CN112010829B - 海洋真菌hk1-6中神经保护活性苯酚衍生物及其制备方法 - Google Patents

海洋真菌hk1-6中神经保护活性苯酚衍生物及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112010829B
CN112010829B CN201910467153.XA CN201910467153A CN112010829B CN 112010829 B CN112010829 B CN 112010829B CN 201910467153 A CN201910467153 A CN 201910467153A CN 112010829 B CN112010829 B CN 112010829B
Authority
CN
China
Prior art keywords
formula
phenol derivative
pharmaceutical composition
neuroprotective
pharmaceutically acceptable
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910467153.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN112010829A (zh
Inventor
陈敏
郑瑶瑶
申丽
王长云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yangzhou University
Original Assignee
Yangzhou University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yangzhou University filed Critical Yangzhou University
Priority to CN201910467153.XA priority Critical patent/CN112010829B/zh
Publication of CN112010829A publication Critical patent/CN112010829A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112010829B publication Critical patent/CN112010829B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
    • C07D309/34—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D309/36—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with oxygen atoms directly attached to ring carbon atoms
    • C07D309/38—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with oxygen atoms directly attached to ring carbon atoms one oxygen atom in position 2 or 4, e.g. pyrones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及海洋真菌HK1‑6中神经保护活性苯酚衍生物及其制备方法，所述苯酚衍生物具有式I所示的结构：

