CN112111558A - 一种测定牛痘病毒加帽酶活性的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种测定牛痘病毒加帽酶活性的方法，包括如下步骤：步骤A、利用HPLC‑MS的方法检测转录产物RNA的分子量大小；步骤B、利用HPLC‑MS的方法检测采用牛痘病毒加帽酶进行RNA加帽反应后的产物的分子量大小；步骤C、比较步骤A和步骤B的产物的分子量大小，观察步骤B的产物是否增加一个甲基化鸟苷的分子量，从而判定步骤B的产物是否具有牛痘病毒加帽酶活性。本发明与传统的牛痘病毒加帽酶活性检测方法相比，无放射性污染，灵敏度高，可重复性好，结果易于分析判断，具有较好的工业应用价值。

Description

一种测定牛痘病毒加帽酶活性的方法
技术领域
本发明属于生物工程领域，具体地说，是关于一种测定牛痘病毒加帽酶活性的方法。
背景技术
真核生物中mRNA经转录后修饰在5′端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟嘌呤帽结构(m7Gppp)连接到RNA的5′末端(m7Gppp5′N)。使用酶促反应为RNA加帽是一种简单有效的方法，对用于体外转录、转染和显微注射的RNA，能改善其稳定性和翻译能力。另外，反应中所用到的标记GTP还能提供一种便捷的标记方法，将5′末端带有三磷酸的任何RNA进行标记。因此，检测牛痘病毒加帽酶的活性具有重要的意义。
标准的牛痘病毒加帽酶活性检测采用放射性底物掺入法，即采用以α32P标记的GTP为底物，经牛痘病毒加帽酶将其掺入到一条体外转录的RNA上。经过TCA沉淀、whatman滤纸过滤，通过测定酸不溶性产物中放射性同位素的量，计算出牛痘病毒加帽酶的活性。这种方法易产生放射性污染，且步骤多、周期长，难以实现高通量、自动化，因此为筛选带来了困难。
发明内容
本发明的目的是提供一种简便、灵敏、重现性好、非放射性的测定牛痘病毒加帽酶活性的方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种测定牛痘病毒加帽酶活性的方法，包括如下步骤：
步骤A、利用HPLC-MS的方法检测转录产物RNA的分子量大小；
步骤B、利用HPLC-MS的方法检测采用牛痘病毒加帽酶进行RNA加帽反应后的产物的分子量大小；
步骤C、将步骤B的RNA加帽反应后的产物的分子量大小与步骤A的转录产物RNA的分子量大小进行比较，观察是否增加一个甲基化鸟苷的分子量，从而判定步骤B的RNA加帽反应后的产物是否具有牛痘病毒加帽酶活性。当步骤B的产物增加了一个甲基化鸟甘的分子量，则判定步骤B的RNA加帽反应后的产物具有牛痘病毒加帽酶活性。
根据本发明，所述步骤A的转录产物RNA的制备步骤如下：
步骤A1、合成含有T7启动子序列的引物对，将引物混合并退火；
步骤A2、加入4种NTPs，在T7 RNA聚合酶的作用下进行转录，合成RNA。
进一步的，所述含有T7启动子序列的引物对的序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ IDNO：2所示。
根据本发明，所述步骤A1的退火的反应体系为：10x退火缓冲液，5μL；引物各20μL；DEPC-H2O补足50μL。
根据本发明，所述步骤A2的转录的反应体系为：10x转录缓冲液，2μL；4种NTPs(各100mM)，各2μL；退火混合液，2μL；T7 RNA聚合酶混合液，2μL；DEPC-H2O补足20μL。
根据本发明，步骤B的RNA加帽反应的具体步骤为：在牛痘病毒加帽酶的作用下，对转录产物RNA进行5’端加帽。
根据本发明，所述步骤B的RNA加帽反应的反应体系为：10x加帽缓冲液，2μL；SAM(2mM)，1μL；GTP(10mM)1μL；变性的RNA，10μg；RRI(40U/μL)，0.5μL；牛痘病毒加帽酶(10U/μL)，2μL；DEPC-H2O补足20μL。
