CN112007023A - 黄芩素在制备防治肥胖症及其并发症药物中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型预防和/或治疗肥胖症及其并发症的用途。具体涉及黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质作为活性成分在肥胖症及其胰岛素抵抗、血糖和/或血脂异常等并发症治疗中的应用，以及黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质作为活性成分在每日0.001～2000mg/kg体重范围内与其他活性成分和赋形剂联合制成的用于临床的固体药物形式。

Description

黄芩素在制备防治肥胖症及其并发症药物中的用途
技术领域
本发明涉及一种关于黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质在制备预防和/或治疗肥胖症及其并发症的药物中的应用。主要关于黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质在制备预防和/或治疗肥胖症及其胰岛素抵抗、糖代谢和/或脂代谢异常等肥胖症并发症药物中的应用。
背景技术
肥胖症是由能量摄入和消耗不平衡导致的一种长期的慢性代谢性疾病。近年来，生活方式的改变，体力活动的减少和高热量食物的广泛摄入已经导致了当代人的正能量平衡。摄入的多余和未利用的食物被转化为脂质成分，储存在肝脏、脂肪和其他组织中。在发达国家和发展中国家，肥胖症的发生率均逐年增加。肥胖症个体更容易患糖尿病、心血管疾病、高血压、代谢综合征、骨关节炎、不育症、尿失禁、肺部疾病，以及某些类型的癌症。肥胖症给个人和社会带来巨大的心理及经济负担，因此肥胖症已经成为一个不容忽视的公共卫生问题。在过去的三十年中，一些药物被开发出来并用于肥胖症的治疗，但其中一些药物已经被撤回，目前，即使是FDA批准的现有药物也存在相当大的副作用。因此，寻找安全有效的肥胖症预防和/或治疗药物具有重要意义。
黄芩素(化学名：5，6，7-三羟基黄酮；英文名：Baicalien)，其化学结构如下：
Figure BDA0002080451220000011
近年来研究发现，黄芩素具有解热、镇痛、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、清除氧自由基、保肝、保护心脑血管及神经元、改善肺动脉高压、治疗帕金森病等作用，具体见如下中国专利(公开号：CN1556108A，CN1606979A，CN1606979A，CN1939295A，CN1559400A，CN1528289A等)。为了解决黄芩素难于吸收的问题，中国医学科学院药物研究所杜冠华、吕扬等制备了黄芩素两种晶型物质(α晶型和β晶型)，其中β晶型的吸收率可比α晶型提高2倍以上，具体见中国专利《黄芩素两种晶型物质、其制法和其药物组合物与用途》(公开号：CN101434593A)。但是现有技术中没有公开黄芩素预防和/或治疗肥胖症及其并发症的用途。
发明内容
本发明要解决的技术方案是提供一种新的可以用于制备预防和/或治疗肥胖症及其并发症药物的药物，即黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质在制备预防和/或治疗肥胖症及其并发症药物中的应用，其中黄芩素(α+β)混合晶型物质是黄芩素α晶型与β晶型分别以1％-99％范围内的任何比例的混合晶型物质。所述的肥胖症主要为身体质量指数BMI大于或等于28的人群。所述的肥胖症并发症，包括但不限定于，胰岛素抵抗、糖代谢和/或脂代谢异常等，通常表现为血糖值高于正常值和/或全部血脂指标或部分血脂指标浓度增高。
本发明还涉及预防和/或治疗肥胖症及其并发症的药物组合物，其特征在于，以黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质作为药物活性成分，并含有药学上可接受的载体。黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质还可作为药物活性成分开发制备含有一种或多种活性成分之一的复方药物制剂。因此本发明的药物组合物，除含有黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质作为药物活性成分外，还含有其他活性成分，以及药用赋形剂。
所述的药物组合物，包括片剂、胶囊、丸剂、针剂、缓释药物制剂、控释药物制剂。
所述的药学上可接受的载体包括淀粉、糊精、多甲基纤维素钠、硬脂酸镁、滑石粉。
药物组合物中黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质的每日用药剂量在0.001～2000mg/kg体重范围内，优选0.01-1000mg/kg，更优选0.1-500mg/kg，最优选1-100mg/kg。本发明显示黄芩素α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质具有改善肥胖症及其并发症的作用，适用于肥胖症及其并发症的治疗。此外，本发明发现黄芩素两种晶型物质在发挥药物治疗作用中存在药物生物活性作用差异，其中β晶型药物生物活性作用大于α晶型。
本发明因此还涉及以本发明化合物作为活性成分的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也制成缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；润湿剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、粘合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂、增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等；如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其他添加剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物每天的合适剂量范围为0.001-2000mg/kg体重，优选为0.01-1000mg/kg体重，更优选为0.1-500mg/kg体重，最优选为1-100mg/kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症治疗合并使用。当本发明化合物与其他治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