Description

海洋真菌HK1-6中神经保护活性苯酚衍生物及其制备方法
技术领域
本发明属于海洋天然药物化学领域，具体涉及海洋真菌HK1-6中神经保护活性苯酚衍生物及其制备方法。
背景技术
申请人先前研究(中国发明专利申请号：201711417393.6、201810658502.1；J.Nat.Prod.,2017,80(4),1081–1086、J.Nat.Prod.,2019,82(2),368-374)中公开了系列分离自海洋真菌Penicillium sp.HK1-6的抗耐药致病菌活性的化合物。本发明对海洋真菌HK1-6做进一步研究，获得了一种具有神经保护活性的苯酚衍生物。
发明内容
本发明提供一种海洋真菌HK1-6中神经保护活性苯酚衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述苯酚衍生物具有式I所示的结构：
Figure BDA0002080265110000011
本发明的另一实施方案提供上述式I结构的苯酚衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)先在菌种培养基中对海洋真菌HK1-6进行菌种培养；
(2)再在发酵培养基中对步骤(1)中的海洋真菌HK1-6进行发酵培养；
(3)将步骤(2)发酵培养得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取2-4次，合并萃取液后减压浓缩得到浸膏；经过色谱分离即得式I结构的苯酚衍生物。
本发明上述制备方法中步骤(1)中菌种培养基优选PDA培养基，进一步优选含有葡萄糖0.1％–10.0％、酵母膏0.01％–5％、蛋白胨0.01％–5％、琼脂0.1％–6.0％、氯化钠0.05％–10％，适量的水；更进一步优选含有葡萄糖0.1％–5.0％、酵母膏0.01％–2％、蛋白胨0.01％–2％、琼脂0.1％–3.0％、氯化钠0.05％–5％；上述百分比均为重量百分比；培养温度优选为0–45℃，进一步优选5–30℃，更进一步优选15–25℃；培养时间优选为2–10天，进一步优选为3、5、7天。步骤(2)中发酵培养基优选PDA培养基，进一步优选含有葡萄糖0.1％–10.0％、酵母膏0.01％–5％、蛋白胨0.01％–5％、溴化钠0.05％–10％，适量的水；更进一步优选含有葡萄糖0.1％–5.0％、酵母膏0.01％–2％、蛋白胨0.01％–2％、溴化钠0.05％–5％；上述百分比均为重量百分比；培养温度优选为0–45℃，进一步优选5–30℃，更进一步优选10–25℃；培养时间优选为20–40天，进一步优选21、24、28、30、32、35天；步骤(3)中所述色谱分离优选减压硅胶柱层析、正相硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、LH-20凝胶柱层析、高效液相制备色谱中的一种或几种组合。
本发明的另一实施方案提供海洋真菌HK1-6在制备上述式I结构的苯酚衍生物中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述式I结构的苯酚衍生物或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗神经损伤药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述式I结构的苯酚衍生物或其药学上可接受的盐在制备神经保护药物中的应用。
一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以上述式I结构的苯酚衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分。该药物组合物还可包括其他预防和/或治疗神经损伤药物。该药物组合物还可包括药学上可接的辅料(药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂)。该药物组合物的剂型优选固体制剂、半固体制剂或液体制剂等。
一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以上述式I结构的苯酚衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分。该药物组合物还任选包括其他神经保护药物。该药物组合物还可包括药学上可接的辅料(药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂)。该药物组合物的剂型优选固体制剂、半固体制剂或液体制剂等。
本发明所述的海洋真菌HK1-6同在先申请(申请号：201711417393.6)中的海洋真菌Penicillium sp.HK1-6，来源于红树林根际土壤。其菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2016年7月5日；保藏编号：CGMCCNo.12762；分类命名：青霉Penicillium sp.。
本发明中术语“药学上可接受的盐”是指非毒性的无机或有机酸和/或碱的加成盐，可参见“Salt selection for basic drugs”,Int.J.Pharm.(1986),33,201–217。
应理解，在本发明范围内，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1是式I化合物的1H NMR(600MHz,acetone-d6)谱图；
图2是式I化合物的13C NMR(150MHz,acetone-d6)谱图；
图3是式I化合物的HSQC谱图；
图4是式I化合物的1H–1H COSY谱图；
图5是式I化合物的HMBC谱图；
图6是式I化合物的HRESIMS谱图；
图7是式I化合物的神经保护活性图，A为式I化合物对正常星形胶质细胞细胞活力的影响图；B为式I化合物对模型星形胶质细胞活力的影响(OGD for 6h)图，###p<0.001vscontrol,*p<0.05vs OGD,***p<0.001vs OGD。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1
(1)海洋真菌HK1-6菌种的培养
真菌HK1-6的菌种培养所用的培养基为每1000mL水中加入：土豆200g煮沸取汁，葡萄糖20g，氯化钠30g，琼脂15g；使用时倒入玻璃培养皿中，制成培养基平板。真菌菌株接种于培养基平板中，在20℃下摇床培养3天。
(2)海洋真菌HK1-6的发酵
真菌HK1-6的发酵培养所用的发酵培养基为，每1000mL水中加入：土豆200g煮沸取汁，葡萄糖20g，氯化钠30g；使用时分装于锥形瓶中。真菌菌株接种于锥形瓶的培养基中，于25℃静置培养28天。
(3)式I结构的苯酚衍生物的分离纯化
取步骤(2)所得的发酵物30L，将发酵液和菌体分离后，发酵液用乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液减压浓缩得到发酵液浸膏；先进行减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯按100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100梯度洗脱，每个梯度收集两个柱体积，将其中50:50和40:60梯度洗脱得到的馏分合并后浓缩经正相硅胶柱层析(硅胶200-300目，洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯＝6:1-3:1)，再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为65％的MeOH/H2O，最终得到式I化合物(16.0mg，白色固体)。
Figure BDA0002080265110000041
结构确证数据：UV(MeOH)λmax(logε)290(0.9),206(1.9)nm；IR(KBr)νmax 3158,1570,1411,1268,1169,1120,1025,850,758,649cm-1；1H NMR(600MHz,acetone-d6)δH 6.38(1H,s,H-10),6.36(1H,s,H-8),5.84(1H,s,H-4),3.89(2H,s,H-6),2.53(3H,s,H-14),1.83(3H,s,H-15)；13C NMR(150MHz,acetone-d6)δC203.6(C,C-13),138.5(C,C-7),165.0(C,C-1),162.5(C,C-5),161.7(C,C-9),161.6(C,C-11),165.7(C,C-3),119.6(C,C-12),111.7(CH,C-8),102.8(CH,C-10),100.8(CH,C-4),98.6(C,C-2),38.3(CH2,C-6),32.4(CH3,C-14),8.5(CH3,C-15)；HRESIMS(positive)m/z 313.0694[M+Na]+(Calcd.for C15H14NaO6,313.0683).
实施例2神经保护活性测试
根据MTT法(Biomedicine&Pharmacotherapy,2016,84:925～930)研究式I化合物对氧糖剥夺(OGD)损伤大鼠脊髓星形胶质细胞的体外神经保护作用。
细胞培养。在试验用大鼠出生后24h内取其大脑皮层，用0.25％胰蛋白酶分散细胞，离心后将细胞培养在高糖培养基DMEM(添加有10％FBS,青霉素G(100units/mL)和链霉素(100μg/mL))，在37℃、5％CO2条件下培养，最终经12-14天培养获得单层星形胶质细胞。
细胞活力测试。将大鼠脊髓星形胶质细胞以1×104个/孔置于96孔板于5％CO2细胞培养箱中培养。将不同浓度的化合物(0,0.625,1.25,2.5,5.0,10.0,20.0μg/mL)添加到细胞培养基，培养24小时。采用MTT法检测细胞活力。每孔加入20μL MTT(5mg/mL)于37℃条件反应4h，然后每孔加入100μL DMSO溶解formazan，最后在自动酶标仪490nm下测OD值。
神经保护活性测定。大鼠脊髓星形胶质细胞以1×104个/孔置于96孔板于5％CO2细胞培养箱中培养。不同浓度的式I化合物(0.3125,0.625,1.25,2.5,5.0,10.0,20.0μg/mL)在氧糖剥夺前加入胶质细胞培养基培养24h，对照组在常氧条件下于正常DMEM培养基中培养，模型组不加化合物且经6h糖氧剥夺处理(5％CO2,1％O2,94％N2)。MTT法检测细胞活力。经糖氧剥夺后,每孔加入20μL MTT(5mg/mL)处理4h，然后每孔加入100μL DMSO溶解formazan，最后在自动酶标仪490nm下测OD值。
结果表明，式I化合物对星形胶质细胞基本无毒性；在0.3125～5μg/ml浓度范围内，化合物预处理对模型星形胶质细胞有明显的保护作用。即式I化合物能减轻OGD诱导的大鼠脊髓星形胶质细胞活力丧失，具有一定的神经保护作用(见附图7)。

