CN112011485B - 具除臭、促生作用的嗜吡啶红球菌Rp3及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一株降解堆肥中臭味物质粪臭素并促进植物生长的嗜吡啶红球菌及其应用。本发明所提供的嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.20444。该菌株分离于羊粪堆肥下土壤，对高浓度堆肥臭味物质‑粪臭素的降解率高，而且可以解除高浓度粪臭素对植物生长的抑制作用。该菌株营养需求简单、生产成本低，而且具有较高的耐盐性，利于将其应用于畜禽粪便污染环境的治理和净化，比其它降解菌剂更有优势，具有良好的应用前景。

Description

具除臭、促生作用的嗜吡啶红球菌Rp3及其应用

技术领域

本发明属于农业资源和环境保护技术领域，特别涉及一株对堆肥臭味物质粪臭素具有高效降解作用的嗜吡啶红球菌及其应用。

技术背景

氮杂环化合物是一类污染面广、毒性大的难降解有机物。多数氮杂环化合物有恶臭或刺激性气味，其中吲哚类氮杂环有机物是畜牧堆肥中有机污染物的主要成分，造成养殖场及其周边环境恶化，引起一系列环境污染和公共卫生问题。3-甲基吲哚俗称粪臭素，是吲哚的一种衍生物，是色氨酸的主要代谢物之一。虽然3-甲基吲哚能够调控肠道菌群，抑制产气杆菌、沙门氏菌等多种革兰氏阴性肠道菌的增殖，但对人和动物健康也有不良影响。已报道粪臭素对细胞具有遗传毒性并导致肿瘤的发生；能够引起多种反刍动物的急性肺水肿和肺气肿，严重时导致动物死亡；还可引起人神经内分泌功能和免疫功能的病变，严重可导致呼吸道细胞发生畸变和癌变，因此对粪臭素污染环境的净化具有重要意义。

采用物理化学方法可去除吲哚类氮杂环化合物的臭味，但该方法成本较高，且易形成二次污染，因此利用微生物降解吲哚类化合物的研究近年受到广泛关注。Vhile等(2012)认为不同微生物在色氨酸转化形成粪臭素途径中的作用不同，肠道菌群的改变导致粪臭素含量的改变。通过在饲料中添加乳酸、枯草芽孢杆菌等，可以明显降低猪粪中粪臭素的含量(Nowal等，2009)。如饲料中添加枯草芽孢杆菌后，猪粪中粪臭素含量由83.94ng/L降低到52.91ng/L(盛清凯等，2018)。但是已经排放到环境中的畜禽粪便中粪臭素仍然对环境具有很大的污染，如何降解畜禽粪便堆肥和污染环境中的粪臭素仍然是我们需要解决的问题。前人研究报道一些微生物可降解畜禽粪便污染环境中的粪臭素。如：Kohda等(1997)从猪粪和鸡粪堆肥中分离出一株马来提名梭菌(Clostridium malenominatum)A-3，该菌株在厌氧条件下可降解粪臭素的浓度为100～300mg·L^-1，在PYG培养液中培养4周对粪臭素的最高降解率为32.18％。Gu等(2002)从海底沉积物中分离出的产甲烷菌群在硫还原条件下对浓度为100μmol·L^-1的粪臭素具有降解作用；Li等(2010)分离到能降解粪臭素的恶臭假单胞菌Lpc24，在限氧条件下降解2.0mmol·L^-1粪臭素约需要30d。上述研究表明在厌氧条件下，微生物对粪臭素的降解需要时间比较长，有的还需要提供特殊的还原条件，在实际应用中有一定的局限性。有关微生物对粪臭素的有氧降解也有一些研究报道。如：从红树林底泥中分离出的铜绿假单胞菌Pesudomonas aeruginosa Gs(Yin和Gu，2006)、乳酸菌(Meng等，2013)、红假单胞菌(Rhodopseudomonas)和贪铜菌属(Cupriavidus)(Sharma et al.，2015；Fukuoka et al.，2015)，但这些菌株仅对低浓度的粪臭素具有降解作用。伯克霍尔德氏菌(Burkehoderia)(Ma等，2020)、无色杆菌(Achromobacter)和红球菌(Rhodococcus)为活性污泥中粪臭素的降解菌，其中红球菌菌株DMU1和DMU2在24h内可完全降解50mg/L的粪臭素(Ma等，2020)，但这株菌尚未鉴定到种，且该菌株是否对更高浓度的粪臭素具有降解作用尚未见报道。Tesso等(2019)从堆肥中分离到不动杆菌NTA1-2A和NTA1-6A菌株，这两株菌在粪臭素初始浓度小于200mg·L^-1时，对粪臭素降解率达到85％需要6天。因为粪臭素对菌株生长具有一定的毒性，获得对高浓度粪臭素具有高效快速降解能力的菌株仍然是畜禽粪便处理和环境治理迫在眉睫的重要任务。

