CN112057539A

CN112057539A - 用于治疗病毒性心肌炎的药物

Info

Publication number: CN112057539A
Application number: CN202011074342.XA
Authority: CN
Inventors: 孟红; 李志会
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2020-10-09
Filing date: 2020-10-09
Publication date: 2020-12-11

Abstract

本发明公开了一种用于治疗病毒性心肌炎的药物，是通过以下方法制备得到的：取七叶一枝花、柴胡、黄芩，分别采用丙酮或其溶液超声低温萃取，负压干燥，粉碎，分别得七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物；取地龙，断伤后绞碎，用含EDTA‑Na₂的生理盐水浸提，过滤得浸提液，冷冻干燥，得地龙提取物；将七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物和地龙提取物混合，即得。经体外抗病毒试验、体内抗病毒试验及动物模型治疗试验证明，本发明的药物对治疗病毒性心肌炎具有良好的治疗效果。

Description

用于治疗病毒性心肌炎的药物

技术领域

本发明涉及一种用于治疗病毒性心肌炎的药物，具体涉及七叶一枝花、柴胡、黄芩、地龙提取物，属于医药领域。

背景技术

心肌炎是指由各种原因引起的心肌的局限性或弥漫性炎症。其原因有很多，包括病毒、细菌、真菌、寄生虫、免疫反应，以及物理、化学因素等等。临床上以病毒性心肌炎最为常见。

病毒性心肌炎是病毒感染后直接侵入心脏，损害心肌，影响心肌的血液供应或是病毒在局部产生的毒素，累及中枢神经后，使心肌发生继发性损害。该病可见于各年龄组，正常成人可能发病率为5％，儿童更高，是儿童和健康青年猝死的重要原因。引起病毒性心肌炎的病毒包括柯萨奇病毒、埃可病毒、腺病毒、流感病毒、脑心肌病毒等30余种，其中柯萨基病毒B组(1-6型)最为常见，尤其Cox-B3(小RNA科、肠道病毒属)。这些病毒对心肌细胞有很强的亲和力，当机体抵抗力下降时，肠道病毒就会“乘虚而入”，诱发病毒性心肌炎。

目前对于病毒性心肌炎的治疗缺乏特异性，其治疗主要包括休息、易消化高蛋白高维生素饮食、提高机体免疫力、促进心肌营养和代谢、抗心律失常、抗心衰、抗休克等等。大多数患者经过治疗后可完全康复，但易复发。少数患者由于心肌弥漫型炎症和坏死，发生急性心力衰竭、心源性休克或严重心律失常而死亡。部分患者经过数周或数月后病情趋于稳定，但有一定程度的心脏扩大、心动能减退、心律失常或心电图变化，此种情况历久不变，大致为急性期后心肌疤痕形成，成为后遗症。还有部分患者由于急性期后炎症持续，转为慢性心肌炎，逐渐出现进行性心脏扩大、心功能减退、心律失常，经过数年或一、二十年后死于上述各并发症。鉴于此，临床上迫切需要针对病毒性心肌炎特异性治疗的药物和方法；因此，寻找一种安全、有效、特异性针对病毒性心肌炎的抗病毒药物成为临床上亟需解决的课题。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种安全、有效、特异性针对病毒性心肌炎的药物。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种用于治疗病毒性心肌炎的药物，是由以下原料药制成的：七叶一枝花，柴胡，黄芩，地龙。

优选的，是由以下重量份的原料药制成的：七叶一枝花8～12份，柴胡8～12份，黄芩8～12份，地龙8～12份。

所述用于治疗病毒性心肌炎的药物，是通过以下方法制备得到的：取七叶一枝花、柴胡、黄芩，分别采用丙酮或其溶液超声低温萃取，负压干燥，粉碎，分别得七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物(七叶一枝花提取物的成分为重楼皂甙；柴胡提取物的成分为柴胡皂苷；黄芩提取物的成分为黄芩苷)；取地龙，断伤后绞碎，用含EDTA-Na₂的生理盐水浸提，过滤得浸提液，冷冻干燥，得地龙提取物；将七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物和地龙提取物混合，即得，可根据实际要求制成所需剂型；七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物和地龙提取物的重量比为：0.8～1.2:0.8～1.2:0.8～1.2:0.8～1.2。