Claims (9)

1.一种海洋真菌Penicillium sp.HK1-6中神经保护活性苯酚衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述苯酚衍生物具有式I所示的结构：
Figure FDA0003691419460000011
所述海洋真菌Penicillium sp.HK1-6的保藏编号为CGMCCNo.12762。
2.海洋真菌Penicillium sp.HK1-6在制备权利要求1所述式I结构的苯酚衍生物中的应用，所述海洋真菌Penicillium sp.HK1-6的保藏编号为CGMCCNo.12762。
3.权利要求1所述式I结构的苯酚衍生物或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗神经损伤药物中的应用。
4.权利要求1所述式I结构的苯酚衍生物或其药学上可接受的盐在制备神经保护药物中的应用。
5.一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以权利要求1所述式I结构的苯酚衍生物或其药学上可接受的盐作为有效成分。
6.权利要求5所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还包括其他预防和/或治疗神经损伤药物。
7.权利要求5所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还包括其他神经保护药物。
8.权利要求5-7任一项所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物还包括药学上可接的辅料。
9.权利要求8所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的剂型选自固体制剂、半固体制剂或液体制剂。
CN201910467153.XA 2019-05-31 2019-05-31 海洋真菌hk1-6中神经保护活性苯酚衍生物及其制备方法 Active CN112010829B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910467153.XA CN112010829B (zh) 2019-05-31 2019-05-31 海洋真菌hk1-6中神经保护活性苯酚衍生物及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910467153.XA CN112010829B (zh) 2019-05-31 2019-05-31 海洋真菌hk1-6中神经保护活性苯酚衍生物及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112010829A CN112010829A (zh) 2020-12-01
CN112010829B true CN112010829B (zh) 2022-08-16

