CN111983127A - 一种薄层层析法及其展开装置 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种薄层层析法及其展开装置。一种薄层层析法,包括以下步骤:S1:制备待测试样、对照液和薄层板;S2:初展:在薄层板固定相所在面进行制剂和对照液的点样,将点样后的薄层板放置于层析缸中,盖上层析缸的玻璃盖板,展开12‑14cm后取出薄层板,挥干溶剂;S3:再展准备:通过紫外灯或显色剂确定定位点,定位点为初展时距离展开液最近的功效成分对应的斑点;在薄层板的定位点靠近杂质斑点的一侧分离,切断固定相;S4:二次展开:将薄层板切断固定相后包含功效部分的一侧进行二次展开,展开至距离薄层板展开方向前沿10‑12cm时取出薄层板,挥干溶剂。本发明的薄层层析法具有对显色后功效成分的斑点图谱影响很小,方便功效成分斑点的辨别优点。
Description
技术领域
本发明涉及薄层层析法的领域,更具体地说,它涉及一种薄层层析法及其展开装置。
背景技术
薄层层析法又称“薄层色谱分析法”,将样品中不同种类的化合物分离后,根据分离的各组分的Rf值或荧光特性来确定各组分的种类。样品用量少,分析速度较快,设备简单,是一种用于中药及其功效成分、农药、食品、司法鉴定等领域的快速定性鉴别方法。
薄层层析法为薄层层析一次展开,主要包括以下步骤:制备制剂。在薄层板上均匀涂覆一层吸附剂或支持剂,待干燥、活化后作为固定相,再将制剂用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端的起点线上(点样),将晾干或吹干后的薄层板靠近点样的一端浸入盛有展开剂的层析缸中(制剂不浸入展开液),盖上层析缸的玻璃盖板。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时,将薄层板取出,干燥后喷以显色剂,或在紫外灯下显色。通过对于比薄层层析图谱来进行定性鉴别。
针对上述中的相关技术:对于成份复杂的制剂,薄层层析一次展开后,在薄层板上呈现的杂质斑点会与功效成分的斑点部分重合,同时斑点边界不清晰,对功效成分斑点的鉴别造成困难。
发明内容
针对现有技术存在的不足,本发明的第一个目的在于提供一种薄层层析法,其具有减少杂质斑点对功效成分斑点的影响,同时提高斑点清晰度,方便功效成分鉴别的优点。
本发明的第二个目的在于提供一种薄层层析法的展开装置,其具有成本低廉、操作简单和展开稳定的优点。
为实现上述第一个目的,本发明提供了如下技术方案:一种薄层层析法,包括以下步骤:
S1:制备待测试样、对照液和薄层板;
S2:初展:制备薄层板,在薄层板固定相所在面进行制剂和对照液的点样,将点样后的薄层板放置于层析缸中,盖上层析缸的玻璃盖板,展开12-14cm后取出薄层板,挥干溶剂;
S2:再展准备:通过紫外灯或显色剂确定定位点,定位点为初展时距离展开液最近的功效成分对应的斑点;在薄层板的定位点靠近杂质斑点的一侧分离,切断固定相;
S3:二次展开:将薄层板切断固定相后包含功效部分的一侧进行二次展开,展开至距离薄层板展开方向前沿10-12cm时取出薄层板,挥干溶剂。
采用上述技术方案,在进行一次展开时,在展开液的驱动下,杂质的展开速度比功效成分慢很多,在一次展开结束后,找到功效成分的定位点,该定位点最靠近杂质斑点,在定位点靠近杂质的一侧将固定相分离,直接将薄层板切断或刮去对应位置的固定相;再将包含有功效成分的一侧进行二次展开。由于大部分杂质都已经被分离,而且不跟随一起展开,二次展开时杂质的含量很少,对显色后功效成分的斑点图谱影响很小,方便功效成分斑点的辨别。
上述方法针对可以运用薄层层析法进行定性鉴别的物质,例如中药药剂、食品中霉菌毒素、农药定性鉴别,在制药、食品工业、毒样分析领域都有广泛的用途;操作简单,方便辨别。
进一步地,所述步骤S2中,在薄层板的定位点靠近杂质斑点的一侧开设分离槽,切断固定相。
采用上述技术方案,将薄层板切断的操作对固定相以及展开状态影响较大,而且不易操作,直接在定位点以下开设分离槽对薄层板的影响小。
