CN112135623B - 与疾病的治疗有关的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

提供了用于治疗和/或防治银屑病或特应性皮炎的方法和组合物，该方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的干扰素alpha亚型的步骤，其中干扰素alpha亚型是IFN‑α14、杂合物1或IFN‑α14和杂合物1的组合。

Description

与疾病的治疗有关的组合物和方法
发明领域
本发明涉及用于预防或治疗银屑病和/或特应性皮炎以及过度的Th-17应答发挥有害作用的状况如炎症应答和自身免疫性疾病的组合物和方法。本发明进一步扩展到用于人类和兽医疗法的本发明的组合物以及组合物用于治疗和/或防治银屑病和特应性皮炎的用途。
发明背景
过度反应性Th1应答可以产生器官特异性自身免疫性疾病，如关节炎、多发性硬化或I型糖尿病，而过度反应性Th2/Th17应答可能是变态反应和萎缩的基础。目前认为，Th17细胞在宿主对抗病原体的防御中起主要作用，并且过度的Th17应答可以导致严重的炎症应答和自身免疫性疾病，如银屑病。Th17细胞产生白介素17(IL17)。IL17有六种已知的同等型，从A至F。IL17A和IL17F两者均是促炎性细胞因子。
已知不同的病原体在体外诱导不同的IFN-α亚型，并且IFN-α亚型具有不同的抗病毒、抗增殖和免疫调节活性。已显示经由多种途径的感染诱导不同的亚型概况。IFN-α亚型结合相同的受体，激活共同的信号传导途径，并预期具有类似的免疫学功能。根据定义，所有IFN-α亚型均具有抗病毒活性，尽管它们在此情况下的绝对功效可能有很大差异。另外，已经描述了许多其他生物学特性，但是具有不同的效力，包括免疫调节和抗增殖活性。多效性效应似乎是由于与受体链的差异的相互作用以及通过不同细胞内途径到达一系列效应分子的信号传导所致。I型IFN受体由两条链IFNR1和IFNR2组成。具有不同受体链的12种IFN-α亚型中的每一种都有一定的结合亲和力范围。IFNα-14对两种干扰素受体都具有最高的亲和力之一，这就是为什么其与其他11个亚型相比如此具有活性的原因。IFNα-6对该两种干扰素受体也具有高亲和力。
IFN-α可能在调节Th1和Th17应答中起关键作用。已经表明，IFN-α处理间接地(主要经由IFN-γ)促进Th1细胞分化，但是也通过抑制IL4和IL13基因表达来抑制Th2细胞发育。因此，IFN-α能够在促进Th2细胞失衡的疾病和感染中重新建立Th1/Th2群体平衡。近年来，很明显，除了抗病毒效应外，IFN-α还发挥了几种免疫调节功能。IFN-α可以影响树突状细胞分化并控制各种促炎性细胞因子(如IL8或IL18)的表达，并诱导几种抗炎介质，如IL1受体拮抗剂(IL1Ra)、可溶性TNF受体p55、IL10和IL18结合蛋白。然而，对IFN-α，特别是个别的IFN-α亚型的作用机理仍仅部分了解。
银屑病是一种自身免疫性疾病，其特征在于患者皮肤上的异常斑块。这些异常斑块通常是红色、发痒和鳞状的。斑块通常出现在肘部、膝盖、下背部或头皮上，但可以出现在身体的任何位置。银屑病影响全世界约1.25亿人。银屑病与银屑病关节炎、淋巴瘤、心血管疾病、克罗恩病和抑郁症的风险增加有关。银屑病关节炎影响多达30％的患有银屑病的个体。
银屑病的特征在于皮肤表皮层的异常过度和快速生长。银屑病的皮肤细胞每3-5天更换一次，而不是通常的28-30天。据信，这些变化源自角质形成细胞的过早成熟，其由涉及树突状细胞、巨噬细胞和T细胞的真皮中的炎性级联诱导。这些免疫细胞(Th17淋巴细胞和巨噬细胞)从真皮移动到表皮，并分泌炎性化学信号(细胞因子)，尤其是肿瘤坏死因子-alpha(TNF-α)、IL17A、IL17F和IL22。这些分泌的炎性信号刺激角质形成细胞增殖并产生趋化因子-CXCL1、CXCL5和CXCL8(IL8)。这些细胞因子对嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞具有化学吸引性，并且它们会迁移到角质形成细胞层中。然后，嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞释放其颗粒的内含物，从而导致银屑病的许多特征。
目前尚无银屑病的治愈方法；然而，各种治疗方法可以帮助控制症状。这些治疗方法包括皮质类固醇乳膏、维生素D3类似物乳膏、紫外光和免疫系统抑制药物如甲氨蝶呤。约70-80％的银屑病病例以轻度至中度形式出现，并通常可以用乳膏和/或光疗法来处理。然而，现有的局部药物功效有限，且不适合长期使用。在过去的25年中，还没有新的局部药物治疗银屑病。近年来，研究集中在用于治疗中度至重度银屑病的系统性药剂上，例如抗IL17A、TNF-α单克隆抗体构建体。这些新的系统性生物药是有效的，但可能导致与抗感染能力下降相关的一系列有害副作用。极其迫切需要有效、安全、局部的治疗，其可以用来治疗大多数银屑病患者。
特应性皮炎(也称为特应性湿疹)是一种皮肤炎症的类型，其可以导致皮肤发红、肿胀和破裂。其是与Th2相关的疾病，并涉及IL-3、4、5、13、17、22、31的增加。还存在参与粒细胞的增殖和吸引的趋化因子如G(M)CSF，CXCL1、5和8的显著增加。
发明概述
本发明人认为，需要开发一种改进的免疫治疗方法来治疗和/或防治银屑病和特应性皮炎。由于银屑病是由Th17细胞的过度反应性和相应的某些细胞因子的过度生成引起的，因此能够修饰和平衡错向的(misdirected)Th17应答和相关细胞因子的过度生成的药物对治疗银屑病将是有益的。此类药物将进一步适合于治疗过度的Th17应答发挥作用的疾病和状况，例如在特应性皮炎中。
发明人认为，需要提供一种可以关闭角质形成细胞层中的细胞因子/趋化因子的局部治疗，该细胞因子/趋化因子对于可以引起皮肤中的银屑病和/或特应性皮炎中的嗜中性粒细胞和嗜碱性粒细胞/肥大细胞具有趋化性。
本发明涉及用于预防或治疗银屑病以及其中过度的Th-17应答发挥有害作用的状况如炎症应答和自身免疫的组合物和方法。本发明进一步扩展到本发明的组合物在治疗和/或防治银屑病中的用途。
经过广泛的实验，本发明的发明人惊奇地发现，如本文所述，施用IFN-α14，例如SEQ ID NO:1或其变体或片段导致与银屑病或特应性皮炎中免疫应答有关的各种细胞因子的阻抑或抑制。发明人出乎意料地确定，IFN-α14可以直接相互作用以关闭角质形成细胞层中的细胞因子，该细胞因子对于引起皮肤中银屑病的嗜中性粒细胞和嗜碱性粒细胞/肥大细胞具有趋化性。发明人证明，即使在TNF-α的影响下，IFN-α14也抑制这些趋化因子。令人惊讶的是，当局部施用IFN-α14时证明了这种效果。IFN-α14是17,000道尔顿的大分子，且出乎意料的是该分子会穿过皮肤。更令人惊讶的是，发明人出乎意料地发现，当局部提供时，观察到了IFN-α14对角质形成细胞中趋化因子的作用。发明人认为，与向全血提供IFN-α14时更不加区分的效应——在多效性效应和更多组织与IFN-α14接触的事实两者中相比，IFN-α14的局部效应对银屑病更具选择性且更有用。
发明人还建立了本文中称为杂合物1的重组IFN-杂合分子