本发明的有益效果是：无放射性污染，而且该方法的操作步骤简单快速，1个小时内就能完成检测，无需TCA沉淀、洗涤、干燥、洗脱等；可实现高通量、自动化的检测。
附图说明
图1为RNA体外转录原理图。
图2为mRNA 5’帽子结构图。
图3为RNA阴性对照HPLC-MS结果图。
图4为NEB牛痘病毒加帽酶对RNA加帽后HPLC-MS结果图。
图5为Yeasen牛痘病毒加帽酶对RNA加帽后HPLC-MS结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件进行。
本发明通过研究，建立了一种测定牛痘病毒加帽酶活性的方法，具体过程为：
首先，合成一对引物T7-F和T7-23R，将引物混合并退火；接着，加入4种NTPs，在T7RNA聚合酶的作用下进行转录，合成RNA；随后在牛痘病毒加帽酶的作用下，对转录产物RNA进行5’端加帽；最后，利用HPLC-MS的方法检测RNA 5’端加帽的效率，以此判定牛痘病毒加帽酶的活性。若牛痘病毒加帽酶无活性，则产物HPLC-MS结果与原始RNA分子量一致；若牛痘病毒加帽酶有活性，则产物HPLC-MS结果比原始RNA分子量大279，即增加一个甲基化鸟苷的量，根据分子量的大小差异就可以判定牛痘病毒加帽酶是否具有活性。
以下实施例的实验材料
1、T7 RNA Polymerase(T7 RNA聚合酶)，Yeasen(上海翊圣生物科技有限公司)，货号：10617；
2、NTPs(ATP/GTP/CTP/UTP)，Yeasen，货号：10133；
3、DNase 1(脱氧核糖核酸酶1)，Yeasen，货号：10607；
4、牛痘病毒加帽酶，NEB，货号：M2080S；
5、牛痘病毒加帽酶，Yeasen，货号：10615；
6、RRI(RNA酶抑制剂)，Yeasen，货号：10603；
7、SAM(S-腺苷甲硫氨酸)，NEB，货号：B9003S；
8、DEPC-H2O，焦碳酸二乙酯处理过的水。
实施例1反应体系的建立
(1)引物T7-F和T7-23R的设计
引物T7-F和T7-23R的含有T7启动子序列，具体序列如下：
T7-F：5’-CGAAATTAATACGACTCACTATAGGG-3’，(SEQ ID NO：1)；
T7-23R：5’-TTCTTTTCCTCTCTCTATTCCCCTATAGTGAGTCGTATTAATTTCG-3’，(SEQ IDNO：2)。
(2)引物退火反应体系，如表1所示。
表1反应体系
组分 加入量
10×Annealing buffer(退火缓冲液) 5μL
T7-F(100uM) 20μL
T7-23R(100uM) 20μL
DEPC-H<sub>2</sub>O To 50μL
退火获得Annealing mix(退火混合液)。
(3)反应程序，如表2所示。
表2反应程序
步骤 温度 时间 降温/每个循环 循环数
预变性 95℃ 4min
梯度降温 95℃ 20sec -0.1℃/cycle 750
保持 20℃ 1hour
保存 4℃ forever
(4)转录反应体系，见表3
表3转录反应体系
组分 加入量
10×Transcription Buffer(转录缓冲液) 2μL
NTPs(ATP/GTP/CTP/UTP各100mM) 各2μL
上述Annealing mix(退火混合液) 2μL
T7 RNA Polymerase Mix(T7 RNA聚合酶混合液) 2μL
DEPC-H<sub>2</sub>O To 20μL
37℃ 2h，反应结束，加入2U DNase 1 37℃消化15min，然后进行磁珠纯化。
(5)加帽反应体系
取上述纯化后的RNA 10μg，65℃ 5min后，立即置于冰上5min，获得纯化后的Denatured RNA。加帽反应体系如表4所示。
表4加帽反应体系
组分 加入量
Denatured RNA(变性的RNA) 10μg
10×Capping buffer(加帽缓冲液) 2μL
