CN111995478A - 一种含有海藻素的微生物肥料及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物肥料技术领域，具体涉及一种含有海藻素的微生物肥料及其制备方法和应用。本发明提供的微生物肥料采用淡紫拟青霉、克里布所类芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌多种微生物菌剂配合，对根腐病和根结线虫有明显的抑制作用，与海藻素配合，利用海藻素中多种营养成分，促进植物根部发育，改善作物品质，不含化学药物，施用后无有毒物质残留。实施例的结果表明，本发明提供的含有海藻素的微生物肥料施用于脐橙、西瓜和蜜柚时，能够促进植株根系生长，有效降低根腐病和根结线虫的病害情况，与仅适用常规肥料相比，作物增产可达10.23％。

Description

一种含有海藻素的微生物肥料及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于微生物肥料技术领域，具体涉及一种含有海藻素的微生物肥料及其制备方法和应用。
背景技术
经济作物和果树的根部病虫害的研究现主要集中在根结线虫病和根腐病(包括茎腐病)，其中根结线虫是危害农作物的重要病原生物之一，它广泛分布于世界各地。目前国际上报道的根结线虫有80多种，主要寄生在蔬菜、粮食作物、经济作物、果树、观赏植物及杂草等200多种寄主上。温带、亚热带、热带地区的植物受害尤其严重，病害发生后，一般减产10～20％，严重的达75％以上。而根腐病是一种真菌引起的病，主要危害幼苗，成株期也能发病。根腐病的传播途径主要是通过田间耕作、地下害虫和土壤线虫所造成的伤口侵入的，即土壤害虫、地下线虫是根腐病的传播媒介，因此，防治地下害虫和线虫是防治根腐病害的关键要素。
目前，根结线虫的防治以化学防治为主，如我国常用的杀线虫剂有：万强、涕灭威、威百亩、胺线磷、克线丹等，另外，用溴甲烷进行土壤消毒是我国蔬菜保护地用以防治土传病害的主要措施之一；对根腐病的防治也是以化防为主，如现多采用硫酸铜、石硫合剂、农抗、多菌灵、喹啉酮等药物进行灌根防控。这些化学药物会引发病原生物的抗药性，药物残留对土壤环境均有不同程度的污染，溴甲烷对大气臭氧层具有破坏作用。
因此，需要提供一种能够有效防治根结线虫病和根腐病，且施用后无有毒物质残留的肥料。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含有海藻素的微生物肥料及其制备方法和应用。本发明提供的微生物肥料以海藻素和微生物为主要组分，施用后无有毒物质残留，且对植物的根腐病、根结线虫等有明显的抑制作用。
为了实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种含有海藻素的微生物肥料，按质量含量计，包括淡紫拟青霉发酵液25～35％，克里布所类芽孢杆菌发酵液15～25％，侧孢短芽孢杆菌发酵液35～45％，以及海藻素5～15％。
优选的，所述微生物肥料包括淡紫拟青霉发酵液30％，克里布所类芽孢杆菌发酵液20％，侧孢短芽孢杆菌发酵液40％，以及海藻素10％。
优选的，所述淡紫拟青霉发酵液中有效活菌数为30～50亿/mL。
优选的，所述淡紫拟青霉发酵液中的淡紫拟青霉包括淡紫拟青霉三炬03 号种，保藏编号为CCTCC No.M2010165。
优选的，所述克里布所类芽孢杆菌发酵液中有效活菌数为0.5～2亿/mL。
优选的，所述克里布所类芽孢杆菌发酵液中的克里布所类芽孢杆菌包括克里布所类芽孢杆菌三炬021号种，保藏编号为CGMCC No.17248。
优选的，所述侧孢短芽孢杆菌发酵液中有效活菌数为200～300亿/mL。
本发明还提供了上述技术方案所述微生物肥料的制备方法，包括：将淡紫拟青霉发酵液、克里布所类芽孢杆菌发酵液、侧孢短芽孢杆菌发酵液和海藻素混合，得到微生物肥料。