除了获得降解菌资源外，对于农药、环境有毒有害物质的微生物降解菌，提高制剂中的含菌量，降低生产成本，提高其货架期是实现降解菌大规模生产和应用的前提条件。以往研究虽然获得了可以降解粪臭素的菌株，但如何保持降解菌及其制剂的活性很少有研究，因此开展堆肥臭味物质降解菌及其发酵工艺研究，研制具有我国自主知识产权的降解菌剂对畜禽粪便臭味物质粪臭素的降解具有重要的实际意义。

发明人于2019年4月从我国山西省应县采集羊粪堆肥下土壤，经过富集分离到一株粪臭素降解菌Rp3，被鉴定为嗜吡啶红球菌Rhodococcus pyridinovorans，该菌株对粪臭素具有高效降解作用，与100μg·mL^-1粪臭素共培养48h对粪臭素的降解率可达到98.4％，该菌株除了具有除臭作用外，还可以解除粪臭素对植株生长的影响，是一株非常有应用潜力的菌株。

发明内容

本发明的目的是提供一株降解环境中粪臭素含量并能促进植物生长的嗜吡啶红球菌及其应用。

本发明所提供的嗜吡啶红球菌具体为嗜吡啶红球菌(Rhodococcuspyridinovorans)Rp3，该菌株已于2020年7月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.20444。

本发明还保护活性成分为所述嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3的菌剂。

所述菌剂中还可包括吸附载体；所述吸附载体可为硅藻土、草炭、蛭石、稻壳粉、秸秆粉、糠醛渣、珍珠岩和碳酸钙中的至少一种。

更加具体的，在本发明的一个实施例中，所述吸附载体具体由糠醛渣和秸秆粉混和物(质量比25∶1)按照体积比1∶1的配比混和而成。

进一步，所述菌剂由所述嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3的发酵液，或对发酵液进行离心后所得菌泥与所述吸附载体按照1L∶1Kg至1L∶3Kg(如1L∶1Kg)的配比混和而成。

在本发明的一个实施例(实施例4)中，制备所述嗜吡啶红球菌(Rhodococcuspyridinovorans)Rp3的发酵液时采用大量发酵培养液，所述嗜吡啶红球菌Rp3的发酵液中，所述嗜吡啶红球菌Rp3的活菌数为50～100亿/mL(如50亿/mL)所述发酵液。其中，所述大量发酵培养液的溶剂为水，溶质及浓度如下：蔗糖1.4％、牛肉膏1.4％、酵母浸粉0.6％和硫酸铵0.15％；其中，％表示质量百分含量。相应的，在所制备得到的所述菌剂中，所述嗜吡啶红球菌Rp3的活菌数为30～100亿/g(如100亿/g)所述菌剂；所述菌剂的含水量在5～8％以内。