进一步的，采用30％(体积百分数)的丙酮溶液提取。

进一步的，粉碎后过300目筛。

进一步的，EDTA-Na₂的浓度为0.05％(质量体积比，g/ml)。

进一步的，过滤的具体方式为：10μm滤纸板过滤澄清，0.45μm滤纸板过滤除菌。

进一步的，所述七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物和地龙提取物的重量比为：1:1:1:1。

本发明的用于治疗病毒性心肌炎的药物，为口服制剂，优选胶囊制剂。进一步优选的，每粒胶囊中含七叶一枝花提取物0.05g，柴胡提取物0.05g，黄芩提取物0.05g，地龙提取物0.05g。

已有实验证实病毒性心肌炎早期以病毒直接作用为主，后期则以免疫反应为主。早期主要指起病9天以内，病人或动物的心肌中可分离出病毒，病毒荧光抗体检查结果阳性，或在电镜检查时发现病毒颗粒。病毒感染心肌细胞后产生溶细胞物质，使细胞溶解，产生病理损害。后期即起病9天后，心肌内已不能再找到病毒，但心肌炎变仍继续；有些患者病毒感染的其他症状轻微而心肌炎表现颇为严重；还有些患者心肌炎的症状在病毒感染其他症状开始一段时间以后方出现；有些患者的心肌中可能发现抗原抗体复合体。以上都提示免疫机制的存在。有实验将小鼠心肌细胞感染少量柯萨奇病毒，测得其细胞毒性不显著；如加用同种免疫脾细胞，则细胞毒性增强；如预先用抗胸脾抗体及补体处理免疫脾细胞，则细胞毒性不增强；若预先以柯萨奇B抗体及补体处理免疫脾细胞，则细胞毒性增加；该实验说明病毒性心肌炎有细胞介导的免疫机制存在。临床上，病毒性心肌炎迁延不愈者，E花环、淋巴细胞转化率、补体C均较正常人为低，抗核抗体、抗心肌抗体、抗补体均较正常人的检出率为高，说明病毒性心肌炎时免疫机能低下。最近发现病毒性心肌炎时自然杀伤细胞的活力与α干扰素也显著低于正常。同时PCR方法在慢性、反复发作性心肌炎患者心肌活检组织重检测到柯萨基病毒基因。

以上资料说明免疫损伤、机体免疫功能低下以及病毒的潜延感染在病毒性心肌炎的发病过程中起着关键性的作用。那么，治疗病毒性心肌炎也应从促进损伤组织愈调节机体免疫力、抗病毒这几方面着手。现已研究证实，重楼皂甙、柴胡皂苷、黄芩苷、地龙提取物，这些物质能调节机体免疫功能，增强巨噬细胞吞噬能力和自然杀伤细胞活性，增加抗体产量，增强体液免疫和细胞免疫功能，提高机体的抗病力与自愈力；另外，还可以促进组织再生，修复内脏器官组织的病变损伤；并有充分的资料表明具有一定的抗病毒活性。由此可见，本发明使用七叶一枝花、柴胡、黄芩、地龙提取物治疗病毒性心肌炎有着可靠的理论依据。

本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。

下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。

为更进一步阐述本发明，本发明以体外抗病毒试验、体内抗病毒试验及动物模型治疗试验证明了本发明的药物在治疗病毒性心肌炎中具有良好的治疗效果；通过体外抗病毒试验证明该药物具有体外抑制柯萨奇病毒B3型(CVB₃)增殖、保护心肌细胞的作用；通过动物感染CVB₃毒株的心肌炎疗效模型的观察(包括病理学检测、乳酸脱氢酶检测、病毒重分离及毒力测定)，证明该药物具有明显的治疗作用；免疫指标的检测结果表明该药物的体内抗病毒的作用与诱生干扰素、IL-2、提高中和抗体水平关系密切。

实施例1制备药物

取七叶一枝花、柴胡、黄芩，分别采用30％溶液超声低温萃取，负压干燥，300目粉碎，分别得七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物；取地龙，断伤后绞碎，用含0.05％EDTA-Na₂的生理盐水浸提，过滤得浸提液(10μm滤纸板过滤澄清，0.45μm滤纸板过滤除菌)，冷冻干燥，得地龙提取物；将七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物和地龙提取物混合，即得，制成胶囊制剂，每粒胶囊中含七叶一枝花提取物0.05g，柴胡提取物0.05g，黄芩提取物0.05g，地龙提取物0.05g。