进一步地,所述步骤S2中,用刀具划出分离槽,将固定相切断。
采用上述技术方案,刀具简单易得,操作方便,且对薄层板的影响小。固定相只是很薄的涂覆层,用刀具将薄层板表面划开明显的划痕后,固定相就已经被刮离了薄层板表面,并其有明显的分离槽,方便后续二次展开操作。
为实现上述第二个目的,本发明提供了如下技术方案:一种薄层层析法的展开装置,包括盛放有展开液的盛放皿、用于向薄层板涂覆了固定相的一面传递展开液的传递介质,以及放置于盛放皿中用于支撑薄层板和放置传递介质的支撑件;薄层板涂覆有固定相的一面朝下,传递介质一端抵接于薄层板上展开有功效成分的分离槽的一侧。
采用上述技术方案,进行二次展开时,在盛放皿中放置展开液,将支撑件放置于盛放皿中,再将传递介质进行安装,最后将薄层板靠近分离槽的一端放置于支撑件上,另一端抵接于水平面上;传递介质一端与薄层板对应位置抵接,进行二次展开。进行二次展开时要保证在密闭房间或密闭空间内静置进行,减少空气流动和外界环境对展开的影响。
进一步地,所述支撑件由至少一个的支撑单元组成,支撑单元包括支撑杆体以及设置于支撑杆体上用于卡入传递介质的卡槽,卡槽靠近薄层板的一端贯通。
采用上述技术方案,通过支撑单元来实现对薄层板和传递介质的支撑,支撑单元越多,多薄层板的支撑点越多,可根据需要来选择。
进一步地,所述支撑件由两个支撑单元组成,两个支撑单元之间连接有连接杆。
采用上述技术方案,支撑单元之间通过连接杆连接,形成整体,不需要多次调整单个支撑单元的位置来保证其在同一直线上,方便整体的拿取和放置,同时提高支撑件的稳定性。
进一步地,所述支撑件中相邻的支撑杆体、连接杆以及卡槽均由同一根金属丝弯折形成。
采用上述技术方案,用一根金属丝弯折形成,节约成本,简单易得,轻巧轻便。
进一步地,所述卡槽中插设有两块夹片,传递介质夹设于两块夹片中。
采用上述技术方案,通过夹片将软质的传递介质进行夹设和支撑,减少传递介质吸收展开液后变形的可能性,同时对传递介质进行保护,减少外界对齐的影响,从整体上提高二次展开的稳定性。
进一步地,还包括用于保持薄层板水平的平衡件,平衡件支撑于薄层板远离支撑件一端。
采用上述技术方案,将倾斜设置的薄层板保持水平,减少支撑点可能移动的情况出现,提高薄层板在二次层析时的稳定性。
进一步地,所述平衡件为支撑件和盛放皿的组合。
采用上述技术方案,不需要另外设置与支撑件高度相当的物件,直接用规格相同的支撑件设置于薄层板另一端即可,减少不必要部件的增设,减少成本。
综上所述,本发明具有以下有益效果:
1、由于本发明采用初展、再展准备和二次展开,显色后,大大减少杂质斑点对功效成分的斑点图谱的影响,方便功效成分斑点的辨别。
2、本发明中优选采用在薄层板上开设分离槽,将杂质与功效成分分离,阻止杂质进行二次展开,显色后方便功效成分斑点的辨别。
3、本发明中优选采用薄层层析法的展开装置,将分离槽功效成分一侧进行二次展开,展开稳定性好,装置简单,成本低廉。
附图说明
图1是实施例1中展开装置使用状态的结构示意图;
图2是图1中部分结构的结构示意图(去除盖子、切除部分容纳盒和薄层板);
图3是实施例1中支撑件的结构示意图;
图4是实施例3的结构示意图;
图5是图4中部分结构的结构示意图(去除盖子、切除部分容纳盒和薄层板);
图6是实施例4的结构示意图;
图7是实施例4中支撑件的结构示意图;
图8是实施例5的结构示意图;
图9是图8中部分结构的结构示意图(去除盖子、切除部分容纳盒和薄层板);
图10是实施例1的层析色谱图;
图11是对比例1的层析色谱图。
附图标记:1、薄层板;11、分离槽;2、传递介质;21、滤纸;3、支撑件;31、连接杆;32、夹片;4、支撑单元;41、支撑杆体;411、第一段体;412、第二段体;413、第三段体;414、第四段体;415、第五段体;416、第六段体;42、卡槽;5、盛放皿;6、平衡件;7、容纳盒;8、盖子。
具体实施方式
以下结合附图对本发明作进一步详细说明。
实施例1:一种薄层层析法,包括以下步骤:
S1:制备制剂:制备待测试样以及对照液;