所述菌剂的制备方法也属于本发明的保护范围。

所述菌剂的制备方法，具体可包括如下步骤：

(1)培养所述嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3，得到所述嗜吡啶红球菌Rp3的发酵液；在所述发酵液中，所述嗜吡啶红球菌Rp3的活菌数为50～100亿/mL(如50亿/mL)；

(2)将步骤(1)所得发酵液或离心后的菌泥和所述吸附载体按照1L∶1Kg至1L∶3Kg(如1L∶1Kg)的配比混和，得到所述菌剂。

在步骤(1)中，培养所述嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3的培养基的溶剂为水，溶质及浓度如下：蔗糖1.2～1.6％、牛肉膏1.0～1.4％、酵母浸粉0.2～0.6％和硫酸铵0.1～0.2％：其中，％表示质量百分含量。

更加具体的，所述培养基的溶剂为水，溶质及浓度如下：蔗糖1.4％、牛肉膏1.4％、酵母浸粉0.6％和硫酸铵0.15％；其中，％表示质量百分含量。

所述嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3的发酵液也属于本发明的保护范围。

本发明还提供了一种用于畜禽粪便堆肥或畜禽粪便污染环境治理和净化的产品。

所述嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3或所述菌剂或所述发酵液在如下(1)或(2)中的应用也属于本发明的保护范围：

(1)治理畜禽养殖、畜禽粪便堆肥或畜禽粪便污染环境的治理。

(2)制备用于畜禽粪便污染环境治理的产品。

本发明所提供的嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3的CGMCCNo.20444具有如下优势：

1、该菌株分离于羊粪堆肥下土壤，更能适应畜禽粪便污染环境，而且生长迅速。

2、该菌株不仅对堆肥臭味物质-粪臭素具有高效降解作用并解除高浓度粪臭素对植物生长的抑制作用，而且具有较高的耐盐性，有利于其在不利环境中存活而发挥作用，是一株有潜力的降解菌。

3、该菌株的营养需求比较简单，发酵周期短，成本低，容易大规模生产和商品化应用。

本发明所提供的嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3 CGMCCNo.20444是2019年4月发明人从我国山西省应县采集羊粪堆肥下土壤，经过富集分离到的一株粪臭素降解菌。该菌株的特点是：在无机盐L2培养基(KH₂PO₄0.5g、K₂HPO₄1.5g、MgSO₄0.5g，、(NH₄)₂SO₄1.5g，蒸馏水定容至1L，pH自然)平板上培养24h时，菌体呈球状、杆状两种不同形态，培养至7d时，菌落呈圆形，粉红色、表面光滑。在营养培养基平板上菌落扩展速度很快，这是降解菌可大规模生产和应用的前提条件之一。该菌株对堆肥臭味物质-粪臭素具有趋化作用，可以高效降解粪臭素。除了具有降解粪臭素功能外，还具有较高的耐盐性，并可解除高浓度粪臭素对植物生长的抑制作用，是一株非常有潜力的菌株。经鉴定，该菌株为嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)，定名为Rp3。该菌株对100mg·L^-1的粪臭素降解率达到98.4％仅需要48h，其降解效率高于其他菌株。Rp3菌株发酵培养时，生长速度快、24小时之内可完成发酵，发酵结束后活菌数可达到50～100亿/mL，成产成本低。因此Rp3是一株非常有潜力的降解菌，从而提出了本发明。

保藏说明

菌种名称：嗜吡啶红球菌

拉丁名：Rhodococcus pyridinovorans

菌株编号：Rp3

保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心

保藏机构简称：CGMCC

地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号

保藏日期：2020年7月24日

保藏中心登记入册编号：CGMCC No.20444

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3的分离与鉴定

(一)粪臭素降解菌Rp3菌株的分离

本发明的红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3是从羊粪堆肥下土壤，经富集后，以粪臭素为唯一营养，稀释涂布后分离获得的，具体如下：

