CN112057616A - 牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料及其制备和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料及其制备和应用，制备方法包括：(1)制备分散均匀的氧化氮化碳纳米片水溶液；(2)将四水合乙酸锰、三乙胺依次加入步骤(1)所得的氧化氮化碳纳米片水溶液，不断搅拌，通过原位生长法制备得到负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料；(3)将原卟啉通过搅拌负载到步骤(2)所得的负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料的表面，并加入牛血清白蛋白修饰。本发明制备的材料可在磁共振成像和肿瘤声动力治疗中应用。与现有技术相比，本发明具有良好的生物相容性，可以作为磁共振成像造影剂，引导肿瘤的声动力治疗。

Description

牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复 合材料及其制备和应用
技术领域
本发明涉及材料科学与生物医药技术领域，具体涉及一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料及其制备和应用。
背景技术
癌症的准确诊断和及时治疗在临床上具有重要的意义。因此，许多研究致力于开发智能化的纳米材料，以应对肿瘤的微环境(低pH值、低氧)。在过去的几十年中，无机基(例如Au、Fe3O4)和有机基(例如人血清白蛋白、脂质体)纳米材料常被用作纳米载体，在生物医学应用中负载治疗药剂。但是，无机基纳米材料的长期毒性和有机基纳米材料不能用于成像的缺陷，限制了其对肿瘤准确安全地诊断和治疗。因此，开发具有生物相容性高和成像效果好的多功能纳米材料尤为关键。
磁共振成像(MRI)是一种在医学领域广泛应用的成像技术，由于其具有高空间分辨率，更深的穿透深度以及更高的安全系数，可以进行无创实时监测，因此是强大的成像技术之一。
声动力疗法(SDT)作为一种临床上非侵入性的肿瘤治疗方法，借助超声波(US)在声敏剂的帮助下触发活性氧(ROS)的产生。由于声波对组织的渗透更深，SDT适用于治疗体积较大的肿瘤或在器官中包埋的肿瘤，而光动力疗法(PDT)由于穿透深度的限制，很难对其进行治疗。SDT是一种非常有前景的无创肿瘤治疗方法，具有比常规PDT更大的优势。现已报道的声敏剂有两大类，分别是有机声敏剂：各类卟啉衍生物(例如光敏蛋白、血卟啉、叶绿素衍生物和酞菁)以及无机声敏剂。
发明专利CN107469079A公开了一种T1-MRI成像引导下的光动治疗剂的制备方法，首先制备钆(锰)-卟啉金属有机框架结构的纳米粒子；再制备蛋白质/磺胺嘧啶复合物；将纳米粒子与复合物混合制备牛血清蛋白/磺胺嘧啶-钆(锰)卟啉纳米复合材料，将纳米复合材料在T1-MRI成像引导下的光动效应即为光动治疗剂；所制得的复合材料生物相容性较好，细胞毒性低，MTT测试表面此复合材料在600nm激光光照下可以触发光动效应，而杀死肿瘤细胞。同时，所制得的复合材料是很好的T1-MRI造影剂，可用于肿瘤的筛查及引导光动治疗，但是该发明仅适用于光动力疗法(PDT)，穿透深度有限制，对于体积较大的肿瘤或在器官中包埋的肿瘤，很难对其进行治疗。
尽管磁共振成像已成为临床诊断的强大工具之一，但源自脂肪、血液和空气等内源性条件的MR成像伪影会影响其准确性。双模态MRI造影剂可降低这些假象并提高MR成像的准确性。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料及其制备和应用，该材料具有磁共振成像和肿瘤声动力治疗性能，可在磁共振成像和肿瘤声动力治疗中应用。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备分散均匀的氧化氮化碳纳米片水溶液；
(2)将四水合乙酸锰、三乙胺依次加入步骤(1)所得的氧化氮化碳纳米片水溶液，不断搅拌，通过原位生长法制备得到负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料；
(3)将原卟啉通过搅拌负载到步骤(2)所得的负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料的表面，并加入牛血清白蛋白修饰，制得牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料。
石墨相氮化碳(g-C3N4)具有良好的生物相容性，并且具有类似于石墨的层状结构，可以通过超声或者强酸刻蚀的方法将其剥离成纳米片。强酸刻蚀及氧化处理g-C3N4得到氧化氮化碳(OCN)，OCN具有高比表面积，并且表面富含羧基，因而可以作为药物载体，负载造影剂、声敏剂或化疗药物，用于肿瘤的诊断与治疗。
锰基氧化物纳米材料经常被用作MRI造影剂，因为它们可以利用肿瘤微环境(低pH值、谷胱甘肽)分解成水溶性的Mn2+离子，增强T1磁共振成像的信号。此外，生成的Mn2+可以被肾脏迅速排泄，因而治疗后不会存在潜在的长期毒性。
