CN112080431A - 培养液及其制备方法、红托竹荪液体菌种发酵方法、应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及食用菌种生产技术领域，具体公开了一种培养液及其制备方法、红托竹荪液体菌种发酵方法、应用，所述培养液包括以下的原料：木屑、麸皮、玉米粉、豆粕、竹叶、蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白。本发明提供的培养液可用于菌种发酵以制备菌种生产周期短的红托竹荪液体菌种，通过多种原料的合理配伍，可以很大程度上缩短红托竹荪菌种的生产周期；而提供的制备方法适合工业化生产，解决了现有用于红托竹荪栽培的菌种主要是固体菌种，存在菌种生产周期长的问题；同时，本发明提供的红托竹荪液体菌种发酵方法采用所述培养液，可以得到活力极强的优质液体菌种，可以很大程度上缩短菌种生产周期，降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及食用菌种生产技术领域，具体是一种培养液及其制备方法、红托竹荪液体菌种发酵方法、应用。
背景技术
红托竹荪是中国食用菌中的珍品，享有真菌“皇后”之誉。虽然红托竹荪由野生到逐步训化为人工栽培已有三十多年，但是，由于现有用于红托竹荪的栽培的菌种主要是固体菌种，导致红托竹荪栽培的菌种存在成活率低，菌丝生长缓慢，菌龄时间长等问题。
因此，以上的技术方案在实际使用时还存在以下问题：由于现有用于红托竹荪栽培的菌种主要是固体菌种，菌龄时间长，故存在杂菌感染机率大、成活率低、成品率低、易老化等菌种质量问题，制约了红托竹荪的发展，设计一种培养液，由于可以在很大程度上缩短菌种生产周期，成为目前亟需解决的问题。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种培养液，以解决上述背景技术中提出的现有用于红托竹荪栽培的菌种主要是固体菌种，存在菌种生产周期长的问题。
为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：
一种培养液，可用于菌种发酵以制备菌种生产周期短的红托竹荪液体菌种，所述培养液包括以下按照重量份的原料：木屑3.5份-4.5份、麸皮3.0份-3.8份、玉米粉0.5份-0.7份、豆粕0.3份-0.4份、竹叶0.5份-0.7份，以及适量的营养组分和适量的水；其中，所述营养组分包括蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白。
作为本发明进一步的方案：所述培养液按照质量千分比计算包括：木屑3.5‰-4.5‰、麸皮3.0‰-3.8‰、玉米粉0.5‰-0.7‰、豆粕0.3‰-0.4‰、竹叶0.5‰-0.6‰，以及适量的营养组分和适量的水。
作为本发明再进一步的方案：所述营养组分按照重量份计包括：蔗糖1.4份-2份、蛋白胨0.16份-0.3份、磷酸二氢钾0.07份-0.15份、菌丝蛋白0.16份-0.3份。
作为本发明再进一步的方案：所述营养组分按照质量千分比计算包括：蔗糖1.8‰-2‰、蛋白胨0.2‰-0.3‰、磷酸二氢钾0.08‰-0.15‰、菌丝蛋白0.2‰-0.3‰。
本发明实施例的另一目的在于提供一种培养液的制备方法，所述的培养液的制备方法，包括以下步骤：
1）按照比例称取木屑、麸皮、玉米粉、豆粕与竹叶，混合均匀，得到混合料；
2）将所述混合料中加入水进行第一次浸提，过滤，得到滤渣与第一浸提液；
3）将所述滤渣中加入水进行第二次浸提，过滤，得到第二浸提液；
4）将所述第一浸提液与所述第二浸提液进行合并，得到提取液（浓缩液）；
5）将所述提取液中加入蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白，搅拌混合均匀，调节pH值至5.6-5.8，得到所述培养液。