本发明还提供了上述技术方案所述微生物肥料或上述技术方案所述制备方法制备的微生物肥料的应用。
优选的，所述微生物肥料的施用量为1.5～2.5kg/株。
本发明提供了一种含有海藻素的微生物肥料，按质量含量计，包括淡紫拟青霉发酵液25～35％，克里布所类芽孢杆菌发酵液15～25％，侧孢短芽孢杆菌发酵液35～45％，以及海藻素5～15％。本发明提供的微生物肥料采用淡紫拟青霉、克里布所类芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌多种微生物菌剂配合，对根腐病和根结线虫有明显的抑制作用，与海藻素配合，利用海藻素中多种营养成分，促进植物根部发育，改善作物品质，不含化学药物，施用后无有毒物质残留。实施例的结果表明，本发明提供的含有海藻素的微生物肥料施用于脐橙、西瓜和蜜柚时，能够促进植株根系生长，有效降低根腐病和根结线虫的病害情况，与仅适用常规肥料相比，作物增产可达10.23％。
生物保藏说明
淡紫拟青霉(Paecilomyceslilacinus)三炬03号种，保藏地点为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC No.M2010165，保藏时间为2010年 6月30日；
克里布所类芽孢杆菌(Paenibacilluskribbensis)三炬021号种，保藏地点为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为中国北京，保藏编号为CGMCCNo.17248，保藏时间为2019年2月20日。
具体实施方式
本发明提供了一种含有海藻素的微生物肥料，按质量含量计，包括淡紫拟青霉发酵液25～35％，克里布所类芽孢杆菌发酵液15～25％，侧孢短芽孢杆菌发酵液35～45％，以及海藻素5～15％。
按质量含量计，本发明提供的含有海藻素的微生物肥料包括淡紫拟青霉发酵液25～35％，优选为28～32％，更优选为30％。在本发明中，所述淡紫拟青霉发酵液能够防治根结线虫；将其添加量控制在上述范围内能够在达到更好的效果且节约成本。
在本发明中，所述淡紫拟青霉发酵液中有效活菌数优选为30～50亿/mL，更优选为35～45亿/mL。在本发明中，所述淡紫拟青霉发酵液中的淡紫拟青霉优选包括淡紫拟青霉三炬03号种，保藏编号为CCTCC No.M2010165。
本发明对所述淡紫拟青霉发酵液的制备方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的制备方法，保证有效活菌数在上述范围内即可。在本发明中，所述淡紫拟青霉发酵液的制备方法优选包括以下步骤：
(1)将淡紫拟青霉菌种进行活化，得到种液；
(2)将所述步骤(1)得到的种液接种于液体培养基中进行液体发酵，得到淡紫拟青霉发酵液。
本发明优选将淡紫拟青霉菌种进行活化，得到种液。在本发明中，所述活化优选为将保藏的淡紫拟青霉菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，28～32℃培养36～48h进行活化培养。
得到种液后，本发明优选将所述种液接种于液体培养基中进行液体发酵，得到淡紫拟青霉发酵液。本发明对所述液体培养基的组成没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的淡紫拟青霉液体培养基即可。本发明优选将所述液体培养基经120～130℃灭菌30～45min后使用。
本发明对所述液体发酵的设备没有特殊的限制，采用本技术领域技术人员熟知的发酵罐即可。
在本发明中，所述液体发酵的温度优选为28～32℃，更优选为30℃；所述液体发酵的pH值优选为6.8～7.2，更优选为7.0；所述液体培养时的罐内压力优选为0.05～0.1MPa，更优选为0.07～0.08MpPa；所述液体发酵的通气量优选为0.8～1.2V/V·min，更优选为1V/V·min；所述液体发酵的时间优选为36～48小时，更优选的为44小时。本发明优选在液体发酵32小时之后每 4小时镜检一次，48小时观察可不可以出罐(出罐标准位置)，若不可以出罐则继续培养。
