CN111961668A - 一种水稻胁迫诱导型启动子POsSalT1及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物技术和植物基因工程技术领域，具体而言，本发明涉及一种水稻胁迫诱导型启动子P_OsSalT1及其应用。本启动子来源于水稻抗逆性基因OsSalT，其DNA序列如SEQ ID NO:1所示。上述启动子的下游连接待表达的基因(如抗逆性基因)并构建重组表达载体，用重组表达载体转化得到的转基因水稻在非生物胁迫条件(高盐、低温、干旱)诱导下调控待表达基因表达。本发明可以提高水稻的抗逆性，对保障国家的粮食安全、经济发展和社会稳定具有重要的作用。

Description

一种水稻胁迫诱导型启动子POsSalT1及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术和植物基因工程技术领域，具体而言，本发明涉及一种水稻胁迫诱导型启动子P_OsSalT1及其应用。

背景技术

水稻是对温度极为敏感的作物，世界水稻主产区普遍存在的问题便是低温冷害的问题。水稻的种植过程中如果芽期、苗期和孕穗开花期遭遇冷害，将导致水稻幼苗生长迟缓、分蘖减少，最终造成水稻产量的大幅度降低。另外，温度也是影响水稻籽粒品质的一个重要的环境因素。

土壤盐碱化已严重影响到水稻种植安全，成为影响水稻高产的一个主要因素，盐胁迫对水稻的影响主要是由于过高浓度的中性盐(NaCl和Na₂SO₄)所引起的离子毒害和渗透胁迫。离子毒害是指土壤中盐分过多时，往往以一、两种离子为主，形成不平衡的土壤溶液而导致特殊离子的毒害作用。例如水稻在盐胁迫下过量的Na⁺浓度抑制了水稻对其他离子的吸收，从而产生了毒害作用。渗透胁迫是指土壤中高浓度的盐分降低了土壤水势，造成水稻的吸水困难，甚至引起水稻体内水分的外渗，从而造成水稻的水分亏缺，产生生理干旱。

以上的2个因素严重制约水稻种植与推广，近来随着分子生物学的发展，在水稻抗逆境理论的研究方面取得许多进展，包括一些关键的抗逆境基因相继被克隆。利用这些关键基因，可以有效提高作物适应外界条件的变化，保证粮食安全。但目前的基因工程操作中，大部分是利用组成型启动子去驱动这些关键抗逆境基因的表达，所获转基因植株虽然能够表现出较强的抗逆境能力，组成型启动子会使驱动的目的基因在植物各组织中恒定而持续的表达，从而过度消耗细胞内的物质和能量，并且不能从时间和空间上有效地调控目的基因的表达，所以有时会带来一些负面效应，比如造成植株矮小，发育延滞和物质能量浪费，不利于潜在的实际应用推广。而诱导型启动子是指在某些物理或化学信号的刺激下，此种类型的启动子可以大幅度地提高目的基因的转录水平。显然，诱导型启动子这种可以接受特异信号的特性使其在基因工程中有很好的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种水稻胁迫诱导型启动子P_OsSalT1及其应用。

为了实现上述目的，一方面，本发明提供一种水稻特诱导型启动子P_OsSalT1，能够指导可操作地连接在其下游的核酸在水稻中受盐胁迫或低温胁迫下诱导表达，启动子P_OsSalT1的DNA序列如SEQ ID NO:1所示。

一方面，本发明还提供一组用于扩增P_OsSalT启动子的全长片段的引物对，引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物的DNA序列如SEQ ID NO:2所示；所述第二引物的DNA序列如SEQ ID NO:3所示，并在第一引物中加入PstI酶切位点和在第二引物加人BamHI酶切位点。

一方面，本发明还提供一种重组表达载体，在植物载体pCambia1300-221的多克隆位点插入P_OsSalT1启动子和待表达的基因序列得到的重组表达载体，在所述重组表达载体中，所述植物诱导启动子P_OsSalT1连接于载体中待表达的基因序列的上游。