(SEQ ID NO:2)对干扰素受体也具有高结合亲和力，并且将证明对与银屑病或特应性皮炎有关的趋化因子的影响，特别是在角质形成细胞层中关闭或抑制趋化因子，该趋化因子对于引起皮肤中的银屑病和/或特应性皮炎的嗜中性粒细胞和嗜碱性粒细胞/肥大细胞具有趋化性。
在PCT公开号WO2014/037717和PCT公开号WO2015/136287中讨论了干扰素亚型IFN-α10和IFN-α14及其杂合物。具体而言，公开了基于所有12种alpha-干扰素的共有主链序列，IFN-α10-IFN-α14杂合物含有IFN-α10和IFN-α14亚型结合位点的特征性序列。尽管不希望受到理论的束缚，但发明人相信，包含IFN-α10的氨基酸序列的蛋白质对干扰素受体2(IFNR2)具有更大的亲和力，并且包含IFN-α14的氨基酸序列的蛋白质对干扰素受体1(IFNR1)具有更大的亲和力。因此，认为用允许与干扰素受体1结合的IFN-α14的氨基酸取代包含IFN-α10氨基酸序列的蛋白质，或用允许与干扰素受体2结合的IFN-α10的氨基酸取代包含IFN-α14氨基酸序列的蛋白质提供了IFN-α10IFN-α14杂合蛋白，其与单独的IFN-α10或IFN-α14相比应具有对干扰素受体1和2两者的更强的结合亲和力。包括IFN-α10和IFN-α14的主要干扰素受体结合位点是指该杂合物包含从IFN-α10选择并取代到IFN-α14氨基酸序列中以改进IFN-α14亚型与干扰素受体2结合的能力的氨基酸和/或该杂合物包含从IFN-α14选择并取代到IFN-α10氨基酸序列中以改进IFN-α10亚型与干扰素受体1结合的能力的氨基酸。
合适地，用确定参与结合干扰素受体1的IFN-α14的氨基酸对包含IFN-α10氨基酸序列的蛋白质进行若干个氨基酸取代可以增强该蛋白质与干扰素受体1的结合。合适地，用确定参与结合干扰素受体2的IFN-α10的氨基酸对包含IFN-α14氨基酸序列的蛋白质进行氨基酸取代可以增强该蛋白质与干扰素受体2的结合。
在实施方案中，IFN-α10-IFN-α14杂合物可以基本上具有IFN-α10的氨基酸序列，但是在氨基残基80至150之间，或合适地在氨基酸残基84至144之间，或合适地在氨基酸残基92至115，或合适地在氨基酸残基90至110之间(利用IFN-α10序列的编号)的区域中经修饰以提供由IFN-α14序列提供的氨基酸。认为这些区域或这些区域的部分中的氨基酸残基提供了IFN-α14与干扰素受体1的结合。具体而言，杂合物序列可以包括IFN-α10序列的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个或至少11个修饰，以提供IFN-α14序列的相应残基或其保守的突变。在实施方案中，提供了11个修饰，如黑体所标注的氨基酸所示
在实施方案中，IFN-α10-IFN-α14杂合物序列可以包括选自位置94、101、102、109或144处的氨基酸的至少一个突变，优选地选自位置94、101、102、109或144处的氨基酸的至少两个突变，更优选地选自位置94、101、102、109或144处的氨基酸的至少三个突变，更优选地选自位置94、101、102、109或144处的氨基酸的至少四个突变，或者更优选地选自位置94、101、102、109或144处的氨基酸的至少五个突变。在替代的实施方案中，IFN-α14可以用作杂合物的主链结构，并且可以在杂合物序列中提供在序列的N和C末端区域处在IFN-α10和IFN-α14序列之间有差异的残基，如同在IFN-α10序列中存在的那些。合适地，可以制备IFN-α14N末端序列的至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10或至少11个取代以提供杂合物序列，以提供来自IFN-α10的处于下述氨基酸位置的残基，其中所述氨基酸在IFN-α10和IFN-α14之间不是共享/共同的。合适地，在IFN-α14C末端序列处提供至少1、至少2或3个取代，以在IFN-α10与IFN-α14之间不共享/共同的那些氨基酸位置处向杂合物序列提供来自IFN-α10的残基。在实施方案中，制备来自IFN-α14的N末端序列的至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10或至少11个取代以及来自C末端序列的至少1、至少2或3个取代，以在具有IFN-α10与IFN-α14之间不共享/共同的氨基酸的氨基酸位置处向杂合物提供来自IFN-α10的残基。
在实施方案中，杂合物包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体或由之组成。
功能活性是指包含IFN-α10和IFN-α14的主要干扰素结合位点的IL-α10IL-α14杂合物多肽，其中向受试者施用肽或受试者中肽的表达促进Th1介导的免疫应答的增强和Th2/Th17介导的免疫应答的抑制。此外，可以通过杂合肽增强Th1介导的免疫应答和抑制Th2/Th17介导的应答的能力来指示功能活性。
片段可以包含来自SEQ ID NO:1或2的至少50个，优选100个，且更优选150个或更多个连续氨基酸，并且其具有功能活性。合适地，可以使用例如cDNA的C末端连续缺失来确定片段。然后可以将所述缺失构建体克隆到合适的质粒中。然后，可以如本文所述对这些缺失突变体的活性测试生物学活性。
变体是指与SEQ ID NO:1或2至少70％同源，更优选与SEQ ID NO:1或2至少80％同源，更优选与SEQ ID NO:1或2至少90％同源，甚至更优选与SEQ ID NO:1或2至少95％同源，甚至更优选与SEQ ID NO:1或2至少96％同源，甚至更优选与SEQ ID NO:1或2至少97％同源，且最优选与SEQ ID NO:1或2至少98％同源的氨基酸序列。变体涵盖SEQ ID NO:1或2的多肽序列，其包括氨基酸的取代，尤其是众所周知具有很高的概率不导致蛋白质的生物学活性或构型或折叠的任何显著改变的取代。这些取代(通常称为保守取代)是本领域已知的。例如，精氨酸、赖氨酸和组氨酸的组是已知的可互换的碱性氨基酸。合适地，在实施方案中，具有相同电荷、大小或疏水性的氨基酸可以彼此取代。合适地，可以基于对干扰素alpha亚型的氨基酸序列比对的分析来选择任何取代，以提供当序列比对时在相似或相同位置处存在于其他alpha亚型中的氨基酸的氨基酸取代。杂合物及其变体和片段可以使用本领域已知的合适的分子生物学方法来产生。
发明人还认为，使用IFN-α14或杂合物1(SEQ ID NO:2)作为与皮肤的表皮下层有关的局部治疗存在某种关联性。不希望受理论的束缚，认为IFN-α14或杂合物1的一部分可以穿过皮肤到达真皮下层，在真皮下层有许多白细胞，特别是生成IL17A、IL17F和IL22的Th17。IL17A和IL17F刺激巨噬细胞制造TNF-α，其是导致角质形成细胞释放粒细胞吸引趋化因子(如CXCL1、CXCL5和CXCL8)的主要介质。
发明人惊奇地发现，IFN-α14或杂合物1(特别是SEQ ID NO:1或2或其变体或片段)作为局部治疗的施用导致与以前的局部用药相比，角质形成细胞中CXCL1、CXCL8(IL8)、CXCL-5和CCL20的更大的降低或抑制。另外，发明人已经确定可以使用非常低剂量的IFN-α14或杂合物1，例如高达5x103IU/ml或5x104IU/ml的局部乳膏。