GTP(10mM) 1μL
SAM(2mM) 1μL
RRI(40U/μL) 0.5μL
Capping Enzyme(牛痘病毒加帽酶)(10U/μL) 2μL
DEPC-H<sub>2</sub>O To 20μL
实施例2一种测定牛痘病毒加帽酶活性的方法
步骤一、合成引物T7-F和T7-23R，将引物混合并退火，其中，所述T7-F和T7-23R的引物序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；
步骤二、加入4种NTPs，在T7 RNA聚合酶的作用下进行转录，合成RNA；
步骤三、在牛痘病毒加帽酶的作用下，对转录产物RNA进行5’端加帽；
步骤四、利用HPLC-MS的方法检测RNA 5’加帽的效率，以此判定牛痘病毒加帽酶的活性。结果如图3(RNA阴性对照组)、图4(NEB阳性对照组)、图5(Yeasen：10617)。其中，图3为步骤二合成的RNA的HPLC-MS结果图，图4为NEB牛痘病毒加帽酶对RNA加帽后HPLC-MS结果图，图5为Yeasen牛痘病毒加帽酶对RNA加帽后HPLC-MS结果图。
本发明的检测步骤所需要的总时间约为1个小时。
图3结果显示，RNA阴性对照组目标分子量大小与预期一致(7887.7)；图4结果显示，NEB阳性对照组RNA加帽反应后，产物分子量大小为8166.7，表明其增加了一个甲基化的鸟苷，说明加帽成功；图5结果与图4一致，说明其同样加帽成功，即该酶具有加帽活性。
实施例3实际验证
(1)采用传统测定牛痘病毒加帽酶活性的方法进行检测
步骤一、合成引物T7-F和T7-23R，将引物混合并退火，其中，所述T7-F和T7-23R的引物序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；
步骤二、加入4种NTPs，在T7 RNA聚合酶的作用下进行转录，合成RNA；
步骤三、在牛痘病毒加帽酶的作用下，对转录产物RNA进行5’端加帽(32PGTP)；
步骤四、经过TCA沉淀、whatman滤纸过滤，通过测定酸不溶性产物中放射性同位素的量，以这样的方法检测RNA 5’加帽的效率。结果如表4所示。传统方法的检测步骤所需要的时间约为3个小时，操作复杂，周期长，且具有放射性污染。
表4传统法测定结果
Figure BDA0002641061360000061
结果显示：阴性对照中，TCA沉淀后的样品Cpm几乎无信号，表明32PGTP未掺入到RNA上；NEB和Yeasen经TCA沉淀后样品Cpm有信号，表明32PGTP掺入到RNA上。
(2)采用本发明的测定牛痘病毒加帽酶活性的方法进行检测
利用实施例2的HPLC-MS的方式进行检测实施例3中(1)的步骤二的合成RNA和步骤三的加帽产物，其结果与传统方法一致：NEB和Yeasen样品与阴性对照相比增加了一个甲基化鸟苷的分子量。
结论：本发明的测定牛痘病毒加帽酶活性的方法准确、可靠，可以有效的检测牛痘病毒加帽酶的活性。
综上所述，若牛痘病毒加帽酶无加帽活性，则在HPLC-MS检测中，RNA加帽反应后产物分子量大小与对照RNA相比无变化；若牛痘病毒加帽酶具有加帽活性，则在HPLC-MS检测中，RNA加帽反应后产物分子量大小与对照RNA相比增加一个甲基化鸟苷的量。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。
序列表
<110> 翌圣生物科技（上海）有限公司
<120> 一种测定牛痘病毒加帽酶活性的方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
cgaaattaat acgactcact ataggg 26
<210> 2
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ttcttttcct ctctctattc ccctatagtg agtcgtatta atttcg 46

