CN112125963B - 可可毛色二孢菌LtALTA1基因及其用途 - Google Patents

可可毛色二孢菌LtALTA1基因及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种可可毛色二孢菌LtALTA1基因及其用途。本发明提供了一个影响可可毛色二孢菌致病力的新蛋白LtALTA1及其编码基因。蛋白LtALTA1的氨基酸序列如序列表的序列4所示。研究本发明所提供的基因LtALTA1将有助于揭示可可毛色二孢菌等植物机会病原真菌与寄主互作的分子机制，该基因的表达产物、修饰、定位及其参与调控的基因网络可在新型抗真菌药物的设计与筛选中加以利用。

Description

可可毛色二孢菌LtALTA1基因及其用途
技术领域
本发明涉及微生物基因工程和植物保护领域，具体涉及可可毛色二孢菌LtALTA1基因及其用途。
背景技术
可可毛色二孢菌是一种危害广泛的机会病原真菌，它可以潜伏在寄主体内，不引起明显的症状，但在外界条件适宜情况下，它能成功侵染危害葡萄、苹果、梨、桃、黑莓等果树。其中由该病原菌引起的葡萄溃疡病在我国多个省份均有不同程度的发生，特别是在葡萄成熟转色期会出现大量的果粒脱落现象，造成的损失为3％-10％，严重时造成的损失高达80％，甚至绝收。
在自然条件下，可可毛色二孢菌可以在病枝条、病果等病组织上越冬越夏，并通过雨水传播，经自然孔口或者修剪伤口侵染寄主植物。病原菌在侵染寄主植物过程中，会分泌特定的效应子，这些效应子会采用不同的方式与寄主相互作用，如干扰寄主的防卫反应，调节寄主的代谢途径及改变自身的微生态环境等。寄主植物识别病原菌分泌的效应子后，会引起自身的免疫反应，从而减弱或阻止病原菌的侵入。
发明内容
本发明的目的是提供可可毛色二孢菌LtALTA1基因及其用途。
本发明首先提供了一种蛋白质(命名为LtALTA1蛋白)，是如下(a1)或(a2)或(a3)的蛋白质：
(a1)由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(a2)将序列表的序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且有相同功能的由序列4衍生的蛋白质；
(a3)来源于可可毛色二孢菌且与序列表的序列4所示的氨基酸序列具有75％或75％以上的同源性且具有相同功能的由序列4衍生的蛋白质。
所述蛋白质来源于可可毛色二孢菌。
为了使(a1)中的蛋白质便于纯化和检测，可在由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表4所示的标签。
表1标签的序列
Figure GDA0003363431980000011
Figure GDA0003363431980000021
上述(a2)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。
本发明还保护编码所述蛋白质的基因(命名为LtALTA1基因)。
所述基因为如下(b1)-(b5)中的任一种：
(b1)序列表的序列1所示的DNA分子；
(b2)序列表的序列2所示的DNA分子；
(b3)编码区如序列表中序列3所示的DNA分子；
(b4)在严格条件下与(b1)或(b2)或(b3)限定的DNA序列杂交且编码权利要求1所述蛋白质的DNA分子；
(b5)与(b1)或(b2)或(b3)或(b4)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码权利要求1所述的蛋白的DNA分子。
上述严格条件可为用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA杂交实验中65℃下杂交并洗膜。
本发明还保护含有LtALTA1基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
所述重组表达载体具体可为将pBluescript II KS载体的Hind III和EcoRI酶切位点间的片段替换为序列表的序列3所示的DNA分子得到的重组质粒。
所述重组表达载体具体可为将pET-32a载体的EcoR I和BamH I酶切位点间的片段替换为了序列表的序列表的序列3所示的DNA分子得到的重组质粒。
所述重组菌是将所述基因导入宿主菌中得到的。
所述基因可通过含有所述基因的重组表达载体导入宿主菌得到重组菌。
所述重组表达载体具体可为上述重组表达载体中的任一种。
所述宿主菌可为大肠杆菌，具体可为大肠杆菌BL21(DE3)。
本发明还保护所述LtALTA1蛋白或所述LtALTA1基因在调控真菌致病力中的应用。所述应用具体可体现为：LtALTA1蛋白或LtALTA1基因在所述真菌中的活性和/或表达量提高，真菌致病力降低。
本发明还保护所述LtALTA1蛋白或所述LtALTA1基因在抗真菌药物筛选中的应用。
本发明还保护一种降低真菌致病力的方法，包括如下步骤：提高真菌中LtALTA1蛋白的表达量和/或活性，从而达到降低真菌致病力的目的。
