CN112057499A - 一种抗肿瘤药物的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗肿瘤药物的制备方法,该方法中所使用的原料药为:黄芪3‑8重量份,人参1‑3重量份,甘草0.5‑2重量份,肉桂0.5‑2重量份,将以上药材超微粉碎成粒度为100‑200目的细粉,然后加入到含有复合菌剂的发酵液中进行混合发酵,发酵完成后加热煮沸10‑30min使微生物灭活,然后用0.22μm陶瓷膜过滤,将滤液减压浓缩,真空冷冻干燥。本发明针对保元汤活性成分的性质,使用特殊的复合菌剂对药材进行发酵,试验证明,该方法明显提高了产物中总多糖和皂苷类成分的含量,从而使药物能更好地发挥抗肿瘤功效。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗肿瘤药物的制备方法。
背景技术
近年来肿瘤患病率在我国乃至世界范围内均呈上升趋势,各类抗肿瘤药物应运而生,而中医药作为我国所特有的医药资源,其抗肿瘤活性已经得到广大医药工作者认可,尽管其抗肿瘤效果没有西医立竿见影,但是它在改善患者生存质量、延长寿命以及辅助治疗方面仍具有不可替代的优势,而且与化疗药物的副作用相比,中医药的作用更加温和,对人体的破坏和造成的损伤更小。
保元汤,出自明代《博爱心鉴》,由黄芪、人参、甘草、肉桂四味药组成,具有补气温阳的作用,适用于虚损劳怯、元气不足症。黄芪补肾固表,增强卫外;人参、甘草补气益胃,固里和中;肉桂“治血以推动其毒,扶阳益气以充达周身”,四药配伍能补肾、胃、肺三气,保护真元,因此称之为保元汤。中医认为肿瘤主要是机体阴阳平衡失调,出现组织细胞异常增生所致,而本方可通过调整阴阳平衡、改善机体免疫力、提高机体正气和抗病能力,从而达到治疗肿瘤的目的。
由于现有的中药大多仍采用传统的水煎方法,不能有针对地提取中药活性成分,导致疗效不能得到充分保证,高温条件下的煎煮还会提取出大量杂质包括重金属等,从而导致服用剂量和副作用大、依从性差,不符合现代中药“三小”(剂量小、毒性小、副作用小)、“三效”(高效、速效、长效)、“五方便”(服用、携带、生产、运输、储藏方便)的发展方向。
随着生物技术的发展,酶解、发酵等方法正逐步应用于医药和食品领域。微生物具有强大的分解和转化物质的能力,并可产生丰富的次生代谢产物,它能在常温、常压等较为温和的条件下进行生长代谢和转化,故能最大限度地保护中药活性成分免遭破坏,微生物能叠加发酵益生菌功能,增强机体抗病力,同时还能将不能直接吸收利用的大分子有效活性物质降解为小分子活性物质从而提高机体对中药的吸收和利用。越来越多的研究表明,发酵中药是现代生物技术和中药研究的完美结合,利用微生物发酵中药,能提高中药制剂活性成分含量,增强疗效。
但是,利用生物发酵技术制备抗肿瘤中药尤其是保元汤的文献目前尚鲜有报导。
发明内容
本发明的目的是针对保元汤活性成分提取不充分、杂质量大等缺陷,提供一种新的制备方法,该方法通过引入生物发酵技术,提高了药物中的活性成分尤其是总多糖和人参皂苷的含量,从而能更好地发挥抗肿瘤功效。
上述目的是通过以下技术方案实现的:
一种抗肿瘤药物的制备方法,该方法中所使用的原料药为:黄芪3-8重量份,人参1-3重量份,甘草0.5-2重量份,肉桂0.5-2重量份,该方法包括以下步骤:将以上药材超微粉碎成粒度为100-200目的细粉,然后加入到含有复合菌剂的发酵液中进行混合发酵,发酵完成后加热煮沸10-30min使微生物灭活,然后用0.22μm陶瓷膜过滤,将滤液减压浓缩,真空冷冻干燥,
所述复合菌剂中含有伞枝犁头霉菌、乳酸菌和酵母菌,所述发酵液中各菌的含菌量分别为:伞枝犁头霉菌107-1011CFU/mL、乳酸菌106-109CFU/mL、酵母菌106-109CFU/mL。