在声敏剂中，原卟啉(PpIX)在肿瘤的声动力治疗中具有较强的活性氧产生能力，可在肿瘤的局部治疗中达到良好的临床效果。
牛血清白蛋白(BSA)修饰可使纳米材料具有更好的生物相容性，且制备方法简单，价格低廉。
游离的Mn3O4纳米颗粒尺寸小、毒性大，通过OCN的负载，增加材料的尺寸，从而延长材料在体内的循环时间，保证材料在肿瘤部位具有更多的积累。最后通过BSA的包裹，提高了材料的生物相容性，最大地降低潜在毒性。
Mn3O4与肿瘤微环境中过表达的H2O2反应产生O2，改善肿瘤微环境的乏氧情况。O2参与声敏剂PpIX的声动力治疗过程，通过超声响应，诱导产生ROS，从而达到治疗肿瘤的目的。另外，Mn3O4与GSH反应，减轻了GSH对ROS的消耗，这有利于增强声动力治疗的效果。Mn3O4分解产生的Mn2+，可用于磁共振成像，实时监测肿瘤治疗过程。
进一步地，步骤(1)分散均匀的氧化氮化碳纳米片的制备方法具体如下：
(11)将三聚氰胺在500～550℃下煅烧至变为淡黄色固体，得到石墨相氮化碳；
(12)将步骤(11)得到的石墨相氮化碳溶解到浓硫酸中，在冰浴下缓慢加入高锰酸钾，不断搅拌，待高锰酸钾完全溶解后，转移至36-39℃的水浴中，继续搅拌，反应4h，在冰浴下缓慢滴加去离子水稀释，最后加入过氧化氢除去未反应的高锰酸钾，得到氧化氮化碳纳米片；
(13)将步骤(12)中的到的氧化氮化碳纳米片，洗涤后离心分散到去离子水中。
更进一步地，所述的步骤(11)中石墨相氮化碳、浓硫酸和高锰酸钾的摩尔比为1：80-100：1.8-2.2。
步骤(12)除去未反应的高锰酸钾采用的过氧化氢为质量分数为30％的过氧化氢。
步骤(13)中洗涤是用质量分数为5％的盐酸洗涤1～2次，再用去离子水洗涤至pH为中性；离心的转速为18000～21000rpm。
进一步地，步骤(2)负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料的制备方法具体如下：
向步骤(1)所得分散均匀的氧化氮化碳纳米片水溶液中加入四水合乙酸锰，搅拌5～10min，加入三乙胺，继续搅拌10～15min，静置60～80min，用去离子水洗涤3～5次，并离心分散在去离子水中，得到负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料。
更进一步地，所述的氧化氮化碳纳米片与四水合乙酸锰的摩尔比为1：4-6；所述的三乙胺的添加量为：氧化氮化碳纳米片与三乙胺的质量体积比为：45～55：0.5～1(mg/mL)。
所述的离心转速为16000～18000rpm。
进一步地，步骤(3)所述的牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料具体制备如下：
(31)取步骤(2)所得的负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料，在去离子水中分散均匀；
(32)配制浓度为1.5～2.5mg/mL原卟啉的无水甲醇溶液；
(33)配制浓度为15～25mg/mL牛血清白蛋白的水溶液；
(34)将步骤(31)、步骤(32)和步骤(33)所得到的溶液充分混合均匀，搅拌12～14h；
(35)将步骤(34)所得产物用无水甲醇和去离子水洗涤3～5次，离心分散于去离子水中，得到牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料。
更进一步地，步骤(35)中离心转速为12000～15000rpm。
采用上述方法制得的牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料，可作为磁共振成像造影剂和声动力治疗药物，在磁共振成像和肿瘤声动力治疗中应用。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)可合成分散性良好、生物相容性高的负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料，材料具备磁共振成像和产氧能力；
(2)在负载四氧化三锰的氧化氮化碳表面吸附原卟啉，可实现磁共振成像引导的肿瘤声动力治疗；
(3)利用纳米材料作为载体负载造影剂和声敏剂，可以降低造影剂和声敏剂对正常器官的毒性，最大限度地减少药物对正常组织器官的副作用；同时利用实体瘤的高通透性和滞留效应提高药物在肿瘤部位的积累，从而增强肿瘤的治疗效果；
(4)制备方法简单，制备得到的纳米复合材料具有磁共振成像和声动力治疗性能，可用于磁共振成像引导的肿瘤声动力治疗，实现诊疗一体化。
附图说明
图1为实施例1中步骤(1)所制备的氧化氮化碳纳米片的TEM图片；
图2为实施例1中步骤(2)所制备的负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料的TEM图片；
图3为实施例1中步骤(2)所制备的负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料的XRD图；
图4为实施例1中各步骤制备的材料的Zeta电位汇总；