按质量含量计，本发明提供的含有海藻素的微生物肥料包括克里布所类芽孢杆菌发酵液15～25％，优选为18～22％，更优选为20％。在本发明中，所述克里布所类芽孢杆菌发酵液能够防治土传病害，促进作物生长；将其添加量控制在上述范围内能够在达到更好的效果且节约成本。
在本发明中，所述克里布所类芽孢杆菌发酵液中有效活菌数优选为 0.5～2亿/mL，更优选为1～1.5亿/mL。在本发明中，所述克里布所类芽孢杆菌发酵液中的克里布所类芽孢杆菌优选包括克里布所类芽孢杆菌三炬021号种，保藏编号为CGMCC No.17248。
本发明对所述克里布所类芽孢杆菌发酵液的制备方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的制备方法，保证有效活菌数在上述范围内即可。在本发明中，所述克里布所类芽孢杆菌发酵液的制备方法优选包括：将克里布所类芽孢杆菌用牛肉膏蛋白胨培养基活化后，挑取单菌落或菌苔接种到装量为摇瓶20％体积的改良的液体察氏培养基中，在30℃，以200r/min振荡培养36～48h，使克里布所类芽孢杆菌快速生长，待菌种生长到符合生产条件即镜检无杂菌时，接入液体发酵罐进行液体发酵培养，得到克里布所类芽孢杆菌发酵液。
本发明对所述液体发酵培养的培养基成分没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的克里布所类芽孢杆菌培养基即可。
在本发明中，所述液体发酵培养的时间优选为4～5d；所述液体发酵培养的温度优选为28～30℃。在本发明中，所述液体发酵培养优选在持续通氧气条件下进行；所述通气量优选为前24小时为10m3/h，第24～48小时为15m3/h， 48小时之后为20m3/h。在本发明中，所述液体发酵培养优选在光照条件下进行；所述光源优选为36V、40W的白炽灯。在本发明中，所述液体发酵培养优选在搅拌条件下进行；所述搅拌具体为前24小时不搅拌，第24～48小时一小时搅拌一次，每次10秒，后期半个小时搅拌一次，每次10秒，临近出罐的前几个小时10分钟一次，一次10秒，出罐一直搅拌。
按质量含量计，本发明提供的含有海藻素的微生物肥料包括侧孢短芽孢杆菌发酵液35～45％，优选为38～42％，更优选为40％。在本发明中，所述侧孢短芽孢杆菌发酵液能够抑制植物病原菌、促进作物根系生长；将其添加量控制在上述范围内能够在达到更好的效果且节约成本。
在本发明中，所述侧孢短芽孢杆菌发酵液中有效活菌数优选为200～300 亿/mL，更优选为240～280亿/mL。在本发明中，所述侧孢短芽孢杆菌发酵液中的侧孢短芽孢杆菌优选购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。
本发明对所述侧孢短芽孢杆菌发酵液的制备方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的制备方法，保证有效活菌数在上述范围内即可。在本发明中，所述侧孢短芽孢杆菌发酵液的制备优选包括以下步骤：
(a)将侧孢短芽孢杆菌菌种进行活化，得到种液；
(b)将所述步骤(a)得到的种液接种于液体培养基中进行液体发酵，得到侧孢短芽孢杆菌发酵液。
本发明将侧孢短芽孢杆菌菌种进行活化，得到种液。
在本发明中个，所述活化优选包括：将侧孢短芽孢杆菌菌种接种于装有察氏培养基的茄型瓶中，28～34℃培养24～36h进行活化培养。
得到种液后，本发明将所述种液接种于液体培养基中进行液体发酵，得到侧孢短芽孢杆菌发酵液。
本发明对所述液体培养基的组成没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的侧孢短芽孢杆菌液体培养基即可。本发明优选将所述液体培养基经 120～130℃灭菌30～45min后使用。