优选地,所述发酵液中各菌的含菌量分别为:伞枝犁头霉菌1010CFU/mL、乳酸菌107CFU/mL、酵母菌107CFU/mL。
优选地,所述复合菌剂中还含有灵芝真菌,所述发酵液中灵芝真菌的重量含量为0.5-5%。灵芝真菌不仅能提高发酵物中总多糖的含量,而且其自身即具备抗肿瘤和延缓衰老等功能,添加后还能提高药物疗效。
进一步优选地,所述发酵液中灵芝真菌的重量含量为1.5%。
优选地,所述乳酸菌为保加利亚乳杆菌和双歧杆菌,二者在发酵液中的含菌量之比为1:1。与使用单一的乳酸菌相比,使用这两种乳酸菌能提高发酵物中活性成分的含量。
优选地,所述发酵是在温度为35-45℃,pH为6-6.5,转速为50-150r/min的条件下进行,最佳的发酵条件是:温度为42℃,pH为6.3,转速为80r/min。
优选地,所述发酵的时间为80-150小时,最佳的发酵时间是120小时。
本发明的有益效果是:
1)黄芪、人参、甘草、肉桂中均含有大量多糖和皂苷类成分,而黄芪多糖、黄芪甲苷、人参皂苷、人参多糖、肉桂皂苷、甘草苷、甘草多糖等均已被大量文献证明是抗肿瘤活性成分,本发明针对这些活性成分的性质,使用特殊的复合菌剂对药材进行微生物发酵,试验证明,该方法明显提高了产物中总多糖和皂苷类成分的含量,从而使药物能更好地发挥抗肿瘤功效。
2)与常规的煎煮等提取方法相比,微生物发酵具有条件更加温和的特点,不仅能够使中药活性成分免遭破坏,从而进一步提高药物活性,同时也能减少药材组织细胞、鞣质、纤维、重金属、果胶、色素等杂质成分的渗出,从而能降低副作用和使用剂量。
3)发酵的同时微生物还能将药材中的大分子物质降解和转化为小分子肽,从而更有利于人体吸收。
4)本发明制备的药物能提高肿瘤患者血液中的白细胞及多核白细胞数量,增加巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数,从而抑制肿瘤细胞生长,在化疗时可发挥辅助治疗的作用。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
黄芪50g,人参15g,甘草10g,肉桂10g
将以上药材超微粉碎成粒度为100目的细粉,然后分别加入到500ml含有复合菌剂的发酵液中进行混合发酵,发酵完成后加热煮沸15min使微生物灭活,然后用0.22μm陶瓷膜过滤。
所述复合菌剂的种类及发酵液中各菌的含菌量如下:
1)保加利亚乳杆菌109CFU/mL、酵母菌109CFU/mL;
2)保加利亚乳杆菌108CFU/mL、双歧杆菌108CFU/mL、酵母菌109CFU/mL;
3)伞枝犁头霉菌108CFU/mL、保加利亚乳杆菌107CFU/mL、双歧杆菌107CFU/mL、酵母菌107CFU/mL;
4)伞枝犁头霉菌108CFU/mL、保加利亚乳杆菌107CFU/mL、双歧杆菌107CFU/mL、酵母菌107CFU/mL、灵芝真菌1%;
5)伞枝犁头霉菌1011CFU/mL、保加利亚乳杆菌106CFU/mL、双歧杆菌106CFU/mL、酵母菌106CFU/mL、灵芝真菌2%;
6)伞枝犁头霉菌1010CFU/mL、保加利亚乳杆菌107CFU/mL、双歧杆菌107CFU/mL、酵母菌107CFU/mL、灵芝真菌1.5%;
7)伞枝犁头霉菌107CFU/mL、保加利亚乳杆菌108CFU/mL、双歧杆菌108CFU/mL、酵母菌107CFU/mL、灵芝真菌3%;
8)伞枝犁头霉菌109CFU/mL、保加利亚乳杆菌109CFU/mL、双歧杆菌109CFU/mL、酵母菌109CFU/mL、灵芝真菌1.5%。
总多糖含量测定方法:采用苯酚-硫酸紫外分光光度法检测上述陶瓷膜过滤后滤液中的多糖含量,首先称取葡萄糖配制成浓度为0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06mg/mL的标准溶液,加入苯酚和硫酸,用分光光度计在490nm下检测吸光度,建立标准曲线,得标准回归方程为A=4.7143C+0.03333,R=0.997547;然后将待测样品稀释后按相同的方法检测吸光度,代入回归方程计算含量,并根据稀释倍数计算滤液中的含量。