(1)粪臭素降解菌的分离

从山西省应县养殖场不同羊粪堆放处取样，多点取样后取样，每样品500g。低温保存带回实验室。将粪臭素母液加到250mL三角瓶中，待乙醇挥发后加入60mL无机盐培养液L2，振荡混匀，使粪臭素的终浓度为10mg·L^-1。将0.1g堆肥下土样加入培养液中，以不加样品的培养液为对照，每处理3个重复，28℃、180r·min^-1摇床振荡培养7d，作为第一周期富集培养液。取第一周期富集驯化后的菌液10mL，加入到60mL新配制的加有更高浓度粪臭素的富集培养液中，28℃、180r·min^-1摇床培养7d，以相同方法连续驯化5个周期。在第5个周期，驯化培养液中粪臭素含量达100mg·L^-1。取最后一次富集驯化的菌液，稀释涂布于含粪臭素50mg·L^-1的分离培养基上，28℃，恒温培养3d。挑取单菌落进行纯化。

其中，所述L2培养基组分及配比为：KH₂PO₄0.5g、K₂HPO₄1.5g、MgSO₄0.5g，、(NH₄)₂SO₄1.5g，蒸馏水定容至1L，pH自然，121℃高压灭菌30分钟。所述L2培养基平板为：在L2液体培养基中加入

1.8％琼脂，凝固后倒平板。经富集培养后，共获得3株可以在L2培养基平板生长的细菌，分别编号为1#、2#、3#。采用点滴平板趋化方法测试1#、2#、3#菌株对粪臭素的趋化反应。吸取1mL各菌株菌悬液(OD₆₀₀＝0.8)加入到温度为40℃的趋化培养基中，混和均匀，倒平板。凝固后，在平板中央放置少量粪臭素，28℃静置培养2d。结果表明：只有3#菌株在粪臭素周围形成趋化圈，说明3#菌对粪臭素降解能力最高，将其命名为菌株Rp3。

其中，所述的趋化培养基组分及配比为：KH₂PO₄0.5g、K₂HPO₄1.5g、MgSO₄0.5g、(NH₄)₂SO₄1.5g，琼脂2g，蒸馏水定容至1L，pH自然。

(2)Rp3菌株对粪臭素的降解效果

首先建立HPLC法测定粪臭素的标准曲线。具体方法：称取粪臭素标准样品10mg，置于10mL容量瓶中，用乙醇配置成1mg·mL^-1标准储备液。依次稀释，得到0、1、5、10、15、20、25μg·mL^-1标准系列溶液，经0.2μm有机滤膜过滤，HPLC测定其峰面积，每浓度重复测定三次。以进样浓度和所得峰面积建立线性回归方程。色谱条件：色谱柱为Hypersill BDSC₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)；柱温：室温；紫外检测波长：254nm；流动相：甲醇∶水为90∶10；流速：1mL·min^-1；进样量10μL。

Rp3菌株对粪臭素的降解效果：在灭菌的50mL三角瓶中加入粪臭素的乙醇溶液，挥发尽溶剂，分别加入灭菌的20mL无机盐培养液L2，150hz超声振荡10min，使三角瓶中粪臭素浓度为50和100mg·L^-1。按5％的接种量将菌株Rp3的菌悬液转接到L2培养液中，28℃，180r·min^-1振荡培养，于0、12、24、36、48h取样测定。同时设不接种细菌但含相同浓度粪臭素的L2培养液为对照；另设一个培养液中接种菌株Rp3菌悬液的处理，检测菌悬液细胞提取物是否影响粪臭素的检测，每处理3重复，于0、24、36、48h提取粪臭素。粪臭素的提取方法如下：将上述培养液加入等体积甲醇，5000r·min^-1离心10min，吸取1mL溶液，0.22μm有机滤膜过滤，4℃保存，待测。如提取液浓度太高，需进行稀释后再进行HPLC检测。