本发明还保护一种降低真菌致病力的方法，包括如下步骤：向真菌中导入LtALTA1基因，从而达到降低真菌致病力的目的。
所述方法中，“向真菌中导入LtALTA1基因”可通过向真菌中导入含有LtALTA1基因的重组表达载体实现。所述重组表达载体可为上述重组表达载体中的任一种。
本发明还保护LtALTA1蛋白或LtALTA1基因或以上任一所述方法在植物育种中的应用。
所述育种的目的是为了选育对真菌抗性高的植物。
所述LtALTA1蛋白或LtALTA1基因及其表达产物可引起植物(具体可为烟草)的免疫反应。
以上任一所述真菌具体可为可可毛色二孢菌，更具体可为可可毛色二孢菌CSS-01s。
本发明提供了一个影响可可毛色二孢菌致病力的新基因LtALTA1。研究本发明所提供的基因LtALTA1将有助于揭示可可毛色二孢菌等植物机会病原真菌与寄主互作的分子机制，该基因的表达产物、修饰及其参与调控的基因网络可在新型抗真菌药物的设计与筛选中加以利用。
附图说明
图1为基因LtALTA1超表达转化子的验证。
图2为基因LtALTA1影响可可毛色二孢菌的致病力。
图3为基因LtALTA1的编码产物具有信号肽活性。
图4为基因LtALTA1的编码产物能够引起烟草的坏死。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
可可毛色二孢菌CSS-01s：参考文献：Yan J Y,Li X H,Kong F F,etal.Occurrence of Grapevine Trunk Disease Caused by Botryosphaeria rhodina inChina[J].Plant Disease,2011,95(2):219-219.；公众可以从北京市农林科学院获得。
pBluescript II KS载体：参考文献：Yan J Y,Zhao W S,Chen Z,etal.Comparative genome and transcriptome analyses reveal adaptations toopportunistic infections in woody plant degrading pathogens ofBotryosphaeriaceae[J].DNA Research,2018，25(1):87-102.；公众可以从北京市农林科学院获得。
酵母信号序列诱捕载体pSUC2载体：参考文献：Fang A,Han Y,Zhang N,etal.Identification and Characterization of Plant Cell Death-Inducing SecretedProteins From Ustilaginoidea virens[J].Molecular Plant-Microbe Interactions,2016,29(5):405-416.；公众可以从北京市农林科学院获得。
酵母蔗糖酶分泌缺陷型菌株YTK12：参考文献：Fang A,Han Y,Zhang N,etal.Identification and Characterization of Plant Cell Death-Inducing SecretedProteins From Ustilaginoidea virens[J].Molecular Plant-Microbe Interactions,2016,29(5):405-416.；公众可以从北京市农林科学院获得。
pSUC2-Avrlb载体：参考文献：Fang A,Han Y,Zhang N,et al.Identificationand Characterization of Plant Cell Death-Inducing Secreted Proteins FromUstilaginoidea virens[J].Molecular Plant-Microbe Interactions,2016,29(5):405-416.；公众可以从北京市农林科学院获得。
pSUC2-Mg87载体：参考文献：Fang A,Han Y,Zhang N,et al.Identification andCharacterization of Plant Cell Death-Inducing Secreted Proteins FromUstilaginoidea virens[J].Molecular Plant-Microbe Interactions,2016,29(5):405-416.；公众可以从北京市农林科学院获得。
pET-32a载体：参考文献：邢启凯,燕继晔,张玮,等.葡萄乙醛脱氢酶VvALDH10A9基因的克隆、表达及酶活性分析[J].植物保护,2017，43(5):35-42.；公众可以从北京市农林科学院获得。
E.coli BL21(DE3)感受态细胞：北京全式金生物技术有限公司，货号：CD601-03。
Ni-NTA
Figure GDA0003363431980000041