人参皂苷Re含量测定方法:采用HPLC法检测上述陶瓷膜过滤后滤液中的人参皂苷Re含量。高效液相色谱条件为:C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流速1mL/min,柱温为35℃,检测波长为203nm,乙腈(A)和水(B)作为流动相,梯度洗脱条件是0-35min流动相A为19%;35-55min流动相A为19-29%;55-70min流动相A为29%;70-100min流动相A为29-40%。
同时还检测了常规水煎提取滤液中总多糖和人参皂苷Re的含量,检测结果见表1。
表1不同复合菌剂对发酵液中总多糖和人参皂苷Re含量的影响
多糖含量(mg/mL) | 人参皂苷Re含量(mg/mL) | |
水煎提取 | 9.2 | 0.60 |
样品1 | 15.3 | 0.67 |
样品2 | 17.1 | 0.73 |
样品3 | 25.1 | 0.84 |
样品4 | 31.6 | 0.87 |
样品5 | 37.3 | 0.92 |
样品6 | 44.2 | 1.10 |
样品7 | 35.9 | 0.88 |
样品8 | 41.3 | 0.95 |
从以上结果可以看出,微生物发酵法制备的滤液中总多糖和人参皂苷Re的含量都明显高于常规水煎法;当乳酸菌为保加利亚乳杆菌和双歧杆菌时,发酵物中活性成分的含量高于仅使用保加利亚乳杆菌;当复合菌剂中加入伞枝犁头霉菌时,发酵物中两种活性成分的含量都得到显著增加;当复合菌剂中继续加入灵芝真菌时,发酵物中总多糖的含量有所提高;样品4-8之间进行比较,当复合菌剂中各菌含量为伞枝犁头霉菌1010CFU/mL、保加利亚乳杆菌107CFU/mL、双歧杆菌107CFU/mL、酵母菌107CFU/mL、灵芝真菌1.5%时,总多糖和人参皂苷Re的含量均最高。
以下实施例均以6号复合菌剂安排试验。
实施例2
黄芪500g,人参150g,甘草100g,肉桂100g
将以上药材超微粉碎成粒度为100目的细粉,然后分别加入到5000ml含有复合菌剂的发酵液中进行混合发酵,控制发酵温度为45℃,pH为6.5,转速为50r/min,发酵80小时后加热煮沸15min使微生物灭活,然后用0.22μm陶瓷膜过滤。
实施例3
黄芪500g,人参150g,甘草100g,肉桂100g
将以上药材超微粉碎成粒度为100目的细粉,然后分别加入到5000ml含有复合菌剂的发酵液中进行混合发酵,控制发酵温度为42℃,pH为6.3,转速为80r/min,发酵120小时后加热煮沸15min使微生物灭活,然后用0.22μm陶瓷膜过滤。
实施例4
黄芪500g,人参150g,甘草100g,肉桂100g
将以上药材超微粉碎成粒度为100目的细粉,然后分别加入到5000ml含有复合菌剂的发酵液中进行混合发酵,控制发酵温度为37℃,pH为6.0,转速为150r/min,发酵150小时后加热煮沸15min使微生物灭活,然后用0.22μm陶瓷膜过滤。
检测实施例2、3、4滤液中的总多糖和人参皂苷Re含量,结果见下表:
表2发酵工艺参数对发酵液中总多糖和人参皂苷Re含量的影响
多糖含量(mg/mL) | 人参皂苷Re含量(mg/mL) | |
实施例2 | 46.8 | 1.28 |
实施例3 | 54.3 | 1.33 |
实施例4 | 50.3 | 1.23 |
将实施例2-4得到的滤液减压浓缩,真空冷冻干燥,然后再加入糖粉制成颗粒,分配给40名肿瘤患者服用,患者基本情况见表3:
表3 40名肿瘤患者的基本情况