制备薄层板:在10cm*20cm的干净玻璃板上均匀涂覆固定相,待其自然干燥后,将其置于烘箱中,在温度为105℃的条件下烘烤1h干燥活化后,得到薄层板;
S2:初展:
在固定相所在面进行待测试样和对照液的点样;用微量进样器将5±1μL待测试样和2μL对照液点样至距薄层板底边2cm的同一直线上,样点直径控制于1-1.5mm;将点样后的薄层板用电吹风吹干。
在层析缸中加入20mL展开剂,在25℃环境下静置15min后,将点样后的薄层板放入层析缸内,距离点样处的薄层板的一侧浸入展开液中,盖上层析缸的玻璃盖板;向上展开12cm后取出薄层板,在空气中将展开剂挥干;
S3:再展准备:在紫外灯(波长为365nm)下确定定位点,定位点为初展时距离展开液最近的功效成分对应的斑点;用小刀在定位点靠近杂质斑点的薄层板上划开,将固定相切断,形成分离槽;
S4:二次展开:将薄层板包含功效部分的部分进行二次展开,展开至距离薄层板展开方向前沿10cm时取出薄层板,在空气中将展开液挥干。
步骤S4中进行二次展开的展开装置,参见图1,包括在层析缸中经历了一次展开的薄层板1,以及在二次展开时将展开液传递至薄层板1上的传递介质2(参见图2),传递介质2为滤纸。准备铝制的容纳盒7和盖子8,在进行二次展开时,需要将薄层板1和传递介质2放置于容纳盒7中,再盖上盖子8,减少外界空气流动对展开的影响。
如图2所示,薄层板1涂覆了固定相的一面开设有分离槽11,分离槽11垂直于一次展开时展开液的展开方向,分离槽11将一次展开后的杂质与功效成分断开。滤纸21一端抵接于分离槽11包含有功效成分的一侧,进行二次展开;滤纸21抵接于薄层板1上的宽度为1cm。
容纳盒7底板上放置有盛放有展开液的盛放皿5,盛放皿5中放置有用于支撑薄层板1和放置滤纸21的支撑件3和平衡件6,薄层板涂覆有固定相的一面朝下,支撑件3和平衡件6将薄层板1保持水平。
如图3所示,支撑件3由两个支撑单元4组成,两个支撑单元4分别支撑于薄层板1展开方向的两侧,两个支撑单元4的竖直部之间连接有连接杆31。支撑件3中的两个支撑单元4、连接杆31以及每个支撑单元4对应的卡槽42由同一根铜丝弯折形成。利用一根铜丝弯折形成支撑件3,节约成本且加工工序简单随时可以自制。
铜丝从端部开始为水平设置的第一段体411,第一段体411向连接杆31的方向弯折后形成第二段体412,第二段体412与第一段体411平行且位于同一水平面;第二段体412远离第一段体411的一端向上弯折后向上延伸形成竖直的第三段体413,第三段体413上端向远离连接杆31的一侧弯折后向下延伸形成竖直的第四段体414;第四段体414下端向远离第一段体411的一侧弯折后向上延伸形成竖直的第五段体415,最后第五段体415上端向靠近连接杆31的一侧弯折后向下延伸形成竖直的第六段体416;第六段体416弯折至水平形成水平的连接杆31。
第一段体411、第二段体412、第三段体413、第四段体414、第五段体415和第六段体416组成单个支撑单元4的支撑杆体41。第三段体413和第四段体414形成第一弯折部,第五段体415和第六段体416形成的第二弯折部,第一弯折部和第二弯折部相互平行,且第一弯折部和第二弯折部之间为卡槽42。
如图2所示,卡槽42中插设有两块夹片32,滤纸21夹设于两块夹片32中,滤纸21上下两端均位于夹片32外侧,且滤纸21在夹片32外露出的长度为1cm。夹片32将滤纸21夹设固定,提高二次展开时滤纸21的稳定性。夹片32为玻璃片。
平衡件6的结构与支撑件3、盛放皿5和夹片31组成的结构相同。
本实施例中展开装置的实施原理为:将铜丝弯折形成包含连接杆31和两个支撑单元4的支撑件3。二次展开时,将盛放皿5放入容纳盒7底部并加入展开液,再将支撑件3和平衡件6放入,将滤纸21夹在两个夹片32之间,滤纸21两端均露出夹片32距离为1cm,再将滤纸21和夹片32插在卡槽42中并将滤纸21上端超出卡槽42的部分折弯,为避免斑点在展开液中溶解扩大,滤纸21抵接于薄层板上时,不与功效成分的斑点直接抵接接触。将薄层板1涂覆有固定相的一面朝下,水平地放置于支撑件3和平衡件6上方,进行二次层析。