Resin：EMD Millipore公司，货号：70666
本生烟：参考文献：Yan J Y,Zhao W S,Chen Z,et al.Comparative genome andtranscriptome analyses reveal adaptations to opportunistic infections inwoody plant degrading pathogens of Botryosphaeriaceae[J].DNA Research,2018,25(1):87-102.；公众可以从北京市农林科学院获得。
CM液体培养基：0.6％(质量百分含量)酵母提取物，0.3％(质量百分含量)酶水解干酪素，0.3％(质量百分含量)酸水解干酪素，1％(质量百分含量)蔗糖，蒸馏水定容。
酶渗透液：含20mg/mL的崩溃酶和20mg/mL的蜗牛酶的0.7M氯化钠溶液。
STC溶液：含有1.2M山梨醇，10mM Tris-pH 7.5和50mM氯化钙的水溶液。
PTC溶液：含有60％(质量百分含量)聚已二醇3350，10mM Tris-pH 7.5和50mM氯化钙的水溶液。
LR培养基：0.1％(质量百分含量)酵母提取物，0.1％(质量百分含量)酶水解干酪素，1M蔗糖，蒸馏水定容。
SR培养基：0.1％(质量百分含量)酵母提取物，0.1％(质量百分含量)酶水解干酪素，1M蔗糖，1.6％(质量百分含量)琼脂，蒸馏水定容。
实施例1、LtALTA1蛋白及其编码基因的获得
对可可毛色二孢菌的基因组进行大量序列分析、表达量分析与功能验证，发现了一个与可可毛色二孢菌致病力相关的基因，命名为LtALTA1基因。涵盖启动子、LtALTA1基因编码区和终止子的DNA序列如序列表的序列1所示，LtALTA1基因的基因组DNA如序列表的序列2所示，编码区如序列表的序列3所示。LtALTA1基因编码的蛋白质(LtALTA1蛋白)如序列表的序列4所示。
实施例2、LtALTA1基因对可可毛色二孢菌致病力的影响
一、超表达载体的构建
将pBluescript II KS载体的Hind III和EcoRI酶切位点间的片段替换为序列表的序列3所示的DNA分子，得到超表达载体OE-LtALTA1(已经测序验证)。
二、转LtALTA1基因的可可毛色二孢菌的构建
采用CaCl2/PEG介导的原生质体转化方法将LtALTA1基因导入可可毛色二孢菌。
1、原生质体的制备
(1)将适量可可毛色二孢菌CSS-01s的菌丝接种至CM液体培养基中，28℃、120rpm摇培24小时，然后4000rpm离心5min，倒掉上清，收集菌丝体。
(2)将步骤(1)收集的菌丝体用0.7M氯化钠溶液洗涤后转移至灭菌的50ml离心管中，每1克菌丝加入1毫升的酶渗透液，28℃、120rpm条件下酶解4小时。
(3)完成步骤(2)后，用0.7M氯化钠洗涤菌丝体，然后用四层灭菌擦镜纸过滤，将滤液4,000rpm离心15分钟，弃上清，收集沉淀(原生质体)。
(4)将步骤(3)收集的沉淀(原生质体)采用25ml STC溶液洗涤两次。然后用STC溶液溶解，将原生质体浓度调至1×107个/ml后备用。
2、可可毛色二孢菌原生质体转化
(1)采用限制性内切酶Dra I对步骤一得到的超表达载体OE-LtALTA1进行线性化处理，得到线性化载体。
(2)将步骤1得到的原生质体溶液分装于灭菌的50ml离心管中，每管300微升，然后加入约2微克的线性化载体，冰上放置15分钟。
(3)完成步骤(2)后，逐滴加入2ml PTC溶液，冰上静置20分钟。
(4)完成步骤(3)后，加入25ml预冷的STC溶液，混匀后4,000rpm、4℃离心15分钟，弃上清。
(5)完成步骤(4)后，向每管中加入3ml的LR培养基，26-28℃培养12-18小时。
(6)完成步骤(5)后，将培养体系转入培养皿，加入12ml冷却至50℃左右的SR培养基，混匀，待其凝固后，上面铺15ml含有400微克/毫升的新霉素的0.7％(质量百分含量)琼脂溶液，28℃培养4-6天。
(7)完成步骤(6)后，将出现的转化体转至含有400微克/毫升的新霉素的PDA固体培养基上，重复筛选3次，得到具有新霉素抗性的转化子。
3、转化子的验证
取若干步骤2得到的转化子，提取总RNA并反转录为cDNA。以cDNA为模板，采用qRT-PCR的方法进行筛选及验证(采用引物F1和引物R1组成的引物对检测LtALTA1基因，采用引物F2和引物R2组成的引物对检测内参基因Actin)，采用可可毛色二孢菌CSS-01s的cDNA作为对照。
F1：5’-ATCCAGTCCGTCTCGTTCA-3’；
R1:5’-CGAAGCGGTACTTGGTCTC-3’；
F2:5’-CCAAGTCCAACCGTGAGAA-3’；
R2:5’-GAAGCGTACAGCGACAGAA-3’。
部分结果如图1所示。图1中，1-10所示的为最后选取的10个LtALTA1基因表达量较高的阳性转化子，依次命名为1.1267-1至1.1267-10。
三、转空载体的可可毛色二孢菌的构建