有益技术效果：
本发明首次发现黄芩素可用于制备抗肥胖药物，具体涉及α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质在制备预防和/或治疗肥胖症及其胰岛素抵抗、糖代谢和/或脂代谢异常等肥胖症并发症药物中的应用。
附图说明
图1黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠体重的影响。
图2黄芩素两种晶型物质给药5周对高脂饲料诱导肥胖小鼠体重增长率的影响。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)。
图3黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠体重增长率的影响。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)。
图4黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠24小时摄食量的影响。
图5黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠24小时摄水量的影响。
图6黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠体脂率的影响。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，##P<0.01(与模型对照组相比)，###P<0.001(与模型对照组相比)。
图7黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠禁食血糖的影响。**P<0.01(与正常对照组相比)，***P<0.001(与正常对照组相比)，##P<0.01(与模型对照组相比)。
图8黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠禁食血糖的影响。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，###P<0.001(与模型对照组相比)。
图9黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠葡萄糖耐量的影响。
图10黄芩素两种晶型物质给药8周后高脂饲料诱导肥胖小鼠葡萄糖耐量曲线下面积。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，##P<0.01(与模型对照组相比)，###P<0.001(与模型对照组相比)。
图11黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠胰岛素耐量的影响。
图12黄芩素两种晶型物质给药8周后高脂饲料诱导肥胖小鼠胰岛素耐量曲线下面积。**P<0.01(与正常对照组相比)，***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，###P<0.001(与模型对照组相比)。
图13黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆甘油三酯浓度的影响。#P<0.05(与模型对照组相比)。
图14黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆总胆固醇浓度的影响。***P<0.001(与正常对照组相比)。
图15黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆低密度脂蛋白浓度的影响。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)。
图16黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆高密度脂蛋白浓度的影响。***P<0.001(与正常对照组相比)。
图17黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆甘油三酯浓度的影响。*P<0.05(与正常对照组相比)，**P<0.01(与正常对照组相比)。
图18黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆总胆固醇浓度的影响。***P<0.001(与正常对照组相比)。
图19黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆低密度脂蛋白浓度的影响。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，##P<0.01(与模型对照组相比)。
图20黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆高密度脂蛋白浓度的影响。***P<0.001(与正常对照组相比)。
图21黄芩素两种晶型物质连续给药8周后，高脂饲料诱导肥胖小鼠红外热成像。
图22黄芩素两种晶型物质给药8周后对高脂饲料诱导肥胖小鼠体温的影响。*P<0.05(与正常对照组相比)，**P<0.01(与正常对照组相比)，***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，##P<0.01(与模型对照组相比)，###P<0.001(与模型对照组相比)。
