CN112094849B

CN112094849B - 与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1、分子标记及其应用

Info

Publication number: CN112094849B
Application number: CN202010852401.5A
Authority: CN
Inventors: 吕广德; 郭营; 王超; 王瑞霞; 赵岩; 钱兆国; 吴科; 李斯深
Original assignee: Tai'an Academy Of Agricultural Sciences; Shandong Agricultural University
Current assignee: Tai'an Academy Of Agricultural Sciences; Shandong Agricultural University
Priority date: 2020-08-22
Filing date: 2020-08-22
Publication date: 2022-07-01
Anticipated expiration: 2040-08-22
Also published as: CN112094849A

Abstract

本发明公开了一个与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1、与该基因相关的分子标记TaOSCA2.1‑5A‑C/T或TaOSCA2.1‑5A‑A/G，及该标记的应用。如果利用TaOSCA2.1‑5A‑C/T标记检测2423位点的SNP为T，且利用TaOSCA2.1‑5A‑G/A标记检测4407位点的SNP为G，则小麦品种（品系）株高表现为高秆（Hap1）;如果利用TaOSCA2.1‑5A‑C/T标记检测2423位点的SNP为C，且利用TaOSCA2.1‑5A‑G/A标记检测4407位点的SNP为A，则小麦品种（品系）株高表现为高秆（Hap2）；如果利用TaOSCA2.1‑5A‑C/T标记检测2423位点的SNP为T，且利用TaOSCA2.1‑5A‑G/A标记检测4407位点的SNP为A，则小麦品种（品系）株高表现为矮秆（Hap3）。本发明所提供的小麦株高相关基因TaOSCA2.1及其功能标记，可以便于检测和筛选株高差异小麦品种或品系，可大大加快小麦高产品种的选育进程。

Description

与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1、分子标记及其应用

技术领域

本发明涉及小麦分子生物技术与育种应用领域，具体地说是一种与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1、分子标记及其应用。

背景技术

小麦作为世界上最重要的作物之一，在世界各地广泛分布，是全世界人口获取能量的主要来源。随着耕地面积的减少，如何提高小麦产量成为小麦育种的新课题，抗倒伏能力是影响作物产量的要素之一，植株过高，在高肥水地力情况下容易造成倒伏，产量降低；植株过低，容易使植株叶片拥挤，造成光合效率和产量降低。20世纪中期以来的矮秆和半矮秆基因应用于小麦育种，大幅提高了小麦产量，从而，引发了“绿色革命”。适当降低小麦的株高不仅可以提高小麦抗倒伏能力，还能提高收获指数和光能利用率，进而提高小麦产量，是现今育种家和科研工作者不断探索的重要课题。除受主效矮杆基因控制外，小麦株高性状还受其他多个基因调节控制。迄今为止，小麦中克隆到和株高相关的基因还很少。

随着分子标记辅助育种技术的不断成熟，越来越多的育种工作者对分子标记辅助选择技术和常规育种技术的结合也越来越重视。Ellis等针对矮秆基因Rht-B5B、Rht-D5B开发的STS引物被广泛用于基因的分子检测，基因Rht8的特异标记WMC503也被用于基因的检测。Korzun等和Worland等利用标记Xgwm261检测Rht8的有无。慕美财、孙树贵、唐娜等分别利用开发的矮秆基因分子标记检测了当前小麦品种中矮秆基因的分布。因此，研究调节小麦株高的基因，开发获得与小麦株高相关的分子标记，并在小麦育种中应用该标记，优化株高发生群体结构，对于提高小麦抗倒伏能力、提高收获指数、培育高产小麦新品种具有极其重要的意义。

发明内容

本发明的目的就是提供一种与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1、与所述基因相关的分子标记开发及其应用，通过该功能标记对待测小麦品种或品系的DNA进行PCR扩增，可以快速筛选出株高差异显著的小麦材料。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1，所述基因TaOSCA2.1为TaOSCA2.1-5A、TaOSCA2.1-5B或TaOSCA2.1-5D，所述TaOSCA2.1-5A的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述TaOSCA2.1-5B的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述TaOSCA2.1-5D的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

所述TaOSCA2.1-5A的gDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述TaOSCA2.1-5B的gDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述TaOSCA2.1-5D的gDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

扩增TaOSCA2.1基因的引物为TaOSCA2.1-F/R；其中TaOSCA2.1-F/R的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示。

用于TaOSCA2.1基因染色体定位的引物为TaOSCA2.1-5A，TaOSCA2.1-5B和TaOSCA2.1-5D；其中TaOSCA2.1-5A的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示，TaOSCA2.1-5B的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：11所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：12所示，TaOSCA2.1-5D的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：13所示、反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：14所示。

本发明克隆小麦株高相关基因TaOSCA2.1的步骤如下：

1. 小麦TaOSCA2.1基因的获得：小麦TaOSCA2.1 cDNA序列电子克隆：（1）以NCBI提交的水稻OsOSCA2.1 (Accession: KJ920375)基因序列为探针，搜索小麦EST数据库，将得到的序列用DNAMAN软件拼接，对开放阅读框进行预测，以获取完整的小麦OSCA2.1 cDNA序列；（2）根据得到的全长cDNA序列用Primer5软件设计一对特异引物TaOSCA2.1-F/R用于小麦TaOSCA2.1 cDNA和gDNA基因克隆。

2. 利用Trizol试剂盒法提取总RNA，总RNA提取的步骤严格按照TransZoL™说明书进行，利用反转录试剂盒进行第一链cDNA序列合成。利用聚合酶链式反应（PCR）用于小麦TaOSCA2.1 cDNA的克隆。

3. 本发明扩增所述TaOSCA2.1基因所设计的引物为TaOSCA2.1-F/R，TaOSCA2.1-F/R的正向核苷酸序列如SEQ ID NO：7所述，TaOSCA2.1-F/R的反向核苷酸序列如SEQ IDNO：8所述；

4. 利用改良CTAB法提取小麦DNA，利用聚合酶链式反应（PCR）及引物TaOSCA2.1-F/R用于小麦TaOSCA2.1 gDNA的克隆。

5. 所述PCR的体系为20 μl，包含ddH2O 6.0 μl，2×Gflex PCR buffer 10.0 μl，Gflex Taq 0.40 μl，正反向引物各0.8 μl，cDNA或DNA 2.0 μl；

6. 所述PCR扩增的条件为：98℃预变性30 s；98℃变性10 s，58℃退火15 s，72℃延伸5 min，30个循环；72℃延伸10 min；4℃保存。

7. 基因克隆：PCR产物按照琼脂糖凝胶回收试剂盒进行纯化回收：操作过程严格遵守琼脂糖凝胶DNA纯化回收试剂盒说明书进行。取 PCR回收产物加入与pEASY-Blunt载体，混合，室温反应，完成连接；将连接产物转化大肠杆菌DH5α菌株，在表面涂有IPTG，X-gal的氨苄青霉素LB平板生长过夜；挑选白色菌落，通过快速PCR挑选阳性克隆测序；

所述小麦株高相关基因TaOSCA2.1的序列分析步骤如下：

1. 所述小麦株高相关基因TaOSCA2.1的染色体定位：根据序列差异设计基因组特异引物，TaOSCA2.1-2F/2R、TaOSCA2.1-3F/3R和TaOSCA2.1-4F/4R扩增中国春缺四体DNA进行染色体定位，3条序列分别定位在5A、5B和5D基因组上；

2. 运用DNAman软件对测序结果进行分析，以TaOSCA2.1-F/R引物扩增的小麦TaOSCA2.1-5A的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，基因长度为4612 bp，包含一个长为2415bp的开放阅读框，编码804个氨基酸； TaOSCA2.1-5B的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，基因长度为4280 bp，包含一个长为2340bp的开放阅读框，编码779个氨基酸；以及TaOSCA2.1-5D的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示，基因长度为4322 bp，包含一个长为2334bp的开放阅读框，编码777个氨基酸；分别包含10个外显子和9个内含子；（如图1所示）。

3. 本发明用于所述TaOSCA2.1基因染色体定位的引物为TaOSCA2.1-2F/2R（正向核苷酸序列如SEQ ID NO：9所述；反向核苷酸序列如SEQ ID NO：10所述），TaOSCA2.1-3F/3R（正向核苷酸序列如SEQ ID NO：11所述；反向核苷酸序列如SEQ ID NO：12所述）和TaOSCA2.1-4F/4R（正向核苷酸序列如SEQ ID NO：13所述；反向核苷酸序列如SEQ ID NO：14所述）；

4. 基因组序列自5’端第2423位的SNP位点为T/C，根据此处的SNP位点开发基因组特异的SNP标记，命名为TaOSCA2.1-5A-T/C，（正向引物序列为SEQ ID NO：15和 SEQ ID NO：17，反向引物序列为SEQ ID NO：16和 SEQ ID NO：18）。基因组序列自5’端第4407位的SNP位点为G/A，根据此处的SNP位点开发基因组特异的SNP标记，命名为TaOSCA2.1-5A-A/G，（正向引物序列为SEQ ID NO：19和 SEQ ID NO：21，反向引物序列为SEQ ID NO：20和 SEQ ID NO：22）

与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1的分子标记，所述分子标记包含有TaOSCA2.1-5A-C/T和TaOSCA2.1-5A-A/G，其中TaOSCA2.1-5A-T的引物正向核苷酸序列如SEQ ID NO：15所示，反向核苷酸序列如SEQ ID NO：16所示，TaOSCA2.1-5A-C的引物正向核苷酸序列如SEQID NO：17所示，反向核苷酸序列如SEQ ID NO：18所示； TaOSCA2.1-5A-A的引物正向核苷酸序列如SEQ ID NO：19所示，反向核苷酸序列如SEQ ID NO：20所示，TaOSCA2.1-5A-G的引物正向核苷酸序列如SEQ ID NO：21所示，反向核苷酸序列如SEQ ID NO：22所示。

与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1的分子标记在检测小麦品种株高上的应用。

与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1的分子标记在检测小麦品种株高上的应用，包含有如下步骤：

a．用TaOSCA2.1-5A-C/T的标记引物和TaOSCA2.1-5A-A/G的标记引物对小麦品种的DNA分别进行PCR扩增，其PCR扩增体系为20 μl，包含2×Accurate Taq MIX 10 μl，ddH₂O7 μl，正反向引物各0.5 μl，gDNA 1.0 μl，dNTP 2 μl；扩增条件为94℃预变性3 min；94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃延伸5 min；16℃保存；

b．如果利用TaOSCA2.1-5A-C/T标记检测2423位点的SNP为T，且利用TaOSCA2.1-5A-G/A标记检测4407位点的SNP为G，则小麦品种（品系）株高表现为高秆（Hap1）;如果利用TaOSCA2.1-5A-C/T标记检测2423位点的SNP为C，且利用TaOSCA2.1-5A-G/A标记检测4407位点的SNP为A，则小麦品种（品系）株高表现为高秆（Hap2）；如果利用TaOSCA2.1-5A-C/T标记检测2423位点的SNP为T，且利用TaOSCA2.1-5A-G/A标记检测4407位点的SNP为A，则小麦品种（品系）株高表现为矮秆（Hap3）。