本发明对所述液体发酵的设备没有特殊的限制，采用本技术领域技术人员熟知的发酵罐即可。
在本发明中，所述液体发酵的温度优选为28～34℃，更优选为30～32℃；所述液体发酵的pH值优选为5.8～6.5，更优选为6.0；所述液体发酵的罐内压力优选为0.05～0.1MPa，更优选为0.07～0.08MpPa；所述液体发酵的通气量优选为0.5～0.8V/V·min，更优选为0.6V/V·min；所述液体发酵的时间优选为36～48小时，更优选为40小时。
在本发明中，所述液体发酵优选在搅拌条件下进行；所述搅拌优选为：前12小时不搅拌，第12～24小时一小时搅拌一次，每次10秒，24h之后半个小时搅拌一次，每次10秒，临近出罐的前几个小时10分钟一次，一次10 秒，出罐一直搅拌。
按质量含量计，本发明提供的含有海藻素的微生物肥料包括海藻素5～15％，优选为8～12％，更优选为10％。在本发明中，所述海藻素能促进植物细胞分裂和伸长，强化新陈代谢，加速根部发育，提高植物对水分和养分额吸收能力，增强抗逆能力，改善作物品质，提高产量；所述海藻素的用量在上述范围内能够在达到更好的效果且节约成本。
本发明对所述海藻素的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的市售产品，或按照本领域技术人员熟知的制备方法制备即可。在本发明中，所述海藻素的制备优选包括：将海藻原料进行预处理，然后加水浸泡，再粉碎成海藻浆；在低温条件下将海藻浆与海藻多酚抗氧化剂和甲醇混合后进行反应，然后用甲醇提取后过滤，得到的滤液蒸发浓缩，浓缩物即海藻素。
在本发明中，所述海藻原料优选为新鲜裙带菜。在本发明中，所述预处理优选为用海水冲洗，除去表面附着的微小生物及杂质。
在本发明中，所述海藻多酚抗氧化剂的用量优选为海藻原料重量的 0.2～0.4g/kg；所述甲醇的用量优选为海藻原料重量的1.4～1.8L/kg。
在本发明中，所述反应的时间优选为4～6h，更优选为5h。在本发明中，所述反应优选在搅拌条件下进行；所述搅拌优选为间歇式搅拌，具体为：以每20～40秒间隔搅拌20～40秒；所述搅拌的速率优选为80～100rpm，更优选为90rpm。
本发明提供的微生物肥料能促进作物根际发育，既为作物提供全方面营养，还能提高作物抗病能力，对黑胫病、根腐病、根结线虫等具有很好的抑制作用，对作物有一定提质增产效果。
本发明提供的微生物肥料内含有植物必需的营养成分和天然矿物质、生长调节剂，能促进植物细胞分裂和伸长，强化新陈代谢，加速根部发育，提高植物对水分和养分的吸收能力，增强抗逆能力，改善作物品质，提高产量；并且，含有多种海洋生物活性物质、海藻多糖、海藻多酚，寡糖素，碘，其含量比例适中，对植物的根腐病、根结线虫等有明显的抑制作用；施用后可疏松土壤，改良因施用化肥造成的土壤板结，加快土壤团粒结构形成，确保土壤有良好的通气性；用含有海藻素的微生物肥料生产的粮食、蔬菜、瓜果、茶叶，其品质优良，无有毒物质残留，符合绿色食品标准；能代替部分化学农药的使用，降低化学农药的施用次数，减少农户生产成本。
本发明还提供了上述技术方案所述微生物肥料的制备方法，包括：将淡紫拟青霉发酵液、克里布所类芽孢杆菌发酵液、侧孢短芽孢杆菌发酵液和海藻素混合，得到微生物肥料。
本发明将淡紫拟青霉发酵液、克里布所类芽孢杆菌发酵液、侧孢短芽孢杆菌发酵液和海藻素混合，得到微生物肥料。本发明对所述混合的操作没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的物料混合的技术方案即可。在本发明中，所述混合的温度优选为35℃以下。
本发明还提供了上述技术方案所述微生物肥料或上述技术方案所述制备方法制备的微生物肥料的应用。
在本发明中，所述微生物肥料的施用量优选为1.5～2.5kg/株，更优选为 2kg/株。