图23黄芩素对脂肪细胞线粒体内膜解偶联蛋白1(uncoupling protein1,UCPl)的激动作用。*P<0.05(与正常对照组相比)。
具体实施方式
药理实验
实验小鼠：70只5周龄C57BL/6Cnc雄性小鼠，适应性喂养1周后，从中随机抽取10只作为正常对照组，其余作为高脂饲料诱导肥胖组。正常对照组喂养标准小鼠饲料，高脂饲料诱导肥胖症组喂养高脂饲料(60％热量来自脂肪,美国Research Diets公司)。每周记录小鼠体重及摄食摄水变化。喂养4周后，将高脂饲料诱导肥胖组小鼠随机分为6组，每组10只，分别为：模型对照组、盐酸二甲双胍阳性对照组(200mg/kg)、黄芩素α晶型组(250mg/kg)、黄芩素β晶型组(125mg/kg)、黄芩素β晶型组(250mg/kg)、黄芩素β晶型组(500mg/kg)。分组后灌胃给药，每天给药1次，连续给药8周。盐酸二甲双胍和黄芩素两种晶型物质由中国医学科学院药物研究所杜冠华课题组提供。
实验例1、黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠体重及摄食摄水的影响
实验方法：每周记录小鼠体重及摄食摄水变化。
实验结果：高脂饲料喂养后小鼠体重逐渐增加，喂养4周后，高脂饲料诱导肥胖组小鼠体重明显增加，与正常对照组相比具有统计学差异。黄芩素两种晶型物质连续给药8周，逐渐降低高脂饲料诱导肥胖小鼠的体重增长率，且相同剂量(250mg/kg)β晶型物质抗肥胖生物活性大于α晶型物质(图1，表1)。黄芩素两种晶型物质连续给药5周后，黄芩素β晶型组(250mg/kg)体重增长率相比于模型对照组降低13.0％，并且与模型对照组相比开始出现统计学差异(P<0.05)(图2，表2)。在给药终点第8周时，与模型对照组相比，黄芩素α晶型组(250mg/kg)体重增长率降低10.3％，黄芩素β晶型组(125mg/kg)体重增长率降低12.0％，黄芩素β晶型组(250mg/kg)体重增长率降低最显著为26.3％，黄芩素β晶型组(500mg/kg)体重增长率降低22.9％，盐酸二甲双胍阳性对照组(200mg/kg)体重增长率降低18.8％，其中黄芩素β晶型组(250mg/kg)与黄芩素β晶型组(500mg/kg)的体重增长率降低具有统计学差异(P<0.05)(图3，表3)。但是黄芩素两种晶型物质连续给药8周后并不影响高脂饲料诱导肥胖小鼠的24小时摄食摄水量(图4，图5，表4，表5)。
表1黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠体重的影响。
Figure BDA0002080451220000061
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析；#P<0.05(与模型对照组相比)。
表2黄芩素两种晶型物质给药5周对高脂饲料诱导肥胖小鼠体重增长率的影响
Figure BDA0002080451220000062
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析；***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)。
表3黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠体重增长率的影响。
Figure BDA0002080451220000071
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析；***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)。
表4黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠24小时摄食量的影响。
Figure BDA0002080451220000072
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。
表5黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠24小时摄水量的影响。
Figure BDA0002080451220000073
Figure BDA0002080451220000081
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。
实验例2、黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠体脂率的影响
实验方法：采用核磁共振方法检测小鼠体脂率，体脂率越高，表明小鼠肥胖症越严重。体脂率降低，表明小鼠肥胖症状况有所改善。
实验结果：与正常对照组相比，模型对照组体脂率出现明显升高(P<0.001)。黄芩素两种晶型物质连续给药8周后，与模型对照组相比，盐酸二甲双胍阳性对照组、黄芩素α晶型与β晶型均能明显降低高脂饲料诱导肥胖小鼠的体脂率，且相同剂量(250mg/kg)β晶型物质(P<0.001)降低体脂率的生物活性大于α晶型物质(P<0.05)(图6，表6)。
表6黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠体脂率的影响。
Figure BDA0002080451220000082
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，##P<0.01(与模型对照组相比)，###P<0.001(与模型对照组相比)。
实验例3、黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠糖代谢的影响
3.1黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠禁食血糖的影响