图5为实施例1中各步骤主要涉及的材料的紫外-可见吸收光谱图；
图6为实施例1中各步骤主要涉及的材料的傅里叶红外光谱图；
图7为实施例1中步骤(3)所制备的牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料在水溶液中的磁共振成像效果图；
图8为实施例1中步骤(3)所制备的牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料在5mM谷胱甘肽溶液中的磁共振成像效果图；
图9为实施例1中步骤(3)所制备的牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料在溶液水平的声动力活性效果图。
图10为实施例1中步骤(3)所制备的牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的细胞毒性。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备分散均匀的氧化氮化碳纳米片水溶液，具体步骤如下：
(11)将10g三聚氰胺于马弗炉中以3℃/min升温至550℃，保持3h，自然冷却至室温，得到石墨相氮化碳，研磨成粉末备用；
(12)将1g步骤(11)制得的石墨相氮化碳溶解到50mL浓硫酸中，在冰浴下缓慢加入3.5g高锰酸钾，不断搅拌；待高锰酸钾完全溶解后，转移至37℃的水浴中，继续搅拌，反应4h；在冰浴下缓慢滴加200mL去离子水稀释，最后滴加质量分数为30％的过氧化氢溶液，至溶液变为白色。用质量分数为5％的盐酸洗涤1次，再用去离子水洗涤至pH为中性，得到氧化氮化碳(OCN)纳米片。
(13)将所步骤(12)得到的氧化氮化碳纳米片洗涤后离心分散到去离子水中，离心转速为20000rpm。
请参阅图1，可以看出，所制备的OCN纳米片分散均匀，粒径约为120nm。
(2)制备负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料，具体步骤如下：
(21)将50mg步骤(1)制备的氧化氮化碳纳米片均匀分散于50mL去离子水中；
(22)向步骤(21)所得到的溶液中加入2.5mM四水合乙酸锰，搅拌5min；加入0.5mL三乙胺，继续搅拌15min；静置60min，用去离子水洗涤3次，并离心分散在去离子水中，离心转速为17000rpm，得到负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料(Mn3O4/OCN)。
请参阅图2，可以看出，所制备的Mn3O4/OCN粒径约为240nm。
请参阅图3，可以看出，所制备的Mn3O4/OCN与Mn3O4标准卡片出峰位置吻合，证明OCN表面成功负载Mn3O4。
(3)制备牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料，具体步骤如下：
(31)取20mg步骤(2)中制备的Mn3O4/OCN，在20mL去离子水中分散均匀；
(32)配制浓度为2mg/mL原卟啉的无水甲醇溶液10mL；
(33)配制浓度为20mg/mL牛血清白蛋白的水溶液20mL；
(34)将(31)、(32)和(33)所得到的溶液充分混合均匀，搅拌14h；
(35)将(34)所得产物用无水甲醇：去离子水＝1：1的溶液洗涤3次，离心分散于去离子水中，离心转速为14000rpm，得到牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料(Mn3O4/OCN-PpIX@BSA)。
请参阅图4，通过Zeta电位的变化可以证明每一步的材料都是制备成功的。
请参阅图5，可以看出，负载原卟啉后，所制备的材料在400nm波长处出现了原卟啉的特征吸收峰，表明原卟啉负载成功。
请参阅图6，可以看出，515.45cm-1、623.50cm-1对应Mn-O的伸缩振动，OCN三嗪环的特征吸收峰位于810.07cm-1，对比Mn3O4/OCN-PpIX@BSA与各材料出峰位置，可以证明材料是制备成功的。
请参阅图7，图中包括：1/T1和1/T2与Mn2+浓度的线性拟合曲线以及不同浓度材料溶液的T1和T2成像信号的变化图像。从图中可以看出，随着Mn2+离子浓度的增加，T1加权成像信号越来越亮，T2加权成像信号越来越暗。材料的纵向弛豫率r1为1.98mM-1s-1，横向从弛豫率r2为3.30mM-1s-1，r2/r1的比值为1.67，说明材料有较好的T1加权成像效果，能够作为T1加权MRI造影剂。
请参阅图8，可以看出，材料的纵向弛豫率r1为9.95mM-1s-1，横向从弛豫率r2为48.1mM-1s-1，r2/r1的比值为4.83，对比分散在水溶液中的材料，T1/T2成像信号明显增强，说明材料中的高价锰被谷胱甘肽还原后，材料具有T1/T2双模态成像效果，因而能够更好地在肿瘤治疗中作为MRI造影剂发挥作用。
请参阅图9，可以发现，Mn3O4/OCN-PpIX@BSA在超声作用下，可以产生活性氧，使活性氧捕获剂DPBF的荧光下降；空白对照组由于没有加材料只进行超声，荧光强度没有明显变化；材料对照组即Mn3O4/OCN由于没有负载声敏剂药物，也没有声动力效果；NaN3是一种活性氧抑制剂，因此加入NaN3，也没有出现荧光强度下降的现象。