试验

(一)体外抑毒试验

(1)在HEL上体外抑制CVB₃试验：

将实施例1制备的重楼皂甙(即七叶一枝花提取物)、柴胡皂苷(即柴胡提取物)、黄芩苷(即黄芩提取物)、地龙提取物用生理盐水溶解，然后混合，使其终浓度分别为：重楼皂甙为0.05mg/ml，柴胡皂苷为0.05mg/ml，黄芩苷为0.05mg/ml，地龙提取物0.05mg/ml，过滤除菌，以PBS按5倍比稀释，加至已制备好的96孔板单层HEL细胞上，100μl/孔；同时每孔加入100个TCID₅₀的CVB₃，同时设细胞对照、病毒对照及药物毒性对照，37℃、5％CO₂培养96小时后中性红染色，测其570nm处OD值。结果见表1。

表1药物在HEL上体外抑制CVB3试验结果

实验结果显示：受试药物体外具有抑制CVB₃病毒在HEL细胞增殖的作用。

(2)在心肌细胞上体外抑制CVB₃试验：

制备单层大鼠搏动心肌细胞于96孔板内，每孔加入100个TCID₅₀的CVB₃，1小时后，吸除病毒液，加入以PBS稀释的药物，同时设阳性药物对照、细胞对照、病毒对照，37℃、5％CO₂培养24小时，观察心肌细胞病变(表2)及搏动(表3)，取培养上清测LDH、CK含量(表4)。通过药物的抗病毒效果和抑制LDH、CK外漏、稳定心率的效果，从而提示本发明的药物可以抑制病毒增殖，并可保护心肌细胞免受损伤。

表2药物体外抑制心肌细胞病变的影响

表3心肌炎胶囊对感染病毒的心肌细胞搏动的影响

**与病毒组比较P<0.01

表4药物对感染病毒的心肌细胞LDH、CK的影响

与正常组比较 *P〉0.05 **P〈0.05 ***P〈0.01；

与病毒组比较 #P〉0.05 ##P〈0.05 ###P〈0.01。

实验结果显示：受试药物体外具有保护心肌细胞免遭病毒性损伤的作用。

(二)体内抑毒试验

BALB/C鼠，50只，雄性，体重16g。随机分为5组，每组10只，分别为正常对照组、病毒对对照组、阳性药物对照组、大剂量受试药物组和小剂量受试药物组。将正常对照组动物腹腔注射等容量的生理盐水，另外4组腹腔注射CVB₃(TCID₅₀为10⁸/ml)毒液，每只100ul。1小时后分组给药，正常对照组和病毒对照组灌胃给生理盐水，阳性药物对照组灌胃给芪冬颐心口服液(成人剂量的3倍)。大、小两个剂量受试药物组灌胃给本发明药物(实施例1制备)，大剂量组给药0.12g/kg(成人剂量的3倍)，小剂量组0.04g/kg(成人剂量的1倍)，每日一次，连续给药7天。末次灌胃2小时后眼动脉取血，离心取血清测乳酸脱氢酶含量；取心肌组织作病理切片观察动物损伤情况，做病毒重分离比较组间心肌组织含毒量的差异。结果见表5、6、7。

表5药物治疗BALB/C鼠心肌炎模型后乳酸脱氢酶检测(n＝10±s)

与病毒组比较*P〈0.05**P〈0.01与正常组比较#P〉0.05##P〈0.05。

从上表可以看出，以阳性药物治疗和受试药物治疗的动物较病毒对照组动物血清乳酸脱氢酶均有明显降低，表明受试药物与对照药物均有保护CVB₃病毒感染动物心肌细胞的作用。

表6药物治疗BALB/C鼠心肌炎模型后心肌组织病理检测积分表

从病理学检测结果明显看出，受试药物与阳性对照药均可使CVB₃引起的心肌损害明显减轻。

表7动物心肌组织标本病毒分离结果(n＝10±s)

t检验结果显示：各药物组与病毒对照组比较P<0.01，有显著统计学意义，可认为各药物在体内均有抗病毒效果。而各药物组之间比较P>0.05，无统计学意义，不能认为各药物的抗病毒效果有差异，即受试药物大、小剂量组与阳性对照药物芪冬口服液具有相当的体内抗病毒效果。

(三)小鼠机体免疫指标的检测：

按LD50病毒剂量攻击BALB/C(腹腔注射)，动物分组和给药方法同体内抑毒试验，每日给药一次，连续给药20天。观察各组存活情况20天后眼动脉取血，离心取上清，测干扰素含量、IL-2活性和抗体产生情况。结果见表8、9、10、11。