作为本发明再进一步的方案：在所述的培养液的制备方法中，所述第一次浸提的温度是90℃-100℃，浸提时间为30-40分钟。
作为本发明再进一步的方案：在所述的培养液的制备方法中，所述第一次浸提时的加水量是所述混合料重量的5-70倍。
作为本发明再进一步的方案：在所述的培养液的制备方法中，所述第二次浸提的温度是90℃-100℃，浸提时间为30-40分钟。
作为本发明再进一步的方案：在所述的培养液的制备方法中，所述第二次浸提时的加水量是所述滤渣重量的20-30倍。
作为本发明再进一步的方案：在所述的培养液的制备方法中，将所述提取液中加入蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白即是调配步骤，具体加入比例是将所述提取液中按照质量千分比计算加入：蔗糖1.8‰-2‰、蛋白胨0.2‰-0.3‰、磷酸二氢钾0.08‰-0.15‰、菌丝蛋白0.2‰-0.3‰（即以所述提取液计作单位1，例如，蔗糖1.8‰-2‰是加入1.8‰-2‰的提取液重量的蔗糖）。
本发明实施例的另一目的在于提供一种采用上述的培养液的制备方法制备得到的培养液。
本发明实施例的另一目的在于提供一种红托竹荪液体菌种发酵方法，所述的红托竹荪液体菌种发酵方法采用上述的培养液。
作为本发明再进一步的方案：所述的红托竹荪液体菌种发酵方法包括以下步骤：将所述培养液装入容器后进行灭菌、冷却，接种待培养的红托竹荪菌种，发酵培养，得到红托竹荪液体菌种。
作为本发明再进一步的方案：所述装入容器具体是装罐过程，所述的装罐过程是将已调配后的培养液泵入待用的菌种发酵罐内，装容量为罐体内容量（体积）的85%-90%。
优选的，所述的灭菌可采用如下方法:1.检漏:指对发酵罐各个接头处进行检查，把发酵罐压力打到0.2Mpa，用肥皂泡沫涂抹发酵罐各个接头处，看是否漏气，各个接头处均无漏气等异常，待用；2.空消:指对空发酵罐进行消毒灭菌，先将检漏合格的空发酵罐推至灭菌区，正确的接上蒸汽管道，尾气管道，准备好后，向发酵罐内通去蒸汽，缓慢增加蒸汽压力至0.14Mpa，当发酵罐内温度达到119℃时，开始计时，并一直维持发酵罐温度在119℃-120℃之间，同时打开空气过滤器的蒸汽进汽阀，使空气过滤器内部压力为0.11Mpa，保持灭菌时间40min；3.降压：灭菌结束后，先关掉空气过滤器的蒸汽进汽阀门，然后全开过滤器的排水阀门，5s后关闭排水阀门；发酵罐内部的蒸汽先关取样口的阀门，然后依次关闭进蒸汽阀门，打开发酵罐夹层阀门，排尽蒸汽管道里的余汽，待发酵罐内部压力降到0.05Mpa时，通入空气，防止发酵罐形成负压，损坏发酵罐，直到恢复至常温备用；4.实消:加入培养液后，加水至指定的位置，开始夹层预热，同时向发酵罐内通入空气进行搅拌，使发酵罐内部的水均匀受热，当发酵罐内水温升到100℃时，关闭进气阀门，蒸汽由夹层预热变成直接通去发酵罐内加热，使发酵罐水温升到119℃，开始计时灭菌，维持发酵罐水温在119℃-120℃之间，灭菌时间为60min。
作为本发明再进一步的方案：所述冷却是将已经灭菌完成的发酵罐内水温降到20-25℃（优选的是25℃）的过程，具体是先关闭空气过滤器的进汽阀门，然后打开空气过滤器的排水阀门5s左右，排出空气过滤器内的蒸汽后，立刻关闭排水阀门。其后关闭取样口的阀门，再依次关闭蒸汽的进汽阀门，再打开夹层的阀门，排出蒸汽管道内的蒸汽，随后接好冷却水管道，打开冷却水，进行冷却，当发酵罐内部压力降至0.05Mpa以下时，向发酵罐内通入无菌空气，保持发酵罐内部0.05Mpa左右的正压，冷却至发酵罐水温为20-25℃（优选的是25℃）即可。
作为本发明再进一步的方案：所述接种可采用如下方法:先把浸入95%酒精的火焰圈套在发酵罐的接种口上，点火灼烧接种口，达到无菌要求口，打开接种口的盖子，并通气一定量的无菌空气，使发酵罐保持一个正压的状态，再把待用的菌种瓶口放于接种口火焰的上方灼烧，达到无菌要求后，拔掉菌种瓶的棉塞，把待培养的红托竹荪菌种快速倒入发酵罐内，盖上发酵罐接种口盖子，拧紧，取下火焰圈。