发明人还指出，当IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段)向下扩散到真皮下层时，其也可以关闭或抑制TNF-α，这也导致趋化因子(如IL17，例如IL17A、IL17B、IL17F和/或IL22)的抑制。
这已导致发明人鉴定出改进的治疗组合物，该组合物可用于治疗和/或防治银屑病以及其中过度的Th17、22应答起作用的疾病和状况，如特应性皮炎。
因此，本发明的第一方面提供了用于治疗和/或防治银屑病或特应性皮炎的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)向有此需要的受试者施用治疗有效量的干扰素alpha亚型，其中干扰素alpha亚型是IFN-α14、杂合物1或IFN-α14和杂合物1的组合。
在实施方案中，干扰素alpha亚型IFN-α14包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体，或由氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体组成。
在实施方案中，干扰素alpha亚型杂合物1包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体，或由氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体组成。
在实施方案中，施用的方法是局部施用。在实施方案中，施用的方法是舌下的。不希望受理论的束缚，在两种施用方法中据认为将提供一定浓度的IFN-α14和杂合物1，从而不诱导干扰素的系统性作用。因此，可以实现趋化因子和白介素的作用而不引起(或仅最小程度引起)抗病毒或抗增殖效应。
可以认为这种施用不同于已提供药理学剂量的本领域中干扰素的系统性递送。此类药理学剂量将激活此类干扰素的抗病毒/细菌特性(例如，如在本领域施用IFNalpha2c之后所观察到的那样)-引起副作用并消除发明人在局部施用后观察到的低浓度相关的免疫调节作用。通常，局部剂量可以比系统性剂量小100-1000倍，并且仅允许控制皮肤区室中的免疫应答。
在实施方案中，干扰素alpha亚型的治疗有效量是低剂量(高达5×104IU单位或5×103IU单位/ml)。在实施方案中，干扰素alpha亚型的治疗有效量低于当前用于银屑病或其他状况的系统性治疗。
在实施方案中，以5IU/ml、10IU/ml、50IU/ml、1x102IU/ml、1x103IU/ml、1x104IU/ml、1x105IU/ml或1x106IU/ml的剂量施用干扰素alpha亚型。
发明人已经阐明，干扰素alpha亚型引起彼此之间并且随剂量变化的应答(高剂量导致系统性——抗病毒和抗增殖效应)和低剂量——非系统性水平的趋化因子和白介素效应，并且该应答可以随组织而变化。
在实施方案中，以0.1mg至1mg、1mg至3mg、3mg至5mg或5mg至10mg的剂量施用干扰素alpha亚型。例如，在人类局部应用中，可以使用5×104IU/ml或更少的乳膏。在动物(例如犬)中，舌下使用可以是104IU/Kg，例如在1ml PBS中。
在实施方案中，干扰素alpha亚型每天一次、一天两次、一天三次或一天四次局部施用。通常对于舌下施用，每天将提供一次剂量。
在实施方案中，干扰素alpha亚型IFN-α14和杂合物1直接相互作用以关闭或抑制角质形成细胞层中的细胞因子/趋化因子。在实施方案中，干扰素alpha亚型IFN-α14和杂合物1直接相互作用以关闭角质形成细胞层中的细胞因子，该细胞因子对于引起皮肤中银屑病的嗜中性粒细胞和嗜碱性粒细胞/肥大细胞具有趋化性。在实施方案中，干扰素alpha亚型穿过皮肤到达真皮下层，在其中它影响趋化因子的产生。
在实施方案中，特应性皮炎可以定位于身体上的特定位置、例如手臂的弯曲、腿、面、颈、眼睑、手腕、手指、指关节、脚踝、脚和/或手。在实施方案中，特应性皮炎可以影响整个或基本上整个身体。这特别是对于动物，例如在犬中可以观察到，其中特应性皮炎可以导致它们在整个身体上抓挠。
在某些实施方案中，银屑病可以是轻度、轻度至中度、中度、中度至重度或重度银屑病。
通常，受试者是哺乳动物，特别是人。在实施方案中，受试者可以是动物，例如但不限于伴侣动物，如犬。
在某些实施方案中，受试者可以患有其中期望抑制Th17介导的免疫应答的状况。在某些实施方案中，受试者可以患有银屑病。在实施方案中，受试者可以患有特应性皮炎。
根据本发明的第二方面，提供了干扰素alpha亚型，其中干扰素alpha亚型是IFN-α14或杂合物1或IFN-α14和杂合物1的组合，用于治疗和/或防治银屑病或特应性皮炎或其中期望抑制Th17介导的免疫应答的状况。
在实施方案中，干扰素alpha亚型IFN-α14包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体，或由氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体组成。
在实施方案中，干扰素alpha亚型杂合物1包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体，或由氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体组成。
在某些实施方案中，干扰素alpha亚型将局部施用。在某些实施方案中，干扰素alpha亚型可以舌下施用。这对于兽医治疗可能特别有利。
在实施方案中，如本文所述以低剂量施用干扰素alpha亚型。在实施方案中，以非常低的剂量施用干扰素alpha亚型。在实施方案中，干扰素alpha亚型的治疗有效量低于当前用于银屑病的系统性治疗。
在实施方案中，干扰素alpha亚型可以以5IU/ml、10IU/ml、50IU/ml、1x102IU/ml、1x103IU/ml、1x104IU/ml、1x105IU/ml或1x106IU/ml的剂量施用。
在实施方案中，干扰素alpha亚型可以以0.1mg至1mg、1mg至3mg、3mg至5mg或5mg至10mg的剂量施用。
在实施方案中，干扰素alpha亚型可以每天一次、一天两次、一天三次或一天四次施用。合适地，在舌下施用中，每天可以提供单一剂量。
在某些实施方案中，银屑病可以是轻度、轻度至中度、中度、中度至重度或重度银屑病。银屑病的严重程度可以通过PASI评分进行评估。这给出了患者病变范围的数字。银屑病面积和严重程度指数(PASI)分数降低75％(PASI 75)是目前大多数银屑病临床试验的主要终点的基准。
根据本发明的第三方面，提供了干扰素alpha亚型在制备用于治疗和/或防治银屑病或其中期望抑制Th17介导的免疫应答的状况的药物中的用途，其中干扰素alpha亚型是IFN-α14、杂合物1或IFN-14和杂合物1的组合。合适地，状况可以是特应性皮炎。
根据本发明的进一步的方面，提供了包含干扰素alpha亚型的组合物，其中干扰素alpha亚型是IFN-α14、杂合物1或IFN-14和杂合物1的组合，其用于治疗和/或防治银屑病或其中期望抑制Th17介导的免疫应答的状况。
根据本发明的进一步的方面，提供了包含干扰素alpha亚型的药物组合物，其中干扰素alpha亚型是IFN-α14、杂合物1或IFN-14和杂合物1的组合，其用于治疗和/或防治银屑病或其中期望抑制Th17介导的免疫应答的状况。