实验方法：黄芩素两种晶型物质连续给药4周后，小鼠自上午8:00开始禁食，10:00灌胃给药，12:00尾尖取血，采用辅理善血糖仪和辅理善血糖试纸测定小鼠禁食血糖值。
实验结果：与正常对照组相比，模型对照组小鼠的禁食血糖明显升高(P<0.001)，说明模型对照组小鼠出现高血糖。黄芩素两种晶型物质连续给药4周后，与模型对照组相比，黄芩素β晶型显示出降低小鼠禁食血糖的作用，其中黄芩素β晶型组(250mg/kg)降低禁食血糖作用最为明显(P<0.01)(图7，表7)。
表7黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠禁食血糖的影响。
Figure BDA0002080451220000091
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。**P<0.01(与正常对照组相比)，***P<0.001(与正常对照组相比)，##P<0.01(与模型对照组相比)。
3.2黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠禁食血糖的影响
实验方法：黄芩素两种晶型物质连续给药8周后，小鼠自上午8:00开始禁食，10:00灌胃给药，12:00尾尖取血，采用辅理善血糖仪和辅理善血糖试纸测定小鼠禁食血糖值。
实验结果：与正常对照组相比，模型对照组小鼠的禁食血糖明显升高，表明模型对照组小鼠出现高血糖。黄芩素两种晶型物质连续给药8周后，与模型对照组相比，黄芩素两种晶型物质均显示出降低小鼠禁食血糖的趋势，其中黄芩素β晶型组(250mg/kg)降低禁食血糖作用最为明显(P<0.05)(图8，表8)。
表8黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠禁食血糖的影响。
Figure BDA0002080451220000092
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，###P<0.001(与模型对照组相比)。
3.3黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠葡萄糖耐量的影响
实验方法：黄芩素两种晶型物质连续给药8周后，小鼠自上午8:00开始食，10:00灌胃给药，12:00尾尖取血，采用辅理善血糖仪和辅理善血糖试纸测定高脂饲料诱导肥胖小鼠禁食血糖值，记录为0min血糖值。随后立即腹腔注射20％葡萄糖，2g/kg。分别于30min、60min、120min尾尖取血，采用辅理善血糖仪和辅理善血糖试纸测定小鼠血糖值。通过AUC＝0.25×空腹血糖+0.5×30min血糖+0.75×60min血糖+0.5×120min血糖公式计算曲线下面积，比较造模及给药对葡萄糖耐量的影响。
实验结果：与正常对照组小鼠相比，模型对照组小鼠腹腔注射葡萄糖后血糖水平升高更为明显，说明模型对照组小鼠出现糖耐量异常。黄芩素两种晶型物质连续给药8周后，α晶型与β晶型均显示出明显改善高脂饲料诱导肥胖小鼠葡萄糖耐量的作用，其中黄芩素β晶型组(250mg/kg)作用最明显(P<0.001)，其改善糖耐量的生物活性大于相同剂量(250mg/kg)的α晶型物质(P<0.05)(图9，图10，表9，表10)。
表9黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠葡萄糖耐量的影响。
Figure BDA0002080451220000101
注：n＝8-10。
表10黄芩素两种晶型物质给药8周后高脂饲料诱导肥胖小鼠葡萄糖耐量曲线下面积。
Figure BDA0002080451220000102
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，##P<0.01(与模型对照组相比)，###P<0.001(与模型对照组相比)。
综上，黄芩素β晶型对高脂饲料诱导肥胖小鼠的高血糖具有降低作用，纠正受损的葡萄糖耐量，从而改善肥胖引发的糖代谢异常。
实验例4、黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠胰岛素抵抗的影响
实验方法：黄芩素两种晶型物质连续给药8周后，小鼠自上午8:00开始禁食，10:00灌胃给药，12:00尾尖取血，采用辅理善血糖仪和辅理善血糖试纸测定高脂饲料诱导肥胖小鼠禁食血糖值，记录为0min血糖值。随后立即腹腔注射用生理盐水新鲜配置的0.5U/kg胰岛素(胰岛素注射液(400U:10ml)，江苏万邦生化医药股份有限公司)。分别于15min、30min、60min、90min尾尖取血，采用辅理善血糖仪和辅理善血糖试纸测定小鼠血糖值。通过AUC＝0.125×空腹血糖+0.25×15min血糖+0.375×30min血糖+0.5×60min血糖+0.25×90min血糖公式计算曲线下面积，比较造模及给药对胰岛素耐量的影响。
实验结果：与正常对照组相比，模型对照组小鼠胰岛素耐量曲线下面积明显增加(P<0.001)，出现明显的胰岛素抵抗。连续给药8周后，黄芩素β晶型组(250mg/kg)、黄芩素β晶型组(500mg/kg)均显示对高脂饲料诱导肥胖小鼠的胰岛素耐量具有改善作用(P<0.05)，证实黄芩素β晶型具有改善肥胖引发胰岛素抵抗的作用(图11，图12表11，表12)。
表11黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠胰岛素耐量的影响。
Figure BDA0002080451220000111
注：n＝8-10。
表12黄芩素两种晶型物质给药8周后高脂饲料诱导肥胖小鼠胰岛素耐量曲线下面积。
Figure BDA0002080451220000112
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。**P<0.01(与正常对照组相比)，***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，###P<0.001(与模型对照组相比)。