作为本发明再进一步的方案：在所述的红托竹荪液体菌种发酵方法中，所述发酵培养是将接入发酵罐内的待培养的红托竹荪菌种在温度是20℃-25℃、压力是0.02-0.04Mpa的环境下进行培养11d-12d。
优选的，所述发酵培养是将接入发酵罐内的待培养的红托竹荪菌种在温度是25℃进行培养，发酵罐压力维持在0.02-0.04Mpa之间，严格控制进气，防止发酵罐内产生负压，经11d-12d发酵培养成红托竹荪液体菌种。
作为本发明再进一步的方案：在所述的红托竹荪液体菌种发酵方法中，所述红托竹荪菌种经发酵培养后还包括取样检验的步骤。
作为本发明再进一步的方案：所述取样检验采用如下方法:首先用酒精火焰灼烧取样口，达到无菌要求后，用无菌瓶取出一部分菌种，待检测；然后将取样的菌种和PDA（马铃薯葡萄糖琼脂）平皿一起放在超净工作台，紫外灯杀菌30min后，把菌种用接种环在平皿上涂2-3条线，盖上平皿盖，用封口膜封好平皿，放入霉菌培养箱，33℃-35℃培养36h，便可观察有无污染，用生物学显微镜观察菌丝有无锁状联合，并观察菌丝形态有无异常；当无污染，菌丝形态正常，有明显锁状联合，菌龄适中，菌悬液ph3-4之间，即符合菌种要求。
本发明实施例的另一目的在于提供一种所述的红托竹荪液体菌种发酵方法在食用菌培育中的应用。
作为本发明再进一步的方案：所述食用菌可以是现有的食用菌种类，例如平菇、草菇、猴头菌、香菇等。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明实施例提供的培养液可用于菌种发酵以制备菌种生产周期短的红托竹荪液体菌种，通过木屑、麸皮、玉米粉、豆粕、竹叶、蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白等原料的合理配伍，制备的培养液可以很大程度上缩短红托竹荪菌种的生产周期；而提供的培养液的制备方法适合工业化生产，解决了现有用于红托竹荪栽培的菌种主要是固体菌种，存在菌种生产周期长的问题，具有广阔的市场前景。同时，本发明实施例提供的红托竹荪液体菌种发酵方法采用所述培养液，可以得到活力极强的优质液体菌种，可以很大程度上缩短菌种生产周期，并且菌种纯度达到100%，菌丝健壮，活力强，可有效降低生产成本，提高经济效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步详细地说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
一种培养液，可用于菌种发酵以制备菌种生产周期短的红托竹荪液体菌种，所述培养液包括以下的原料：木屑3.5千克、麸皮3.0千克、玉米粉0.5千克、豆粕0.3千克、竹叶0.5千克，以及适量的营养组分和适量的水；其中，所述营养组分包括蔗糖14千克、蛋白胨1.6千克、磷酸二氢钾0.7千克、菌丝蛋白1.6千克。
在本发明实施例中，所述培养液的制备方法包括以下步骤：
1）称取上述的木屑、麸皮、玉米粉、豆粕与竹叶，混合均匀，得到混合料；
2）将所述混合料中加入水进行第一次浸提，过滤，得到滤渣与第一浸提液；其中，所述第一次浸提的温度是90℃，浸提时间为40分钟；所述第一次浸提时的加水量是所述混合料重量的5倍；
3）将所述滤渣中加入水进行第二次浸提，过滤，得到第二浸提液；其中，所述第二次浸提的温度是90℃，浸提时间为40分钟；所述第二次浸提时的加水量是所述滤渣重量的20倍；
4）将所述第一浸提液与所述第二浸提液进行合并，得到提取液（浓缩液）；
5）将所述提取液中加入蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白，搅拌混合均匀，调节pH值至5.6，得到所述培养液。
实施例2
一种培养液，可用于菌种发酵以制备菌种生产周期短的红托竹荪液体菌种，所述培养液包括以下的原料：木屑4.5千克、麸皮3.8千克、玉米粉0.7千克、豆粕0.4千克、竹叶0.7千克，以及适量的营养组分和适量的水；其中，所述营养组分包括蔗糖20千克、蛋白胨3千克、磷酸二氢钾1.5千克、菌丝蛋白3千克。