根据本发明的进一步的方面，提供了干扰素alpha亚型，其中干扰素亚型是IFN-α14、杂合物1或IFN-α14和杂合物1的组合，其用于调节免疫应答。
在上文概述的本发明的方面的实施方案中，干扰素alpha亚型IFN-α14包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体，或由氨基酸序列SEQ ID NO:1或其功能活性片段或变体组成。
在上文概述的本发明的方面的实施方案中，干扰素alpha亚型杂合物1包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体，或由氨基酸序列SEQ ID NO:2或其功能活性片段或变体组成。
在上文概述的本发明的方面的实施方案中，组合物或药物组合物是局部施用的。
在上文概述的本发明的方面的实施方案中，以低剂量施用干扰素alpha亚型。在实施方案中，以非常低的剂量施用干扰素alpha亚型。在实施方案中，干扰素alpha亚型的治疗有效量低于当前用于银屑病的系统性治疗。
在上文概述的本发明的方面的实施方式中，干扰素alpha亚型以5IU/ml、10IU/ml、50IU/ml、1x102IU/ml、1x103IU/ml、1x104IU/ml、1x105IU/ml或1x106IU/ml的剂量施用。
在上文概述的本发明的方面的实施方案中，干扰素alpha亚型以0.1mg至1mg、1mg至3mg、3mg至5mg或5mg至10mg的剂量施用。
在上文概述的本发明的方面的实施方案中，干扰素alpha亚型每天一次、一天两次、一天三次或一天四次施用。
在上文概述的本发明的方面的某些实施方案中，银屑病可以是轻度、轻度至中度、中度、中度至重度或重度银屑病。
在上文概述的本发明的方面的某些实施方案中，IFN-α亚型包含IFN-α14，由IFN-α14组成或是IFN-α14，如融合蛋白或重组蛋白等，并且特别地，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:1或其变体或片段，或由氨基酸序列SEQ ID NO:1或其变体或片段组成。在实施方案中，IFN-α14可以经糖基化。
在上文概述的本发明的方面的某些实施方案中，IFN-α亚型包含杂合物1，由杂合物1组成，或是杂合物1，如融合蛋白或重组蛋白等，并且特别地，其包含氨基酸序列SEQ IDNO:2或其变体或片段，或由氨基酸序列SEQ IDNO:2或其变体或片段组成。
在本发明的进一步的方面，提供了重组多肽，其包含SEQ ID NO:1或其片段或变体，或由SEQ ID NO:1或其片段或变体组成。本发明扩展到衍生自氨基酸序列SEQ ID NO:1的核酸序列。
在本发明的进一步的方面，提供了重组多肽，其包含SEQ ID NO:2或其片段或变体，或由SEQ ID NO:2或其片段或变体组成。本发明扩展到衍生自氨基酸序列SEQ ID NO:2的核酸序列。
发明详述
本发明的发明人惊奇地发现，如本文所述，施用IFN-α14，例如SEQ ID NO:1或其变体或片段，导致阻抑或抑制与银屑病中与免疫应答有关的多种细胞因子。令人惊讶地，当局部施用IFN-α14时，该效应增强。
SEQ ID NO:1是IFNα-14，并可以定义如下：
SEQ ID NO:2是HYBRID-1，并可以定义如下：
特别地，发明人已发现IFNα-14，特别是SEQ ID NO:1或杂合物1(SEQ ID NO:2)或其变体或片段靶向与银屑病相关的角质形成细胞层中的特定细胞因子(例如CXCL-1、5、8，但不是CCL-1、5、IL-6。银屑病的免疫应答涉及IL23/Th17/IL-17A轴。IL23由树突状细胞或单核细胞产生。Th17淋巴细胞经激活以释放IL17A、IL17B和IL17F。IL17进一步刺激巨噬细胞以释放大量的TNF-α。这导致CXCL8(IL8)、CXCL5、CCL-20和CXCL1从角质形成细胞释放。这吸引嗜中性粒细胞和嗜碱性粒细胞/肥大细胞，其然后释放导致银屑病斑块的药剂。此外，TNF-α是斑块形成的主要贡献者。IL22是炎症的激活物，并抑制角质形成细胞终末分化。近年来，已开发出单独地针对IL23、IL17A或TNF-α的新系统性药。发明人已证明天然分子IFNα-14(特别是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或其变体或片段)以非常低的剂量消除或关闭角质形成细胞中的CXCL1、CXCL8(IL8)、CXCL5和CCL20。杂合物1对IL-17途径和相关趋化因子的功能作用与处于相同剂量的IFNα-14相同。此外，尽管发明人已经确定与IFNα-14不同，它是NK细胞的弱激活物(见图25)。这可能是有利的，因为这意味着杂合物1将具有“更好的副作用”概况。本发明人还已确定，当IFNα-14(特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段)向下移动到真皮层中时，它同时靶向IL23、IL17A、IL17F和TNF-αIL17F。这些发现可以用于提供改进的方法和改进的组合物，用于治疗和/或预防银屑病。
发明人认为IFNα-14和杂合物1作用于：
(i)CXCL1：诱发炎症，吸引嗜中性粒细胞并导致其破坏性酶的释放；
(ii)CXCL8(IL8)：来自角质形成细胞的趋化因子，其是嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞的引诱物，引起许多组织破坏性物质的释放；
(iii)CXCL5：众所周知对嗜中性粒细胞具有趋化和激活功能，主要在急性炎症应答期间。它还可以维持嗜中性粒细胞的稳态；
(iv)IL6：来自角质形成细胞的生长因子，通常与压力和发烧有关。IL6是急性期反应物，并且可以同时是促炎的和消炎的。IL6可以在IL17产生之前通过抑制Th17细胞生成，且在IL17产生之后通过抑制增加角质形成细胞增殖的IL6的产生来发挥作用；
(v)TNF-α：斑块形成的主要贡献者，并激活角质形成细胞产生不需要的趋化因子；
(vi)IL17和IL23：经临床验证在银屑病发病机理中具有重要作用；和
(vii)IL-22：发炎并抑制角质形成细胞终末分化，并复制IL-17的许多趋化因子刺激活性。
CXCL8(IL8)是参与嗜中性粒细胞募集到损伤或感染部位的主要细胞因子；该过程称为趋化。许多变量对于嗜中性粒细胞的成功趋化是必不可少的，包括增加高亲和力粘附分子的表达以将嗜中性粒细胞缚牢在受影响部位附近的内皮上(因此不被冲走进入循环系统)，以及嗜中性粒细胞可以通过基底膜和细胞外基质(ECM)消化到达受影响的部位。CXCL8在诱导引起这些变化所必需的细胞信号传导中起关键作用。首先，在感染部位，组胺释放导致受伤区域附近的毛细血管的血管舒张，其减慢该区域中的血流，并促使白细胞(如嗜中性粒细胞)更靠近内皮并远离管腔的中心(血流速度最高的地方)。一旦发生这种情况，在嗜中性粒细胞上表达的选择素与内皮细胞之间就产生弱相互作用(通过CXCL8和其他细胞因子的作用，其表达也增加)。
发明人已发现，施用IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段)导致与以前的局部用药相比，IL-17(IL-17A、IL-17B或IL-17F)降低10％、优选20％、优选30％、优选40％、优选50％、优选60％、优选70％、优选80％且更优选87％更大。认为杂合物1将具有相同的效应。