采用pBluescript II KS载体替代超表达载体OE-LtALTA1，参照步骤二中的方法转入可可毛色二孢菌CSS-01s，得到转空载体的可可毛色二孢菌。
四、转化子致病力检测
待测菌株：可可毛色二孢菌CSS-01s、转化子1.1267-1至1.1267-10和转空载体的可可毛色二孢菌。
将待测菌种点接至PDA固体平板上培养，选取直径大小为4mm的菌丝块，接种至划伤的、长势一致的葡萄枝干表面，每个枝条接种3个菌块，置于28℃恒温培养，3天后，测量病斑长短。每个菌株设置10个重复。
结果如图2所示。结果表明，过表达LtALTA1基因可降低可可毛色二孢菌的致病力。转空载体的可可毛色二孢菌致病力与可可毛色二孢菌CSS-01s无显著差异。
实施例3、LtALTA1蛋白信号肽活性验证
1、将酵母信号序列诱捕载体pSUC2载体的EcoR I和Xho I酶切位点间的片段替换为了序列表的为序列表3自5’端1-57位所示的DNA分子，得到重组载体pSUC2-LtALTA1。
2、将步骤1得到的重组载体pSUC2-LtALTA1采用酵母转化的办法导入酵母蔗糖酶分泌缺陷型菌株YTK12，得到酵母转化子。
3、将步骤2得到的酵母转化子分别接种至YPDA、CMD-W和YPRAA培养基上，通过观察转化子的生长情况来检测LtAlta1信号肽外泌活性。
4、设置采用pSUC2-Avrlb-YTK12替代重组载体pSUC2-LtALTA1的阳性对照，设置采用pSUC2-Mg87-YTK12替代重组载体pSUC2-LtALTA1的阴性对照。
结果如图3所示。pSUC2-Avr1b-YTK12为实验组阳性对照，pSUC2-Mg87-YTK12为实验组阴性对照，pSUC2-1.1267-YTK12为基因LtALTA1的实验组。
结果表明，LtALTA1蛋白的信号肽能够引导酵母蔗糖酶的外泌，具有信号肽活性。
实施例4、LtALTA1基因的表达产物引起烟草的免疫反应
1、将pET-32a载体的EcoR I和BamH I酶切位点间的片段替换为了序列表的序列表的序列3所示的DNA分子，得到重组载体pET-32a-LtALTA1。
2、将步骤1制备的重组载体pET-32a-LtALTA1导入E.coli BL21(DE3)感受态细胞中，得到重组菌。
3、将步骤2得到的重组菌接种于LB液体培养基中，37℃、220rpm培养至菌液OD600达到0.8左右，向培养体系中加入IPTG使其在培养体系中的浓度为0.2mM，18℃、220rpm培养10h。
4、完成步骤3后，将培养体系4℃、5000rpm离心10min收集菌体。
5、采用缓冲液(pH 8.0，20mM Tris-HCl，500mM NaCl，20mM咪唑)重悬步骤4得到的菌体，得到菌体悬浮液，向菌体悬浮液中加入PMSF蛋白酶抑制使其在菌体悬浮液中的浓度为1mM，然后冰浴超声破碎细胞(10min，工作2s停止4s，功率600W)。
6、完成步骤5后，将体系4℃、12000rpm离心30min，收集上清(即为LtALTA1粗蛋白溶液)。
7、将步骤6得到的LtALTA1粗蛋白溶液使用Ni-NTA His Bind Resin进行纯化。
8、将步骤7得到的LtALTA1蛋白溶液稀释成不同的浓度(0.2μM,0.5μM,1.0μM,2.0μM,4.0μM)，注射接种至生长4周左右的本生烟叶片中，注射体积为100μL/片，2-3天后观察本生烟是否有过敏性坏死反应发生。使用缓冲液(pH 8.0，20mM Tris-HCl，500mM NaCl，20mM咪唑)为阴性对照。
结果如图4所示。结果表明，LtALTA1蛋白可以引起烟草细胞的坏死。
序列表
<110> 北京市农林科学院
<120> 可可毛色二孢菌LtALTA1基因及其用途
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 3104
<212> DNA
<213> 可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)
<400> 1
ttgatgaacg tcgtccagaa tcagcatacc gaaattggca gtggatctgt aaaatcaaca 60
tgggcacacc aaatgttgca gacctttgtt caacgatctg tgttgactga cctgtgtaga 120
gtcgagaaag taacctccac tccttgcaga ctcagaagat gctcagaacc agatgatcca 180
gtcgtatttt gcatacgttt ctggccatct tggaaaatga aattctccga agtacgagat 240
gtgcctccta gctcagtcaa cgcttcgtga cgaaaaggct cctcctcctt agcctcaggc 300
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ggacgagaga ggactctgac atcattcaat ttaaccctag ctcatggcct gtttcacatc 420