在本发明实施例中，所述培养液的制备方法包括以下步骤：
1）称取上述的木屑、麸皮、玉米粉、豆粕与竹叶，混合均匀，得到混合料；
2）将所述混合料中加入水进行第一次浸提，过滤，得到滤渣与第一浸提液；其中，所述第一次浸提的温度是100℃，浸提时间为30分钟；所述第一次浸提时的加水量是所述混合料重量的70倍；
3）将所述滤渣中加入水进行第二次浸提，过滤，得到第二浸提液；其中，所述第二次浸提的温度是100℃，浸提时间为30分钟；所述第二次浸提时的加水量是所述滤渣重量的30倍；
4）将所述第一浸提液与所述第二浸提液进行合并，得到提取液（浓缩液）；
5）将所述提取液中加入蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白，搅拌混合均匀，调节pH值至5.8，得到所述培养液。
实施例3
一种培养液，可用于菌种发酵以制备菌种生产周期短的红托竹荪液体菌种，所述培养液包括以下的原料：木屑4千克、麸皮3.4千克、玉米粉0.6千克、豆粕0.35千克、竹叶0.6千克，以及适量的营养组分和适量的水；其中，所述营养组分包括蔗糖17千克、蛋白胨2.3千克、磷酸二氢钾0.9千克、菌丝蛋白2.3千克。
在本发明实施例中，所述培养液的制备方法包括以下步骤：
1）称取上述的木屑、麸皮、玉米粉、豆粕与竹叶，混合均匀，得到混合料；
2）将所述混合料中加入水进行第一次浸提，过滤，得到滤渣与第一浸提液；其中，所述第一次浸提的温度是95℃，浸提时间为35分钟；所述第一次浸提时的加水量是所述混合料重量的40倍；
3）将所述滤渣中加入水进行第二次浸提，过滤，得到第二浸提液；其中，所述第二次浸提的温度是95℃，浸提时间为35分钟；所述第二次浸提时的加水量是所述滤渣重量的25倍；
4）将所述第一浸提液与所述第二浸提液进行合并，得到提取液（浓缩液）；
5）将所述提取液中加入蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白，搅拌混合均匀，调节pH值至5.7，得到所述培养液。
实施例4
一种培养液，可用于菌种发酵以制备菌种生产周期短的红托竹荪液体菌种，所述培养液包括以下的原料：木屑3.5千克、麸皮3.0千克、玉米粉0.5千克、豆粕0.3千克、竹叶0.5千克，以及适量的营养组分和适量的水；其中，所述营养组分包括所述营养组分包括蔗糖20千克、蛋白胨3千克、磷酸二氢钾1.5千克、菌丝蛋白3千克。所述培养液的制备方法与实施例3相同。
实施例5
一种培养液，可用于菌种发酵以制备菌种生产周期短的红托竹荪液体菌种，所述培养液包括以下的原料：木屑4.5千克、麸皮3.8千克、玉米粉0.7千克、豆粕0.4千克、竹叶0.6千克，以及适量的营养组分和适量的水；其中，所述营养组分包括蔗糖17千克、蛋白胨2.5千克、磷酸二氢钾0.9千克、菌丝蛋白2.5千克。所述培养液的制备方法与实施例3相同。
实施例6
一种培养液，可用于菌种发酵以制备菌种生产周期短的红托竹荪液体菌种，所述培养液包括以下的原料：木屑3.5千克、麸皮3.0千克、玉米粉0.5千克、豆粕0.3千克、竹叶0.5千克，以及适量的营养组分和适量的水；其中，所述营养组分包括蔗糖18千克、蛋白胨2千克、磷酸二氢钾0.8千克、菌丝蛋白2千克。
在本发明实施例中，所述培养液的制备方法包括以下步骤：
1）称取上述的木屑、麸皮、玉米粉、豆粕与竹叶，混合均匀，得到混合料；
2）将所述混合料中加入水进行第一次浸提，过滤，得到滤渣与第一浸提液；其中，所述第一次浸提的温度是90℃，浸提时间为40分钟；所述第一次浸提时的加水量是所述混合料重量的15倍；
3）将所述滤渣中加入水进行第二次浸提，过滤，得到第二浸提液；其中，所述第二次浸提的温度是90℃，浸提时间为30分钟；所述第二次浸提时的加水量是所述滤渣重量的20倍；