进一步地，所述待表达的基因为水稻抗逆性基因。

更进一步地，所述水稻抗逆性基因为耐高盐基因、耐低温基因或耐干旱基因。

再一方面，本发明提供一种重组表达载体提高水稻抗逆性的方法，具体步骤如下：

(1)将本发明提供的上述启动子连接于载体的待表达的基因序列上游，从而构建重组表达载体；

(2)将所述重组表达载体用农杆菌介导转化到水稻细胞、组织或器官中进行培育。

其中，在重组表达载体提高水稻抗逆性的方法步骤(1)中待表达的基因为ATAF1基因，构建的重组载体为pCambia1300-221-P_OsSalT1-ATAF1载体。

最后，本发明提供了克隆ATAF1基因全长的引物对，其特征在于，所述第一引物对DNA序列为SEQ ID NO:4所示，所述第二引物DNA序列为SEQ ID NO:5所示。

综上所述，本发明的发明人设计引物扩增籼稻品种黄花占(Oryza sativaL.subsp.indica)OsSalT1基因上游2100bpDNA序列，这是一种诱导型启动子，并将其命名为P_OsSalT1。将该序列经酶切后连接到克隆载体pEASY-Blunt进行测序验证，将验证正确的启动子和pCambia1300-221、ATAF1基因酶切连接构成重组表达载体pCambia1300-221-P_OsSalT1-ATAF1，ATAF1基因在启动子下游，利用该重组质粒转化根癌农杆菌菌株EHA105，然后用农杆菌介导的方法进行水稻的转化，得到转基因水稻植株。对获得的转基因水稻进行ATAF1基因表达定量检测发现，转基因植株在高盐诱导处理后，整体上的ATAF1基因表达水平提高3-8倍，从而证明该2100bp的序列具有驱动基因表达的活性，而且该启动子驱动的ATAF1基因在水稻高盐诱导处理后表达。高盐处理后，转基因水稻和对照都有黄化现象，但过表达ATAF1的水稻绿色叶片多于对照(图7)。最终，对照的成活率仅为8.5％，而转基因水稻成活率分别为35.3％、47.3％和22.5％(图4)。同时，低温处理10天后，转基因水稻长势明显优于对照。结果说明，P_OsSalT1能够启动外源基因表达，提高水稻抗逆性。

本发明所述的迫诱导表达的水稻启动子P_OsSalT1可与植物双元表达载体和抗逆性基因一起构建重组表达载体，经此重组表达载体转化得到的水稻，在遭遇高盐、低温、干旱的非生物环境胁迫恶劣条件时，驱动抗逆基因表达，提高水稻抵抗逆境能力，保障水稻的生产安全，维护社会的稳定，减少国家对进口粮食的依赖。

附图说明

图1为水稻P_OsSalT1启动子的扩增检验电泳检验图

图2为pCambia1300质粒图谱图

图3为P_OsSalT1-GUS表达载体图

图4为P_OsSalT1启动子重组质粒酶切鉴定图

图5为P_OsSalT1-ATAF1表达载体图

图6为转基因拟南芥中启动子和GUS基因部分扩增图

图7为转基因拟南芥非生物胁迫后组织化学染色结果图

图8为转基因水稻在高盐胁迫下的成活率

图9为P_OsSalT1-ATAF1转基因水稻在高盐处理后的表型

图10为P_OsSalT1-ATAF1转基因水稻的转录分析图

图11为P_OsSalT1-ATAF1转基因水稻在低温处理后的表型

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

启动子的功能鉴定的实验材料为野生型拟南芥(Arabidopsis thalinana)。先将拟南芥种子用10％次氯酸钠进行表面消毒15～20min，再用灭菌蒸馏水冲洗种子3～5次。灭菌后的种子用含有0.2％琼脂粉的培养基重悬，播种在1/2MS固体培养基。4℃处理2～3d后，放入标准培养间进行培养。

发明中用到的水稻品种：(1)籼稻品种黄花占(Oryza sativa L.subsp.indica)，主要用于基因组DNA的提取并克隆OsSalT1基因的启动子。(2)粳稻品种日本晴(Oryzasativa L.japonica)，主要用来做重组表达载体转基因的遗传转化。

大肠杆菌XL1-blue、农杆菌EHA105、植物表达载体pCambia1300-221-GUS由发明人实验室保存。发明中所用的限制性内切酶和T4DNA连接酶购自TaKaRa公司；Taq酶购自北京天根公司；凝胶回收试剂盒购自博迈得公司；克隆载体pEASY-Blunt购自全式金公司，其他化学试剂均为国产或进口分析纯，都能从市场获得。