请参阅图10，可以看出，在超声刺激下，随着Mn3O4/OCN-PpIX@BSA浓度的增加，4T1细胞的存活率逐渐降低。100μg/mL的材料结合超声，使细胞存活率下降到20％以下，说明声动力治疗的效果明显。
实施例2
一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备分散均匀的氧化氮化碳纳米片水溶液，具体步骤如下：
(11)将三聚氰胺于马弗炉中以3℃/min升温至500℃，保持4h，自然冷却至室温，得到石墨相氮化碳，研磨成粉末备用；
(12)将步骤(11)制得的石墨相氮化碳溶解到浓硫酸中，在冰浴下缓慢加入高锰酸钾，其中，石墨相氮化碳、浓硫酸和高锰酸钾的摩尔比为1：80：1.8，不断搅拌；待高锰酸钾完全溶解后，转移至36℃的水浴中，继续搅拌，反应4h；在冰浴下缓慢滴加200mL去离子水稀释，最后滴加质量分数为30％的过氧化氢溶液，至溶液变为白色。用质量分数为5％的盐酸洗涤1次，再用去离子水洗涤至pH为中性，得到氧化氮化碳(OCN)纳米片。
(13)将所步骤(12)所得到的氧化氮化碳纳米片洗涤后离心分散到去离子水中，离心转速为21000rpm。
(2)制备负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料，具体步骤如下：
(21)将步骤(1)制备的氧化氮化碳纳米片均匀分散于去离子水中；
(22)向步骤(21)所得到的溶液中加入四水合乙酸锰，氧化氮化碳纳米片与四水合乙酸锰的摩尔比为1：4，搅拌10min；加入三乙胺，氧化氮化碳纳米片与三乙胺的质量体积比为：45：0.5mg/mL，继续搅拌13min；静置80min，用去离子水洗涤5次，并离心分散在去离子水中，离心转速为18000rpm，得到负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料(Mn3O4/OCN)。
(3)制备牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料，具体步骤如下：
(31)取10mg步骤(2)中制备的Mn3O4/OCN，在10mL去离子水中分散均匀；
(32)配制浓度为1.5mg/mL原卟啉的无水甲醇溶液10mL；
(33)配制浓度为15mg/mL牛血清白蛋白的水溶液20mL；
(34)将(31)、(32)和(33)所得到的溶液充分混合均匀，搅拌12h；
(35)将(34)所得产物用无水甲醇：去离子水＝1：1的溶液洗涤4次，离心分散于去离子水中，离心转速为13000rpm，得到牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料(Mn3O4/OCN-PpIX@BSA)。
实施例3
一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备分散均匀的氧化氮化碳纳米片水溶液，具体步骤如下：
(11)将三聚氰胺于马弗炉中以3℃/min升温至525℃，保持3.5h，自然冷却至室温，得到石墨相氮化碳，研磨成粉末备用；
(12)将步骤(11)制得的石墨相氮化碳溶解到浓硫酸中，在冰浴下缓慢加入高锰酸钾，石墨相氮化碳、浓硫酸和高锰酸钾的摩尔比为1：100：2.2，不断搅拌；待高锰酸钾完全溶解后，转移至39℃的水浴中，继续搅拌，反应4h；在冰浴下缓慢滴加200mL去离子水稀释，最后滴加质量分数为30％的过氧化氢溶液，至溶液变为白色。用质量分数为5％的盐酸洗涤2次，再用去离子水洗涤至pH为中性，得到氧化氮化碳(OCN)纳米片。
(13)将步骤(12)所得到的氧化氮化碳纳米片洗涤后离心分散到去离子水中，离心转速为19000rpm。
(2)制备负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料，具体步骤如下：
(21)将步骤(1)制备的氧化氮化碳纳米片均匀分散于去离子水中；
(22)向步骤(21)所得到的溶液中加入四水合乙酸锰，氧化氮化碳纳米片与四水合乙酸锰的摩尔比为1：6，搅拌8min；加入三乙胺，氧化氮化碳纳米片与三乙胺的质量体积比为55：1mg/mL，继续搅拌10min；静置70min，用去离子水洗涤4次，并离心分散在去离子水中，离心转速为16000rpm，得到负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料(Mn3O4/OCN)。
(3)制备牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料，具体步骤如下：
(31)取15mg步骤(2)中制备的Mn3O4/OCN，在15mL去离子水中分散均匀；
(32)配制浓度为2.5mg/mL原卟啉的无水甲醇溶液10mL；
(33)配制浓度为25mg/mL牛血清白蛋白的水溶液20mL；
(34)将(31)、(32)和(33)所得到的溶液充分混合均匀，搅拌13h；