实验例5、黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠血脂代谢的影响
5.1黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血脂代谢的影响
实验方法：黄芩素两种晶型物质连续给药4周后，小鼠眼眶取血于肝素化EP管中。4℃，5000rpm离心10分钟。将上清液转移至新的EP管中，取12μL上清液用生理盐水稀释5倍至60μL，于全自动生化分析仪(TBA-40FR，东芝，日本)中检测甘油三酯(甘油三酯测定试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司)、总胆固醇(总胆固醇测定试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司)、低密度脂蛋白(低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司)以及高密度脂蛋白的浓度(高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司)。
实验结果：与正常对照组相比，模型对照组小鼠甘油三酯水平无明显变化；与模型对照组相比，连续给药4周后，黄芩素β晶型物质显示出降低高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆甘油三酯的作用，其中黄芩素β晶型组(500mg/kg)具有统计学差异(P<0.05)(图13，表13)。与正常对照组相比，模型对照组小鼠总胆固醇明显升高(P<0.001)；黄芩素β晶型各剂量组给药4周均有剂量依赖性降低总胆固醇的趋势，但无统计学差异(图14，表14)。与正常对照组相比，模型对照组小鼠低密度脂蛋白明显升高(P<0.001)；与模型对照组相比，黄芩素β晶型各剂量组具有剂量依赖性降低低密度脂蛋白的作用，其中250mg/kg组与500mg/kg组具有统计学差异(P<0.05)；相同剂量(250mg/kg)β晶型物质(P<0.05)降低低密度脂蛋白的生物活性大于α晶型物质(P>0.05)(图15，表15)。与正常对照组相比，模型对照组小鼠高密度脂蛋白浓度明显升高(P<0.001)；黄芩素β晶型各剂量组均有剂量依赖性降低高密度脂蛋白的趋势，但无统计学差异(图16，表16)。综上，黄芩素β晶型给药4周对于肥胖引发的高血脂具有降低作用。
表13黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆甘油三酯浓度的影响。
Figure BDA0002080451220000121
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。#P<0.05(与模型对照组相比)。
表14黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆总胆固醇浓度的影响。
Figure BDA0002080451220000122
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。***P<0.001(与正常对照组相比)。
表15黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆低密度脂蛋白浓度的影响。
Figure BDA0002080451220000131
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)。
表16黄芩素两种晶型物质给药4周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆高密度脂蛋白浓度的影响。
Figure BDA0002080451220000132
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。***P<0.001(与正常对照组相比)。
5.2黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血脂代谢的影响
实验方法：黄芩素两种晶型物质连续给药8周后，小鼠眼眶取血于肝素化EP管中。4℃，5000rpm离心10分钟。将上清液转移至新的EP管中，取12μL上清液用生理盐水稀释5倍至60μL，于全自动生化分析仪(TBA-40FR，东芝，日本)中检测甘油三酯(甘油三酯测定试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司)、总胆固醇(总胆固醇测定试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司)、低密度脂蛋白(低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司)以及高密度脂蛋白的浓度(高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，北京中生北控生物科技股份有限公司)。
实验结果：与正常对照组相比，模型对照组小鼠甘油三酯浓度反而出现降低(P<0.05)(图17，表17)；与模型对照组相比，黄芩素各晶型给药组均对甘油三酯无明显影响。与正常对照组相比，模型对照组小鼠总胆固醇明显升高(P<0.001)；黄芩素β晶型各剂量组给药8周均有剂量依赖性降低总胆固醇的趋势，但无统计学差异(图18，表18)。与正常对照组相比，模型对照组小鼠低密度脂蛋白明显升高(P<0.001)；与模型对照组相比，黄芩素β晶型各剂量组给药8周具有剂量依赖性降低低密度脂蛋白的作用，其中500mg/kg组具有统计学差异(P<0.01)(图19，表19)。与正常对照组相比，模型对照组小鼠高密度脂蛋白浓度明显升高(P<0.001)；黄芩素β晶型各剂量组给药8周均有剂量依赖性降低高密度脂蛋白的趋势，但无统计学差异(图20，表20)。综上，黄芩素β晶型给药8周对于肥胖引发的高血脂具有降低作用。
表17黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆甘油三酯浓度的影响。