实施例1

P_OsSalT1基因启动子的克隆

以根据P_OsSalT1的启动子序列用primer6.0设计引物，得到一对引物，序列如SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:3所示，如表2所示，P1(下划线为PstI酶切位点)和P2(下划线为BamHI酶切位点)并在引物前面加入酶切位点。以水稻基因组DNA为模板进行PCR扩增，扩增条件：94℃，3min；94℃，30s、57℃，30s、72℃，2min10s，30个循环；72℃延伸10min。PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳分离后如图1所示，紫外切胶。利用凝胶回收试剂盒回收目的片段，连入克隆载体pEASY-Blunt进行测序。

以ATAF1的序列设计引物，引物对序列如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示。如表2所示，A1(下划线为BamHI酶切位点酶切位点)和A2(下划线为SacI酶切位点)。以拟南芥的cDNA为模板，扩增条件：94℃，3min；94℃，30s、57℃，30s、72℃，1min，30个循环；72℃延伸10min。PCR产物用1％琼脂糖凝胶电泳分离后，切胶。利用凝胶回收试剂盒回收目的片段，连入克隆载体pEASY-Blunt进行测序。

表2研究中用到的引物

实施例2

P_OsSalT1启动子表达载体构建及拟南芥的转化

将OsSalT1的启动子克隆至植物双元载体pCambia1300-221中驱动GUS基因表达，pCambia1300-221质粒图谱如图2所示。用PstI和BamHI酶切pCambia1300-221-GUS和含有启动子片段的pEASY-Blunt克隆载体，回收目的片段与载体片段。利用T4DNA连接酶22℃连接过夜，得到pCambia1300-221-P_OsSalT1-GUS质粒如图3所示，然后转化大肠杆菌XL1-Blue，提取并鉴定重组质粒如图4所示。通过农杆菌介导的拟南芥花序遗传转化方法转化野生型拟南芥。

用BamHI和SacI酶切pCambia1300-221-P_OsSalT1-GUS和含有ATAF1的pEASY-Blunt克隆载体，回收目的片段与载体片段。利用T4DNA连接酶22℃连接过夜，得到pCambia1300-221-P_OsSalT1-ATAF1,结果如图5所示，转化大肠杆菌XL1-Blue，提取并鉴定重组质粒。

实施例3

转基因拟南芥筛选及非生物胁迫处理

利用潮霉素对转基因拟南芥种子进行筛选，鉴定出T2代纯合转基因株，基因组PCR验证结果显示，P_OsSalT1启动子和GUS特异引物分别扩增出2100bp和280bp的条带，结果如图6所示，表明载体成功转入受体内。经非生物胁迫(干旱、低温、高盐)处理和组织化学染色分析结果如图7所示。将1/2MS固体培养基中培养2周左右的拟南芥移植到1/2MS液体培养基中继续培养48h，一部分幼苗用300mmol/LNaCl的培养基进行高盐处理4h；一部分幼苗置于滤纸上，进行模拟干旱处理4h；一部分幼苗用100μmol/LSA的培养基进行处理4h；一部分幼苗用100μmol/LmeJA的培养基进行处理4h；用不处理的幼苗作为对照。将处理后的幼苗浸泡在染色液中进行染色(按照说明书进行)。结果如图5表示，未经高盐、干旱、低温处理时，报告基因在幼苗中有一定的表达量，在根和叶中均有表达。经过高盐、干旱、低温和meJA处理后，GUS基因的表达量均明显上调。meJA处理后，报告基因在根和叶中表达量下降，尤其是在根中表达量几乎检测不到。在高盐、干旱、低温和meJA处理条件下，P_OsSalT1启动子可以明显增强报告基因的表达量，但启动效果不相同。低温、高盐和meJA处理后，GUS基因在叶中的表达量升高，根中的表达量变化不大。干旱处理后，GUS在根和叶中的表达量升高。