小麦株高和倒伏存在很大的关系，倒伏的发生严重影响小麦产量，优异株高基因及分子标记的开发有重要意义，当前小麦株高基因克隆的很少，开发的与株高相关的分子标记也很少，本发明所提供的小麦株高相关基因TaOSCA2.1及其功能标记，对株高选择育种筛选有重要意义。该标记的应用可以便于检测和筛选株高差异小麦品种或品系，可大大加快小麦高产品种的选育进程。特别是优异株高的选择进程，通过该标记的筛选，在低代（F₃~F₄代）小麦品系株高稳定的过程中即可筛选到优异的株高品系，在株高选择进程中可以节省1~2年的时间。

附图说明

图1为小麦TaOSCA2.1-5A、TaOSCA2.1-5B和TaOSCA2.1-5D的基因结构。

图2为TaOSCA2.1基因利用中国春缺体-四体的定位结果。01：泰农18；02：临麦6号；03：N5AT5B；04：N5BT5A；05：N5DT5B；06：中国春；07：水。

图3为开发TaOSCA2.1-5A-C/T标记示意图。M：marker；01：泰农18；02：小偃81；03：河农4185；04：郑麦9023；05：新麦16；06：中优9507；07：洛旱21；08：泰山21；09：晋麦33；10：石4185；11：淮麦16；12：陕农534。

图4为开发TaOSCA2.1-5A-A/G标记示意图。M：marker；01：泰农18；02：小偃81；03：河农4185；04：郑麦9023；05：洛旱21；06：泰山21；07：淮麦16；08：陕农534；09：晋麦33；10：石4185；11：山农483；12：烟农836。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例中所用的试验材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1：小麦株高相关基因TaOSCA2.1的克隆，使用的材料为小麦品种泰农18。

1）与小麦株高相关基因TaOSCA2.1的获得；

（1）以NCBI提交的水稻OsOSCA2.1基因序列为探针，搜索小麦的EST数据库，将得到的序列用DNAMAN软件拼接，利用ORF Finder程序对开放阅读框（ORF）进行预测，得到完整的TaOSCA2.1的cDNA序列。

（2）根据得到的全长cDNA序列用Primer5软件设计一对引物TaOSCA2.1-F/R用于小麦TaOSCA2.1 cDNA和gDNA基因克隆。其上下游引物分别为：

上游引物TaOSCA2.1-F: 5’-GTTTGGAATGCGCATACACT-3’

下游引物TaOSCA2.1-R: 5’-TCGCAATCAACCAAAGATGT-3’

2）利用Trizol试剂盒法提取总RNA：总RNA提取的步骤严格按照TransZoL™说明书进行，具体如下：（1）预先加1 mL TransZoL™试剂至2 mL离心管中；（2）取0.15 g小麦幼嫩叶片放至预先用液氮冷却的研钵中，迅速研磨为粉末状，研磨期间使材料始终浸泡在液氮中；（3）将经过研磨的样品转移到预先加TransZoL™试剂的离心管中，每使用1ml TransZoL™，加0.2ml氯仿，剧烈震荡15s室温静置5 min，使核酸与蛋白分离完全；（4）在冷冻离心机中于4℃，10000 rpm，离心15 min。此时样品分成三层，上层的无色水相，中间层和下层的粉红色有机相。RNA主要在水相；（5）小心转移上层水相于干净的试管中，以每1 mL TransZoL™提取液加0.5 mL异丙醇的标准加入异丙醇，颠倒混匀，室温静置10 min；（6）在冷冻离心机中于4℃，10000 rpm，离心10 min。弃上清，在试管内会有胶状沉淀形成；（7）弃上清，加入用1 mL DEPC处理水配制的75%乙醇，剧烈涡旋；（8）在冷冻离心机中于4℃，7500rpm条件下离心5 min，弃上清；（9）除尽75%乙醇，于超净台中干燥10 min，加50-100μL RNA溶解液溶解；（10）55℃~60℃孵育10min，样品于-80℃保存备用。

3）利用改良CTAB法提取DNA，具体步骤如下：

DNA的提取参照采用改良的CTAB法进行。（1）取0.15g小麦幼嫩叶片至2 mL离心管中，在液氮冷冻条件下迅速磨成粉末；（2）加入1 mL 65℃水浴的CTAB提取液，充分混匀，将离心管置于65℃水浴条件下1 .5h，每隔20 min颠倒混匀几次离心管；（3）将离心管于12000rpm离心10 min，提取的DNA主要存在于上清液中；（4）转移上清液至干净的离心管中，加入等体积苯酚-氯仿-异戊醇（体积比为25：24：1）并颠倒混匀，12000 rpm离心10 min；（5）转移上清液至新的离心管中，加入等体积的氯仿-异戊醇（体积比为24：1），颠倒混匀，12000 rpm离心10 min；（6）转移上清液至新的离心管中，加入等体积的预冷的异丙醇，轻轻混匀，12000 rpm离心5 min；（7）倒掉多余的液体，加入70%的乙醇洗涤2~3次；（8）将离心管置于超净台中充分晾干；（9）加入500µL TE缓冲液溶解DNA，-20℃冰箱中保存备用。

4）利用反转录试剂盒进行第一链cDNA序列合成：cDNA第一链的合成参照PrimeScript™Ⅱ1st strand cDNA synthesis Kit说明书进行：（1）在无RNA酶的干净试管中加入dNTP Mixture、Oligo dT Primer和模板 RNA；（2）轻轻混匀，于65℃条件下温育5min，迅速置于冰盒冷却并加入5×PrimeScript II Buffer 、RNase Inhibitor、PrimeScript II RTase和RNase free dH2O；（3）轻轻混匀，于42℃温育60 min。（4）于95℃条件下5 min终止反应，致酶失活。反转录样品于-80℃冰箱保存备用。

5）聚合酶链式反应（PCR）反应进行序列扩增

用TaOSCA2.1-F/R引物分别对小麦cDNA和gDNA进行PCR扩增，其PCR扩增体系为20μl，包含ddH2O 6.0 μl，2×Gflex PCR buffer 10.0 μl，Gflex Taq 0.40 μl，左反向引物各0.8 μl，cDNA或DNA 2.0 μl；扩增条件为98℃预变性30 min；98℃变性15 s，58℃退火10s，72℃延伸5 min，30个循环，72℃延伸10 min，4℃保存；

6）PCR产物按照琼脂糖凝胶回收试剂盒进行纯化回收，具体步骤如下：

（1）柱平衡步骤：向吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中）加入500 μl平衡液BL，12000 rpm离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中；（2）将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量；（3）向胶块中加入等倍体积溶液PC（如果凝胶重为0.1 g，其体积可视为100 µl，则加入100 µlPC溶液），50℃水浴放置10 min左右，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解；（4）将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中），12000 rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中；（5）向吸附柱CB2中加入600 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000 rpm离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中；（6）重复操作步骤5；（7）将吸附柱CB2放入收集管中，12000 rpm离心2 min，尽量除去漂洗液。将吸附柱置于室温放置数分钟，彻底晾干；（8）将吸附柱CB2放入一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液EB，室温放置2 min，12000 rpm离心2 min，收集DNA溶液。

7）基因克隆：取4 μl PCR回收产物与1 μl pEASY- Blunt载体轻轻混合，25℃反应30分钟，完成连接；将连接产物转化大肠杆菌DH5α菌株，在表面涂有8 μl IPTG（500 mM），40μl X-gal的氨苄青霉素（100 μg/ml）LB平板生长过夜；挑选白色菌落，通过快速PCR挑选阳性克隆测序。

8）小麦TaOSCA2.1-5A、TaOSCA2.1-5B和TaOSCA2.1-5D序列分析。

（1）运用TaOSCA2.1-F/R引物进行PCR扩增，分别得到3条全长cDNA序列和对应的gDNA序列，根据序列差异设计基因组特异引物TaOSCA2.1-2F/2R、TaOSCA2.1-3F/3R和TaOSCA2.1-4F/4R扩增中国春缺四体DNA进行染色体定位，3条序列分别定位在5A、5B和5D基因组上。

（2）运用DNAMAN软件对测序结果进行分析，以TaOSCA2.1-F/R引物扩增的小麦TaOSCA2.1-5A的cDNA序列如SEQ ID NO：1所示、TaOSCA2.1-5B的cDNA序列如SEQ ID NO：2所示、以及TaOSCA2.1-5D的cDNA序列如SEQ ID NO：3所示；其cDNA序列全长分别为2415、2340和2334bp。以引物TaOSCA2.1-F/R扩增的TaOSCA2.1-5A 的gDNA序列如SEQ ID NO：4所示、TaOSCA2.1-5B的gDNA序列如SEQ ID NO：5所示和TaOSCA2.1-5D的gDNA序列如SEQ ID NO：6所示；其gDNA序列全长4612、4280和4322 bp，分别包含10个外显子和9个内含子。

实施例2：小麦株高相关基因TaOSCA2.1的标记开发

1）用TaOSCA2.1-F/R（正向引物序列为SEQ ID NO：7，反向引物序列为SEQ ID NO：8）引物序列对黄淮麦区20份材料DNA进行PCR扩增并分析基因组序列发现TaOSCA2.1-5A（SEQ ID NO：5）序列在品种间存在SNP序列差异。

2）在TaOSCA2.1-5A基因组序列中存在6个SNP位点。

3）自5’端第2423位的SNP位点周围的核苷酸序列为：

5'-CAAACATTTGGCTTCCCTATAAGCAG-3'

5'-CAAACATTTGGCTTCCCTACAAGCAG -3'

在此SNP位点的核苷酸为T，引物TaOSCA2.1-5A-T可以扩增出条带，而引物TaOSCA2.1-5A-C扩增不出条带；此SNP位点的核苷酸为C，引物TaOSCA2.1-5A-C可以扩增出条带，而引物TaOSCA2.1-5A-T扩增不出条带。根据此处的SNP位点开发基因组特异的SNP标记，命名为TaOSCA2.1-5A-T/C（正向引物序列为：SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：17；反向引物序列为SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：18）。

自5’端第4407位的SNP位点周围的核苷酸序列为：

5'-GCAAAGGTAGCTCGGATGGGTCCA-3'

5'-GCAAAGGTAGCTCGGACGAGTCCA-3'

在此SNP位点的核苷酸为G，引物TaOSCA2.1-5A-G可以扩增出条带，而引物TaOSCA2.1-5A-A扩增不出条带；此SNP位点的核苷酸为A，引物TaOSCA2.1-5A-A可以扩增出条带，而引物TaOSCA2.1-5A-G扩增不出条带。根据此处的SNP位点开发基因组特异的SNP标记，命名为TaOSCA2.1-5A-G/A（正向引物序列为：SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：21；反向引物序列为SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：22）。