下面结合实施例对本发明提供的一种含有海藻素的微生物肥料及其制备方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
淡紫拟青霉发酵液的制备：
1)保藏的淡紫拟青霉菌种接种于装有营养琼脂培养基的茄型瓶中，30℃培养48h进行活化培养，实验室内制备成种液；
2)将所述活化后制成种液的淡紫拟青霉接种于发酵罐内液体培养基中进行液体发酵54小时，产出淡紫拟青霉菌剂，其发酵液有效活菌数为50亿 /mL。
液体发酵使用的培养基成分如表1-1所示，液体培养基经121℃灭菌 35min后使用。
表1-1淡紫拟青霉液体发酵培养基成分
培养基成分 浓度g/L 用量
蔗糖 30 9.5kg
硝酸胺 1.5 475g
黄豆粉 5 2.0kg
磷酸氢二钠 2.06 620g
硫酸镁 0.24 80g
氯化钾 0.5 200g
硫酸铁 0.05 20g
消泡剂 — 600mL
克里布所类芽孢杆菌发酵液的制备：
将保藏的克里布所类芽孢杆菌用牛肉膏蛋白胨培养基活化后，挑取单菌落或菌苔接种到装量为摇瓶20％体积的改良的液体察氏培养基中，30℃、 200r/min振荡培养48h，使克里布所类芽孢杆菌快速生长，待菌种生长到符合生产条件即镜检无杂菌，接入液体发酵罐进行液体发酵培养。液体发酵培养用的培养基组成如表1-2所示。
表1-2克里布所类芽孢杆菌液体发酵培养基成分
培养基成分 浓度g/L 用量
蔗糖 25 9.5kg
硝酸钠 1.5 450g
磷酸氢二钾 1.0 325g
硫酸镁 0.5 180g
氯化钾 0.8 180g
硫酸铁 0.01 4g
消泡剂 950ml5
接种后发酵量按50％计算，培养5d。发酵过程中，温度控制在30℃，持续通入氧气，持续搅拌，待克里布所类芽孢杆菌发酵液呈粘稠状态出罐，获得克里布所类芽孢杆菌的菌液。
搅拌：前24小时不开，24小时一小时开一次，每次约10秒，后期半个小时开一次，每次约10秒，临近出罐的前几个小时10分钟一次，一次10 秒，出罐一直搅拌。
排气量：相当于通气量，前24小时为10m3/h，24～48小时为15m3/h， 48小时之后为20m3/h。
光照：一直是36V 40W白炽灯
侧孢短芽孢杆菌发酵液的制备：
1)侧孢短芽孢杆菌菌种接种于装有察氏培养基的茄型瓶中，30℃培养 36h进行活化培养，得到种液；
2)将所述种液接种于发酵罐内的液体培养基中进行液体发酵36小时，得到侧孢短芽孢杆菌发酵液。
侧孢短芽孢杆菌的液体培养基组分如表1-3所示，经121℃灭菌35min 后使用。
表1-3侧孢短芽孢杆菌的液体培养基组分
培养基成分 质量浓度 用量
蛋白胨 0.03％ 100g
酵母粉 0.03％ 100g
蔗糖 0.025％ 80g
硫酸铵 0.007％ 24g
柠檬酸三钠 0.003％ 10g
磷酸氢二钾 0.003％ 10g
硫酸镁 0.0005％ 2.0g
硫酸铁 0.00005％ 0.2g
硫酸锰 0.01％ 35g
消泡剂 3％ 950g
液体发酵的温度为30℃；所述液体发酵的pH值为6.0；发酵时罐内压力为0.07～0.08MPa；所述液体发酵的通气量为0.6V/V·min；所述液体发酵的时间为40小时。
液体发酵在搅拌条件下进行，搅拌具体方式：前12小时不开，12～24 小时一小时开一次，每次约10秒，24之后半个小时开一次每次约10秒，临近出罐的前几个小时10分钟一次，一次10秒，出罐一直搅拌。
海藻素的制备：
将海藻原料用海水冲洗，除去表面附着的微小生物及杂质，将经过预处理后的海藻原料加水浸泡，粉碎成海藻浆，在低温条件下加入海藻多酚抗氧化剂及甲醇，其用量分别为海藻重量的0.3g/kg和1.6L/kg，将混合均匀的物料密闭，于暗室中间歇式搅拌处理进行反应，反应时间为5h，间歇式搅拌具体为：以每20～40秒间隔搅拌20秒，搅拌频率控制为90rpm；然后用甲醇提取，过滤，滤液蒸发浓缩，浓缩物即海藻素。其中所用海藻原料为新鲜裙带菜。