实施例4

转pCambia1300-221-P_OsSalT1-ATAF1水稻的遗传转化

(1).预培养：将成熟水稻种子去壳，用70％乙醇灭菌2min，再用无菌水冲洗5次；用100％NaClO处理40min，再用无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干水分，并在无菌工作台台上吹30min左右；将灭菌后的水稻种子放入1/2MS诱导培养基中，27℃暗培养10d。

(2).农杆菌培养：带pCambia1300-221-P_OsSalT1-ATAF1载体的农杆菌EHA105菌株，在LB(含50mgRif和Hyg)固体培养基上28℃暗培养2～3d；挑单菌落于10mlLB(含1/1000，50mg/L的Hyg和Rif)LB液体培养基中，28℃摇床上180rpm震荡培养48h；吸取适量的农杆菌于无菌离心管中，3600rpm离心15min，弃上清液，将沉淀重悬后转入AAM侵染培养基，28℃摇床上180rpm震荡培养，至OD600约为0.1。

(3).侵染和共培养：在诱导培养基中挑选质地紧凑的愈伤组织，同时用刀片将愈伤组织的根去掉，装放入无菌三角瓶中，将培养好的农杆菌倒入无菌三角瓶内，并将愈伤组织淹没；在水平摇床慢摇30min，倒掉菌液，用无菌滤纸吸去愈伤组织表面的菌液，吹干；将干燥后的愈伤组织接在AAM培养基上，27℃暗培养3d。

(4).筛选：将共培养后的愈伤组织用1/400的头孢水(50mg/l)冲洗5次，浸泡30min，再用无菌水冲洗3次，以彻底除去农杆菌；用无菌滤纸吸干愈伤组织表面的水分，吹干，将其接于筛选培养基上(含1/400，50mg/l头孢+1/1000，50mg/Lhyg)，27℃持续光照20d左右。

(5).分化培养：将筛选培养基中长出抗性愈伤的愈伤整体转移到预分化培养基(含1/400，50mg/L头孢+1/1000，50mg/LHyg)中，置于光培养培养箱中培养条件为：27℃，14h光照培养，光强1000～1500lx。3～7天陆续有愈伤变绿；将预分化培养基中变绿的愈伤转到分化培养基(含1/400，50mg/L头孢+1/1000，50mg/LHyg)中，置于27℃，14h光照培养，光强1000～1500lx光照培养，每20天更换一次培养基。

(6).生根培养：绿苗高约5～8cm时，转移到(含1/400，50mg/l头孢)1/2MS生根培养基上，促进根的生长，置于27℃，14h光照培养，光强1000～1500lx光照培养。生根后将苗移至室温。

(7).移栽：3～4周后，打开瓶盖加入蒸馏水，室内炼苗3天，用自来水将附在幼苗上的培养基冲洗干净，移栽到装有泥土的小盘子里，待幼苗成活再移入桶子或实验田中，培养至成熟。

实施例3和4中培养基配方如下

1.诱导培养基：

1/2MS大量+MS微量+铁盐+2mg/L2,4-D。

2.LB固体培养基：

在950mlddH₂O中加入胰化蛋白胨(tryptone)10g；酵母提取物(yesat extract)5g；NaCl10g。用1M的NaOH调节pH值到7.0，定容至1L。然后加入15g琼脂粉。121℃，20min高压灭菌，待冷却至50-60℃时，倒制平板。倒制时培养基温度不宜过高，否则冷却后平板会产生大量冷凝水。

3.LB液体培养基：

950mlddH₂O中加入胰化蛋白胨(tryptone)10g、酵母提取物(yesat extract)5g、NaCl10g。用1M的NaOH调节pH值到7.0，定容至1L。121℃，20min高压灭菌，4℃储存。

4.AAM侵染培养基：

称取磷酸二氢钾0.17g、硫酸镁0.37g、氯化钾2.94g、氯化钙0.44g、硫酸锰7.58mg、钼酸钠0.25mg、硼酸3.0mg、硫酸锌2.0mg、碘化钾0.75mg、硫酸铜0.0387mg、氯化钴0.025mg、硫酸亚铁27.8mg、EDTA钠盐37.3mg、肌醇100mg、盐酸硫胺素0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、尼克酸0.5mg、甘氨酸7.5mg、精氨酸174mg、谷氨酰胺876mg、水解酪蛋白500mg、乙酰丁香酮100ug、葡萄糖68.5g、蔗糖30.0g，溶于1L蒸馏水或去离子水中，微温溶解，使用NaOH调节pH至5.2，过滤除菌，备用。