4）用TaOSCA2.1-5A-T/C对已测序的12份小麦材料进行PCR扩增，PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，如图4所示，验证SNP标记的准确性：其PCR扩增体系为20 μl，包含2×Accurate Taq MIX 10 μl，ddH2O 7 μl，正反向引物各0.5 μl，gDNA 2.0 μl；扩增条件为94℃预变性3 min，94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环，72℃延伸5 min，16℃保存。结果表明，Hap1单倍型Hap3单倍型的6份材料利用TaOSCA2.1-5A-T引物可以扩增出737bp的条带；Hap2单倍型的6份材料利用TaOSCA2.1-5A-C引物可以扩增出737bp的条带。基于此标记的单倍型分析结果与测序分析单倍型的结果相一致。

用TaOSCA2.1-5A-G/A对已测序的12份小麦材料进行PCR扩增，PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，如图4所示，验证SNP标记的准确性：其PCR扩增体系为20 μl，包含2×AccurateTaq MIX 10 μl，ddH2O 7 μl，正反向引物各0.5 μl，gDNA 2.0 μl；扩增条件为94℃预变性3min；94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环，72℃延伸5 min，16℃保存。结果表明，Hap1单倍型的6份材料利用TaOSCA2.1-5A-G引物可以扩增出296bp的条带；Hap2单倍型和Hap3单倍型的6份材料利用TaOSCA2.1-5A-A引物可以扩增出296bp的条带。基于此标记的单倍型分析结果与测序分析单倍型的结果相一致。

5）利用分子标记TaOSCA2.1-5A-T/C和TaOSCA2.1-5A-G/A扫描由132份材料组成的品种群体，可以将自然群体分成三种单倍型，命名为Hap1、Hap2、 Hap3。

实施例3：用TaOSCA2.1-5A-T/C标记和TaOSCA2.1-5A-G/A标记检测小麦品种或品系株高的方法

1）将132份材料组成的品种群体进行了2年共7个试验环境的田间种植及表型鉴定，分别考查不同年份的各个品种株高，其中2年7个试验环境即2013年泰安、2013年淄博、2013年新疆、2014年泰安、2014年淄博、2014年新疆、均值。

其中小麦种植方法：每个品种种植5行，行长2 m、行间距25 cm、每行种植70粒种子，正常生长及收获；株高测定方法：随机选取10株调查株高，取平均值计算株高。

2）提取待测小麦品种的DNA，用TaOSCA2.1-5A-T/C标记引物和TaOSCA2.1-5A-G/A标记对小麦品种DNA进行PCR扩增，其PCR扩增体系为20 μl，包含2×Accurate Taq MIX 10μl，ddH2O 7 μl，正反向引物各0.5 μl，gDNA 2.0 μl；扩增条件为94℃预变性3 min；94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃延伸5 min；16℃保存。

将TaOSCA2.1-5A-T/C标记扩增产物的有无，检测待测小麦TaOSCA2.1-5A基因组序列自5’端第2423位的SNP位点为T还是C。如果TaOSCA2.1-5A-C扩增出条带，如图3（01-06样品）所示，则位点为C；如果TaOSCA2.1-5A-T扩增出条带，如图3（07-12样品）所示，则位点为T。

将TaOSCA2.1-5A-G/A标记扩增产物的有无，检测待测小麦TaOSCA2.1-5A基因组序列自5’端第4407位的SNP位点为G还是A。如果TaOSCA2.1-5A-A扩增出条带，如图4（01-06样品）所示，则位点为A；如果TaOSCA2.1-5A-G扩增出条带，如图4（07-12样品）所示，则位点为G。

3）如果利用TaOSCA2.1-5A-C/T标记检测2423位点的SNP为T，且利用TaOSCA2.1-5A-G/A标记检测4407位点的SNP为G，则小麦品种（品系）株高表现为高秆（Hap1）;如果利用TaOSCA2.1-5A-C/T标记检测2423位点的SNP为C，且利用TaOSCA2.1-5A-G/A标记检测4407位点的SNP为A，则小麦品种（品系）株高表现为高秆（Hap2）；如果利用TaOSCA2.1-5A-C/T标记检测2423位点的SNP为T，且利用TaOSCA2.1-5A-G/A标记检测4407位点的SNP为A，则小麦品种（品系）株高表现为矮秆（Hap3）。如表2所示。

序列表

<110> 泰安市农业科学研究院山东农业大学

<120> 与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1、分子标记及其应用

<130> 2020

<160> 25

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2415

<212> DNA

<213> 小麦(Triticum aestivum L.)

<400> 1

atgaagatca gcgcactcct gacctctgcg ggcatcaata ttgggctttg cgtgctcttt 60

ctgtcgctct attctgttct gaggaagcag ccagccaatg tcagggtcta cttcggccgg 120

aggatttccg aggagcatag tcggctccga gaggctttta ttttggagag gtttgttcca 180

tcaactggct ggatcgtcaa ggccctgcgg tataccgagg aagagctctt ggcagctgct 240

gggctggatg ctgtcgcttt caatagaatg cttgtcttca gcatacgtat cttttcactg 300

gctgcccttc tgtgtgtgtt tggaatactt ccattgcact attatggaaa aaatatacta 360

catagtcgga ttccttcaga agatttggat atcttcacaa ttgggaatgt ggaagtgcga 420

tcaagatggc tttgggttca ttgtctagtt ctctacataa tatctggagt agcttgcatt 480

ctcctatatc ttgagtatag gcacattgct agactgaggc tccttcacct taagcgtgca 540

acacccaatc caggccaatt tactgtgctt gttcgcggaa taccaaagat aacaaaagaa 600

tcgtgcagta gtgctgttga tgatttcttc accaagtatc atgggtcaag ttacctattc 660

caccaagttg tttataaagt tgggaaagtt cagaagataa tgactggtgc caagaaggca 720

tgtagaaagt tgaaacattt cacggacacc actgtagatc agagctacaa agcaattaca 780

taccggtgtt gtctttgtgg tgcctcttca aattctttcc acttgttgcc cactgacgaa 840

gttgtaccga gcagaggaaa agctgacctg gacgattcta gcttgaacat ggataatgag 900

gaatgtgcgg ctgcttttgt atttttcaaa actcggtatg gagcacttgt tgcgtcagac 960

gttcttcaga catcgaaccc tacgaagtgg gttactgatc cagctccaga accaaatgat 1020

gtgtattggt caaacatttg gcttccctac aagcagcttt ggattcgaag gatagcgacg 1080

cttcttggtt ctattgtttt tatgctctta tttctggcac cagtgacgtt tataaatggt 1140

ctatctcagc ttgatcagtt gcagaagagg cttcctttcc ttaatgggat attgaagcag 1200

ccacaccaca tggtccaact aataactgga taccttccga gtgtcatact gcaaatattt 1260

ctgtactctg ttgcgccaat aatgatgcta ttttcaacac tagaggggcc tgtatctcac 1320

agcgaaagga agaggagtgc ttgctgtaaa gtgctgtact tcttgatttg gaatgtattc 1380

tttgttaatg tggtatctgg tactgtctta aaacaattgg attttttttc aagcccaaag 1440

gacattcctg tccagctcgc taaggttata cctgggcagg cttccttctt catcacctat 1500

gttctgactt caggatgggc cagtttatca tctgaactta tgcaactctt tggtctgatc 1560

tataacttca taaggaagta tgttctgaga atgaaagaag atacagagtt tgtcccctcg 1620

ttcccctatc acactgaagt accaaaaata ttgttgtttg gactattggg attcacatgc 1680

tctgtactgg cgcccttgat cttacctttt ctgctagtct acttcttcct gggttatgtc 1740

gtataccgca atcagctgct caatgtgtac cgcacgagat atgacaccgg tggtttgtat 1800

tggccgatta tacacaacac agtgatattc tctctcgtgc tcacccagat catctgcctc 1860

ggtgtatttg gcctgaaagt atcaccagta gctgcaggct tcaccatacc tctcatcatc 1920

ttcactcttc tgttcaatca gtattgcaga acccggcttc ttccactgtt cagcactttc 1980

ccagcacaga atttaatcga catggacagg gaggacgagc tgtcaggaag aatggaacat 2040

attcaccaac ggctccatac cgcatattgc cagttccctg attccgaaga tatacaactg 2100

gaggagattc ggaccgtcgg gaatgatgag gacgtcggag gttgtagctc aggcgggtcc 2160

aacggcaaag gtagcccggg tgagttcaac ggcaaaggta gctcggacga gtccaacggc 2220

aaaggtagcc cgggggagtt caatggcaaa ggtggctcgg acgagtccaa cggcaaagag 2280

accctccagg aacagcagca gcccagaagg gatctgtctc acccaacact caaagggctt 2340

cccgttagcc gtctgcagaa tgccgtgaga tgcgtcactt tcctcattag gctgcagaaa 2400

agaggcttgt catga 2415

<210> 2

<211> 2340

<212> DNA

<213> 小麦(Triticum aestivum L.)