发明人已惊奇地发现，施用IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段)能够使IL-22抑制α/β和γ/δT淋巴细胞合成达50％、优选60％、优选70％、优选76％、优选大于76％、优选80％、优选90％且更优选95％。同样，认为杂合物1提供了相同的效应。
发明人已惊奇地发现，施用IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段)导致抑制角质形成细胞中的CXCL1、CXCL8(IL-8)、CXCL-5或CCL-20达50％、优选60％、优选70％、优选80％、优选90％、优选91％、优选92％、优选93％、优选94％、优选95％、优选96％、优选97％且更优选98％。
发明人已惊奇地发现，如本文所讨论，以低剂量施用IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段)导致角质形成细胞中CXCL1、CXCL8(IL8)、CXCL5或CCL20的抑制。同样，杂合物1显示出相似的功能作用。
可以以5IU/ml、10IU/ml、50IU/ml、1x102IU/ml、1x103IU/ml、1x104IU/ml、1x105IU/ml或1x106IU/ml的剂量施用本发明的治疗。
可以以0.1mg至1mg、1mg至3mg、3mg至5mg或5mg至10mg的剂量施用本发明的治疗。
可以每天一次、一天两次、一天三次或一天四次局部施用本发明的治疗。
另外，发明人已发现，IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或杂合物1(SEQ ID NO:2)或其变体或片段)的施用或使用导致对角质形成细胞中CXCL1的完全或部分抑制和/或CXCL8(IL8)的完全或部分抑制和/或CXCL5的完全或部分抑制和/或CCL20的完全或部分抑制。
另外，发明人已发现，IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或杂合物1(SEQ ID NO:2)或其变体或片段)的施用或使用导致对真皮层中IL17的完全或部分抑制和/或IL22的完全或部分抑制和/或IL23的完全或部分抑制和/或和/或IL6的完全或部分抑制和/或TNF-α的完全或部分抑制。
此外，发明人已惊奇地发现，如本文所讨论，IFN-α14或杂合物1(特别是SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2或其片段或变体)的局部施用可以导致靶向角质形成细胞层中的相关细胞因子。本发明提供了在轻度、中度和重度银屑病中安全且有效的优良局部治疗。这种治疗显示出较低的副作用概况。需要低剂量的药物，并且即使在最高浓度(1x108 IU/ml)下，天然产物IFN-α14或杂合物1也不展现出体外细胞毒性。
发明人在用TNF-α激活以诱导趋化因子(Il8)分泌的来自正常人皮肤培养物的角质形成细胞上已经证明，IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段)直接抑制IL8分泌>80％。另外，发明人证明，当对诱导为银屑病状态的正常人皮肤的活组织检查进行测试时，添加IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段)导致IL17A、IL17F和IL22的分泌的强烈抑制。这些结果清楚地表明了IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段)相对于现有系统性生物制剂的潜在优势。
尽管不希望受到理论的束缚，但发明人已经确定IFN-α14(特别是SEQ ID NO:1或其变体或片段)的局部施用可以用于治疗银屑病和特应性皮炎。发明人已经证明，尽管分子量相对较高，IFNα-14和杂合物1(特别是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或其变体或片段)仍显示出良好的透过皮肤的渗透潜力，并因此，开发能够跨皮肤递送治疗剂量的这种肽的临床上可行的配制剂，为治疗或预防银屑病提供了出乎意料的方法。
定义
片段
片段可以包含来自SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的至少50个，优选100个，更优选150个或更多个连续氨基酸，并且其具有功能活性。合适地，可以使用例如cDNA的C末端连续缺失来确定片段。然后可以将所述缺失构建体克隆到合适的质粒中。然后可以如本文所述对这些缺失突变体的活性测试生物学活性。可以使用本领域已知的合适的分子生物学方法来产生片段。
变体
变体是指与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2至少70％同源，更优选与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2至少80％同源，更优选与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2至少90％同源，甚至更优选与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2至少95％同源，甚至更优选与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2至少96％同源，甚至更优选与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2至少97％同源，且最优选与SEQID NO:1或SEQ ID NO:2至少98％同源的氨基酸序列。变体涵盖SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的多肽序列，其包括氨基酸的取代，尤其是众所周知具有很高的概率不导致蛋白质的生物学活性或构型或折叠的任何显著改变的取代。这些取代(通常称为保守取代)是本领域已知的。例如，精氨酸、赖氨酸和组氨酸的组是已知的可互换的碱性氨基酸。合适地，在实施方案中，具有相同电荷、大小或疏水性的氨基酸可以彼此取代。合适地，可以基于对干扰素alpha亚型的氨基酸序列比对的分析来选择任何取代，以提供当序列比对时在相似或相同位置处存在于其他alpha亚型中的氨基酸的氨基酸取代。变体可以使用本领域已知的合适的分子生物学方法来产生。
受试者
如本文所定义，“受试者”包括并涵盖哺乳动物，如人、灵长类动物和家畜动物(例如绵羊、猪、牛、马、驴)；实验室测试动物，如小鼠、兔、大鼠和豚鼠；以及伴侣动物，如犬和猫。
治疗/疗法
本文使用术语“治疗”以指可以有益于人类或非人类动物的任何方案。治疗可以针对银屑病，并且治疗可以是防治性的(预防性治疗)。治疗可以包括疗效或缓解作用。在本文中提及“治疗性”和“防治性”治疗应在其最广泛的范围内考虑。术语“治疗性”不一定暗示对受试者进行治疗直至完全康复。类似地，“防治性”并不一定意味着受试者最终将不会染病。因此，治疗性和/或防治性治疗包括改善特定过敏性状况的症状或预防或以其他方式降低发展特定过敏性状况的风险。术语“防治性”可以被认为降低了特定状况的严重性或发作。“治疗性”也可以减轻现有状况的严重性。