Claims (7)

1.一种测定牛痘病毒加帽酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤A、利用HPLC-MS的方法检测转录产物RNA的分子量大小；
步骤B、利用HPLC-MS的方法检测采用牛痘病毒加帽酶进行RNA加帽反应后的产物的分子量大小；
步骤C、比较步骤A和步骤B的产物的分子量大小，观察步骤B的产物是否增加一个甲基化鸟苷的分子量，从而判定步骤B的产物是否具有牛痘病毒加帽酶活性。
2.如权利要求1所述的测定牛痘病毒加帽酶活性的方法，其特征在于，步骤A的转录产物RNA的制备步骤如下：
步骤A1、合成含有T7启动子序列的引物对，将引物混合并退火；
步骤A2、加入4种NTPs，在T7 RNA聚合酶的作用下进行转录，合成RNA。
3.如权利要求2所述的测定牛痘病毒加帽酶活性的方法，其特征在于，所述含有T7启动子序列的引物对的序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
4.如权利要求2或3所述的测定牛痘病毒加帽酶活性的方法，其特征在于，所述步骤A1的退火的反应体系为：10x退火缓冲液，5μL；引物各20μL；DEPC-H2O补足50μL。
5.如权利要求2或3所述的测定牛痘病毒加帽酶活性的方法，其特征在于，所述步骤A2的转录的反应体系为：10x转录缓冲液，2μL；4种NTPs，各100mM，各2μL；退火混合液，2μL；T7RNA聚合酶混合液，2μL；DEPC-H2O补足20μL。
6.如权利要求1所述的测定牛痘病毒加帽酶活性的方法，其特征在于，步骤B的RNA加帽反应的具体步骤为：在牛痘病毒加帽酶的作用下，对转录产物RNA进行5’端加帽。
7.如权利要求1或6所述的测定牛痘病毒加帽酶活性的方法，其特征在于，所述步骤B的RNA加帽反应的反应体系为：10x加帽缓冲液，2μL；SAM，2mM，1μL；GTP，10mM，1μL；变性的RNA，10μg；RRI，40U/μL，0.5μL；牛痘病毒加帽酶，10U/μL，2μL；DEPC-H2O补足20μL。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114395613A (zh) * 2022-03-25 2022-04-26 苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 一种检测牛痘病毒加帽酶活性的方法
CN114480570A (zh) * 2022-02-25 2022-05-13 苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 一种检测mRNA 2′-O-甲基转移酶活性的方法
CN114894916A (zh) * 2022-04-02 2022-08-12 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 一种检测rna加帽效率的方法
CN114941018A (zh) * 2022-06-28 2022-08-26 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 cap1帽类似物的合成方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104844609A (zh) * 2015-05-12 2015-08-19 杭州和正医药有限公司 双位点不可逆布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂
CN105051213A (zh) * 2013-03-14 2015-11-11 夏尔人类遗传性治疗公司 信使rna加帽效率的定量评估
US20160304938A1 (en) * 2013-12-30 2016-10-20 Curevac Ag Methods for rna analysis
WO2017098468A1 (en) * 2015-12-09 2017-06-15 Novartis Ag Label-free analysis of rna capping efficiency using rnase h, probes and liquid chromatography/mass spectrometry
US20180237817A1 (en) * 2015-05-29 2018-08-23 Curevac Ag Method for adding cap structures to rna using immobilized enzymes

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105051213A (zh) * 2013-03-14 2015-11-11 夏尔人类遗传性治疗公司 信使rna加帽效率的定量评估
US20160304938A1 (en) * 2013-12-30 2016-10-20 Curevac Ag Methods for rna analysis
CN104844609A (zh) * 2015-05-12 2015-08-19 杭州和正医药有限公司 双位点不可逆布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂
US20180237817A1 (en) * 2015-05-29 2018-08-23 Curevac Ag Method for adding cap structures to rna using immobilized enzymes
WO2017098468A1 (en) * 2015-12-09 2017-06-15 Novartis Ag Label-free analysis of rna capping efficiency using rnase h, probes and liquid chromatography/mass spectrometry

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114480570A (zh) * 2022-02-25 2022-05-13 苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 一种检测mRNA 2′-O-甲基转移酶活性的方法
CN114395613A (zh) * 2022-03-25 2022-04-26 苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 一种检测牛痘病毒加帽酶活性的方法
CN114395613B (zh) * 2022-03-25 2022-06-28 苏州近岸蛋白质科技股份有限公司 一种检测牛痘病毒加帽酶活性的方法
CN114894916A (zh) * 2022-04-02 2022-08-12 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 一种检测rna加帽效率的方法
WO2023185947A1 (zh) * 2022-04-02 2023-10-05 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 一种检测rna加帽效率的方法
CN114941018A (zh) * 2022-06-28 2022-08-26 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 cap1帽类似物的合成方法
CN114941018B (zh) * 2022-06-28 2023-09-22 翌圣生物科技(上海)股份有限公司 cap1帽类似物的合成方法

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