<400> 2

atgaagatca gcgcactcct gacctctgcg ggcatcaata tcgggctctc cgtgctcttt 60

ctgtcgctct attctgttct gaggaagcag ccagccaatg tcagggtcta cttcggccgc 120

aggatttccg cggagcatag tcggctccga gaggctttta ttttggagag gtttgttcca 180

tcaactggct ggatcgtcaa ggccctgagg tataccgagg aagagctctt ggcagctgct 240

gggctggatg ctgtcgcttt caatagaatg ctagtcttca gcacacgtat cttttcccta 300

gctgccctgc tgtgtgtgtt tggaattctt ccactgcatt atcatggaca aaatatacag 360

catcttcgga ttccttatga agatttggat atcttcacaa ttggaaatgt ggaaaagcga 420

tcaagatggc tttgggttca ttgtctagtt ctctacataa tatctggagt agcttgcatt 480

ctcctatatc ttgagtttag gcacattgct agactgaggc tccttcacct taaacgtgca 540

acacccaatc caggccaatt tactgtgctt gttcgcggaa taccaaagac caagaaagaa 600

tcgtgcagta gtgccgttga tgatttcttc accaagtatc atgcgtcaag ttacctattc 660

caccaaattg tttacaaaac tgggaaagtt cagaagataa tgactggtgc gaagaaggca 720

tgtagaaagt tgaaaaattt cacggacacc actgtagatc agagctgcaa agcaattaca 780

taccggtgtt gtctttgtgg tgcctcttca aattctttcc aattgttgcc cactgatgaa 840

gttgtaccga gcaaaggaaa agttgacctg gacgattcta gcttgaacat agataatgag 900

gaatgtgcag ctgcttttgt atttttcaaa actcggtatg gagcacttgt cgcgtcagac 960

gtacttcaga catcaaaccc tacgaagtgg gttactgatc tagctccaga accaaatgat 1020

gtgtattggt caaacatttg gcttcccttt aagcagcttt ggattcgacg gatagcgacg 1080

ctacttggtt ctgttgtttt tatgctctta tttctggcac cggtgacgtt tataaatggt 1140

ctatctcagc ttgatcagtt gcagaagagg cttcctttcc ttaacgggat attgaagcag 1200

ccacaccacc tggtccaact aataactgga taccttccga gtgtcatact gcaaatattt 1260

ctgtacaccg ttgcgccaat aatgatgctg ttttcaacac tagaagggcc tatatctcac 1320

agcgaaagga agaggagtgc gtgctgtaaa gtgctgtact tcttgatttg gaatgtattc 1380

tttgttaatg tggtatctgg cactgtctta aaacaattgg attttttctc aagcccgaag 1440

gacattcctg tccagctcgc taaggttata cctgggcagg cttccttctt catcacctat 1500

gttctgactt caggatgggc cagtttatca tctgaactta tgcaactctt tggtctgatc 1560

tataacttca taaggaagta tgttctgaga atgaaagaag atacagagtt tgtcccctcg 1620

ttcccatatc acactgaagt accaaaagtt ctgttgtttg gactattggg attcacatgc 1680

tctgtactgg cgcccttgat cttacctttt ctgctagtct acttcttcct gggctatgtc 1740

gtataccgca atcagctgct caatgtgtac cgcacgagat acgacaccgg tggtttgtat 1800

tggccgatta tacacaacac agtgatattt tctctcgtgc tcacccagat catctgcctc 1860

ggcatatttg ggctgaaagt atcaccagta gctgcaggct tcaccatacc tctcatcatc 1920

ttcactcttc tgttcaatca gtactgcaga acccggcttc ttccactgtt cagcactttc 1980

ccagcacaga atttaatcga catggacagg gaggacgagg tgtcgggaag aatggaacat 2040

attcaccacg ggctccacac cgcgtattgc cagttccctg accccgaaga agatttacaa 2100

ctggaggaga ttcggaccgt cgggaacgat gaggacggcg gaggttgtag ctcgggcggg 2160

tccaacggca aaggtagccc gggcgagccc aacggcaaag agaccctcga ggaacagcag 2220

cagcccagga gggacctgtc tcacccgacg ctcaaagggc tcccggtcag ccgtctgcag 2280

aatgcggtga gatgcgtcac tttcctcatc aggctgcaga aaagaggcct gtggtcatga 2340

<210> 3

<211> 2334

<212> DNA

<213> 小麦(Triticum aestivum L.)

<400> 3

atgaagatca gcgcactcct gacctctgcg ggcatcaata ttgggctctg cgtgctcttt 60

ctgtcgctct attctgttct gaggaagcag ccagccaatg tcagggtcta cttcggccgg 120

aggatttccg aggagcatag tcggctccga gaggctttta ttttggagag gtttgttcca 180

tcaactggct ggattgtcaa ggccctgagg tataccgagg aagaggtctt ggcagctgct 240

gggctggatg ctgtcgcttt caatagaatg ctagtcttca gcatacgtat cttttcccta 300

gctgctctgc tgtgtgtgtt tggaattctt ccactgcatt attatggaca aaatatacag 360

catcttcgga ttccttatga agatctggat atcttcacaa ttggaaatgt ggaaaagcga 420

tcaagatggc tttgggttca ttgtctagtt ctctacatac tatctggagt agcttgcatt 480

ctcctatatc ttgagtttag gcacattgct agactgaggc tccttcacct taaacgtgca 540

acacccaatc caggccaatt tactgtgctt gttcgcggaa taccaaagac aaagaaagaa 600

tcgtgcagta gtgctgttga tgatttcttc accaagtatc atgcgtcaag ttacctattc 660

caccaaattg tttacaaaac tggcaaagtt cagaagataa tgactggtgc gaagaaggca 720

tgtagaaagt tgaaaaattt cacggacacc actgtagatc agagctgcaa agcaattaca 780

taccggtgtt gtctttgtgg tgcctcttca aattctttcc agttgttgcc cactgatgaa 840

gttgtaccga gcagaggaaa agttgacctg gacgattcta gcttgaacat agataatgag 900

gaatgtgcag ctgcttttgt atttttcaaa acacggtatg gagcacttgt cgcgtcagac 960

gtacttcaga catcaaaccc tacgaagtgg gttactgatc tagctccaga accaaatgat 1020

gtgtattggt caaacatttg gcttccctat aagcagcttt ggattcgacg gatagcgacg 1080

ctacttggtt ctattgtttt tatgctctta tttctggcac cggtgacatt tataaatggt 1140

ctatctcagc ttgatcagtt gcagaagagg cttcctttcc ttaacgggat attgaagcag 1200

ccacaccacc tggtccagct aataactgga taccttccga gtgtcatact gcaaatattt 1260

ctatacaccg ttgcgccaat aatgatgcta ttttcaacac tagaagggcc tatatctcac 1320

agcgaaagga agaggagtgc gtgctgtaaa gtgctgtact tcttgatttg gaatgtattc 1380

tttgttaatg tggtatctgg cactgtctta aaacaattgg atttcttttc aagcccgaag 1440

gacattcctg tccagctcgc taaggttata cctgggcagg cttccttctt catcacctat 1500

gttcttactt caggatgggc cagtttatca tctgaactca tgcaactctt tggtctgatc 1560

tataacttca taaggaagta tgttctgaga atgaaagaag atacagagtt tgtcccctcg 1620

ttcccctatc acactgaagt accaaaagtt ttgttgtttg gactattggg attcacatgc 1680

tctgtactgg cgcccttgat cttacctttt ctgctagtct acttcttcct gggttatgtc 1740

gtataccgca atcagctgct caatgtgtac cgcacgagat atgacaccgg tggtttgtat 1800

tggccgatta tacacaacac agtgatattc tctctcgtgc tcacccagat catctgcctc 1860

ggtgtatttg gcctgaaagt atcaccagta gctgcaggct tcaccatacc tctcatcatc 1920

ttcactcttc tgttcaatca gtattgcaga acccggcttc ttccactgtt cagcactttc 1980

ccagcacaga atttaatcga catggacagg gaggacgagc tgtcaggaag aatggaacat 2040

attcaccacg ggctccatac cgcgtattgc cagttccctg aatctgaaga tatacaactg 2100

gaggaaattc ggaccgtcgg gaatgatgag gacggcggag gttgtagctc gggcgggtcc 2160

aacggcaaag gttgctcgga cgagcccagc ggcaaagaga ccctccagga acagcagcag 2220

cccagaaggg atctgtctca cccgacactc aaagggctcc ccgttagccg tctgcagact 2280

gccgtgagat gcgtcacttt cctcattcgg ctgcagaaaa gaggcttgtc atga 2334

<210> 4

<211> 4612

<212> DNA

<213> 小麦(Triticum aestivum L.)

<400> 4

atgaagatca gcgcactcct gacctctgcg ggcatcaata ttgggctttg cgtgctcttt 60

ctgtcgctct attctgttct gaggaagcag ccagccaatg tcagggtcta cttcggccgg 120

aggatttccg aggagcatag tcggctccga gaggctttta ttttggagag gtttgttcca 180

tcaactggct ggatcgtcaa ggccctgcgg tataccgagg aagagctctt ggcagctgct 240

gggctggatg ctgtcgcttt caatagaatg cttgtcttca ggtacaccaa atttcgtctt 300

tgatatccat gtatccctct gtgccattat tgtgttggtt aaaagacaat ggtatctgat 360

tgatgagctt gttaacatcc acgtgtggtc tgaatcagaa ggagacagaa acttgttgct 420

ctggcagctg catacaaaat agaacttctt ttaatgctgt tatataaaat cgtagaggac 480

agacccagtg catagaagct cccacacaag gtggggtctg gggagggatt ataggaactt 540

agtcttaccc ctgcgaagtg caatgcagag aggctggttc gaaccaagga ccttttggca 600

caagtgggga ggacttcacc actgcgccag gcctggcctc tattatataa aatcgcggat 660

ccctcttttt tgtttgctat tttctgtcat actgcttttc tatcagttta acatcagatt 720

cgagttttgc acactgatac attcgtttct gcagcatacg tatcttttca ctggctgccc 780

ttctgtgtgt gtttggaata cttccattgc actattatgg aaaaaatata ctacatagtc 840

ggattccttc agaagatttg gatatcttca caattgggaa tgtggaagtg cgatcaagat 900

ggtgagctga gcaatttatt ttaattttat cataaggtgt tttttagggt atcataaggt 960

agttttttta ggctatcata aggtgttttt tttctaggct atcatatggt ggttttatca 1020

aggctgaaat tgtatatttg tttgtcgtat gctgtgttga ttattggtat ttatagtgtt 1080

aatcgttttg cctctaactg gacttcattt agttccgtgc acgtctccac tcttcaaaac 1140

atgagaaaat aatatgtata tgggagcgca atatacatac ttctttattc aatttatttg 1200

ctggttgcat tgcaggcttt gggttcattg tctagttctc tacataatat ctggagtagc 1260

ttgcattctc ctatatcttg taagtatttt tttgaagtac ggactattct acatcgtcat 1320

attgaggaat acatgtaatg ttgtttcctt acccaatctt tcaggagtat aggcacattg 1380

ctagactgag gctccttcac cttaagcgtg caacacccaa tccaggccaa tttactgtgc 1440

ttgttcgcgg aataccaaag ataacaaaag aatcgtgcag tagtgctgtt gatgatttct 1500

tcaccaagta tcatgggtca agttacctat tccaccaagt tgtttataaa gttgggaaag 1560

ttcagaagat aatggtaagc aattctcata caacgtttct atttgtttgg agggtgggag 1620

atgtgggaga acgtgacata attgccaagg tagtattttt atgatttaat gctgtcagtc 1680

ttagacttac tttcctcgtg gttcggtaac cgctatgtca tgtaagggat aattcatgtg 1740

ctgcacattc attatgataa tttttgtctt ctccatgaat ttgtgaaatg atctcatatc 1800

atttaagtta catttataca ttttatctgc aaaggtgttt gtgatattgc atattctttt 1860

tcatattctc cctgagttac tgaattgatc tcagatcggt tgatttggat ttgtaccttt 1920

tatctgcata ttagtatttt gccttctgct tctggagtaa aactgtttcg tatactgcag 1980

actggtgcca agaaggcatg tagaaagttg aaacatttca cggacaccac tgtagatcag 2040

agctacaaag caattacata ccggtgttgt ctttgtggtg cctcttcaaa ttctttccac 2100

ttgttgccca ctgacgaagt tgtaccgagc agaggaaaag ctgacctgga cgattctagc 2160

ttgaacatgg ataatgaggt ttgcttcaca attttgcaaa cattgattct tttactaagt 2220

ttaccaacaa gtcgatatag aatcagtaac tgcagttctg gaactattta caggaatgtg 2280

cggctgcttt tgtatttttc aaaactcggt atggagcact tgttgcgtca gacgttcttc 2340

agacatcgaa ccctacgaag tgggttactg atccagctcc agaaccaaat gatgtgtatt 2400

ggtcaaacat ttggcttccc tacaagcagc tttggattcg aaggatagcg acgcttcttg 2460

gttctattgt ttttatgctc ttatttctgg caccagtgac gtttataaat ggtctatctc 2520

agcttgatca gttgcagaag aggcttcctt tccttaatgg gatattgaag cagtaagtac 2580

ctatgttgca ctggagctga catctatatt gaacttcatc ttccctatcg actaatatgt 2640

agagtctggt atgcatcaga tctcatttag agctgaaatt tgaaacagca agcaaaacca 2700

tttatatcta gaccgattaa cacattttag tttgagtgtt ttgtgatagt taaggtacta 2760

ccattcagca tagacatatg gcttgtcctt catttgtaat tggcttctat tgactcctct 2820

tccatgtgca ggccacacca catggtccaa ctaataactg gataccttcc gagtgtcata 2880

ctgcaaatat ttctgtactc tgttgcgcca ataatgatgc tattttcaac actagagggg 2940

cctgtatctc acagcgaaag gaagaggagt gcttgctgta aagtgctgta cttcttgatt 3000

tggaatgtat tctttgttaa tgtggtatct ggtactgtct taaaacaatt ggattttttt 3060

tcaagcccaa aggacattcc tgtccagctc gctaaggtta tacctgggca ggttagttcc 3120

atcttgttgt tacgcagtag aagatcattc ttcttttttc ttttgagaaa atgcagaaag 3180

atcattttgt ttatggaagg tcaatatatt ctgactgcaa ttctgtaaat ccattttgat 3240

ttcaggcttc cttcttcatc acctatgttc tgacttcagg atgggccagt ttatcatctg 3300

aacttatgca actctttggt ctgatctata acttcataag gaagtatgtt ctgagaatga 3360

aagaagatac agagtttgtc ccctcgttcc cctatcacac tgaagtacca aaagtattgt 3420

tgtttggact attgggattc acatgctctg tactggcgcc cttgatctta ccttttctgc 3480

tagtctactt cttcctgggt tatgtcgtat accgcaatca ggtgagcgag aaactagagt 3540

tggtgttata gtgttatact aataagtcca tagcagttgt tatgttgcat tctcttttct 3600

tagaacaact atgttgccat tatacatata ggtgaacatt gtttagtagc ttacacagtg 3660

ctatccgcag atataaatta ggacaattta agatgttctt gtcaacgatt aaatacttga 3720

tacaaagtat atttgctatt tttgcttggt atgctaatga tctgccatct gtatatgtcc 3780

tcagctgctc aatgtgtacc gcacgagata tgacaccggt ggtttgtatt ggccgattat 3840

acacaacaca gtgatattct ctctcgtgct cacccagatc atctgcctcg gtgtatttgg 3900

cctgaaagta tcaccagtag ctgcaggctt caccatacct ctcatcatct tcactcttct 3960

gttcaatcag tattgcagaa cccggcttct tccactgttc agcactttcc cagcacaggt 4020

ttgcattgct tccataattc tccaagctag gaaataacat actgatgaac atgaacctag 4080

tttttagtgc aaactcggaa ataactcagg ggcagaactt tattgccatt tcctgaccgg 4140

tgattattat ccctgttttg ttgaccgctg tgttccgcaa gtgcagaatt taatcgacat 4200

ggacagggag gacgagctgt caggaagaat ggaacatatt caccaacggc tccataccgc 4260

atattgccag ttccctgatt ccgaagatat acaactggag gagattcgga ccgtcgggaa 4320

tgatgaggac gtcggaggtt gtagctcagg cgggtccaac ggcaaaggta gcccgggtga 4380

gttcaacggc aaaggtagct cggacgagtc caacggcaaa ggtagcccgg gggagttcaa 4440

tggcaaaggt ggctcggacg agtccaacgg caaagagacc ctccaggaac agcagcagcc 4500

cagaagggat ctgtctcacc caacactcaa agggcttccc gttagccgtc tgcagaatgc 4560

cgtgagatgc gtcactttcc tcattaggct gcagaaaaga ggcttgtcat ga 4612

<210> 5

<211> 4280

<212> DNA

<213> 小麦(Triticum aestivum L.)

<400> 5

atgaagatca gcgcactcct gacctctgcg ggcatcaata tcgggctctc cgtgctcttt 60

ctgtcgctct attctgttct gaggaagcag ccagccaatg tcagggtcta cttcggccgc 120

aggatttccg cggagcatag tcggctccga gaggctttta ttttggagag gtttgttcca 180

tcaactggct ggatcgtcaa ggccctgagg tataccgagg aagagctctt ggcagctgct 240

gggctggatg ctgtcgcttt caatagaatg ctagtcttca ggtacaccaa atttcgtctt 300

tgatatccac gtatcccttt gtgctatcat tatgtttggt tagaaggcat caacatctga 360

ttgatgagct ttttagcatc cacgtgtgac ctgaatcaca aggagccgaa aacttgtaaa 420

tctggcagcc gcatataaaa tagaacttct tataatgctg ttatgcaaaa acgtagttcc 480

ctctctcttc ttttttggct attttctgtt atatcagttt aacctcagat tccaattttg 540

cacactgaat acattcgttt tctgcagcac acgtatcttt tccctagctg ccctgctgtg 600

tgtgtttgga attcttccac tgcattatca tggacaaaat atacagcatc ttcggattcc 660

ttatgaagat ttggatatct tcacaattgg aaatgtggaa aagcgatcaa gatggtgagc 720

tgaccaattt attttaatgt tatcataagg tgttttatca aggctgaaat tgtatatttg 780

tttgtggtat acggcatttt ttattggtat ttataatgtt atttgttttg cctctaactg 840

gacttgattt agttccgtgc acatctctac tcttcaaaac atgagaaaag aatatgcata 900

tgggagcgca gcatacatac ttctgtattc attttatttg ctggttgcat tgcaggcttt 960

gggttcattg tctagttctc tacataatat ctggagtagc ttgcattctc ctatatcttg 1020

taagtatttt tagaaactac ggagtattct acatcgtcat attttggaac gcatgtaatg 1080

ttgtttctgt acccaatctt tcaggagttt aggcacattg ctagactgag gctccttcac 1140

cttaaacgtg caacacccaa tccaggccaa tttactgtgc ttgttcgcgg aataccaaag 1200

accaagaaag aatcgtgcag tagtgccgtt gatgatttct tcaccaagta tcatgcgtca 1260

agttacctat tccaccaaat tgtttacaaa actgggaaag ttcagaagat aatggtaaga 1320

attctcatac aacgtttcta tttgtttgga gggtgggggt gggggagaat gcgacacaat 1380

cgctaaggta gtgtttttgt gatttaatgc tgtcagtctt aagacttact ccctctgtaa 1440

actaatataa gagcgtttag attactaaag tagtgatcta aacgctctta tattagctta 1500

cggagggagt actttccttg tggttcggta accactatgt catgcaagtg ataattcatg 1560

taccgcacat tcattatgat aatttttgtc ttctccatga atttgtgaaa tgatctcata 1620

tcattaaagt tagatttata cttctgcaaa ggtatttgtg atattgcaca ttctttttga 1680

tatgatatat tttgttttct ccctgaacta gtgaattgat ctcagatcgc ttgatttgga 1740

tttgtacctt ttatctgaat gttagtattt tgctttctgc ttttggagta aaactgtttc 1800

atatactgca gactggtgcg aagaaggcat gtagaaagtt gaaaaatttc acggacacca 1860

ctgtagatca gagctgcaaa gcaattacat accggtgttg tctttgtggt gcctcttcaa 1920

attctttcca attgttgccc actgatgaag ttgtaccgag caaaggaaaa gttgacctgg 1980

acgattctag cttgaacata gataatgagg ttttcttcgc aatcttgcaa acattgattt 2040

ttctgctaag ttcatcaaca agtctgtata gaatcagtaa cttcagttct tgaactattt 2100

acaggaatgt gcagctgctt ttgtattttt caaaactcgg tatggagcac ttgtcgcgtc 2160

agacgtactt cagacatcaa accctacgaa gtgggttact gatctagctc cagaaccaaa 2220

tgatgtgtat tggtcaaaca tttggcttcc ctttaagcag ctttggattc gacggatagc 2280

gacgctactt ggttctgttg tttttatgct cttatttctg gcaccggtga cgtttataaa 2340

tggtctatct cagcttgatc agttgcagaa gaggcttcct ttccttaacg ggatattgaa 2400

gcagtaagta cctatgttgc actggaactg acatctacta ctattgaact tcatcttctt 2460

atccactaac atgtagagct aacagcatgc aaaatcatgt atatctagac cgattattaa 2520

cgcattttag ttgagtgctt tgggattatt gtggtactac tgttcagctt agacatatgg 2580

catgtatttg tatttggctt ctatcgactc ctcttccatg tgcaggccac accacctggt 2640

ccaactaata actggatacc ttccgagtgt catactgcaa atatttctgt acaccgttgc 2700

gccaataatg atgctgtttt caacactaga agggcctata tctcacagcg aaaggaagag 2760

gagtgcgtgc tgtaaagtgc tgtacttctt gatttggaat gtattctttg ttaatgtggt 2820

atctggcact gtcttaaaac aattggattt tttctcaagc ccgaaggaca ttcctgtcca 2880

gctcgctaag gttatacctg ggcaggttag ttctatcttg ttgtcacgct gtagaaggat 2940

cttttttctt tttgataact ccagaagatc agtttgttta tggaaggtca atatattctg 3000

actgcaattc tgtaaatcca ttttgatttc aggcttcctt cttcatcacc tatgttctga 3060

cttcaggatg ggccagttta tcatctgaac ttatgcaact ctttggtctg atctataact 3120

tcataaggaa gtatgttctg agaatgaaag aagatacaga gtttgtcccc tcgttcccat 3180

atcacactga agtaccaaaa gttctgttgt ttggactatt gggattcaca tgctctgtac 3240

tggcgccctt gatcttacct tttctgctag tctacttctt cctgggctat gtcgtatacc 3300

gcaatcaggt gagaaactct agatggatac tgagaagtcc atggcagtat tctgtttttg 3360

tagcacaact atgttgccct taatggtgaa ttttgttgtt ttgggacgga ggaagtagct 3420

tacagtgcta tcctcagata taaagtagga aaatttgaga tgttattgcc gacgattaaa 3480

tacttgatac acatcttgtt cggcatatgc taatgatctg ccatttgtat tatgttttca 3540

gctgctcaat gtgtaccgca cgagatacga caccggtggt ttgtattggc cgattataca 3600

caacacagtg atattttctc tcgtgctcac ccagatcatc tgcctcggca tatttgggct 3660

gaaagtatca ccagtagctg caggcttcac catacctctc atcatcttca ctcttctgtt 3720

caatcagtac tgcagaaccc ggcttcttcc actgttcagc actttcccag cacaggtttg 3780

tattgcctca ataatactcc aagctagtag taggacataa cgtgttgatg aacatgaacc 3840

taggtgcacc acaaactatg gaataatagc cgcccagggg cagaacttta ttgccatttg 3900

ctgacgggtg agttgttatg accgtgcaga atttaatcga catggacagg gaggacgagg 3960

tgtcgggaag aatggaacat attcaccacg ggctccacac cgcgtattgc cagttccctg 4020

accccgaaga agatttacaa ctggaggaga ttcggaccgt cgggaacgat gaggacggcg 4080

gaggttgtag ctcgggcggg tccaacggca aaggtagccc gggcgagccc aacggcaaag 4140

agaccctcga ggaacagcag cagcccagga gggacctgtc tcacccgacg ctcaaagggc 4200

tcccggtcag ccgtctgcag aatgcggtga gatgcgtcac tttcctcatc aggctgcaga 4260

aaagaggcct gtggtcatga 4280

<210> 6

<211> 4322

<212> DNA

<213> 小麦(Triticum aestivum L.)

<400> 6

atgaagatca gcgcactcct gacctctgcg ggcatcaata ttgggctctg cgtgctcttt 60

ctgtcgctct attctgttct gaggaagcag ccagccaatg tcagggtcta cttcggccgg 120

aggatttccg aggagcatag tcggctccga gaggctttta ttttggagag gtttgttcca 180

tcaactggct ggattgtcaa ggccctgagg tataccgagg aagaggtctt ggcagctgct 240

gggctggatg ctgtcgcttt caatagaatg ctagtcttca ggtacaccaa atttcgtctt 300

tgatatccat gtatcccttt gtgctattat catgttggtt agaaggcatc accatatgat 360

tgatgagctt tttagcatcc acgtgtgacc tgaatcagaa ggagccgaaa actcgtaaat 420

ctggcagctg catataaaat agaacttctt ttaacgctgt tatgcgaaat cgtagttccc 480

tctctctttt tttgtgtggc tattttctgt tatatcagtt taacctcaga ttccaatttt 540

gcacactgaa tacattcgtt ttctgcagca tacgtatctt ttccctagct gctctgctgt 600

gtgtgtttgg aattcttcca ctgcattatt atggacaaaa tatacagcat cttcggattc 660

cttatgaaga tctggatatc ttcacaattg gaaatgtgga aaagcgatca agatggtgag 720

ctgaccaatt tattttaatg ttatcataag gtgtttttta gactatcata aggtggtttt 780

gtctaggcta tcataaggtt gttttatcaa ggctgaaatt gtatatttgt ttgtggtatg 840

ctgcattttt tattggtatt tataatgtta tttgttttgc ctctaactgg actcgattta 900

gttccgtgca cgtctctact cttcaaaaca tgagaaaaga atatgcatat gggagcgcaa 960

catacatact tctgtattca ttttatttgc tggttgcatt gcaggctttg ggttcattgt 1020

ctagttctct acatactatc tggagtagct tgcattctcc tatatcttgt aagtattttt 1080

agaaactacg gagtattcta catcctcata ctttggaacg catgtaatgt tgtttctgta 1140

cccaatcttt caggagttta ggcacattgc tagactgagg ctccttcacc ttaaacgtgc 1200

aacacccaat ccaggccaat ttactgtgct tgttcgcgga ataccaaaga caaagaaaga 1260

atcgtgcagt agtgctgttg atgatttctt caccaagtat catgcgtcaa gttacctatt 1320

ccaccaaatt gtttacaaaa ctggcaaagt tcagaagata atggtaagaa ttctcataca 1380

acgtttctat ttgtttggag ggtgggggtg ggggtgggga gaatgcgaca caatcgctaa 1440

ggtagtattt ttgtgattta atgctgtcag tcttaagact tactttcctt gtggttcggt 1500

aaccactatg tcatgcaagt gataattcat gtaccgcaca ttcattatga taatttttgt 1560

cttctccatg aatttgtgaa atgatctcat atcatttaag ttagatttat aatttttatc 1620

tgcaaaggta tttgtcatat tgcacattct ttttcatatg atatattttg ttttctccct 1680

gaactagtga attgatctca gattcgcttg atttggattt gaatttatct gaatgttagt 1740

attttgcttt ctgcttttgg agtaaaactg tttcatatac tgcagactgg tgcgaagaag 1800

gcatgtagaa agttgaaaaa tttcacggac accactgtag atcagagctg caaagcaatt 1860

acataccggt gttgtctttg tggtgcctct tcaaattctt tccagttgtt gcccactgat 1920

gaagttgtac cgagcagagg aaaagttgac ctggacgatt ctagcttgaa catagataat 1980

gaggttttct tcgcaatttt gcaaacattg atttttctgc taagttcatc aacaagtctg 2040

tatagaatca gtaacttcag ttcttgaact atttacagga atgtgcagct gcttttgtat 2100

ttttcaaaac acggtatgga gcacttgtcg cgtcagacgt acttcagaca tcaaacccta 2160

cgaagtgggt tactgatcta gctccagaac caaatgatgt gtattggtca aacatttggc 2220

ttccctataa gcagctttgg attcgacgga tagcgacgct acttggttct attgttttta 2280

tgctcttatt tctggcaccg gtgacattta taaatggtct atctcagctt gatcagttgc 2340

agaagaggct tcctttcctt aacgggatat tgaagcagta agtacctatg ttgcactgga 2400

actgatatct actactccct ctgtaaatta atataagagc atttagatca ctaaaatagt 2460

gatctaaacg ctcttatatt agtttacgga gggagtacta ttgaacttca tcttcttatc 2520

cactaacatg tagagctaac agcatgcaaa atcatatata tctagaccga ttattaacac 2580

attttagttg agtgctttgg gattattgtg gtactactgt tcagcttaga catatggcat 2640

gtatttgtat ttggcttcta ttgactcctc ttccatgtgc aggccacacc acctggtcca 2700

gctaataact ggataccttc cgagtgtcat actgcaaata tttctataca ccgttgcgcc 2760

aataatgatg ctattttcaa cactagaagg gcctatatct cacagcgaaa ggaagaggag 2820

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tggcactgtc ttaaaacaat tggatttctt ttcaagcccg aaggacattc ctgtccagct 2940

cgctaaggtt atacctgggc aggttagttc tatcttgttg tcacgctgta gaaggatctt 3000

ttttcttttt gaaactccag aagatcattt tgtttatgga aggtcaatat attctgactg 3060

caattctgta aatccatttt gatttcaggc ttccttcttc atcacctatg ttcttacttc 3120

aggatgggcc agtttatcat ctgaactcat gcaactcttt ggtctgatct ataacttcat 3180

aaggaagtat gttctgagaa tgaaagaaga tacagagttt gtcccctcgt tcccctatca 3240

cactgaagta ccaaaagttt tgttgtttgg actattggga ttcacatgct ctgtactggc 3300

gcccttgatc ttaccttttc tgctagtcta cttcttcctg ggttatgtcg tataccgcaa 3360

tcaggtgaga aactctagat ggatactgag aagtccatgg catttttttt gttgcattct 3420

gttttcgtag cacaaccatg ttgcccttaa tggtgaactt cgttgtttag tactccctcc 3480

gtcccaaaat aagtgacttg gttttagttc aaaatacttg atacaaagta tatttgttat 3540

tttgtttggt atgctaatga tctgccattt gtatatgttt tcagctgctc aatgtgtacc 3600

gcacgagata tgacaccggt ggtttgtatt ggccgattat acacaacaca gtgatattct 3660

ctctcgtgct cacccagatc atctgcctcg gtgtatttgg cctgaaagta tcaccagtag 3720

ctgcaggctt caccatacct ctcatcatct tcactcttct gttcaatcag tattgcagaa 3780

cccggcttct tccactgttc agcactttcc cagcacaggt ttgtattgct tcaataatac 3840

tccaagctag caggaaataa cgtattgatg aaaatgaacc taggcgcacc acaaactagg 3900

gaatagccca ggagcagaat ttgctgaccg ttgagttgtt atccctgttt tgttgatgct 3960

gtgttccgac cgtgcagaat ttaatcgaca tggacaggga ggacgagctg tcaggaagaa 4020

tggaacatat tcaccacggg ctccataccg cgtattgcca gttccctgaa tctgaagata 4080

tacaactgga ggaaattcgg accgtcggga atgatgagga cggcggaggt tgtagctcgg 4140

gcgggtccaa cggcaaaggt tgctcggacg agcccagcgg caaagagacc ctccaggaac 4200

agcagcagcc cagaagggat ctgtctcacc cgacactcaa agggctcccc gttagccgtc 4260

tgcagactgc cgtgagatgc gtcactttcc tcattcggct gcagaaaaga ggcttgtcat 4320

ga 4322

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 7

gtttggaatg cgcatacact 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 8

tcgcaatcaa ccaaagatgt 20

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 9

gacagaccca gtgcatagaa 20

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 10

acaagcacag taaattggcc 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 11

caaagacaac accggtatgt 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 12

cgcagcatac atacttctgt 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 13

tttgcctcta actggactcg 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 14

cagtggtgtc cgtgaaattt 20

<210> 15

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 15

gtcaaacatt tggcttccct at 22

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 16

actgcgtaac aacaagatgg 20

<210> 17

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 17

gtcaaacatt tggcttccct ac 22

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 18

actgcgtaac aacaagatgg 20

<210> 19

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 19

gcaaaggtag ctcggacga 19

<210> 20

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 20

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<210> 21

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 21

gcaaaggtag ctcggatgg 19

<210> 22

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial)

<400> 22

cgctgtacat ttacatgagc g 21

<210> 23

<211> 804

<212> PRT

<213> 小麦(Triticum aestivum L.)