Family

ID=73501904

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910467153.XA Active CN112010829B (zh) 2019-05-31 2019-05-31 海洋真菌hk1-6中神经保护活性苯酚衍生物及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112010829B (zh)

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016198623A1 (en) * 2015-06-10 2016-12-15 Danmarks Tekniske Universitet Use of heterologous expressed polyketide synthase and small molecule foldases to make aromatic and cyclic compounds

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1株海洋真菌产青霉酸的发酵优化研究;沈南星 等;《中国海洋药物》;20181215;第37卷(第06期);第33-37页 *
南海海洋真菌Penicillium sp.(386#)次级代谢产物再研究;魏美燕 等;《中山大学学报(自然科学版)》;20100715;第49卷(第04期);第77-80页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112010829A (zh) 2020-12-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110527629B (zh) 一种海洋真菌来源的布雷菲德菌素a、制备方法及其在抗农业致病菌方面的应用
CN108864004A (zh) 马齿苋中羟基二氢博伏内酯及其衍生物的用途
CN103087031A (zh) 双四氢苯并吡喃酮二聚体类化合物在抗癌药物中的应用
CN113717866B (zh) 一种海桑果内生真菌及其在制备抗肿瘤活性化合物中的应用
CN110257255B (zh) 红树尖瓣海莲内生真菌来源的苯并吡喃酮衍生物及其制备方法与应用
CN103627772B (zh) 一种雷公藤内酯醇衍生物的制备方法及其产物和应用
JP6130224B2 (ja) 新規化合物レンツトレハロース、その製造方法、及びその用途、並びに、新規微生物
CN111892611A (zh) 一种混源萜类晶体化合物及其在防治农业病虫害中的应用
CN112010829B (zh) 海洋真菌hk1-6中神经保护活性苯酚衍生物及其制备方法
CN108659089B (zh) 一种具有抗氧化作用的甾醇化合物及其在制备药物中的应用
CN117298250A (zh) 一种环肽化合物在制备抗癌药物中的应用及其药物组合物
CN106432169B (zh) 一种抗弧菌活性的异香豆素类化合物及其晶体
CN110527631B (zh) 海洋真菌hk1-22来源的不饱和脂肪酸类化合物、制备方法及其应用
CN110229131B (zh) 角果木内生真菌来源的苯并吡喃酮衍生物及其制备方法与应用
CN103275139B (zh) 十六碳双乙酰化一个双键内酯型槐糖脂及其应用
CN103275138B (zh) 十六碳双乙酰化无双键内酯型槐糖脂及其应用
CN110563688B (zh) 具有抗补体活性的苯并吡喃类化合物及其用途
WO2017215679A2 (zh) 苯丁酸氮芥的药物组合物及其抗抑郁的医药用途
CN102633616B (zh) 蒽醌二聚体衍生物Alterporriol P及其制备方法与应用
CN113143934B (zh) 熊果酸衍生物在制备预防或治疗心血管疾病药物中的应用
CN109180632A (zh) 一种从雷公藤中分离出的新化合物及其制备方法和医药用途
KR0143719B1 (ko) 백하수오로부터 추출한 암세포의 다중약제내성조절 작용을 갖는 폴리옥시프레그난 배당체
CN115501217B (zh) 一种脂肪酸类化合物在制备抗菌的药物中的用途
CN103242348A (zh) 吲哚啉二酮哌嗪类螺环化合物及其制备方法和用途
CN102618448B (zh) 补身烷型倍半萜环己烯酮衍生物、其制备方法及用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant