CN112147255A - 一种基于gc-ms测定辅酶q10胶囊中氯乙烯的方法 - Google Patents

一种基于gc-ms测定辅酶q10胶囊中氯乙烯的方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种基于GC‑MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，其包括将辅酶Q10胶囊内容物配制成供试品溶液照中国药典2020年四部通则0431公布的GC‑MS法进行检测，其中，气相色谱检测的条件为：以氰丙基苯基‑二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱，载气为氦气；质谱条件为：选用EI离子源，离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；溶剂截流时间：3.8min；扫描模式：单离子监测模式SIM进行检测。该方法可以使辅酶Q10胶囊与氯乙烯有效分离，具有精密度好，分离度好的优点。

Description

一种基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法。
背景技术
辅酶Q10(coenzyme Q10，结构如下式1)又称泛醌，在呼吸链中是一种与蛋白质结合不紧密的辅酶，是生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物，在人体呼吸链中质子移位及电子传递中起重要作用。
Figure BDA0002702021630000011
辅酶Q10作为细胞代谢和细胞呼吸激活剂，也是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂，能抑制线粒体的过氧化，具有促进氧化磷酸化反应，保护生物膜结构完整性的作用。此外，辅酶Q10对免疫非特异性具有增强的作用，可以增强抗体产生的能力，改善T细胞功能。辅酶Q10实质上是一种代谢激活剂，能激活细胞呼吸，加速产生三磷酸腺苷(ATP)，并起到解毒急救的作用；它还可改变细胞和组织的缺氧状态，对肝、脑、心脏及神经系统均有较好的保护和改善作用，增强体内的非特异性免疫应答。经证实，其可以辅助治疗心血管疾病(如：病毒性心肌炎、慢性心功能不全)、肝炎(如：病毒性肝炎、亚急性肝坏死、慢性活动性肝炎)、癌症的综合治疗(能减轻放疗、化疗等引起的某些不良反应)。
辅酶Q10在合成过程中可能会生成杂质氯乙烯，氯乙烯易与DNA反应，造成DNA损伤，存在一定基因毒性。辅酶Q10胶囊在中国药典中只规定了辅酶Q9杂质，在美国药典中也未考察有关物质氯乙烯；经查阅文献可知，目前氯乙烯在辅酶Q10原料的中国药典、美国药典和欧洲药典等标准中也均未有其测定方法，在其他期刊文献中也没有记载。所以，亟需提供一种用于检测辅酶Q10中氯乙烯的方法以更好的控制辅酶Q10的质量。
发明内容
本发明为克服现有技术的上述不足，本发明提供一种基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供了如下技术方案：
一种基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，其包括将辅酶Q10胶囊内容物配制成供试品溶液照中国药典2020年四部通则0431公布的GC-MS法进行检测，其中，气相色谱检测的条件为：
以氰丙基苯基-二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱，载气为氦气；
质谱条件为：选用EI离子源，离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；溶剂截流时间：3.8min；扫描模式：使用单离子监测模式SIM进行检测。
优选地，质谱检测时扫描离子：64.0定量离子、62.0定性离子。
优选地，气相色谱检测时，进样口温度为200℃，程序升温条件：50℃保持2min，15℃/min升至120℃，保持2min，再10℃min升至200℃，保持2min。
优选地，气相色谱检测时分流比为20:1；柱流速为0.8mLmin。
优选地，所述方法的进样方式为顶空进样。由于氯乙烯作为基因毒性杂质控制限度低，基质复杂，而且存在沸点低，易挥发等特点，当采用顶空进样对辅酶Q10中氯乙烯时可以获得较精确的检测结果。
进一步优选地，顶空加样温度为80℃，平衡时间为35min。
进一步优选地，顶空瓶采用棕色的顶空瓶。
优选地，固定液是由6％氰丙基苯基和94％的二甲基聚硅氧烷组成。
与现有技术相比，本发明所取得的有益效果是：
本发明可以定量测定辅酶Q10胶囊中的氯乙烯的含量，从而有效的控制辅酶Q10胶囊的质量。根据本发明提供的方法可以使辅酶Q10胶囊与氯乙烯有效分离，具有精密度好，分离度好的优点。
附图说明
图1为氯乙烯的标准曲线图；
图2为氯乙烯对照品定位图谱；
图3为氯乙烯检测限图谱；
图4为氯乙烯定量限图谱。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
一种基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，包括如下步骤：
1.1仪器与试剂
仪器：本实施例所采用的GC-MS设备为：Agilent 7697A(顶空)+5977B(质谱)气相质谱仪
色谱柱为：以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱(DB-624 30m×320μm×0.18μm或性能相当)
1)氯乙烯储备液及标准溶液的配制
储备液：精密移取100μl氯乙烯标准溶液(2000μg/ml)至20ml容量瓶中，加DMF定容至刻度。
标准溶液：精密移取2500μl储备液至50ml容量瓶中，加DMF定容至刻度。
2)氯乙烯系列标准品溶液的配制
量取储备液分别用上述稀释液DMF稀释成浓度依次为0.10μg/ml、0.25μg/ml、0.50μg/ml、0.75μg/ml、1.00μg/ml的标准品溶液。
3)供试及加标供试样品配制
精密称取9份50mg的辅酶Q10至10ml容量瓶中，然后依次向容量瓶中加入不同体积的储备液分别配制成氯乙烯浓度为20％、100％、150％的混合溶液，每个比例平行配制3份，100％比例平行配制6份(作为加标溶液-重复性)，作为加标溶液-回收率。
另精密称取50mg的辅酶Q10至10ml容量瓶中，加DMF定容至刻度，作为供试液。
1.2色谱系统建立
色谱条件为：以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱(DB-624 30m*320μm*0.18μm或性能相当)，载气为氦气，进样口温度为200℃，程序升温条件：50℃保持2min，15℃/min升至120℃，保持2min，再10℃min升至200℃，保持2min；分流比为20:1；柱流速为0.8mLmin；顶空进样，顶空加样温度：80℃，平衡时间：35min。
质谱条件为：选用EI离子源，离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；溶剂截流时间：3.8min；
扫描模式：使用单离子监测模式(SIM)进行检测；扫描离子：64.0(定量离子)、62.0(定性离子)。
检测分析
照GC-MS法(中国药典2020年四部通则0431)测定。
系统适用性试验
1、精密度
取氯乙烯标准溶液(0.5μg/ml)，在如上检测条件下进行6次重复性进样试验，得到的氯乙烯的色谱峰面积及保留时间如下表1所示。
表1
序号 峰面积 保留时间/min
对照1 7296.06 11.802
对照2 7548.56 11.802
对照3 7450.71 11.804
对照4 7424.79 11.805
对照5 7245.80 11.805
对照6 7167.42 11.805
平均值 7355.56 11.804
SD(％) 143 0.0015
RSD(％) 1.94 0.012
由表1数据可以看出，采用本发明的方法得到的氯乙烯的色谱峰面积和保留时间的相对标准偏差范围分别为1.94％和0.012％，均小于2％，表明本方法精密度良好。
2、线性关系
取上述氯乙烯系列标准品溶液，经质谱检测测定，以氯乙烯响应值的峰面积平均值(Y)为纵坐标，氯乙烯相对应的浓度(X，μg/ml)为横坐标制定标准曲线，如图1所示，线性回归方程为Y＝5360.1X-90.934，氯乙烯在线性范围为0.10-1.01μg/ml，相关系数R2＝0.9999，不同浓度对应的线性面积如下表2所示。
表2
Con.(μg/ml) Area
0.10 470.91
0.25 1241.73
0.50 2597.50
0.76 3987.15
1.01 5316.75
3、检测限与定量限
在本发明中的色谱条件下，对氯乙烯的标准品溶液检测限及定量限进样检测，进行分析，计算的氯乙烯的检测限LOD为0.1μg/ml，对应的信噪比S/N＝89.2(≥3)；定量限LOQ为0.2μg/ml，对应的信噪比S/N＝125.5(≥10)。如图3所示，为氯乙烯检测限检测图谱。如图4所示，为氯乙烯定量限检测图谱。
即本发明提供的方法氯乙烯具有较低的检测限及定量限，信噪比低。
4、回收率