结果表明：粪臭素在浓度为0、1、5、10、15、20、25mg·L^-1范围内标准曲线方程为y＝10743x-6327.7，R²为0.9965，线性良好。粪臭素初始浓度为50mg·L^-1时，接种Rp3菌株后24h，粪臭素的降解率达100％；当粪臭素初始浓度提高到100mg·L^-1时，接种Rp3菌株后36h和48h，粪臭素的降解率分别为95.5％和98.4％(表1)。

表1嗜吡啶红球菌Rp3对粪臭素的降解作用

(二)粪臭素降解菌Rp3菌株的鉴定

提取菌株Rp3的基因组DNA，用通用引物27F和1492R扩增16S rDNA序列，并进行测序。

27F：5′-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3′；1492R：5′-TAC GGC TAC CTT GTT ACGACT T-3′。

菌株Rp3的16S rDNA的序列已经提交GenBank，登录号为MT664723。鉴于上述分子生物学特性鉴定结果，将步骤一分离并纯化得到的菌株Rp3鉴定为嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)。该嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)已于2020年7月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰两路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.20444。

实施例2、红球菌Rp3菌株的生长特性

(1)温度对红球菌Rp3生长的影响

挑取少量菌落稀释到10^-4、10^-5，涂布在LB固体平板上，分别放置在28℃、32℃、35℃、37℃培养箱中，每个温度梯度3个重复，并在第2、7大时观察并测量菌落直径。

结果表明：28～32℃更适宜菌株的生长(表2)。

表2不同温度对红球菌Rp3菌落扩展速度的影响

注：表中不同字字母表示差异显著(p≤0.05)

(2)NaCl含量对红球菌Rp3生长的影响

将菌株接种于NaCl含量分别为0％、2％、4％、6％、8％、10％、12％、14％的LB培养液中，28℃，180r·min^-1振荡培养48h，测定OD₆₀₀值。

结果表明：在培养液中NaCl浓度为0～10％时，Rp3菌株能够正常生长，且各浓度之间菌株生长无显著差异(表3)，说明Rp3菌株具有较高的耐盐性。

表3培养液中NaCl含量对红球菌Rp3生长的影响

注：表中不同字字母表示差异显著(p≤0.05)

(3)pH对红球菌Rp3生长的影响

将菌株接种于初始pH值分别为4、5、6、7、8、9的LB培养液中，28℃，180r·min^-1振荡培养48h，测定OD₆₀₀值。

结果表明：培养液的初始pH＜5和pH＞9时，Rp3菌株生长受到明显抑制(p≤0.05)，pH 6～8适宜Rp3菌株生长(表4)。

表4培养液pH对红球菌Rp3生长的影响

注：表中不同字字母表示差异显著(p≤0.05)

实施例3、红球菌Rp3菌株可解除粪臭素对黄瓜幼苗生长的抑制作用

黄瓜种子萌芽处理：将黄瓜种子在54℃烘烤3小时，晾凉后用1％NaClO消毒1分钟，无菌水洗5次，然后转移到湿润的无菌滤纸上，放到25℃下让黄瓜种子发芽。

在9cm的二分隔培养皿中倒入L2培养基。准确称取0.99g二氧化硅高温灭菌后加入0.01g的粪臭素，混和均匀，称取25mg混和物加入到平板一侧，使粪臭素的含量为250μg，平板另一侧放入3颗露白的黄瓜种子，CK为加入等量的二氧化硅，处理T1为加入二氧化硅、粪臭素混和物以及浓度为2×10⁷的Rp3菌悬液，T2为等量的二氧化硅和粪臭素混和物，每处理5次重复。培养皿放置在黑暗处，28℃培养3天，观察黄瓜幼苗的生长情况，测量根长和茎长。

结果表明：与正常生长黄瓜相比(CK)，250μg的粪臭素严重影响黄瓜幼苗的生长，加入菌株Rp3菌悬液后，可以有效缓解粪臭素的抑制作用，根长和茎长与空白对照无显著差异，可完全解除粪臭素对植株生长的抑制作用(表5)。

