CN112111020B - 桦树茸中抗糖成分的提取纯化及抗糖丸的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了桦树茸中抗糖成分的提取纯化及抗糖丸的制备方法。步骤如下：将桦树茸粉碎过筛，乙醇提取，沉淀热风干燥，得预处理的桦树茸粉末；取预处理的桦树茸粉末以蒸馏水提取，离心取上清液；进行醇沉，离心分离后得粗多糖；将上清液浓缩后醇沉，离心，收集沉淀；将沉淀用微孔滤膜抽滤，冻干得粗多糖；纯化得到的多糖溶液浓缩冻干得纯化多糖；取纯化多糖进行超声降解；再经透析、浓缩，冻干，即得抗糖成分；将得到的抗糖成分进行分离纯化得纯化得抗糖成分。将抗糖成分制备成抗糖丸。本发明的抗糖成分对糖基化反应3个阶段产物的形成均表现出良好的抑制作用，将其制成的抗糖丸具有很好的抗糖效果。
Description
技术领域
本发明涉及保健品加工领域，具体涉及桦树茸中抗糖成分的提取纯化及抗糖丸的制备方法。
背景技术
近几年来，随着经济的发展，人们的健康意识也越来越强烈，其中，“抗糖”这一概念也越来越被人们所熟知，过多的糖遇到蛋白质（主要是胶原蛋白和弹力蛋白）后，通过非酶糖基化反应，使胶原蛋白断裂或紊乱，最终生成晚期糖基代终末产物（AGEs）。糖化反应能引起蛋白分子之间非正常交联，影响胶原纤维的正常排列和降解，导致胶原纤维没有弹性，比较脆弱，肌肤外观表现为松弛、皱纹，而且这种非正常交联影响细胞外基质的结构，从而影响成纤维细胞的粘附、增殖、分化，加速肌肤的老化。因此，“抗糖”越来越被人们所重视。
桦树茸又名桦褐孔菌，是真菌门，担子菌亚门，层菌纲，无褐菌目，多孔菌科，纤孔菌属，多生长于寒带地区。早在16世纪，俄罗斯就已经将没有做过任何药理试验的桦褐孔菌作为民间药物来用于治疗某些疾病，如高血脂、糖尿病等。桦褐孔菌子实体外观呈椭球，似瘤状物，颜色为深褐，直径在25~40 cm范围内，外表面裂沟较深，硬度较大，真菌肉为木栓质，有环形纹路，桦褐孔菌孢子呈现光滑的椭圆状，表面有刚毛。桦褐孔菌作为一种药食同源的食用真菌也越来越引起人们的重视，近年来对桦树茸的研究越来越多，已发现的桦褐孔菌中的有效化学活性成分已高达215种，主要报道的有多糖类、三萜类、甾类、多酚类、黄酮类化合物及木脂素等成分，其中大部分化合物已经成功从桦树茸中分离出单体并鉴定结构。但未有文献对其进行抗糖化的研究。
发明内容
要解决的技术问题：本发明的目的是提供桦树茸中抗糖成分的提取纯化及抗糖丸的制备方法，提取得到的抗糖成分对糖基化反应3个阶段产物的形成均表现出良好的抑制作用，将其制成的抗糖丸具有很好的抗糖效果。
技术方案：桦树茸中抗糖成分的提取纯化，包括以下步骤：
第一步：将桦树茸粉碎后过100目筛，用体积分数为85%的乙醇溶液于70℃条件下水浴回流2次，每次3 h；
第二步：在3000 r/min下冷冻离心20 min，去除上清液，沉淀60℃热风干燥12h，得到预处理的桦树茸粉末；
第三步：取预处理的桦树茸粉末，按照料液比为1:50加入蒸馏水，转移至提取器中，在转速5500-6500r/min下提取60-90s后，4000 r/min离心10 min，取上清液；
进行醇沉，离心分离后得粗多糖；
第四步：将上清液浓缩后，加入95%乙醇进行醇沉，离心，收集沉淀；
第五步：将沉淀用微孔滤膜抽滤，冻干得粗多糖；
第六步：用D4006型大孔树脂对粗多糖进行纯化，得到的多糖溶液浓缩冻干得纯化多糖；
第七步：取纯化多糖，加入去离子水使其质量浓度为6mg/mL，搅拌使其充分溶解；
第八步：采用超声波细胞粉碎机进行在温度25-30℃、功率600-700W下进行超声降解20-30min；