tcggagatct tcagcacgat acgcggtaag gaatatccac cgtgcgatga acacgctgtg 480
tattttaaga taccactcac aggacccggt gacatctccg aaccaagccc taccgtaaaa 540
taatcgcaga tggagacatg agcgatttga ctgcgttcca ccgaatatcg agaagttctg 600
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gcatttcgac gagaaaaagt cgagctctct tacatgcgat gcacgaactg gatatagtat 1140
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catcatcatc agccagcttc acaacaactc tcaaccacac aaaccaaaac ctccctccac 1980
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agaacatcga cattgccgac ttcaccgtcc gcaagaacga cggcatccag tccgtctcgt 2160
tcaagctgag cggcaaggac gccaaggacc tcgactgctc cgccagcaac cccggcctgc 2220
cctccgaggt catcacctgc ggcgagacca agtaccgctt cgccctgtac tccggccagg 2280
agagcgagtt cgccctccgc atctaccacg agctgggtct tgcgtaagtt ttcctccatt 2340
tggacatggc gaataggaac gtgttgctaa cattcctggg taatagtgtc ggcttctacg 2400
gcgagggtga ggttcccacc tactgccacg ctggtggcaa cggccccaac gacttcgtct 2460
gctcccaggt ctccgcgact accatcgtca ttgatggcat gtaaatattt aattgaatgt 2520
ggggaggaat gtattacgac actgtaaata attgtattac caaaatttca agagtcacac 2580
caattctttt tgcatctttg aatcttgaac gtttccataa gaacatgaca gaagagaaaa 2640
taaatgcgga aaatccatgc ggaccactta ctcaaatgaa tgaccggatg taaattgagt 2700
gtgatgactt ggccactttt gtccccgctg cgaagagggg acttcatgta tctggaggta 2760
gaacaggtga gtaaaagtgg agaagtgctt ttgaatctgc aacacattcc gcggtcgagg 2820
actgaagggt gatgtatttg aagtaccccg ttgggggctt tcgacgccag cagtctgcct 2880
ttccaaggca cttactcgtt atgatcgtcc aaaagtgatg ctgattaagc gtgctactgc 2940
atgaaagaac agtacggata cacatggccg cgcgaatatc agcagccttt cagaacgatt 3000
gagcccctgc taaagctaaa gcttcaagaa agtgagcggg tccactcagc cgagaagtgt 3060
gctgatatag cctttctcta tgccggacat gattgagtag actg 3104
<210> 2
<211> 504
<212> DNA
<213> 可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)
<400> 2
atgcgcttca ctctcgccgc cgctaccgcc ctcttcggtg ccattgccac cgctgctccc 60
gctgcccaga gcaccggcgc ccccgacccc aacacctacg agaacatcga cattgccgac 120
ttcaccgtcc gcaagaacga cggcatccag tccgtctcgt tcaagctgag cggcaaggac 180
gccaaggacc tcgactgctc cgccagcaac cccggcctgc cctccgaggt catcacctgc 240
ggcgagacca agtaccgctt cgccctgtac tccggccagg agagcgagtt cgccctccgc 300