表8慢性病毒性心肌炎疗效模型动物存活情况(n＝30±s)

χ²检验结果显示：受试药物组与病毒对照组P<0.05，有统计学意义，可认为受试药物组存活率高于病毒对照组；受试药物组与阳性药物对照组比较P<0.05，有统计学意义，可认为受试药物组存活率高于阳性药物对照组。

表9动物模型干扰素效价测定结果

t检验结果显示：阳性药物组与病毒对照组比较P>0.05，无统计学意义，即不能认为阳性药物组干扰素效价高于病毒对照组；受试药物小剂量治疗组与阳性药物组和病毒对照组比较P>0.05，无统计学意义，不能认为受试药物小剂量治疗组干扰素效价高于阳性药物组和病毒对照组；受试药物大剂量治疗组与阳性药物组和病毒对照组比较P<0.01，有显著统计学意义，可认为受试药物大剂量治疗组干扰素效价高于阳性药物组和病毒对照组。

表10动物模型IL-2活性测定(MTT法)

从以上表格可以看出，受试药物可使部分动物血清IL-2水平升高。

表11动物模型中和抗体效价测定结果

t检验结果显示：阳性药物组、受试药物治疗组与病毒对照组比较P<0.01，有显著统计学意义，即可以认为阳性药物组和受试药物治疗组中和抗体效价高于病毒对照组；阳性药物组与受试药物治疗组比较P>0.05，无统计学意义，不能认为两者的中和抗体效价有差异。

给本领域技术人员提供上述实施例，以完全公开和描述如何实施和使用所主张的实施方案，而不是用于限制本文公开的范围。对于本领域技术人员而言显而易见的修饰将在所附权利要求的范围内。

Claims

1.一种用于治疗病毒性心肌炎的药物，其特征在于：是由以下原料药制成的：七叶一枝花，柴胡，黄芩，地龙。

2.根据权利要求1所述的用于治疗病毒性心肌炎的药物，其特征在于：是通过以下方法制备得到的：取七叶一枝花、柴胡、黄芩，分别采用丙酮或其溶液超声低温萃取，负压干燥，粉碎，分别得七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物；取地龙，断伤后绞碎，用含EDTA-Na₂的生理盐水浸提，过滤得浸提液，冷冻干燥，得地龙提取物；将七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物和地龙提取物混合，即得；七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物和地龙提取物的重量比为：0.8～1.2:0.8～1.2:0.8～1.2:0.8～1.2。

3.根据权利要求2所述的用于治疗病毒性心肌炎的药物，其特征在于：采用30％的丙酮溶液提取；或/和：粉碎后过300目筛；或/和：EDTA-Na₂的浓度为0.05％；或/和：过滤的具体方式为：10μm滤纸板过滤澄清，0.45μm滤纸板过滤除菌。

4.根据权利要求2所述的用于治疗病毒性心肌炎的药物，其特征在于：所述七叶一枝花提取物、柴胡提取物、黄芩提取物和地龙提取物的重量比为：1:1:1:1。

5.根据权利要求1所述的用于治疗病毒性心肌炎的药物，其特征在于：所述用于治疗病毒性心肌炎的药物的剂型为胶囊制剂。

6.根据权利要求5所述的用于治疗病毒性心肌炎的药物，其特征在于：每粒胶囊中含七叶一枝花提取物0.05g，柴胡提取物0.05g，黄芩提取物0.05g，地龙提取物0.05g。

7.重楼皂甙、柴胡皂苷、黄芩苷和地龙提取物在制备治疗病毒性心肌炎的药物中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述重楼皂甙、柴胡皂苷、黄芩苷和地龙提取物的重量比为：0.8～1.2:0.8～1.2:0.8～1.2:0.8～1.2。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于：所述重楼皂甙、柴胡皂苷、黄芩苷是通过以下方法制备得到的：取七叶一枝花、柴胡、黄芩，分别采用丙酮或其溶液超声低温萃取，负压干燥，粉碎，分别得重楼皂甙、柴胡皂苷、黄芩苷；

所述地龙提取物是通过以下方法制备得到的：取地龙，断伤后绞碎，用含EDTA-Na₂的生理盐水浸提，过滤得浸提液，冷冻干燥，得地龙提取物。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：采用30％的丙酮溶液提取；或/和：粉碎后过300目筛；或/和：EDTA-Na₂的浓度为0.05％；或/和：过滤的具体方式为：10μm滤纸板过滤澄清，0.45μm滤纸板过滤除菌。