在辅酶Q10样品中分别加入不同含量的氯乙烯溶液，按上述检测方法进行检测，进行加标回收实验验证方法的有效性。如图2所示，为对照品溶液定位图谱。各样品的平均回收率统计如下表3。
表3
Figure BDA0002702021630000051
Figure BDA0002702021630000061
结果表明，各样品中氯乙烯的回收率在97.76％-100.84％之间(90％-108％)，相对标准偏差为0.97％(≤10％)，该方法具有良好的准确性。
5、重复性
平行配制6份加样供试液，按上述检测方法进行检测，进行重复实验，验证方法的精密度。重复性6份样品结果统计如下表4。
表4
Figure BDA0002702021630000062
结果表明，重复性6份样品中茄尼基氯的平均含量为0.0100％，相对标准偏差为0.47％(≤10％)，该方法具有良好的精密度。
6、稳定性
为了进一步考察对照及供试品溶液放置过程中的稳定性，对照及加标供试液(回收率100％-1)在配制后第0、5、10、18小时后分别进样，标准品溶液中氯乙烯的含量相比初始含量在97.06％-97.64％，加标供试品溶液中氯乙烯的含量相比初始含量在99.90％-101.18％，均在95-105％之间。因此，对照及加样供试配制后18小时之内的溶液较稳定，可满足实验需要。溶液稳定性结果见表5。
表5
Figure BDA0002702021630000063
Figure BDA0002702021630000071
最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (9)

1.一种基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，其包括将辅酶Q10胶囊内容物配制成供试品溶液照中国药典2020年四部通则0431公布的GC-MS法进行检测，其中，气相色谱检测的条件为：
以氰丙基苯基-二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱，载气为氦气；
质谱条件为：选用EI离子源，离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；溶剂截流时间：3.8min；扫描模式：单离子监测模式SIM进行检测。
2.根据权利要求1所述的基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，气相色谱检测时，进样口温度为200℃，程序升温条件：50℃保持2min，15℃/min升至120℃，保持2min，再10℃min升至200℃，保持2min。
3.根据权利要求1所述的基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，气相色谱检测时，色谱柱的分流比为20:1；柱流速为0.8mL/min。
4.根据权利要求1所述的基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，所述方法的进样方式为顶空进样。
5.根据权利要求3所述的基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，顶空加样温度为80℃，平衡时间为35min。
6.根据权利要求1所述的基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，在采用供试品溶液进行GC-MS检测之前还包括氯乙烯储备液及标准溶液的配制步骤：
储备液的配制：精密移取氯乙烯标准溶液至容量瓶中，加DMF定容至刻度得浓度为10μg/mL的储备液；
标准溶液的配制：精密移取储备液至容量瓶中，加DMF定容至刻度得浓度为0.5μg/mL的标准溶液。
7.根据权利要求1所述的基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，在采用供试品溶液进行GC-MS检测之前还包括氯乙烯系列标准品溶液的配制，所述系列标准品溶液的浓度为0.10μg/mL、0.25μg/mL、0.50μg/mL、0.75μg/mL、1.00μg/mL。
8.根据权利要求1所述的基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，质谱检测时扫描离子：64.0定量离子、62.0定性离子。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的基于GC-MS测定辅酶Q10胶囊中氯乙烯的方法，其特征在于，固定液是由6％氰丙基苯基和94％的二甲基聚硅氧烷组成。
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