4）将所述第一浸提液与所述第二浸提液进行合并，得到提取液（浓缩液）；
5）将所述提取液中加入蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白，搅拌混合均匀，调节pH值至5.6，得到所述培养液。
实施例7
一种培养液，可用于菌种发酵以制备菌种生产周期短的红托竹荪液体菌种，所述培养液包括以下的原料：木屑4.5千克、麸皮3.8千克、玉米粉0.7千克、豆粕0.4千克、竹叶0.6千克，以及适量的营养组分和适量的水；其中，所述营养组分包括蔗糖20千克、蛋白胨3千克、磷酸二氢钾1.5千克、菌丝蛋白3千克。
在本发明实施例中，所述培养液的制备方法包括以下步骤：
1）称取上述的木屑、麸皮、玉米粉、豆粕与竹叶，混合均匀，得到混合料；
2）将所述混合料中加入水进行第一次浸提，过滤，得到滤渣与第一浸提液；其中，所述第一次浸提的温度是100℃，浸提时间为40分钟；所述第一次浸提时的加水量是所述混合料重量的60倍；
3）将所述滤渣中加入水进行第二次浸提，过滤，得到第二浸提液；其中，所述第二次浸提的温度是100℃，浸提时间为40分钟；所述第二次浸提时的加水量是所述滤渣重量的30倍；
4）将所述第一浸提液与所述第二浸提液进行合并，得到提取液（浓缩液）；
5）将所述提取液中加入蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白，搅拌混合均匀，调节pH值至5.8，得到所述培养液。
实施例8
一种红托竹荪液体菌种发酵方法，包括以下步骤：将培养液装入容器后进行灭菌、冷却，接种待培养的红托竹荪菌种，发酵培养，得到红托竹荪液体菌种。其中，所述发酵培养是将接入发酵罐内的待培养的红托竹荪菌种在温度是20℃、压力是0.02Mpa的环境下进行培养11d。
在本实施例中，所述培养液包括以下的原料：木屑4千克、麸皮3.0千克、玉米粉0.6千克、豆粕0.4千克、竹叶0.7千克，以及适量的营养组分和适量的水；其中，所述营养组分包括蔗糖1.6千克、蛋白胨0.18千克、磷酸二氢钾0.11千克、菌丝蛋白0.22千克。其中，所述培养液的制备方法包括以下步骤：
1）称取上述的木屑、麸皮、玉米粉、豆粕与竹叶，混合均匀，得到混合料；
2）将所述混合料中加入水进行第一次浸提，过滤，得到滤渣与第一浸提液；其中，所述第一次浸提的温度是95℃，浸提时间为35分钟；所述第一次浸提时的加水量是50千克；
3）将所述滤渣中加入水进行第二次浸提，过滤，得到第二浸提液；其中，所述第二次浸提的温度是95℃，浸提时间为35分钟；所述第二次浸提时的加水量是所述滤渣重量的30倍；
4）将所述第一浸提液与所述第二浸提液进行合并，得到提取液（浓缩液）；
5）将所述提取液中加入蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白，搅拌混合均匀，调节pH值至5.6-5.8，得到所述培养液。
实施例9
与实施例8相比，除了所述发酵培养是将接入发酵罐内的待培养的红托竹荪菌种在温度是25℃、压力是0.04Mpa的环境下进行培养12d外，其他与实施例8相同。
实施例10
与实施例8相比，除了所述发酵培养是将接入发酵罐内的待培养的红托竹荪菌种在温度是22℃、压力是0.03Mpa的环境下进行培养11.5d外，其他与实施例8相同。
实施例11
与实施例8相比，除了所述发酵培养是将接入发酵罐内的待培养的红托竹荪菌种在温度是24℃、压力是0.03Mpa的环境下进行培养11d外，其他与实施例8相同。
实施例12
与实施例8相比，除了所述发酵培养是将接入发酵罐内的待培养的红托竹荪菌种在温度是23℃、压力是0.04Mpa的环境下进行培养12d外，其他与实施例8相同。
实施例13
一种红托竹荪液体菌种发酵方法，具体步骤如下：
（1）原材料备料:称取干木屑3500.0g，麸皮3500.0g，玉米粉500.0g，豆粕300.0g，鲜竹叶700.0g。