5.筛选培养基：

MS盐+B5+CH0.5g/L+Asp0.15g/L+PVP0.16g/L+2,4-D2.0mg/L+Sur30g/L+植物凝胶3.0g/L，灭菌后加含50mg/l头孢+50mg/Lhyg。

6.预分化培养基：

MS+B5+CH0.8g/L+PVP2.0g/L+KT2.0mg/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.25mg/L+D-Sor8g/L+Sur30g/L+植物凝胶3.0g/L，灭菌后加含50mg/l头孢+50mg/Lhyg。

7.分化培养基：

MS盐+B5+CH0.8g/L+PVP2.0g/L+KT2.0mg/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.25mg/L+D-Sor8g/L+Sur30g/L+植物凝胶3.0g/L，灭菌后加含50mg/l头孢+50mg/Lhyg。

8.生根培养基：

1/2MS(MS大量减半，其余不变)基本培养基+NAA0.2mg/L+Sur30g/L+植物凝胶3.2g/L。

实施例5

水稻的胁迫处理

用实施案例4得到的饱满的水稻种子35℃催芽，待胚芽和培根长出约1厘米，转移到去底的96孔PCR板。将PCR板放入泡沫板上，悬浮于霍格兰培养液中，置于培养间培养。3周后换成含有150mMNaCl的培养液处理1周，然后换成正常培养液恢复10天，统计转基因水稻在高盐胁迫下的成活率如图8所示并观察转基因表型如图9所示。正常的转基因水稻中，ATAF1的表达量均高于对照，对照中几乎检测不到ATAF1。高盐胁迫后，ATAF1的表达量明显升高，结果如图10所示。

将饱满的水稻种子剥去外壳，NaClO灭菌40分钟，灭菌水洗涤5次，播种到含有1/2MS培养基。培养两周后，4℃处理3天，28℃恢复。观察低温胁迫下，转基因水稻的表型，结果如图11所示，转基因水稻长势明显优于对照。