实施例2:一种薄层层析法,与实施例1的区别在于:
步骤S2中,向上展开14cm后取出薄层板,在空气中将展开剂挥干;
步骤S3中,定位点确定后,将薄层板分割成包含杂质和功效成分的两部分。
步骤S4中,二次展开时,展开至距离薄层板展开方向前沿12cm时取出薄层板,在空气中将展开液挥干。
实施例3:一种薄层层析法的展开装置,参见图4,包括在层析缸中经历了一次展开的薄层板1,以及在二次展开时将展开液传递至薄层板1上的传递介质2(参见图5),传递介质2为滤纸。准备铝制的容纳盒7和盖子8,在进行二次展开时,需要将薄层板1和传递介质2放置于容纳盒7中,再盖上盖子8,减少外界空气流动对展开的影响。
如图5所示,薄层板1涂覆了固定相的一面开设有分离槽11,分离槽11垂直于一次展开时展开液的展开方向,分离槽11将一次展开后的杂质与功效成分断开。滤纸21一端抵接于分离槽11包含有功效成分的一侧,进行二次展开。
容纳盒7底板上放置有盛放有展开液的盛放皿5,盛放皿5中放置有用于支撑薄层板1和放置滤纸21的支撑件3。薄层板1涂覆有固定相的一面朝下放置于容纳盒7中,薄层板1沿其展开方向且靠近功效成分的一端抵接于容纳盒7底部,另一端向上倾斜并用支撑件3支撑。
支撑件3由一个支撑单元4组成,支撑单元4支撑于薄层板1平行于分离槽11方向的中部。支撑单元4包括沿L形延伸形成的支撑杆体41,支撑杆体41的水平部分抵接于盛放皿5底部,竖直部分下端与水平部分侧边固定,上端向竖直方向延伸至盛放皿5外。支撑杆体41的竖直部分上表面向下开设有卡槽42,卡槽42垂直于支撑杆体41厚度方向的两端贯通,滤纸21一端插接于卡槽42中,另一端位于卡槽42外。滤纸21位于卡槽42外的一端抵接于薄层板1下表面的宽度为1cm,将展开液传递至薄层板1上进行二次展开。
本实施例中展开装置的实施原理为:二次展开时,将盛放皿5放入容纳盒7底部并加入展开液,再将支撑件3放入,将滤纸21插在卡槽42中并将滤纸21上端超出卡槽42的部分折弯。将薄层板1涂覆有固定相的一面朝下,薄层板1沿其展开方向且靠近功效成分的一端抵接于容纳盒7底部,另一端倾斜向上,支撑杆体41支撑于薄层板1上分离槽11靠近功效成分的一侧,进行二次层析。
实施例4:一种薄层层析法的展开装置,参见图6,与实施例3的区别在于,如图7所示,支撑件3由两个支撑单元4组成,两个支撑单元4分别支撑于薄层板1展开方向的两侧。两个支撑单元4的竖直部之间连接有连接杆31。
本实施例的实施原理为:二次展开时,将盛放皿5放入容纳盒7底部并加入展开液,再将支撑件3放入,将滤纸21插在卡槽42中并将滤纸21上端超出卡槽42的部分折弯。将薄层板1涂覆有固定相的一面朝下,薄层板1沿其展开方向且靠近功效成分的一端抵接于容纳盒7底部,另一端倾斜向上,支撑件3支撑于薄层板1上分离槽11靠近功效成分的一侧,进行二次层析。为避免斑点在展开液中溶解扩大,滤纸21抵接于薄层板上时,不与功效成分的斑点直接抵接接触。
实施例5:一种薄层层析法的展开装置,参见图8,与实施例1的区别在于,参见图9,不包含平衡件6,薄层板1沿其展开方向且靠近功效成分的一端抵接于容纳盒7底部,另一端向上倾斜并用支撑件3支撑。
本实施例的实施原理为:二次展开时,将盛放皿5放入容纳盒7底部并加入展开液,再将支撑件3放入,将滤纸21插在夹片32中并将滤纸21上端超出卡槽42的部分折弯。将薄层板1涂覆有固定相的一面朝下,薄层板1沿其展开方向且靠近功效成分的一端抵接于容纳盒7底部,另一端倾斜向上,支撑件3支撑于薄层板1上分离槽11靠近功效成分的一侧,进行二次层析。为避免斑点在展开液中溶解扩大,滤纸21抵接于薄层板上时,不与功效成分的斑点直接抵接接触。
对比例1:与实施例1的区别在于,只进行步骤S1和S2。
表征实验:
1、薄层层析效果实验
实验对象:实施例1和对比例1,一共2组实验样品。
实验方法:待测试样选择同一品牌同一生产批号的人参口服液一盒。利用实施例1-2和对比例1的实验方法分别进行人参及其制剂中功效成分的鉴别试验。