表5红球菌Rp3菌株对粪臭素抑制黄瓜生长的解除作用

注：表中不同字母代表差异显著性(p≤0.05)。

实施例4：嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3菌剂的制备

1、将实施例1获得的嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3 CGMCCNo.20444的菌苔移植到LB培养液中，28～30℃摇床振荡培养18h得到种子液。

其中，LB培养液的配方为：胰蛋白胨10g、NaCl 5g、酵母提取物5g，蒸馏水定容至1L。

2、按5％比例(体积比)将步骤1获得的种子液接种到大量培养发酵培养液中，培养温度28～30℃，转速150～180转/分，初始pH 7.0～7.2，培养时间24h。发酵完成后得到发酵液，发酵液中嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3 CGMCC No.20444的活菌数可达50亿/mL。

其中，大量发酵培养液配方为：蔗糖1.4％、牛肉膏1.4％、酵母浸粉0.6％和硫酸铵0.15％。

3、将步骤2获得的嗜吡啶红球菌发酵液经离心获得的菌泥与吸附载体——糠醛渣和秸秆粉(质量比25∶1)按照体积质量比为1∶1(即1L∶1Kg)的比例混和均匀，即得菌剂。所述离心转速为10000转/分，离心时间为20分钟；所述的菌剂中嗜吡啶红球菌(Rhodococcuspyridinovorans)Rp3 CGMCC No.20444的活菌数可达100亿/g，含水量在5％以内。

实施例5：嗜吡啶红球菌Rp3发酵液对堆肥臭味的降解作用

采用鲜羊粪进行试验。将羊粪1000g、吸附Rp3菌液的糠醛渣250g+秸秆粉10g(糠醛渣和秸秆粉混和物中Rp3的浓度为1×10⁸CFU/g)。将堆体含水率调整到65％，放入容积为3L的白色塑料桶中，每个处理重复3次，以羊粪堆肥为对照。采用恶臭官能检测法测定堆肥臭味的等级，具体方法：将发酵堆料倒出混和均匀后，立即在距离堆体30cm处用感官法评定臭味等级(表6)。采用HPLC法测定粪臭素的降解率。

表6臭气强度等级划分

结果表明：堆肥6天后，对照的臭味等级为5级，经菌液处理的堆肥臭味等级下降到1级，明显减轻了堆肥的臭味释放。HPLC测定堆肥中粪臭素的降解率可达到90.6％。

Claims (6)

1.嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3，保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20444。

2.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂的活性成分为权利要求1所述的嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3。

3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂为液体菌剂，所述液体菌剂中嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3活菌数为30～100亿/mL。

4.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂为固体菌剂，所述固体菌剂为所述嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3的发酵液和吸附载体按照1L∶1Kg至1L∶3Kg的配比混和而成，或所述嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3发酵液经离心后的菌泥和吸附载体按照1L∶1Kg至1L∶3Kg的配比混和而成，所述菌剂的制备方法包括如下步骤：

(1)培养权利要求1所述的嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3，得到嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3的发酵液；

(2)将步骤(1)所得发酵液或发酵液经离心后的菌泥和吸附载体按照1L∶1Kg至1L∶3Kg的配比混和，得到所述菌剂。

5.根据权利要求3所述菌剂的制备方法，其特征在于，所述的嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3液体菌剂的培养基溶剂为水，培养基溶质及浓度如下：蔗糖1.2～1.6％、牛肉膏1.0～1.4％、酵母浸粉0.2～0.6％和硫酸铵0.1～0.2％；其中，％表示质量百分含量。

6.根据权利要求1所述的嗜吡啶红球菌(Rhodococcus pyridinovorans)Rp3、权利要求2～4任意一项所述的菌剂及权利要求5方法制备得到的菌剂在畜禽粪便堆肥及粪便污染环境治理中的应用。