(35)将(34)所得产物用无水甲醇：去离子水＝1：1的溶液洗涤5次，离心分散于去离子水中，离心转速为15000rpm，得到牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料(Mn3O4/OCN-PpIX@BSA)。
上述对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员可以对这些实施例作各种修改。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备分散均匀的氧化氮化碳纳米片水溶液；
(2)将四水合乙酸锰、三乙胺依次加入步骤(1)所得的氧化氮化碳纳米片水溶液，不断搅拌，通过原位生长法制备得到负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料；
(3)将原卟啉通过搅拌负载到步骤(2)所得的负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料的表面，并加入牛血清白蛋白修饰，制得牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料。
2.根据权利要求1所述的一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(1)分散均匀的氧化氮化碳纳米片的制备方法具体如下：
(1.1)将三聚氰胺在500～550℃下煅烧至变为淡黄色固体，得到石墨相氮化碳；
(1.2)将步骤(1.1)得到的石墨相氮化碳溶解到浓硫酸中，在冰浴下缓慢加入高锰酸钾，不断搅拌，待高锰酸钾完全溶解后，转移至36-39℃的水浴中，继续搅拌，反应4h，在冰浴下缓慢滴加去离子水稀释，最后加入过氧化氢除去未反应的高锰酸钾，得到氧化氮化碳纳米片；
(1.3)将步骤(1.2)中得到的氧化氮化碳纳米片，洗涤后离心分散到去离子水中。
3.根据权利要求2所述的一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述的步骤(11)中石墨相氮化碳、浓硫酸和高锰酸钾的摩尔比为1：80-100：1.8-2.2；
步骤(1.2)除去未反应的高锰酸钾采用的过氧化氢为质量分数为30％的过氧化氢；
步骤(13)中洗涤是用质量分数为5％的盐酸洗涤1～2次，再用去离子水洗涤至pH为中性；离心的转速为18000～21000rpm。
4.根据权利要求1所述的一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(2)负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料的制备方法具体如下：
向步骤(1)所得分散均匀的氧化氮化碳纳米片水溶液中加入四水合乙酸锰，搅拌5～10min，加入三乙胺，继续搅拌10～15min，静置60～80min，用去离子水洗涤3～5次，并离心分散在去离子水中，得到负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料。
5.根据权利要求4所述的一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述的氧化氮化碳纳米片与四水合乙酸锰的摩尔比为1：4-6；所述的三乙胺的添加量为：氧化氮化碳纳米片与三乙胺的质量体积比为：45～55：0.5～1(mg/mL)。
6.根据权利要求4所述的一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，其特征在于，所述的离心转速为16000～18000rpm。
7.根据权利要求1所述的一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料具体制备如下：
(31)取步骤(2)所得的负载四氧化三锰的氧化氮化碳纳米材料，在去离子水中分散均匀；
(32)配制浓度为1.5～2.5mg/mL原卟啉的无水甲醇溶液；
(33)配制浓度为15～25mg/mL牛血清白蛋白的水溶液；
(34)将步骤(31)、步骤(32)和步骤(33)所得到的溶液充分混合均匀，搅拌12～14h；
(35)将步骤(34)所得产物用无水甲醇和去离子水洗涤3～5次，离心分散于去离子水中，得到牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料。
8.根据权利要求7所述的一种牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的制备方法，其特征在于，步骤(35)中离心转速为12000～15000rpm。
9.一种采用权利要求1所述方法制得的牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料。
10.一种如权利要求9所述牛血清白蛋白修饰的原卟啉/四氧化三锰/氧化氮化碳纳米复合材料的应用，其特征在于，作为磁共振成像造影剂和声动力治疗药物，在磁共振成像和肿瘤声动力治疗中应用。
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