以质量含量计，将紫拟青霉发酵液30％、克里布所类芽孢杆菌发酵液 20％、侧孢短芽孢杆菌发酵液40％和海藻素10％混合均匀，即得到微生物肥料，混合温度低于35℃。
实施例2
试验柑橘品种为赣南脐橙，种植年限5年，每666.7m2种植55株。
供试土壤：试验地土壤为赤土(赤沙土)，pH 5.2、有机质18.9g/kg、全氮0.94g/kg、速效氮85.9mg/kg、速效磷30.6mg/kg、速效钾92.1mg/kg，肥力水平中等。
试验设计：试验设4个处理，3次重复，每个小区5株，小区面积60.6m2，采用随机区组排列，四周设保护行。
本实施例中所述微生物菌剂为实施例1中制备的微生物肥料。
实施例2：处理A微生物菌剂+常规施肥；
对比例2-1：处理B基质(灭活的微生物菌剂)+常规施肥；
对比例2-2：处理C常规施肥；
对比例2-3：处理D空白对照(不施肥)。
微生物菌剂在脐橙上施用方法：于2019年4月15日穴施，施用量为每株2kg，即每666.7m2用量为110kg。
脐橙常规施肥方法：每666.7m2施复合肥〔N+P5O2+K2O≥45％(18-10-17)〕100.0kg、钙镁磷肥50.0kg、硫酸钾50.0kg、硫酸镁50.0kg。施肥时间与施肥量为：2019年1月18日施基肥，施用干猪粪500kg/666.7m2、钙镁磷肥50.0kg/666.7m2、硫酸镁50.0kg/666.7m2；4月12日施促梢保花肥，5 月30日施保果肥，施用量均为每666.7m2施复合肥40.0kg、硫酸钾25.0kg； 9月22日施壮果肥，每666.7m2施复合肥20.0kg。脐橙于2019年12月21 日采收实测产量，检测脐橙品质。
结果如下所示：
(1)不同处理对脐橙树体生长情况的影响
田间调查表明，脐橙施微生物菌剂后脐橙树体生长健壮，叶色较绿、叶片较厚有光泽，脐橙根系生长粗壮，促进幼果平衡生长，树体长势旺盛，植株后期根腐病、炭疽病等土传病害明显轻于对照，果实的裂果情况也明显低于对照，具体病情轻重情况为：处理A＞处理B＞处理C＞处理D。
(2)不同处理对脐橙产量影响
试验实收产量(见表2-1)可算出，处理A(微生物菌剂+常规施肥)产量最高，平均666.7m2产量为1540.2kg，比处理B(无菌基质+常规施肥)每 666.7m2产量1411.5kg增加128.7kg，增产9.12％；比处理C(常规施肥)每 666.7m2产量1397.2kg增加143.0kg，增产10.23％；比处理D(空白对照) 每666.7m2产量926.3kg增加613.9kg，增产66.3％。
表2-1不同处理对脐橙产量的影响
Figure BDA0002669892890000111
注：小区面积为60.6平方米。
对试验处理小区产量方差分析，F＝13.892＞F0.01＝8.02，说明处理间产量差异达极显著水平。
表2-2方差分析表
Figure BDA0002669892890000121
注：*表示差异达显著水平，**表示差异达极显著水平。
表2-3多重比较
Figure BDA0002669892890000122
注：LSD0.05＝6.796kg/小区，LSD0.01＝10.612kg/小区，不同小写字母表示经LSD检验为差异显著，不同大写字母表示经LSD检验为差异极显著。
多重比较结果表明(见表2-3)：处理A与处理B、C、D产量差异达极显著水平，处理B、C与处理D产量差异达极显著水平，处理B与处理C产量差异不显著。施用微生物菌剂可显著提高脐橙产量，分析原因主要是微生物菌剂能够增强脐橙的光合作用，促进脐橙叶片增厚、浓绿；菌剂中的芽孢杆菌等可活化土壤的生物肥力，改善根系生长环境，促进脐橙对肥料吸收利用及抗病能力的提高。
(3)不同处理对脐橙品质的影响