施用
如本文所述，本发明中使用的活性成分，特别是干扰素亚型IFN-α14，例如SEQ IDNO:1或杂合物1(SEQ ID NO:2)，可以分别施用于同一受试者，任选地顺序施用，或者可以同时作为药物或免疫原性组合物共同施用。药物组合物通常将包含根据预期的施用途径选择的合适的药物赋形剂、稀释剂或载体。
可以经由任何合适的途径将活性成分施用于需要治疗的患者。精确剂量将取决于许多因素，如下面更详细讨论的。
一种合适的施用途径是局部地，例如直接施加至皮肤。
药物组合物
如上所述，本发明扩展到用于治疗银屑病或特应性皮炎的药物组合物。
根据本发明以及根据本发明使用的药物组合物，除了活性成分外，还可以包含药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲稳定剂或本领域技术人员众所周知的其他材料。此类材料应是无毒的，并且不应干扰活性成分的功效。载体或其他材料的确切性质将取决于施用途径，其可以是例如口服、静脉内、鼻内或经由口服或鼻吸入。配制剂可以是液体，例如，含有pH 6.8-7.6的非磷酸盐缓冲剂的生理盐溶液，或经冻干或冷冻干燥的粉末。
剂量
组合物优选以“治疗有效量”或“期望量”施用于个体，这足以显示出对个体的益处。如本文所定义，术语“有效量”是指至少部分获得所期望的应答，或延迟所治疗的特定状况的发作或抑制其进展或完全停止其发作或进展所必需的量。该量取决于所治疗的受试者的健康和身体状况，所治疗的受试者的分类群，所期望的保护程度，组合物的配方，医疗情况的评估和其他相关因素。预期该量将落在相对较宽的范围内，其可以通过常规试验确定。治疗处方，例如剂量等的决定最终应由全科医生、医师或其他医生负责并自行决定，并通常要考虑待治疗的病症，个别患者的状况，递送部位，施用的方法和从业人员已知的其他因素。医师可以基于许多参数来确定最佳剂量，所述参数包括例如年龄、性别、体重、所治疗状况的严重程度、所施用的活性成分和施用途径。可能适用的剂量范围很广。考虑到对人类患者的口服施用，例如，每人剂量可以施用约10μg至约1000μg的药剂，任选地3至4次剂量。可以调整剂量方案以提供最佳的治疗反应并减少副作用。例如，可以每天、每周、每月或其他合适的时间间隔施用若干分开的剂量，或者可以根据情况的紧急情况按比例减少剂量。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有本发明领域的技术人员通常理解的含义。
自身免疫性疾病
如本文所用，术语“自身免疫性疾病”应理解为是指由身体的组织受到自身免疫系统攻击而引起的任何疾病或状况。
在整个说明书中，除非上下文另外要求，否则术语“包含(comprise)”或“包括(include)”或变形如“包含(comprises)”或“包含(comprising)”，“包括(includes)”或“包括(including)”将理解为暗示包括所述整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组。
现在将参考以下非限制性附图和实施例来举例说明本发明，所述附图和实施例是出于说明的目的而提供的，并且不旨在被解释为对本发明的限制。根据该描述，本发明的其他实施方案对于本领域普通技术人员将是显而易见的。
附图简述
图1显示了证明在有和没有用TNF-α诱导的情况下，IFNα-14对从人角质形成细胞生成CXCL8(IL8)的影响的图。
图2显示了证明在有和没有用TNF-α诱导的情况下，IFNα-14对从人角质形成细胞生成CXCL1的影响的图。
图3显示了证明在有和没有用TNF-α诱导的情况下，IFNα-14对从人角质形成细胞生成CXCL5的影响的图。
图4显示了证明在没有用TNF-α诱导的情况下，IFNα-14对从人角质形成细胞生成IL6的影响的图。
图5显示了证明在没有用TNF-α诱导的情况下，IFNα-14对从人角质形成细胞生成CCL2的影响的图。
图6显示了证明在没有用TNF-α诱导的情况下，IFNα-14对从人角质形成细胞生成CCL5的影响的图。
图7显示了证明在没有用TNF-α诱导的情况下，IFNα-14对从人角质形成细胞生成CCL20的影响的图。
图8显示了证明IFNα-14对刺激为银屑病状态的正常皮肤活组织检查中IL17A生成的影响的图。
图9显示了证明在人全血测定法中IFNα14对IL17A生成的影响的图。
图10显示了证明在人全血测定法中IFNα-14对IL17F生成的影响的图。
图11显示了证明在人全血测定法中IFNα-14对IL22生成的影响的图。
图12显示了证明在人全血测定法中IFNα-14对TNF-α生成的影响的图。
图13显示了证明在人全血测定法中IFNα-14对IL6生成的影响的图。
图14显示了证明在人全血测定法中IFNα-14对CXCL8(IL8)生成的影响的图。
图15显示了证明在人全血测定法中IFNα-14对CXCL1生成的影响的图。
图16显示了IFN-α14氨基酸序列。
图17显示了杂合物1氨基酸序列。
图18显示了用人IFN alpha 10/14处理人单个核细胞后白介素、趋化因子和CD标志物浓度的变化。
图19显示了用人IFN-α14抑制犬IL-17A从犬白细胞分泌。
图20显示了杂合物1和IFN-α14对IL-17A生成的效应的比较。
图21显示了杂合物1和IFN-α14对IL-8生成的效应的比较。
图22显示了杂合物1和IFN-α14对CXCL-1生成的效应的比较。
图23显示了杂合物1和IFN-α14对干扰素gamma生成的效应的比较。
图24显示了杂合物1和IFN-α14对肿瘤坏死因子alpha生成的效应的比较。
图25显示了IFN-α14与杂合物1对CXCL-10的分泌的效应的比较。
实验数据
实验1：IFNα-14对来自正常人皮肤的角质形成细胞中IL-6、CXCL8(IL8)、CXCL1和 CCL2生成的影响
发明人测试了IFNα-14对经TNF-α激活以诱导趋化因子分泌的来自正常人皮肤的角质形成细胞的影响。
图1证明了IFNα-14直接抑制CXCl8(IL8)分泌达>80％。CXCL8(IL-8)是涉及银屑病的主要趋化因子，并且图1显示在存在IFNα-14的情况下对CXCL8(IL8)的强烈抑制。
图2证明了对CXCL1生成的强烈抑制。CXCL1是CXC家族的成员，其在响应组织损伤和微生物感染的嗜中性粒细胞的募集和激活中起着不可或缺的作用。
图3证明了对CXCL5生成的强烈抑制。众所周知，CXCL5主要在急性炎症应答期间对嗜中性粒细胞具有趋化和激活功能。它还可以维持嗜中性粒细胞的稳态。
因此，低浓度的IFNα-14强烈抑制所有3种嗜中性粒细胞的化学引诱剂。
图4证明了在存在IFNα-14的情况下对IL6生成无抑制。Il-6是生长促进物。IFNα-14对IL6没有影响。这表明IFNα-14将允许皮肤继续生长。
图5证明了IFNα-14诱导CCL2。CCL2是M2巨噬细胞趋化因子。M2巨噬细胞通常参与受损组织的修复。这是不寻常的，因为它吸引作为“修复”细胞的M2巨噬细胞修复角质形成细胞的损伤。
图6证明了IFNα-14诱导CCL5。CCL5是T淋巴细胞的化学引诱剂。这表明IFNα-14将响应偏转向Th1偏向(bias)。