序列表

<110> 湖南科技学院

<120> 一种水稻胁迫诱导型启动子POsSalT1及其应用

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2100

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 1

tgtagttgtg tagggcaatg gggattgcac cctctattta tagtgcttct tatgcctaac 60

atccactgta tcaactgcat tcgtgtacgt aatctttcat gcatgtgctc catcttttgt 120

tggactttat aatattctag acatttatcc atctatcctt cattctgaag ccgccgtcac 180

caagccttgg tttttgacaa gctggtgagt gctaacattt aaaggctatc ttattgtcga 240

caatgctgct agctagctaa ctgaatgtcc ctgcacggag tttgaccaag cgagccaagc 300

tcactcagcg ccacgtctgc caaagaagcc tcgtgtccaa atttcatacc cctctgttat 360

cacgggtaca ggtgttcctt atcttctggc gatttaggga catgcagttt tggacttgtt 420

ttaagtaagt caaagtttaa taacattatt aatatctttc taaatattta gatatctttg 480

aataatagaa tttaatataa tattatcttt gtttcaaaga gtccatagtt ttcagctcga 540

aagaccacgc gttacagatc ttactatcaa attgacggat atctgcttaa ccgttgtttt 600

gagcagcacc tgcatgttgc aagcaatcct catccctcct caatgctgaa aaaaaacgac 660

cccaaaaata gcgtccgatc attctgttga tcgatactca cacacatcat cgccagcatc 720

gatcaacaaa cggaagcaga tggtaccgcc ggagagtaac taaattataa ataaggtgtg 780

ccatcgctaa attccaccca tgatctctaa tgcatgaggg aaggtttttc ggagcacacc 840

ccatggagga tacgacgtga tttaccaccg tcccttgtct gaaagctaga gtaaggtgtt 900

cctctagaga ttgatatgta tggaatagca gaaaagaacg caataacgac atcttcgagg 960

agaggaaaca cacttagccg tgttcagtag tggttgttgg aaactaatcc ctcctttcct 1020

cgtgcacgta aaacatagca actcattagt gtatgattaa ttaagtatta gctatttgtt 1080

tttttaaaaa atagattaat atgatttttt aaagtaactt tcctattgaa aatttataaa 1140

aaaaacacac cgtttaacag tttaaaaagc gtgtgcgtgg aaaaagtgga atgtgagttg 1200

ggaaaacgtg acacagtggt atggtttcaa tttttccaaa ttcgagtggc atgtagccga 1260

tatcgtgaat agtagtgaca tttacctaaa atagtatatt tgtaatggca tgaatccaac 1320

taactctaaa tataattata ctactatata attatcacta tgttttgaat tttttatttg 1380

gaagaattgt aaaacaaaat aaaagaaggg aaagggaaat catataaaca aggggaattc 1440

taggggtcac ctacaaatcg gacgcccgat tttttttttt ttacaaaaat cgggcgttgt 1500

tccaccaagt agatcggaat tgtttcacta agtagatcga aaatgtttca atcgtttaaa 1560

aagatgaaat acaactaaat cacctcatga aatattttgc tacaatgtat gaaacaatgg 1620

tttttgaagt tgtttcacca tatataaaaa taatatttca gcaaatagca aaaggatgtt 1680

tcaattcact gcaagattta atctatacac agtgaaacaa cacaagtata cttactgaaa 1740

tattgttggt agaaaaaaaa ttgaaacgga ttcctttaat acataataca agtatactta 1800

ctgaaatatt gttggtggaa aaaaaattga aacggattcc tttaatggag cgtttctgta 1860

atatgcgagt gatttgttgc aacgatgcgt gtggtgggac gcgtggtgag atggtgtgga 1920

ggcacgggtg gtgcggtgcc cattttttta gcgcccgtcg gacacccgac tcggggcatt 1980

tccagaaatt ctaccgttct cgaaaaatac catcggtact tatctggtac cgtaagacca 2040

cattccatat ataaacaatg gaaaataaga gatggttagc tgaacgtgca aaagcagaca 2100

<210> 3

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ctgcagtgta gttgtgtagg gcaatgg 27

<210> 3

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ggatcctgtc tgcttttgca cgttca 26

<210> 4

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ggatccatgt cagaattatt aca 23

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gagctcctag taaggcttct gca 23

Claims (10)

1.一种水稻胁迫诱导型启动子P_OsSalT1，其特征在于，其能够指导可操作地连接在其下游的核酸在水稻受逆境胁迫时进行诱导表达，所述启动子序列如SEQ ID NO:1所示。

2.扩增权利要求1的所述的水稻胁迫诱导型启动子P_OsSalT1的引物对，其特征在于，所述引物对包括第一引物和第二引物，所述第一引物的DNA序列为SEQ ID NO：2所示；所述第二引物的DNA序列为SEQ ID NO：3所示。

3.一种含有权利要求1所述的启动子的重组表达载体。

4.根据权利要求3所述的的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括权利要求1所述的启动子和待表达的基因。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，在所述重组表达载体中，所述启动子连接于载体中待表达的基因序列的上游。

6.根据权利要求4所述的的重组表达载体，其所述的待表达基因为水稻抗逆性基因。

7.根据权利要求6所述的重组表达载体，所述水稻抗逆基因为耐高盐基因、耐低温基因或耐干旱基因。

8.利用权利要求3-7任一项所述的重组表达载体提高水稻抗逆性的方法，其特征在于，具体步骤包括如下：

(1)将本发明提供的上述启动子连接于载体的待表达的基因序列上游，从而构建重组表达载体；

(2)将所述重组表达载体用农杆菌介导转化到水稻细胞、组织或器官中进行培育。

9.根据权利要求8所述的利用重组表达载体提高水稻抗逆性的方法，其特征在于，在步骤(1)所述待表达的基因为ATAF1基因，所述构建的重组载体为pCambia1300-221-P_OsSalT1-ATAF1载体。

10.根据权利要求9所述的利用重组表达载体提高水稻抗逆性方法，其特征在于，克隆ATAF1基因的引物的第一对引物DNA序列如SEQ ID NO:4所示，第二对引物DNA序列如SEQ IDNO:5所示。

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