从脐橙品质分析来看(表2-4)，处理A比处理B、C、D脐橙品质均有所提高，处理A可溶性总糖含量、可溶性固形物和维生素C含量均有提高的趋势，可滴定酸含量有下降的趋势。处理A比处理B可溶性总糖含量、可溶性固形物和维生素C含量分别提高0.6％、0.4％和1.3mg/100g；可滴定酸含量下降0.11g/100g。分析原因可能是供试肥料中的有益微生物等的作用，通过叶片吸收有益微生物能较好地促进脐橙叶片的生长，有利于果实可溶性总糖含量、可溶性固形物和维生素C含量的积累，从而提高果实品质。
表2-4不同处理对脐橙品质的影响
Figure BDA0002669892890000131
(4)不同处理间脐橙的产值及投产比
脐橙按6元/kg、微生物菌剂按3元/kg计算投入产出比。处理A(微生物菌剂+常规施肥)产量比处理C(常规施肥)产量每666.7m2增加143.0kg，增加产值858.0元，扣除每666.7m2微生物菌剂成本330元及施用微生物菌剂工钱120元(每666.7m2)，每666.7m2增收408.0元(见表2-5)。
处理A(微生物菌剂+常规施肥)比处理C(常规施肥)每666.7m2多投入微生物菌剂330元及施用微生物菌剂工钱120元，增加产值858.0元，投入产出比1∶1.91。
表2-5不同处理对脐橙产值影响
Figure BDA0002669892890000132
实施例3
供试作物：西瓜，品种为无籽西瓜。
试验设置4个处理，3次重复，采用随机区组设计，小区面积为8m×1.2m。
本实施例中所述微生物菌剂为实施例1中制备的微生物肥料。
实施例3：处理1微生物菌剂+常规施肥；
对比例3-1：处理2基质(灭活的微生物菌剂)+常规施肥；
对比例3-2：处理3常规施肥；
对比例3-3：处理4空白对照(不施肥)。
西瓜于2019年4月2日定植，定植前施足底肥。定植后于苗期(5月2 日)进行微生物菌剂处理。
微生物菌剂在西瓜上施用方法：于2019年5月02日穴施，施用量为每株2kg。
西瓜采收后每小区单独测产，并随机取样测定西瓜品质指标：可溶性总糖、有机酸、Vc；同时在西瓜的整个生育期观察植株长势及病虫害发生情况。
结果如下所示
由表3-1可知，不同处理的西瓜可溶性总糖含量处理1＞处理2＞处理3 ＞处理4，即微生物菌剂处理的西瓜可溶性总糖含量最高，其次是灭活的微生物菌剂处理，所有试验处理的可溶性总糖含量均明显高于对照；西瓜有机酸含量处理1、2均为0.07g/100g，处理3、4均为0.09g/100g；Vc含量处理1最高，其次是处理2、3，对照最低；平均单瓜重方面，处理1＞处理2 ＞处理3＞处理4，但数值相差不大，对照最低。
表3-1不同处理的西瓜品质及产量
处理方式 可溶性总糖(g/100g) 有机酸(g/100g) Vc(mg/100g) 平均单瓜重(kg)
处理1 9.29 0.07 8.56 1.825
处理2 8.06 0.07 7.80 1.71
处理3 7.59 0.09 7.80 1.57
处理4 6.87 0.09 5.50 1.56
可见所有试验处理的西瓜可溶性总糖、Vc含量及平均单瓜重均明显高于对照，尤以处理1即微生物菌剂处理的西瓜品质和产量均占优势。
根据田间观察，西瓜试验区内植株后期根腐病、枯萎病等病害明显轻于对照，果实的裂果情况也明显低于对照，具体病情轻重情况为：处理1＞处理2＞处理3＞处理4。
本试验结果表明，微生物菌剂能提高西瓜的品质和产量以及抗病性，促进植株健康生长。
实施例4
试验作物：蜜柚，平和三红蜜柚，种植年限5年，每666.7m2种植55 株。
供试土壤：母质为冲积物，质地为红壤土。
试验设计：试验设4个处理，3次重复，小区面积60m2，采用随机区组排列，四周设保护行。
本实施例中所述微生物菌剂为实施例1中制备的微生物肥料。
实施例4：处理1微生物菌剂+常规施肥；
对比例4-1：处理2基质+常规施肥；
对比例4-2：处理3常规施肥；
对比例4-3：处理4空白对照(不施肥)。
微生物菌剂在蜜柚上施用方法：于2018年12月21日采用根部弧形施入，然后覆土10-15cm，施用量为每小区12kg。
施肥期间做好田间管理，及时除草，合理灌溉，果品成熟后及时采收，做好数据汇总并检测蜜柚品质。