所有患者在治疗期间维持常规化疗,但均停止使用其它中药或保健食品,颗粒剂每天早、中、晚各服用一次,每次剂量12.5g(生药材),日服剂量为37.5g(生药材),连续服用一个月。
服用前和服用后各检测一次患者血液中白细胞及巨噬细胞,结果表明,早期19名患者中有18名患者血液中白细胞及多核白细胞数量增加17%左右,巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数显著上升15%,1名患者无明显提升,为肠癌患者,但是也无明显下降;21名晚期肿瘤中,16名患者血液中白细胞及多核白细胞数量增加5-7%,巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数提升5%,5名患者相关指数无明显提升。以上结果表明本发明制备的药物有助于抑制肿瘤细胞生长,对化疗患者具有辅助治疗作用。
Claims (9)
1.一种抗肿瘤药物的制备方法,其特征在于,该方法中所使用的原料药为:黄芪3-8重量份,人参1-3重量份,甘草0.5-2重量份,肉桂0.5-2重量份,该方法包括以下步骤:将以上药材超微粉碎成粒度为100-200目的细粉,然后加入到含有复合菌剂的发酵液中进行混合发酵,发酵完成后加热煮沸10-30min使微生物灭活,然后用0.22μm陶瓷膜过滤,将滤液减压浓缩,真空冷冻干燥,
所述复合菌剂中含有伞枝犁头霉菌、乳酸菌和酵母菌,所述发酵液中各菌的含菌量分别为:伞枝犁头霉菌107-1011CFU/mL、乳酸菌106-109CFU/mL、酵母菌106-109CFU/mL。
2.如权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法,其特征在于:所述发酵液中各菌的含菌量分别为:伞枝犁头霉菌1010CFU/mL、乳酸菌107CFU/mL、酵母菌107CFU/mL。
3.如权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法,其特征在于:所述复合菌剂中还含有灵芝真菌,所述发酵液中灵芝真菌的重量含量为0.5-5%。
4.如权利要求3所述抗肿瘤药物的制备方法,其特征在于:所述发酵液中灵芝真菌的重量含量为1.5%。
5.如权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法,其特征在于:所述乳酸菌为保加利亚乳杆菌和双歧杆菌。
6.如权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法,其特征在于:所述发酵是在温度为35-45℃,pH为6-6.5,转速为50-150r/min的条件下进行。
7.如权利要求6所述抗肿瘤药物的制备方法,其特征在于:所述发酵是在温度为42℃,pH为6.3,转速为80r/min的条件下进行。
8.如权利要求1所述抗肿瘤药物的制备方法,其特征在于:所述发酵的时间为80-150小时。
9.如权利要求8所述抗肿瘤药物的制备方法,其特征在于:所述发酵的时间为120小时。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Chen Bin Inventor after: Xu Ruijia Inventor before: Chen Bin |
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CB03 | Change of inventor or designer information | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201211 |
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