（2）经加热提取:将上述原料一起放入提取罐内，加入50kg水，用蒸汽加热至90℃-100℃，进行第一次浸提，浸提时间为50min，经120目过滤筛滤出汁液待用，滤渣再进行二次提取，第二次提取的原料:水=1:30，加热至90℃-100℃，浸提时间为40min，经120目过滤筛过滤，滤出汁液与第一次滤液合并，得到提取液（浓缩液）70kg。
（3）调配:向提取液中加入蔗糖14kg，蛋白胨1.6kg，磷酸二氢钾0.7kg，菌丝蛋白1.6kg，搅拌混合5-10min，用pH计测试为5.6-5.8之间。
（4）过滤:将已调配搅拌后的物料经120目滤网进行过滤。
（5）投料:将已过滤的物料（即所述培养液）装进菌种发酵罐内，采用抽水泵通过管道吸入发酵罐内，装至发酵罐工艺要求的装液量处。
（6）灭菌:将泵入发酵罐的培养液搅拌均匀，采用119℃-120℃的温度进行灭菌，保持灭菌时间60min；具体的操作方法是:1.检漏:指对发酵罐各个接头处进行检查，把发酵罐压力打到0.2Mpa，用肥皂泡沫涂抹发酵罐各个接头处，看是否漏气，各个接头处均无漏气等异常，待用；2.空消:指对空发酵罐进行消毒灭菌，先将检漏合格的空发酵罐推至灭菌区，正确的接上蒸汽管道，尾气管道，准备好后，向发酵罐内通去蒸汽，缓慢增加蒸汽压力至0.14Mpa，当发酵罐内温度达到119℃时，开始计时，并一直维持发酵罐温度在119℃-120℃之间，同时打开空气过滤器的蒸汽进汽阀，使空气过滤器内部压力为0.11Mpa，保持灭菌时间40min；3.降压：灭菌结束后，先关掉空气过滤器的蒸汽进汽阀门，然后全开过滤器的排水阀门，5s后关闭排水阀门；发酵罐内部的蒸汽先关取样口的阀门，然后依次关闭进蒸汽阀门，打开发酵罐夹层阀门，排尽蒸汽管道里的余汽，待发酵罐内部压力降到0.05Mpa时，通入空气，防止发酵罐形成负压，损坏发酵罐，直到恢复至常温备用；4.实消:加入培养液后，加水至指定的位置，开始夹层预热，同时向发酵罐内通入空气进行搅拌，使发酵罐内部的水均匀受热，当发酵罐内水温升到100℃时，关闭进气阀门，蒸汽由夹层预热变成直接通去发酵罐内加热，使发酵罐水温升到119℃，开始计时灭菌，维持发酵罐水温在119℃-120℃之间，灭菌时间为60min。
（7）冷却:将已灭菌的发酵罐内的培养液进行冷却至25℃，灭菌完成后，接通冷却水，当发酵罐内压力降至0.05Mpa时向发酵罐内部通入无菌空气，使发酵罐压力始终维持在0.05Mpa左右，冷却至25℃，关闭冷却水。具体的操作方法是：先关闭空气过滤器的进汽阀门，然后打开空气过滤器的排水阀门5s左右，排出空气过滤器内的蒸汽后，立刻关闭排水阀门。其后关闭取样口的阀门，再依次关闭蒸汽的进汽阀门，再打开夹层的阀门，排出蒸汽管道内的蒸汽，随后接好冷却水管道，打开冷却水，进行冷却，当发酵罐内部压力降至0.05Mpa以下时，向发酵罐内通入无菌空气，保持发酵罐内部0.05Mpa左右的正压，冷却至发酵罐水温为25℃即可。
（8）接种:把浸透95wt%酒精的火焰圈套在发酵罐的接种口上，并点燃火焰圈，灼烧，达到无菌要求后，打开接种口的密封盖，然后向发酵罐内通入无菌空气，时发酵罐维持一个正压的环境，再把菌种瓶口放在接种口上方火焰上灼烧，达到无菌要求后，取下棉塞，接种待培养的红托竹荪菌种至发酵罐内，最后盖好接种口的盖子，取下火焰圈。
（9）菌种发酵罐培养:维持发酵罐内部溶液温度为24℃-25℃之间进行培养，发酵罐压力维持在0.02Mpa-0.04Mpa之间，使发酵罐内菌液一直处于波动增氧状态，菌种从成活到增值，到符合使用标准，需经过11-13d恒温发酵培养。
（10）取样检测:当发酵罐菌种培养到第9d时，取样检测菌种质量，用酒精火焰灼烧取样口，达到无菌要求后用无菌瓶取一点菌种出来，取样完成后，需再次灼烧取样口，达到无菌要求即可。具体的取样检验采用如下方法:首先用酒精火焰灼烧取样口，达到无菌要求后，用无菌瓶取出一部分菌种，待检测；然后将取样的菌种和PDA平皿一起放在超净工作台，紫外灯杀菌30min后，把菌种用接种环在平皿上涂2-3条线，盖上平皿盖，用封口膜封好平皿，放入霉菌培养箱，33℃-35℃培养36h，便可观察有无污染，用生物学显微镜观察菌丝有无锁状联合，并观察菌丝形态有无异常；当无污染，菌丝形态正常，有明显锁状联合，菌龄适中，菌悬液ph3-4之间，即符合菌种要求。