结果如下所示：
(1)不同处理的生长情况比较
根据田间观察，处理1的小区，叶色、果实、结果率等都优于其它处理，植株后期根腐病、炭疽等土传病害明显轻于对照，果实的裂果情况也明显低于对照，具体病情轻重情况为：处理1＞处理2＞处理3＞处理4。
(2)不同处理的产量比较
从表4-1中可以看出，各处理的产量均极显著高于对照，其中处理1产量最高，分别比处理3、2及对照增产22.12kg、39.16kg及56.96kg，增产率分别为5.16％、9.51％及14.46％；说明复合微生物菌剂在同等施肥数量的情况下对蜜柚具有明显的增产作用，肥效显著。
表4-1不同处理小区产量
Figure BDA0002669892890000151
Figure BDA0002669892890000161
(3)不同处理的果实外观品质比较
试验数据表明(表4-2)，微生物菌剂处理的单果重量比对照高出1.5kg。微生物菌剂在本小区的反映，果实均匀，特别是果实的直径及单果重量明显优于其它处理。
表4-2不同处理的果实外观品质分析
Figure BDA0002669892890000162
(4)不同处理的果实营养物质比较
从表4-3可以看出，处理1果实可溶性固形物、总糖、Vc都相对较高，由此表明，施用微生物菌剂的蜜柚，其食用价值和营养价值更高。
表4-3不同处理果实营养物质分析
处理 可溶性固形物(％) 总糖(％) Vc(mg/100g)
1 14.4 9.87 28.18
2 13.8 9.35 26.54
3 13.1 8.12 23.25
4 11.3 7.13 15.14
本试验结果表明，微生物菌剂能提高蜜柚的品质和产量以及抗病性，促进植株健康生长。
由以上对比例和实施例可以看出，本发明提供的微生物肥料能够提高各种农作物的抗病性和作物品质及产量。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并非对本发明作任何形式上的限制。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种含有海藻素的微生物肥料，按质量含量计，包括淡紫拟青霉发酵液25～35％，克里布所类芽孢杆菌发酵液15～25％，侧孢短芽孢杆菌发酵液35～45％，以及海藻素5～15％。
2.根据权利要求1所述的微生物肥料，其特征在于，所述微生物肥料包括淡紫拟青霉发酵液30％，克里布所类芽孢杆菌发酵液20％，侧孢短芽孢杆菌发酵液40％，以及海藻素10％。
3.根据权利要求1或2所述的微生物肥料，其特征在于，所述淡紫拟青霉发酵液中有效活菌数为30～50亿/mL。
4.根据权利要求1或2所述的微生物肥料，其特征在于，所述淡紫拟青霉发酵液中的淡紫拟青霉包括淡紫拟青霉三炬03号种，保藏编号为CCTCC No.M2010165。
5.根据权利要求1或2所述的微生物肥料，其特征在于，所述克里布所类芽孢杆菌发酵液中有效活菌数为0.5～2亿/mL。
6.根据权利要求1或2所述的微生物肥料，其特征在于，所述克里布所类芽孢杆菌发酵液中的克里布所类芽孢杆菌包括克里布所类芽孢杆菌三炬021号种，保藏编号为CGMCCNo.17248。
7.根据权利要求1或2所述的微生物肥料，其特征在于，所述侧孢短芽孢杆菌发酵液中有效活菌数为200～300亿/mL。
8.权利要求1～7任意一项所述微生物肥料的制备方法，包括：将淡紫拟青霉发酵液、克里布所类芽孢杆菌发酵液、侧孢短芽孢杆菌发酵液和海藻素混合，得到微生物肥料。
9.权利要求1～7任意一项所述微生物肥料或按照权利要求8所述制备方法制备的微生物肥料的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述微生物肥料的施用量为1.5～2.5kg/株。
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