制备待测试样制剂:取液样10ml,加水饱和正丁醇20mL,振摇提取,分取正丁醇层,加氨试液(400→1000)3倍量,摇匀,放置分层,取上层液蒸干,加甲醇溶解使成1mL,作为待测试样制剂。
对照液制备:取人参对照药材约1g,依待测试样制备方法进行相同处理,为药材对照液,另取人参皂苷Rb1、Re、Rg1、F11对照品,加甲醇荣家,使成每1mL各含2mg的混合溶液,作为对照液。
展开剂:将15mL三氯甲烷、40mL乙酸乙酯、22mL甲醇和10mL的水置于100mL具塞量筒中混匀,置于4℃冰箱中放置,待分层至上层体积为5mL时,将上层液体吸出,弃去,摇匀后使用。
固定相为硅胶G和水,取硅胶G30g和90mL水搅拌至均匀糊状,在玻璃板上的涂覆厚度为0.3mm。
最后得到实施例1和对比例1最后的层析色谱图。
实验结果:实施例1的层析色谱图如图10所示,对比例1的层析色谱图如图11所示;图10和图11中的1为待测试样制剂,2为人参对照药材对照液,3为人参皂苷Rb1、Re、Rg1、F11对照液。
数据分析:如图10和图11所示,实施例1获得的图谱中,对照液和待测试样制剂的斑点边界清晰,无拖尾和斑点重合情况,功效成分的鉴别非常容易;而对比例1中斑点边界不清晰,且部分功效成分和对照液斑点存在重合现象,不容易鉴别。
本具体实施例仅仅是对本发明的解释,其并不是对本发明的限制,本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改,但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (10)
1.一种薄层层析法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:制备待测试样、对照液和薄层板;
S2:初展:在薄层板固定相所在面进行制剂和对照液的点样,将点样后的薄层板放置于层析缸中,盖上层析缸的玻璃盖板,展开12-14cm后取出薄层板,挥干溶剂;
S3:再展准备:通过紫外灯或显色剂确定定位点,定位点为初展时距离展开液最近的功效成分对应的斑点;在薄层板的定位点靠近杂质斑点的一侧分离,切断固定相;
S4:二次展开:将薄层板切断固定相后包含功效部分的一侧进行二次展开,展开至距离薄层板展开方向前沿10-12cm时取出薄层板,挥干溶剂。
2.根据权利要求1所述的一种薄层层析法,其特征在于,所述步骤S3中,在薄层板的定位点靠近杂质斑点的一侧开设分离槽,切断固定相。
3.根据权利要求2所述的一种薄层层析法,其特征在于,所述步骤S3中,用刀具划出分离槽,将固定相切断。
4.权利要求1-3所述的一种薄层层析法的展开装置,其特征在于,包括盛放有展开液的盛放皿、用于向薄层板涂覆了固定相的一面传递展开液的传递介质,以及放置于盛放皿中用于支撑薄层板和放置传递介质的支撑件;薄层板涂覆有固定相的一面朝下,传递介质一端抵接于薄层板上展开有功效成分的分离槽的一侧。
5.根据权利要求4所述的一种薄层层析法的展开装置,其特征在于,所述支撑件由至少一个的支撑单元组成,支撑单元包括支撑杆体以及设置于支撑杆体上用于卡入传递介质的卡槽,卡槽靠近薄层板的一端贯通。
6.根据权利要求5所述的一种薄层层析法的展开装置,其特征在于,所述支撑件由两个支撑单元组成,两个支撑单元之间连接有连接杆。
7.根据权利要求6所述的一种薄层层析法的展开装置,其特征在于,所述支撑件中相邻的支撑杆体、连接杆以及卡槽均由同一根金属丝弯折形成。
8.根据权利要求6所述的一种薄层层析法的展开装置,其特征在于,所述卡槽中插设有两块夹片,传递介质夹设于两块夹片中。
9.根据权利要求4所述的一种薄层层析法的展开装置,其特征在于,还包括用于保持薄层板水平的平衡件,平衡件支撑于薄层板远离支撑件一端。
10.根据权利要求9所述的一种薄层层析法的展开装置,其特征在于,所述平衡件为支撑件和盛放皿的组合。
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