图7证明了IFNα-14抑制CCL20。CCL20上调代表在屏障破坏的皮肤和伴随屏障功能受损的炎性皮肤状况中免疫监视增加，以抵消潜在抗原入侵的危险信号。它吸引淋巴细胞和树突状细胞。IFNα-14完全阻止角质形成细胞产生CCL20。由IFNα-14进行的此类抑制是完全出乎意料的。
实验2：IFNα-14对刺激成银屑病状态的皮肤活组织检查中IL17A生成的影响
从健康受试者获得正常皮肤活组织检查，并用细胞因子的混合物诱导为银屑病状态。双相应答是药理学众所周知的，并且由于IFNα-14的抗病毒特性所致。图8证明了IL17A在宽范围的IFNα-14浓度内被显著抑制。图8支持以下假设：IFNα-14可以抑制皮肤中IL17的分泌。给药的期望治疗窗口在102-105的范围内。
实验3：人全血测定法中IFNα-14对IL17、IL17F、IL22、TNF-α、IL6、CXCL8(IL8)和 CXCL1生成的影响
该实验使用正常的人全血。用凝集素PHA(植物血凝素)刺激它以非特异性激活T淋巴细胞。由于应答可存在差异(未存在)，使用两剂PHA。因为这是外周血，所以>96％的T淋巴细胞是alpha-beta受体类型的。这高度指示了仅针对系统性治疗的功效。
图9证明了在用100IU/ml IFN-α14(1ng/ml)的情况下从衍生自人全血的αβ淋巴细胞的IL17A合成下降高达80％。这是一个出乎意料且惊人的结果。
图10证明了在存在IFNα-14的情况下，对从衍生自人全血的αβ淋巴细胞的IL17F合成的强烈抑制(三个受试者的平均值)。图10证明了IFNα-14显著抑制IL17F高达87％。
图11证明了在存在IFNα-14的情况下，对IL22生成的强烈抑制。IL22复制IL17的趋化因子刺激活性，因此抑制IL22也将对银屑病具有积极影响。
图12证明了在存在IFNα-14的情况下，对TNF-α生成的强烈抑制。100μg PHA诱导TNF-α的产生。该5天全血测定法显示TNF-α生成的>70％减少。TNF-α对内皮细胞、上皮细胞和角质形成细胞传导信号以产生吸引嗜中性粒细胞的趋化因子。这些脱粒以释放导致银屑病的组织破坏性化学物质和酶。
图13证明了在1天全血测定法中，在存在IFNα-14的情况下，对IL-6生成的强烈抑制。IL-6是一种急性期反应物，其在创伤中升高，并被广泛用作辅助生长因子/刺激物。IL6是通常与应激相关的生长因子。它参与确定Treg与分泌IL17的Th17细胞的比率，并因此其除去使T细胞平衡推离分泌IL17的Th-17细胞。
图14证明了在1天全血测定法中，在存在非常低水平的IFNα-14的情况下，CXCL8(IL8)合成受抑制。CXCL8是银屑病的许多方面的主要贡献者，并且是银屑病的效应分子之一。CXCL8是导致炎症的主要贡献者。它将嗜中性粒细胞和嗜碱性粒细胞/肥大细胞吸引到炎症部位——后者释放出组胺和许多其他有害物质，例如前列腺素、白三烯。
图15证明了在存在IFNα-14的情况下，CXCL-1生成受抑制。CXCL1是重要的角质形成细胞趋化因子，具有强的趋化特性。CXCL1主要将嗜中性粒细胞吸引到作用部位，并由TNF-α诱导。图15表明用LPS或PHA两者刺激均受到抑制。条形表示用不同水平的LPS或PHA刺激产生可能的最高水平。这给出低达1IU/ml的IC50，显示出IFNα-14的效力。此1天CXCL1全血测定法表明了该疗法可以多么有效。
这些结果证明了IFNα-14对趋化因子的抑制是靶向性现象。结果表明IFNα-14在生成IL17之前和之后起作用。与其他银屑病疗法相比，这是该疗法的另一个关键的区分者。
实验4：在未经处理和用50微克/ml植物血凝素(PHA)刺激3天的人类正常单个核细 胞中400个白介素、趋化因子和CD标志物的浓度变化。
将人干扰素-alpha 10和14以105IU/ml的终浓度加入培养物中，并且仅显示浓度的显著变化(倍数)。这是通过人类生物标志物检测阵列(RayBiotech Inc.)进行的。
图18显示了α-14抑制IL-3和G-CSF(髓样细胞和粒细胞)、IL-5(嗜酸性粒细胞)、IL-13(Th2应答和IgE合成)以及IL-17和22(Th17/Th22细胞)的合成，如先前讨论。它还增强IL-12p70，其刺激从Th2向更为Th1的形式的免疫平衡改变。它还抑制嗜碱性粒细胞/肥大细胞上的低亲和力IgE受体CD-23，并抑制趋化因子XCL-1、5和CCL-1、7、16、20，从而抑制任何变应性状态和相关的粒细胞吸引。这强烈暗示不仅在银屑病的控制中而且还在特应性皮炎的控制中也起作用。
实验5：人IFN-α14抑制犬IL-17A。
从雄性比格犬(Beagledog)获得肝素化全血，并在存在浓度增加的IFN-α14的情况下用PHA刺激3天。通过ELISA获得的结果显示在图19中，并显示出对犬IL-17A的显著抑制。该结果与用人血液(图9)和人IL-17A获得的结果非常相似。由于IL-17A被认为是人类银屑病和特应性皮炎的主要靶标，因此犬结果表明使用人IFN-α14在患有相同病症的犬中的响应。
实验6：治疗患有重度特应性皮炎的犬(杂种犬)。
一只患有重度皮炎的5岁龄雄性宠物犬已经用所有可用于该疾病的药物治疗。用这些疗法中任一种均未见益处，并且痛苦的动物不断地抓挠并且很少进食——因此其重量减轻且其总体健康状况不佳。
在2周的时间段内每2天舌下施用0.5ml 0.9％盐水中的人IFN-α14(104 IU/Kg)。在3周后动物从其疾病状态中恢复过来，未抓挠并且正常进食。因此，在所使用的所有其他疗法均未成功的情况下，该治疗起作用。血液、肝或肾功能检查未记录不利数据。
实验7.对PHA诱导的从全人白细胞生成白介素/趋化因子比较杂合物1与干扰素- alpha14。
干扰素的浓度范围为0至40IU/ml，并且细胞以100微克/ml PHA-P刺激3天。白细胞介素/趋化因子使用商业ELISA进行评估，并测量IL-17A、IL-8、CXCL-1、TNF-α和干扰素-gamma。结果显示在图20至24中，并且在干扰素-alpha-14获得的值与由HYBRID1诱导的值之间在P<0.05(学生T-检验)没有观察到统计学差异。本质上，在采用的5种测定法中，这2个分子被判断为相同的。
在不脱离本发明的范围的情况下，对本发明的所描述的实施方案的各种修改和变形对于本领域技术人员将是显而易见的。尽管已经结合特定的优选实施方案描述了本发明，但是应当理解，要求保护的本发明不应不合适地限制于此类特定的实施方案。实际上，对本领域技术人员显而易见的对所描述的实施本发明的方式的各种修改旨在被本发明覆盖。
序列表
<110> ILC医疗有限公司
<120> 与疾病的治疗有关的组合物和方法
<130> P194523.WO.01
<150> GB1809005.0
<151> 2018-06-01
<150> GB1903608.6
<151> 2019-03-15
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 166
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Cys Asn Leu Ser Gln Thr His Ser Leu Asn Asn Arg Arg Thr Leu Met
1 5 10 15
Leu Met Ala Gln Met Arg Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp
20 25 30
Arg His Asp Phe Glu Phe Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe
35 40 45
Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Met Gln Gln Thr
50 55 60
Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asn Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr
65 70 75 80
Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Ile Glu Leu Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu
85 90 95
Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met
100 105 110
Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr
115 120 125
Leu Tyr Leu Met Glu Lys Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val
130 135 140
Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys
145 150 155 160
Arg Leu Arg Arg Lys Asp
165
<210> 2
<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 杂合物 1
<400> 2
Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile
1 5 10 15
Leu Leu Gly Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp
20 25 30
Arg His Asp Phe Arg Ile Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe
35 40 45
Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Met Gln Gln Thr
50 55 60
Phe Asn Leu Phe Ser Thr Glu Asn Ser Ser Ala Ala Trp Glu Gln Thr
65 70 75 80
Leu Leu Glu Lys Phe Ser Ile Glu Leu Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu
85 90 95
Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met
100 105 110
Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr
115 120 125
Leu Tyr Leu Ile Glu Arg Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val
130 135 140
Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys
145 150 155 160
Arg Leu Arg Arg Lys Asp
165
<210> 3
<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有11个突变的杂合物
<400> 3
Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu Gly Asn Arg Arg Ala Leu Ile
1 5 10 15
Leu Leu Gly Gln Met Gly Arg Ile Ser Pro Phe Ser Cys Leu Lys Asp
20 25 30
Arg His Asp Phe Arg Ile Pro Gln Glu Glu Phe Asp Gly Asn Gln Phe
35 40 45
Gln Lys Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Met Gln Gln Thr
50 55 60
Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asn Ser Ser Ala Ala Trp Asp Glu Thr
65 70 75 80
Leu Leu Glu Lys Phe Tyr Ile Glu Leu Phe Gln Gln Met Asn Asp Leu
85 90 95
Glu Ala Cys Val Ile Gln Glu Val Gly Val Glu Glu Thr Pro Leu Met
100 105 110
Asn Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Lys Lys Tyr Phe Gln Arg Ile Thr
115 120 125
Leu Tyr Leu Ile Glu Arg Lys Tyr Ser Pro Cys Ala Trp Glu Val Val
130 135 140
Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Leu Ser Phe Ser Thr Asn Leu Gln Lys
145 150 155 160
Arg Leu Arg Arg Lys Asp
165

Claims (5)

1.治疗有效量的干扰素alpha亚型在制备用于治疗银屑病或特应性皮炎的药物中的用途，其中所述干扰素alpha亚型是IFN-α14、杂合物1(HYBRID 1)或IFN-α14和杂合物1的组合，其中所述干扰素alpha亚型IFN-α14由氨基酸序列SEQ ID NO:1组成，其中所述干扰素alpha亚型杂合物1由氨基酸序列SEQ ID NO:2组成。
2.前述权利要求中任一项的用途，其中所述药物选自局部施用药物和舌下施用药物。
3.前述权利要求中任一项的用途，其中所述干扰素alpha亚型的治疗有效量是低剂量。
4.权利要求1或2的用途，其中所述银屑病是轻度、轻度至中度、中度、中度至重度或重度银屑病。
5.权利要求3的用途，其中所述银屑病是轻度、轻度至中度、中度、中度至重度或重度银屑病。
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Applicant before: ILC Medical Co.,Ltd.

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