氨酸酶的恢复效率，如表4。
本发明不局限于上述实施例所述的具体技术方案，凡采用等同替换形成的技术方案均为本发明要求的保护范围。
表1
表2
表3
表4
Claims (10)
1.一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法，其特征在于：包括如下步骤：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，加入聚乙烯亚胺(PEI)和左旋多巴，混合均匀，反应10分钟生成蓝色的荧光共聚物(FCP)，反应120分钟生成绿色FCP，通过荧光光谱仪对合成的FCP进行荧光强度检测。
2.根据权利要求1所述的一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法，其特征在于：FCP合成条件为：Tris-HCl缓冲溶液的pH为7.4，Tris-HCl的浓度为10mM，左旋多巴的浓度为2mM，聚乙烯亚胺的浓度为50mg/mL，蓝色FCP反应时间为10min，绿色FCP反应时间为120min，通过荧光光谱仪对合成的FCP进行荧光强度检测。
3.根据权利要求2所述的一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，聚乙烯亚胺和左旋多巴反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，通过这种荧光颜色的转变来实现对左旋多巴的检测。
4.根据权利要求1、2和3任一项所述的一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法的应用，其特征在于：室温条件下，在含人体血清的复杂体系中，加入左旋多巴和一定量的聚乙烯亚胺，混合均匀，反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，FCP的荧光强度会随着左旋多巴浓度的增加而增强，从而实现在复杂环境体系中对左旋多巴的检测。
5.根据权利要求1、2和3任一项所述的一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法的应用，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，加入含有左旋多巴的药物和一定量的聚乙烯亚胺，混合均匀，反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，FCP的荧光强度会随着左旋多巴浓度的增加而增强，从而实现对帕金森药物中左旋多巴含量的检测。
6.根据权利要求1、2和3任一项所述的一种原位形成荧光共聚物检测左旋多巴的方法的应用，其特征在于：室温条件下，在含人体血清的复杂体系中，加入含有左旋多巴的药物和一定量的聚乙烯亚胺，混合均匀，反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，FCP的荧光强度会随着左旋多巴浓度的增加而增强，从而实现在复杂环境体系中对帕金森药物中左旋多巴含量的检测。
7.一种原位形成荧光共聚物检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，酪氨酸酶与一定量的酪氨酸反应，再加入一定量的聚乙烯亚胺，混合均匀，反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，通过荧光光谱仪对合成的FCP进行荧光强度检测。
8.根据权利要求7所述的一种原位形成荧光共聚物检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：FCP合成条件为：Tris-HCl缓冲溶液的pH为7.4，Tris-HCl的浓度为10mM，酪氨酸的浓度为500μM，酪氨酸酶的浓度为4U/mL，酪氨酸酶与酪氨酸的孵化温度为37℃，孵化时长为30min，聚乙烯亚胺的浓度为50mg/mL，蓝色FCP反应时间为10min，绿色FCP反应时间为120min，通过荧光光谱仪对合成的FCP进行荧光强度检测。
9.根据权利要求7所述的一种原位形成荧光共聚物检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：室温条件下，在Tris-HCl缓冲溶液中，酪氨酸酶与一定量的酪氨酸反应生成左旋多巴，左旋多巴再与聚乙烯亚胺反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，通过这种荧光颜色的转变来实现对酪氨酸酶的检测。
10.根据权利要求7、8和9任一项所述的一种原位形成荧光共聚物检测酪氨酸酶的方法的应用，其特征在于：室温条件下，在含人体血清的复杂体系中，加入酪氨酸酶和一定量的酪氨酸，反应完全后，再加入一定量的聚乙烯亚胺，混合均匀，反应10分钟生成蓝色FCP，反应120分钟生成绿色FCP，FCP的荧光强度会随着酪氨酸酶浓度的增加而增强，从而实现在复杂环境体系中对酪氨酸酶的检测。
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