<400> 23

Met Lys Ile Ser Ala Leu Leu Thr Ser Ala Gly Ile Asn Ile Gly Leu

1 5 10 15

Cys Val Leu Phe Leu Ser Leu Tyr Ser Val Leu Arg Lys Gln Pro Ala

20 25 30

Asn Val Arg Val Tyr Phe Gly Arg Arg Ile Ser Glu Glu His Ser Arg

35 40 45

Leu Arg Glu Ala Phe Ile Leu Glu Arg Phe Val Pro Ser Thr Gly Trp

50 55 60

Ile Val Lys Ala Leu Arg Tyr Thr Glu Glu Glu Leu Leu Ala Ala Ala

65 70 75 80

Gly Leu Asp Ala Val Ala Phe Asn Arg Met Leu Val Phe Ser Ile Arg

85 90 95

Ile Phe Ser Leu Ala Ala Leu Leu Cys Val Phe Gly Ile Leu Pro Leu

100 105 110

His Tyr Tyr Gly Lys Asn Ile Leu His Ser Arg Ile Pro Ser Glu Asp

115 120 125

Leu Asp Ile Phe Thr Ile Gly Asn Val Glu Val Arg Ser Arg Trp Leu

130 135 140

Trp Val His Cys Leu Val Leu Tyr Ile Ile Ser Gly Val Ala Cys Ile

145 150 155 160

Leu Leu Tyr Leu Glu Tyr Arg His Ile Ala Arg Leu Arg Leu Leu His

165 170 175

Leu Lys Arg Ala Thr Pro Asn Pro Gly Gln Phe Thr Val Leu Val Arg

180 185 190

Gly Ile Pro Lys Ile Thr Lys Glu Ser Cys Ser Ser Ala Val Asp Asp

195 200 205

Phe Phe Thr Lys Tyr His Gly Ser Ser Tyr Leu Phe His Gln Val Val

210 215 220

Tyr Lys Val Gly Lys Val Gln Lys Ile Met Thr Gly Ala Lys Lys Ala

225 230 235 240

Cys Arg Lys Leu Lys His Phe Thr Asp Thr Thr Val Asp Gln Ser Tyr

245 250 255

Lys Ala Ile Thr Tyr Arg Cys Cys Leu Cys Gly Ala Ser Ser Asn Ser

260 265 270

Phe His Leu Leu Pro Thr Asp Glu Val Val Pro Ser Arg Gly Lys Ala

275 280 285

Asp Leu Asp Asp Ser Ser Leu Asn Met Asp Asn Glu Glu Cys Ala Ala

290 295 300

Ala Phe Val Phe Phe Lys Thr Arg Tyr Gly Ala Leu Val Ala Ser Asp

305 310 315 320

Val Leu Gln Thr Ser Asn Pro Thr Lys Trp Val Thr Asp Pro Ala Pro

325 330 335

Glu Pro Asn Asp Val Tyr Trp Ser Asn Ile Trp Leu Pro Tyr Lys Gln

340 345 350

Leu Trp Ile Arg Arg Ile Ala Thr Leu Leu Gly Ser Ile Val Phe Met

355 360 365

Leu Leu Phe Leu Ala Pro Val Thr Phe Ile Asn Gly Leu Ser Gln Leu

370 375 380

Asp Gln Leu Gln Lys Arg Leu Pro Phe Leu Asn Gly Ile Leu Lys Gln

385 390 395 400

Pro His His Met Val Gln Leu Ile Thr Gly Tyr Leu Pro Ser Val Ile

405 410 415

Leu Gln Ile Phe Leu Tyr Ser Val Ala Pro Ile Met Met Leu Phe Ser

420 425 430

Thr Leu Glu Gly Pro Val Ser His Ser Glu Arg Lys Arg Ser Ala Cys

435 440 445

Cys Lys Val Leu Tyr Phe Leu Ile Trp Asn Val Phe Phe Val Asn Val

450 455 460

Val Ser Gly Thr Val Leu Lys Gln Leu Asp Phe Phe Ser Ser Pro Lys

465 470 475 480

Asp Ile Pro Val Gln Leu Ala Lys Val Ile Pro Gly Gln Ala Ser Phe

485 490 495

Phe Ile Thr Tyr Val Leu Thr Ser Gly Trp Ala Ser Leu Ser Ser Glu

500 505 510

Leu Met Gln Leu Phe Gly Leu Ile Tyr Asn Phe Ile Arg Lys Tyr Val

515 520 525

Leu Arg Met Lys Glu Asp Thr Glu Phe Val Pro Ser Phe Pro Tyr His

530 535 540

Thr Glu Val Pro Lys Ile Leu Leu Phe Gly Leu Leu Gly Phe Thr Cys

545 550 555 560

Ser Val Leu Ala Pro Leu Ile Leu Pro Phe Leu Leu Val Tyr Phe Phe

565 570 575

Leu Gly Tyr Val Val Tyr Arg Asn Gln Leu Leu Asn Val Tyr Arg Thr

580 585 590

Arg Tyr Asp Thr Gly Gly Leu Tyr Trp Pro Ile Ile His Asn Thr Val

595 600 605

Ile Phe Ser Leu Val Leu Thr Gln Ile Ile Cys Leu Gly Val Phe Gly

610 615 620

Leu Lys Val Ser Pro Val Ala Ala Gly Phe Thr Ile Pro Leu Ile Ile

625 630 635 640

Phe Thr Leu Leu Phe Asn Gln Tyr Cys Arg Thr Arg Leu Leu Pro Leu

645 650 655

Phe Ser Thr Phe Pro Ala Gln Asn Leu Ile Asp Met Asp Arg Glu Asp

660 665 670

Glu Leu Ser Gly Arg Met Glu His Ile His Gln Arg Leu His Thr Ala

675 680 685

Tyr Cys Gln Phe Pro Asp Ser Glu Asp Ile Gln Leu Glu Glu Ile Arg

690 695 700

Thr Val Gly Asn Asp Glu Asp Val Gly Gly Cys Ser Ser Gly Gly Ser

705 710 715 720

Asn Gly Lys Gly Ser Pro Gly Glu Phe Asn Gly Lys Gly Ser Ser Asp

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Glu Ser Asn Gly Lys Gly Ser Pro Gly Glu Phe Asn Gly Lys Gly Gly

740 745 750

Ser Asp Glu Ser Asn Gly Lys Glu Thr Leu Gln Glu Gln Gln Gln Pro

755 760 765

Arg Arg Asp Leu Ser His Pro Thr Leu Lys Gly Leu Pro Val Ser Arg

770 775 780

Leu Gln Asn Ala Val Arg Cys Val Thr Phe Leu Ile Arg Leu Gln Lys

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Arg Gly Leu Ser

<210> 24

<211> 779

<212> PRT

<213> 小麦(Triticum aestivum L.)