atctaccacg agctgggtct tgcgtaagtt ttcctccatt tggacatggc gaataggaac 360
gtgttgctaa cattcctggg taatagtgtc ggcttctacg gcgagggtga ggttcccacc 420
tactgccacg ctggtggcaa cggccccaac gacttcgtct gctcccaggt ctccgcgact 480
accatcgtca ttgatggcat gtaa 504
<210> 3
<211> 441
<212> DNA
<213> 可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)
<400> 3
atgcgcttca ctctcgccgc cgctaccgcc ctcttcggtg ccattgccac cgctgctccc 60
gctgcccaga gcaccggcgc ccccgacccc aacacctacg agaacatcga cattgccgac 120
ttcaccgtcc gcaagaacga cggcatccag tccgtctcgt tcaagctgag cggcaaggac 180
gccaaggacc tcgactgctc cgccagcaac cccggcctgc cctccgaggt catcacctgc 240
ggcgagacca agtaccgctt cgccctgtac tccggccagg agagcgagtt cgccctccgc 300
atctaccacg agctgggtct tgctgtcggc ttctacggcg agggtgaggt tcccacctac 360
tgccacgctg gtggcaacgg ccccaacgac ttcgtctgct cccaggtctc cgcgactacc 420
atcgtcattg atggcatgta a 441
<210> 4
<211> 146
<212> PRT
<213> 可可毛色二孢菌(Lasiodiplodia theobromae)
<400> 4
Met Arg Phe Thr Leu Ala Ala Ala Thr Ala Leu Phe Gly Ala Ile Ala
1 5 10 15
Thr Ala Ala Pro Ala Ala Gln Ser Thr Gly Ala Pro Asp Pro Asn Thr
20 25 30
Tyr Glu Asn Ile Asp Ile Ala Asp Phe Thr Val Arg Lys Asn Asp Gly
35 40 45
Ile Gln Ser Val Ser Phe Lys Leu Ser Gly Lys Asp Ala Lys Asp Leu
50 55 60
Asp Cys Ser Ala Ser Asn Pro Gly Leu Pro Ser Glu Val Ile Thr Cys
65 70 75 80
Gly Glu Thr Lys Tyr Arg Phe Ala Leu Tyr Ser Gly Gln Glu Ser Glu
85 90 95
Phe Ala Leu Arg Ile Tyr His Glu Leu Gly Leu Ala Val Gly Phe Tyr
100 105 110
Gly Glu Gly Glu Val Pro Thr Tyr Cys His Ala Gly Gly Asn Gly Pro
115 120 125
Asn Asp Phe Val Cys Ser Gln Val Ser Ala Thr Thr Ile Val Ile Asp
130 135 140
Gly Met
145

Claims (7)

1.一种蛋白质，其氨基酸序列如序列表中序列4所示。
2.编码权利要求1所述蛋白质的基因。
3.如权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因为如下(b1)-(b3)中的任一种：
(b1)序列表的序列1所示的DNA分子；
(b2)序列表的序列2所示的DNA分子；
(b3)编码区如序列表中序列3所示的DNA分子。
4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
5.权利要求1所述蛋白质，或，权利要求2或3所述基因在降低可可毛色二孢菌致病力中的应用。
6.一种降低可可毛色二孢菌致病力的方法，包括如下步骤：提高可可毛色二孢菌中权利要求1所述的蛋白质的表达量和/或活性，从而达到降低可可毛色二孢菌致病力的目的。
7.一种降低可可毛色二孢菌致病力的方法，包括如下步骤：向可可毛色二孢菌中导入权利要求2或3所述的基因，从而达到降低可可毛色二孢菌致病力的目的。
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