第九步：再经透析、浓缩，冻干，即得抗糖成分；
第十步：将得到的抗糖成分制成15mg/mL溶液，进行分离纯化，分离纯化即得纯化得抗糖成分。
进一步的，所述微孔滤膜孔径为0.45μm。
进一步的，所述第六步纯化条件为：温度 25℃，上样液质量浓度 4.0mg/mL，洗脱剂为去离子水，洗脱流速 1.0mL/min。
进一步的，所述第九步中透析所用透析袋的规格为3500Da，透析时间为72-84h。
进一步的，所述第十步中采用葡聚糖凝胶SephadexG-100进行分离纯化，上样量为1.0mL，洗脱剂为去离子水，洗脱流速1.0mL/min，收集洗脱液。
抗糖丸的制备方法，制备步骤如下：
（1）精密称取权上述制备的抗糖成分300mg、微晶纤维素 50mg、聚乙二醇6000加95%乙醇溶液制成浓度为 5％的黏合剂、PVPP 60mg、硬脂酸镁6mg，分别干燥、研细，过100目筛；
（2）将抗糖成分、微晶纤维素和 PPVP混合均匀，边搅拌边加入5%聚乙二醇6000溶液制备软材；
（3）过20目筛制备颗粒，65℃下干燥30min；
（4）过筛、整粒，加人硬脂酸镁，混合均匀，制成抗糖丸。
有益效果：
1、本发明采用提取法是根据内外刀产生的剪切作用和负压，使目标成分多糖在外力作用下被溶剂包围、解离、溶解，脱离后进入提取溶剂中，达到溶剂浓度平衡，对目标成分在破碎物料内外的溶解平衡产生强力推动作用。
2. 本发明的抗糖丸原料安全、配伍合理，制备方法与工艺，操作简易、重现性良好。
3. 本发明的抗糖成分对糖基化反应3个阶段产物的形成均表现出良好的抑制作用，同一浓度下，抑制率均高于对照氨基胍。因此，本发明的抗糖丸可作为很好的抗糖产品。
具体实施方式
实施例1
桦树茸中抗糖成分的提取纯化，包括以下步骤：
第一步：将桦树茸粉碎后过100目筛，用体积分数为85%的乙醇溶液于70℃条件下水浴回流2次，每次3 h；
第二步：在3000 r/min下冷冻离心20 min，去除上清液，沉淀60℃热风干燥12h，得到预处理的桦树茸粉末；
第三步：取预处理的桦树茸粉末，按照料液比为1:50加入蒸馏水，转移至提取器中，在转速5500r/min下提取60s后，4000 r/min离心10 min，取上清液；
进行醇沉，离心分离后得粗多糖；
第四步：将上清液浓缩后，加入95%乙醇进行醇沉，离心，收集沉淀；
第五步：将沉淀用0.45μm微孔滤膜抽滤，冻干得粗多糖；
第六步：用D4006型大孔树脂对粗多糖进行纯化，得到的多糖溶液浓缩冻干得纯化多糖，其中，纯化条件为：温度 25℃，上样液质量浓度 4.0mg/mL，洗脱剂为去离子水，洗脱流速 1.0mL/min；
第七步：取纯化多糖，加入去离子水使其质量浓度为6mg/mL，搅拌使其充分溶解；
第八步：采用超声波细胞粉碎机进行在温度25℃、功率600W下进行超声降解20min；
第九步：再经3500Da透析袋透析72h、浓缩，冻干，即得抗糖成分；
第十步：将得到的抗糖成分制成15mg/mL溶液，采用葡聚糖凝胶SephadexG-100进行分离纯化，分离纯化即得纯化得抗糖成分。
进一步的，所述第十步中，上样量为1.0mL，洗脱剂为去离子水，洗脱流速1.0mL/min，收集洗脱液。
抗糖丸的制备方法，制备步骤如下：
（1）精密称取权上述制备的抗糖成分300mg、微晶纤维素 50mg、聚乙二醇6000加95%乙醇溶液制成浓度为 5％的黏合剂、PVPP 60mg、硬脂酸镁6mg，分别干燥、研细，过100目筛；
（2）将抗糖成分、微晶纤维素和 PPVP混合均匀，边搅拌边加入5%聚乙二醇6000溶液制备软材；
（3）过20目筛制备颗粒，65℃下干燥30min；
（4）过筛、整粒，加人硬脂酸镁，混合均匀，制成抗糖丸。
实施例2
桦树茸中抗糖成分的提取纯化，包括以下步骤：
第一步：将桦树茸粉碎后过100目筛，用体积分数为85%的乙醇溶液于70℃条件下水浴回流2次，每次3 h；
第二步：在3000 r/min下冷冻离心20 min，去除上清液，沉淀60℃热风干燥12h，得到预处理的桦树茸粉末；
第三步：取预处理的桦树茸粉末，按照料液比为1:50加入蒸馏水，转移至提取器中，在转速6000r/min下提取75s后，4000 r/min离心10 min，取上清液；
进行醇沉，离心分离后得粗多糖；
第四步：将上清液浓缩后，加入95%乙醇进行醇沉，离心，收集沉淀；
第五步：将沉淀用0.45μm微孔滤膜抽滤，冻干得粗多糖；
第六步：用D4006型大孔树脂对粗多糖进行纯化，得到的多糖溶液浓缩冻干得纯化多糖，其中，纯化条件为：温度 25℃，上样液质量浓度 4.0mg/mL，洗脱剂为去离子水，洗脱流速 1.0mL/min；
第七步：取纯化多糖，加入去离子水使其质量浓度为6mg/mL，搅拌使其充分溶解；
第八步：采用超声波细胞粉碎机进行在温度280℃、功率650W下进行超声降解25min；
第九步：再经3500Da透析袋透析78h、浓缩，冻干，即得抗糖成分；
第十步：将得到的抗糖成分制成15mg/mL溶液，采用葡聚糖凝胶SephadexG-100进行分离纯化，分离纯化即得纯化得抗糖成分。
进一步的，所述第十步中，上样量为1.0mL，洗脱剂为去离子水，洗脱流速1.0mL/min，收集洗脱液。
抗糖丸的制备方法，制备步骤如下：
（1）精密称取权上述制备的抗糖成分300mg、微晶纤维素 50mg、聚乙二醇6000加95%乙醇溶液制成浓度为 5％的黏合剂、PVPP 60mg、硬脂酸镁6mg，分别干燥、研细，过100目筛；
（2）将抗糖成分、微晶纤维素和 PPVP混合均匀，边搅拌边加入5%聚乙二醇6000溶液制备软材；
（3）过20目筛制备颗粒，65℃下干燥30min；
（4）过筛、整粒，加人硬脂酸镁，混合均匀，制成抗糖丸。
实施例3
桦树茸中抗糖成分的提取纯化，包括以下步骤：
第一步：将桦树茸粉碎后过100目筛，用体积分数为85%的乙醇溶液于70℃条件下水浴回流2次，每次3 h；
第二步：在3000 r/min下冷冻离心20 min，去除上清液，沉淀60℃热风干燥12h，得到预处理的桦树茸粉末；
第三步：取预处理的桦树茸粉末，按照料液比为1:50加入蒸馏水，转移至提取器中，在转速6500r/min下提取90s后，4000 r/min离心10 min，取上清液；
进行醇沉，离心分离后得粗多糖；
第四步：将上清液浓缩后，加入95%乙醇进行醇沉，离心，收集沉淀；
第五步：将沉淀用0.45μm微孔滤膜抽滤，冻干得粗多糖；
第六步：用D4006型大孔树脂对粗多糖进行纯化，得到的多糖溶液浓缩冻干得纯化多糖，其中，纯化条件为：温度 25℃，上样液质量浓度 4.0mg/mL，洗脱剂为去离子水，洗脱流速 1.0mL/min；
第七步：取纯化多糖，加入去离子水使其质量浓度为6mg/mL，搅拌使其充分溶解；
第八步：采用超声波细胞粉碎机进行在温度30℃、功率700W下进行超声降解30min；
第九步：再经3500Da透析袋透析84h、浓缩，冻干，即得抗糖成分；
第十步：将得到的抗糖成分制成15mg/mL溶液，采用葡聚糖凝胶SephadexG-100进行分离纯化，分离纯化即得纯化得抗糖成分。
进一步的，所述第十步中，上样量为1.0mL，洗脱剂为去离子水，洗脱流速1.0mL/min，收集洗脱液。
抗糖丸的制备方法，制备步骤如下：
（1）精密称取权上述制备的抗糖成分300mg、微晶纤维素 50mg、聚乙二醇6000加95%乙醇溶液制成浓度为 5％的黏合剂、PVPP 60mg、硬脂酸镁6mg，分别干燥、研细，过100目筛；
（2）将抗糖成分、微晶纤维素和 PPVP混合均匀，边搅拌边加入5%聚乙二醇6000溶液制备软材；
（3）过20目筛制备颗粒，65℃下干燥30min；
（4）过筛、整粒，加人硬脂酸镁，混合均匀，制成抗糖丸。
建立牛血清蛋白-葡萄糖糖基化反应体系，以氨基胍作为阳性对照，测定3个实施例抗糖成分（分别配制成0.4mg/mL）对Amadori产物、二羰基化合物、末期糖基化终产物AGEs)的抑制作用。结果如见表1：
表1
Claims (5)
1.桦树茸中抗糖成分的提取纯化，其特征在于：包括以下步骤：
第一步：将桦树茸粉碎后过100目筛，用体积分数为85%的乙醇溶液于70℃条件下水浴回流2次，每次3 h；
第二步：在3000r/min下冷冻离心20 min，去除上清液，沉淀60℃热风干燥12h，得到预处理的桦树茸粉末；
第三步：取预处理的桦树茸粉末，按照料液比为1:50加入蒸馏水，转移至提取器中，在转速5500-6500r/min下提取60-90s后，4000r/min离心10 min，取上清液；进行醇沉，离心分离后得粗多糖；
第四步：将上清液浓缩后，加入95%乙醇进行醇沉，离心，收集沉淀；
第五步：将沉淀用微孔滤膜抽滤，冻干得粗多糖；
第六步：用D4006型大孔树脂对粗多糖进行纯化，洗脱剂为去离子水，得到的多糖溶液浓缩冻干得纯化多糖；
第七步：取纯化多糖，加入去离子水使其质量浓度为6mg/mL，搅拌使其充分溶解；
第八步：采用超声波细胞粉碎机进行在温度25-30℃、功率600-700W下进行超声降解20-30min；
第九步：再经透析、浓缩，冻干，即得抗糖成分；
第十步：将得到的抗糖成分制成15mg/mL溶液，进行分离纯化，采用葡聚糖凝胶SephadexG-100进行分离纯化，上样量为1.0mL，洗脱剂为去离子水，洗脱流速1.0mL/min，收集洗脱液，纯化得抗糖成分。
2.根据权利要求1所述的桦树茸中抗糖成分的提取纯化，其特征在于：所述微孔滤膜孔径为0.45μm。
3.根据权利要求1所述的桦树茸中抗糖成分的提取纯化，其特征在于：所述第六步纯化条件为：温度25℃，上样液质量浓度4.0mg/mL，洗脱剂为去离子水，洗脱流速1.0mL/min。
4.根据权利要求1所述的桦树茸中抗糖成分的提取纯化，其特征在于：所述第九步中透析所用透析袋的规格为3500Da，透析时间为72-84h。
5.一种抗糖丸的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：
（ 1 ） 精密称取权利要求1-4任一项所述的提取纯化得到的抗糖成分300mg、微晶纤维素50mg、聚乙二醇6000加95%乙醇溶液制成浓度为5％的黏合剂、PVPP 60mg、硬脂酸镁6mg，分别干燥、研细，过100目筛；
（ 2 ） 将抗糖成分、微晶纤维素和PVPP混合均匀，边搅拌边加入5%聚乙二醇6000溶液制备软材；
（ 3 ） 过20目筛制备颗粒，65℃下干燥30min；
（4）过筛、整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，制成抗糖丸。
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