需要说明的是，本发明以上实施例提供的红托竹荪液体菌种发酵方法是一种红托竹荪液体菌种的发酵工艺，依次包括如下工艺过程:原料备料、加热提取、调配、过滤、装罐、灭菌、冷却、接种、培养。通过将竹叶等基料经过提取，科学配方制成浓缩液，装罐、灭菌、接种、培养，使其到达纯真、活力极强的优质液体菌种，可以很大程度上缩短菌种生产周期，并且菌种纯度100%，菌丝健壮，活力强，可有效的降低生产成本，提高经济效益；而且，所述培养液可以使菌包接种成活率达到100%，实现了菌种零污染，缩短了菌种生长周期，大幅度降低了生产成本，提高了菌包质和产量，现已应用到丰源公司日产10万菌棒的生产中，具有广阔的市场前景。
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种培养液，其特征在于，包括以下按照重量份的原料：木屑3.5份-4.5份、麸皮3.0份-3.8份、玉米粉0.5份-0.7份、豆粕0.3份-0.4份、竹叶0.5份-0.7份，以及适量的营养组分和适量的水；其中，所述营养组分包括蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白。
2.根据权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述营养组分按照重量份计包括：蔗糖1.4份-2份、蛋白胨0.16份-0.3份、磷酸二氢钾0.07份-0.15份、菌丝蛋白0.16份-0.3份。
3.根据权利要求1所述的培养液，其特征在于，所述营养组分按照质量千分比计算包括：蔗糖1.8‰-2‰、蛋白胨0.2‰-0.3‰、磷酸二氢钾0.08‰-0.15‰、菌丝蛋白0.2‰-0.3‰。
4.一种如权利要求1-3任一所述的培养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）按照比例称取木屑、麸皮、玉米粉、豆粕与竹叶，混合均匀，得到混合料；
2）将所述混合料中加入水进行第一次浸提，过滤，得到滤渣与第一浸提液；
3）将所述滤渣中加入水进行第二次浸提，过滤，得到第二浸提液；
4）将所述第一浸提液与所述第二浸提液进行合并，得到提取液；
5）将所述提取液中加入蔗糖、蛋白胨、磷酸二氢钾与菌丝蛋白，混合均匀，调节pH值至5.6-5.8，得到所述培养液。
5.根据权利要求4所述的培养液的制备方法，其特征在于，在所述的培养液的制备方法中，所述第一次浸提的温度是90℃-100℃，浸提时间为30-40分钟，所述第一次浸提时的加水量是所述混合料重量的5-70倍。
6.根据权利要求4所述的培养液的制备方法，其特征在于，在所述的培养液的制备方法中，所述第二次浸提的温度是90℃-100℃，浸提时间为30-40分钟，所述第二次浸提时的加水量是所述滤渣重量的20-30倍。
7.一种采用权利要求4-6任一所述的培养液的制备方法制备得到的培养液。
8.一种红托竹荪液体菌种发酵方法，其特征在于，所述的红托竹荪液体菌种发酵方法采用如权利要求1或2或3或7所述的培养液，具体包括以下步骤：将所述培养液装入容器后进行灭菌、冷却，接种待培养的红托竹荪菌种，发酵培养，得到红托竹荪液体菌种。
9.根据权利要求8所述的红托竹荪液体菌种发酵方法，其特征在于，在所述的红托竹荪液体菌种发酵方法中，所述发酵培养是在温度为20℃-25℃、压力为0.02-0.04Mpa的环境下进行培养11d-12d。
10.一种如权利要求8-9任一所述的红托竹荪液体菌种发酵方法在食用菌培育中的应用。
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