Figure BDA0002080451220000141
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。*P<0.05(与正常对照组相比)，**P<0.01(与正常对照组相比)。
表18黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆总胆固醇浓度的影响。
Figure BDA0002080451220000142
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。***P<0.001(与正常对照组相比)。
表19黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆低密度脂蛋白浓度的影响。
Figure BDA0002080451220000143
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。***P<0.001(与正常对照组相比)，
#P<0.05(与模型对照组相比)，##P<0.01(与模型对照组相比)。
表20黄芩素两种晶型物质给药8周对高脂饲料诱导肥胖小鼠血浆高密度脂蛋白浓度的影响。
Figure BDA0002080451220000144
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。***P<0.001(与正常对照组相比)。
实验例6、黄芩素两种晶型物质对高脂饲料诱导肥胖小鼠体温的影响
实验方法：黄芩素两种晶型物质连续给药8周后，采用手持式红外热成像仪(E8Wifi，FLIR，美国)检测小鼠体温。
实验结果：与正常对照组相比，模型对照组小鼠体温未发生明显改变，黄芩素两种晶型物质连续给药8周后，α晶型与β晶型均能够明显升高高脂饲料诱导肥胖小鼠体温，其中黄芩素β晶型组(250mg/kg)与黄芩素β晶型组(500mg/kg)最为显著(分别为P<0.001、P<0.01)(图21，图22，表21)。
表21黄芩素两种晶型物质给药8周后对高脂饲料诱导肥胖小鼠体温的影响。
Figure BDA0002080451220000151
注：n＝8-10，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。*P<0.05(与正常对照组相比)，**P<0.01(与正常对照组相比)，***P<0.001(与正常对照组相比)，#P<0.05(与模型对照组相比)，##P<0.01(与模型对照组相比)，###P<0.001(与模型对照组相比)。
实验例7、黄芩素对脂肪细胞线粒体内膜解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)的激动作用
棕色脂肪组织具有非震颤性产热功能，能够通过升高体温耗散能量。其产热功能源于其富含大量线粒体且特异性高表达线粒体内膜解偶联蛋白1(uncoupling protein1,UCPl)，UCPl促进质子由线粒体内外膜间隙漏入线粒体内，从而使线粒体电子传递链产生电化学势能并以热能的形式散发。因此，我们在本发明人申请的专利《抗代谢综合征药物靶点UCP1的基因工程细胞株和高通量药物筛选模型的建立及应用》(申请号：201811248715.3)的基础上，检测了黄芩素对于脂肪细胞UCP1启动子活性的调节作用。
实验方法：将UCP1启动子区域插入luciferase和tdTomato的稳转脂肪细胞株种于96孔板中，进行成脂诱导分化，Day6分别加入1、3、10、30μmol/L的黄芩素处理，分别于6h，12h，24h及48h后采用报告基因方法检测Luciferase的活性，观察黄芩素是否对UCP1启动子活性具有调节作用，并确定其有效作用浓度和有效作用时间。
实验结果：黄芩素能够增强脂肪细胞UCP1启动子活性，有效作用浓度为10μmol/L和30μmol/L，有效作用时间为24h和48h(图23，表22)。综上，黄芩素的抗肥胖症及并发症的作用可能与激动UCP1有关。
表22黄芩素对脂肪细胞线粒体内膜解偶联蛋白1(uncoupling protein1,UCPl)的激动作用。
Figure BDA0002080451220000161
注：n＝3-5，mean±SEM，采用t检验进行统计学分析。*P<0.05(与正常对照组相比)。

Claims (11)

1.黄芩素在制备预防和/或治疗肥胖症及其并发症药物中的应用，
Figure FDA0002080451210000011
2.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的黄芩素为α晶型、β晶型或(α+β)混合晶型物质。
3.根据权利要求2的应用，其特征在于，所述黄芩素(α+β)混合晶型物质是黄芩素α晶型与β晶型分别以1％-99％范围内的任何比例的混合晶型物质。
4.根据权利要求的1-3任一项的应用，其特征在于，所述的肥胖症是指人的身体质量指数BMI大于或等于28kg/m2。
5.根据权利要求1-3任一项的应用，其特征在于，所述的肥胖症并发症选自肥胖症引起的胰岛素抵抗、糖代谢异常、脂代谢异常。
6.根据权利要求5的应用，其特征在于，所述的糖代谢异常是血糖值高于正常值。
7.根据权利要求6的应用，其特征在于，所述的糖代谢异常包括糖耐量异常，糖尿病。
8.根据权利要求5的应用，其特征在于，所述的脂代谢异常选自至少一种血脂指标浓度增高。
9.根据权利要求8的应用，其特征在于，所述的血脂指标选自甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。
10.一种组合物在制备预防和/或治疗肥胖症及其并发症的药物中的应用，其特征在于，所述的组合物以黄芩素作为活性成分，并含有药学上可接受的载体。
11.根据权利要求10的应用，其特征在于，所述的组合物包括片剂、胶囊、丸剂、针剂、缓释药物制剂、控释药物制剂。
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