<400> 24

Met Lys Ile Ser Ala Leu Leu Thr Ser Ala Gly Ile Asn Ile Gly Leu

1 5 10 15

Ser Val Leu Phe Leu Ser Leu Tyr Ser Val Leu Arg Lys Gln Pro Ala

20 25 30

Asn Val Arg Val Tyr Phe Gly Arg Arg Ile Ser Ala Glu His Ser Arg

35 40 45

Leu Arg Glu Ala Phe Ile Leu Glu Arg Phe Val Pro Ser Thr Gly Trp

50 55 60

Ile Val Lys Ala Leu Arg Tyr Thr Glu Glu Glu Leu Leu Ala Ala Ala

65 70 75 80

Gly Leu Asp Ala Val Ala Phe Asn Arg Met Leu Val Phe Ser Thr Arg

85 90 95

Ile Phe Ser Leu Ala Ala Leu Leu Cys Val Phe Gly Ile Leu Pro Leu

100 105 110

His Tyr His Gly Gln Asn Ile Gln His Leu Arg Ile Pro Tyr Glu Asp

115 120 125

Leu Asp Ile Phe Thr Ile Gly Asn Val Glu Lys Arg Ser Arg Trp Leu

130 135 140

Trp Val His Cys Leu Val Leu Tyr Ile Ile Ser Gly Val Ala Cys Ile

145 150 155 160

Leu Leu Tyr Leu Glu Phe Arg His Ile Ala Arg Leu Arg Leu Leu His

165 170 175

Leu Lys Arg Ala Thr Pro Asn Pro Gly Gln Phe Thr Val Leu Val Arg

180 185 190

Gly Ile Pro Lys Thr Lys Lys Glu Ser Cys Ser Ser Ala Val Asp Asp

195 200 205

Phe Phe Thr Lys Tyr His Ala Ser Ser Tyr Leu Phe His Gln Ile Val

210 215 220

Tyr Lys Thr Gly Lys Val Gln Lys Ile Met Thr Gly Ala Lys Lys Ala

225 230 235 240

Cys Arg Lys Leu Lys Asn Phe Thr Asp Thr Thr Val Asp Gln Ser Cys

245 250 255

Lys Ala Ile Thr Tyr Arg Cys Cys Leu Cys Gly Ala Ser Ser Asn Ser

260 265 270

Phe Gln Leu Leu Pro Thr Asp Glu Val Val Pro Ser Lys Gly Lys Val

275 280 285

Asp Leu Asp Asp Ser Ser Leu Asn Ile Asp Asn Glu Glu Cys Ala Ala

290 295 300

Ala Phe Val Phe Phe Lys Thr Arg Tyr Gly Ala Leu Val Ala Ser Asp

305 310 315 320

Val Leu Gln Thr Ser Asn Pro Thr Lys Trp Val Thr Asp Leu Ala Pro

325 330 335

Glu Pro Asn Asp Val Tyr Trp Ser Asn Ile Trp Leu Pro Phe Lys Gln

340 345 350

Leu Trp Ile Arg Arg Ile Ala Thr Leu Leu Gly Ser Val Val Phe Met

355 360 365

Leu Leu Phe Leu Ala Pro Val Thr Phe Ile Asn Gly Leu Ser Gln Leu

370 375 380

Asp Gln Leu Gln Lys Arg Leu Pro Phe Leu Asn Gly Ile Leu Lys Gln

385 390 395 400

Pro His His Leu Val Gln Leu Ile Thr Gly Tyr Leu Pro Ser Val Ile

405 410 415

Leu Gln Ile Phe Leu Tyr Thr Val Ala Pro Ile Met Met Leu Phe Ser

420 425 430

Thr Leu Glu Gly Pro Ile Ser His Ser Glu Arg Lys Arg Ser Ala Cys

435 440 445

Cys Lys Val Leu Tyr Phe Leu Ile Trp Asn Val Phe Phe Val Asn Val

450 455 460

Val Ser Gly Thr Val Leu Lys Gln Leu Asp Phe Phe Ser Ser Pro Lys

465 470 475 480

Asp Ile Pro Val Gln Leu Ala Lys Val Ile Pro Gly Gln Ala Ser Phe

485 490 495

Phe Ile Thr Tyr Val Leu Thr Ser Gly Trp Ala Ser Leu Ser Ser Glu

500 505 510

Leu Met Gln Leu Phe Gly Leu Ile Tyr Asn Phe Ile Arg Lys Tyr Val

515 520 525

Leu Arg Met Lys Glu Asp Thr Glu Phe Val Pro Ser Phe Pro Tyr His

530 535 540

Thr Glu Val Pro Lys Val Leu Leu Phe Gly Leu Leu Gly Phe Thr Cys

545 550 555 560

Ser Val Leu Ala Pro Leu Ile Leu Pro Phe Leu Leu Val Tyr Phe Phe

565 570 575

Leu Gly Tyr Val Val Tyr Arg Asn Gln Leu Leu Asn Val Tyr Arg Thr

580 585 590

Arg Tyr Asp Thr Gly Gly Leu Tyr Trp Pro Ile Ile His Asn Thr Val

595 600 605

Ile Phe Ser Leu Val Leu Thr Gln Ile Ile Cys Leu Gly Ile Phe Gly

610 615 620

Leu Lys Val Ser Pro Val Ala Ala Gly Phe Thr Ile Pro Leu Ile Ile

625 630 635 640

Phe Thr Leu Leu Phe Asn Gln Tyr Cys Arg Thr Arg Leu Leu Pro Leu

645 650 655

Phe Ser Thr Phe Pro Ala Gln Asn Leu Ile Asp Met Asp Arg Glu Asp

660 665 670

Glu Val Ser Gly Arg Met Glu His Ile His His Gly Leu His Thr Ala

675 680 685

Tyr Cys Gln Phe Pro Asp Pro Glu Glu Asp Leu Gln Leu Glu Glu Ile

690 695 700

Arg Thr Val Gly Asn Asp Glu Asp Gly Gly Gly Cys Ser Ser Gly Gly

705 710 715 720

Ser Asn Gly Lys Gly Ser Pro Gly Glu Pro Asn Gly Lys Glu Thr Leu

725 730 735

Glu Glu Gln Gln Gln Pro Arg Arg Asp Leu Ser His Pro Thr Leu Lys

740 745 750

Gly Leu Pro Val Ser Arg Leu Gln Asn Ala Val Arg Cys Val Thr Phe

755 760 765

Leu Ile Arg Leu Gln Lys Arg Gly Leu Trp Ser

770 775

<210> 25

<211> 777

<212> PRT

<213> 小麦(Triticum aestivum L.)

<400> 25

Met Lys Ile Ser Ala Leu Leu Thr Ser Ala Gly Ile Asn Ile Gly Leu

1 5 10 15

Cys Val Leu Phe Leu Ser Leu Tyr Ser Val Leu Arg Lys Gln Pro Ala

20 25 30

Asn Val Arg Val Tyr Phe Gly Arg Arg Ile Ser Glu Glu His Ser Arg

35 40 45

Leu Arg Glu Ala Phe Ile Leu Glu Arg Phe Val Pro Ser Thr Gly Trp

50 55 60

Ile Val Lys Ala Leu Arg Tyr Thr Glu Glu Glu Val Leu Ala Ala Ala

65 70 75 80

Gly Leu Asp Ala Val Ala Phe Asn Arg Met Leu Val Phe Ser Ile Arg

85 90 95

Ile Phe Ser Leu Ala Ala Leu Leu Cys Val Phe Gly Ile Leu Pro Leu

100 105 110

His Tyr Tyr Gly Gln Asn Ile Gln His Leu Arg Ile Pro Tyr Glu Asp

115 120 125

Leu Asp Ile Phe Thr Ile Gly Asn Val Glu Lys Arg Ser Arg Trp Leu

130 135 140

Trp Val His Cys Leu Val Leu Tyr Ile Leu Ser Gly Val Ala Cys Ile

145 150 155 160

Leu Leu Tyr Leu Glu Phe Arg His Ile Ala Arg Leu Arg Leu Leu His

165 170 175

Leu Lys Arg Ala Thr Pro Asn Pro Gly Gln Phe Thr Val Leu Val Arg

180 185 190

Gly Ile Pro Lys Thr Lys Lys Glu Ser Cys Ser Ser Ala Val Asp Asp

195 200 205

Phe Phe Thr Lys Tyr His Ala Ser Ser Tyr Leu Phe His Gln Ile Val

210 215 220

Tyr Lys Thr Gly Lys Val Gln Lys Ile Met Thr Gly Ala Lys Lys Ala

225 230 235 240

Cys Arg Lys Leu Lys Asn Phe Thr Asp Thr Thr Val Asp Gln Ser Cys

245 250 255

Lys Ala Ile Thr Tyr Arg Cys Cys Leu Cys Gly Ala Ser Ser Asn Ser

260 265 270

Phe Gln Leu Leu Pro Thr Asp Glu Val Val Pro Ser Arg Gly Lys Val

275 280 285

Asp Leu Asp Asp Ser Ser Leu Asn Ile Asp Asn Glu Glu Cys Ala Ala

290 295 300

Ala Phe Val Phe Phe Lys Thr Arg Tyr Gly Ala Leu Val Ala Ser Asp

305 310 315 320

Val Leu Gln Thr Ser Asn Pro Thr Lys Trp Val Thr Asp Leu Ala Pro

325 330 335

Glu Pro Asn Asp Val Tyr Trp Ser Asn Ile Trp Leu Pro Tyr Lys Gln

340 345 350

Leu Trp Ile Arg Arg Ile Ala Thr Leu Leu Gly Ser Ile Val Phe Met

355 360 365

Leu Leu Phe Leu Ala Pro Val Thr Phe Ile Asn Gly Leu Ser Gln Leu

370 375 380

Asp Gln Leu Gln Lys Arg Leu Pro Phe Leu Asn Gly Ile Leu Lys Gln

385 390 395 400

Pro His His Leu Val Gln Leu Ile Thr Gly Tyr Leu Pro Ser Val Ile

405 410 415

Leu Gln Ile Phe Leu Tyr Thr Val Ala Pro Ile Met Met Leu Phe Ser

420 425 430

Thr Leu Glu Gly Pro Ile Ser His Ser Glu Arg Lys Arg Ser Ala Cys

435 440 445

Cys Lys Val Leu Tyr Phe Leu Ile Trp Asn Val Phe Phe Val Asn Val

450 455 460

Val Ser Gly Thr Val Leu Lys Gln Leu Asp Phe Phe Ser Ser Pro Lys

465 470 475 480

Asp Ile Pro Val Gln Leu Ala Lys Val Ile Pro Gly Gln Ala Ser Phe

485 490 495

Phe Ile Thr Tyr Val Leu Thr Ser Gly Trp Ala Ser Leu Ser Ser Glu

500 505 510

Leu Met Gln Leu Phe Gly Leu Ile Tyr Asn Phe Ile Arg Lys Tyr Val

515 520 525

Leu Arg Met Lys Glu Asp Thr Glu Phe Val Pro Ser Phe Pro Tyr His

530 535 540

Thr Glu Val Pro Lys Val Leu Leu Phe Gly Leu Leu Gly Phe Thr Cys

545 550 555 560

Ser Val Leu Ala Pro Leu Ile Leu Pro Phe Leu Leu Val Tyr Phe Phe

565 570 575

Leu Gly Tyr Val Val Tyr Arg Asn Gln Leu Leu Asn Val Tyr Arg Thr

580 585 590

Arg Tyr Asp Thr Gly Gly Leu Tyr Trp Pro Ile Ile His Asn Thr Val

595 600 605

Ile Phe Ser Leu Val Leu Thr Gln Ile Ile Cys Leu Gly Val Phe Gly

610 615 620

Leu Lys Val Ser Pro Val Ala Ala Gly Phe Thr Ile Pro Leu Ile Ile

625 630 635 640

Phe Thr Leu Leu Phe Asn Gln Tyr Cys Arg Thr Arg Leu Leu Pro Leu

645 650 655

Phe Ser Thr Phe Pro Ala Gln Asn Leu Ile Asp Met Asp Arg Glu Asp

660 665 670

Glu Leu Ser Gly Arg Met Glu His Ile His His Gly Leu His Thr Ala

675 680 685

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690 695 700

Thr Val Gly Asn Asp Glu Asp Gly Gly Gly Cys Ser Ser Gly Gly Ser

705 710 715 720

Asn Gly Lys Gly Cys Ser Asp Glu Pro Ser Gly Lys Glu Thr Leu Gln

725 730 735

Glu Gln Gln Gln Pro Arg Arg Asp Leu Ser His Pro Thr Leu Lys Gly

740 745 750

Leu Pro Val Ser Arg Leu Gln Thr Ala Val Arg Cys Val Thr Phe Leu

755 760 765

Ile Arg Leu Gln Lys Arg Gly Leu Ser

770 775

Claims

1.一种与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1，其特征在于，所述基因TaOSCA2.1为TaOSCA2.1-5A、TaOSCA2.1-5B或TaOSCA2.1-5D，所述TaOSCA2.1-5A的cDNA核苷酸序列如SEQID NO：1所示，所述TaOSCA2.1-5B的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述TaOSCA2.1- 5D的cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

2.根据权利要求1所述的与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1，其特征在于：所述TaOSCA2.1-5A的gDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述TaOSCA2.1-5B的gDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述TaOSCA2.1-5D的gDNA核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

3.根据权利要求1所述的与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1-5A的分子标记，其特征在于：所述分子标记为TaOSCA2.1-5A-C/T和TaOSCA2.1-5A-A/G，其中TaOSCA2.1-5A-T的引物正向核苷酸序列如SEQ ID NO：15所示，反向核苷酸序列如SEQ ID NO：16所示，TaOSCA2.1-5A-C的引物正向核苷酸序列如SEQ ID NO：17所示，反向核苷酸序列如SEQ ID NO：18所示；TaOSCA2.1-5A-A的引物正向核苷酸序列如SEQ ID NO：19所示，反向核苷酸序列如SEQ IDNO：20所示，TaOSCA2.1-5A-G的引物正向核苷酸序列如SEQ ID NO：21所示，反向核苷酸序列如SEQ ID NO：22所示。

4.如权利要求3所述的与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1-5A的分子标记在检测小麦品种株高上的应用。

5.根据权利要4所述的与小麦株高相关的基因TaOSCA2.1-5A的分子标记在检测小麦品种株高上的应用，其特征在于，包含有如下步骤：

a．用TaOSCA2.1-5A-C/T的标记引物和TaOSCA2.1-5A-A/G的标记引物对小麦品种的DNA分别进行PCR扩增，其PCR扩增体系为20 μl，包含2×Accurate Taq MIX 10 μl，ddH₂O 7μl，正反向引物各0.5 μl，gDNA 1.0 μl，dNTP 2 μl；扩增条件为94℃预变性3 min；94℃变性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸1 min，30个循环；72℃延伸5 min；16℃保存；

b．如果利用TaOSCA2.1-5A-C/T标记检测2423位点的SNP为T，且利用TaOSCA2.1-5A-G/A标记检测4407位点的SNP为G，则小麦品种株高表现为高秆;如果利用TaOSCA2.1-5A-C/T标记检测2423位点的SNP为C，且利用TaOSCA2.1-5A-G/A标记检测4407位点的SNP为A，则小麦品种株高表现为高秆；如果利用TaOSCA2.1-5A-C/T标记检测2423位点的SNP为T，且利用TaOSCA2.1-5A-G/A标记检测4407位点的SNP为A，则小麦品种株高表现为矮秆。