CN111944808A - 核糖体rna启动子在强启动表达非rna基因中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了过表达目的基因的方法。该方法包括：将核糖体RNA启动子与目的基因进行可操作的连接，所述核糖体RNA(rRNA)启动子设置于所述目的基因原有启动子的位置，所述目的基因为非核糖体RNA基因；将连接有核糖体RNA启动子的目的基因导入受体细胞，以便实现所述目的基因在受体细胞的过表达。该方法实现了目的基因在受体细胞的强启动和显著的过表达，且目的基因的过表达十分地稳定，它不会随着受体细胞的传代而发生重组或丢失。根据本发明实施例的方法适用于微生物、动植物体内目的基因的显著强表达。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及核糖体RNA启动子在强启动表达非RNA基因中的用途。
背景技术
基因的过表达是代谢工程领域增加产量的一项常用技术，过表达基因包括密码子优化、启动子的替换，基因拷贝数的增加等，其中密码子优化能带来的效果不是特别明显，将基因的拷贝数增加能提高基因的表达量，但改造后的微生物菌株在传代过程中容易重组，导致退化。将弱的启动子替换成为强的启动子能够增加基因的表达量，但是启动子的强度有限，因此寻找更强的启动子能够更有利于基因表达量增加。
发明内容
本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：
申请人在科研工作中意外而惊喜地发现，通过核糖体RNA(rRNA)启动子过表达目的基因，可以达到超高强度的过表达目的基因的效果，该种方式比现有常用的启动子强度显著更强。发明人发现，对于各种微生物，只要有微生物的全基因组信息，找到其rRNA的启动子，用该启动子在这种微生物里及同属微生物里几乎能达到最高强度的表达任何基因的目的。同时，发明人发现，在所有动植物体内，发明人所发现的这种强表达目的基因的方法同样适用。
为此，本发明提出了过表达目的基因的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将核糖体RNA启动子与目的基因进行可操作的连接，所述核糖体RNA(rRNA)启动子设置于所述目的基因原有启动子的位置，所述目的基因为非核糖体RNA基因；将连接有核糖体RNA启动子的目的基因导入受体细胞，以便实现所述目的基因在受体细胞的过表达。根据本发明实施例的方法，实现了目的基因在受体细胞的强启动和显著的过表达，相比于现有技术的过表达目的基因的水平，实现了显著进步，且利用根据本发明实施例的方法实现的目的基因的过表达十分地稳定，它不会随着受体细胞的传代而发生重组或丢失。根据本发明实施例的方法适用于微生物、动植物体内目的基因的显著强表达。
根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述核糖体RNA启动子与所述受体细胞来源于同一属；优选地，所述核糖体RNA启动子与所述受体细胞来源于同一种。所述受体细胞可成功识别所述核糖体RNA启动子，进而核糖体RNA启动子发挥启动目的基因表达的功能。
根据本发明的实施例，所述核糖体RNA启动子与所述受体细胞来源于同属微生物；优选地，所述核糖体RNA启动子与所述受体细胞来源于同种微生物。核糖体RNA启动子在同属微生物中启动功能的发挥更加有效。
根据本发明的实施例，所述核糖体RNA启动子至少包含一段完整的该核糖体RNA启动子功能单位，所述“完整的核糖体RNA启动子功能单位”是指能够独立发挥启动rRNA基因表达的最小功能单位。根据本发明的实施例，所述核糖体RNA启动子为核糖体RNA基因序列5’端前的至少包括一段完整的该核糖体RNA启动子功能单位的序列，该段序列的长短可根据该核糖体RNA启动子功能单位的序列的长短做相应调整，需要覆盖至少一段RNA启动子功能单位。例如，所述核糖体RNA启动子为核糖体RNA基因序列5’端前50bp，100bp，200bp，300bp，400bp，500bp，600bp，700bp，800bp或900bp的序列，优选地，所述核糖体RNA启动子为核糖体RNA基因序列5’端前700bp的序列。本申请所述的“核糖体RNA基因序列5’端前的多少bp”是指以核糖体RNA基因序列的起始核苷酸为起始点，向5’端方向前移多少bp后的序列。举例来说，如果核糖体RNA基因序列的起始核苷酸处坐标标记为0，那么向5’端方向前移700bp后的坐标可标记为-700，那么核糖体RNA基因序列5’端前的700bp的序列即为700～0之间的序列。为了便于理解，申请人将核糖体RNA基因序列5’端前的700bp的序列表示为如下图7所示。发明人通过实验验证，核糖体RNA基因序列5’端前的700bp的序列可有效实现非rRNA的目的基因的显著更强启动和表达。
根据本发明的具体实施例，所述核糖体RNA基因序列是通过NCBI数据库或测序获得的。根据本发明的具体实施例，所述目的基因预先设置于质粒载体中。
根据本发明的具体实施例，所述质粒载体为pLH1。
根据本发明的具体实施例，所述目的基因为Gus。
根据本发明的具体实施例，所述核糖体RNA(rRNA)启动子设置于所述pLH1的XbaI和NdeI酶切位点之间。发明人在具体实验中，发明人以Streptomyces albidoflavusJ1074、阿卡波糖游动放线菌、Saccharopolyspora spinosa DSM44228、枯草芽孢杆菌、小单胞菌或S.lividans TK24为例，在NCBI数据库中查找上述菌的rRNA的DNA序列，并将其DNA序列5’端前的700bp作为上述菌株的rRNA启动子，之后将该部分rRNA启动子通过XbaI和NdeI酶切位点连接到pLH1质粒载体中，所述pLH1质粒载体预先连接有Gus基因，并使用XbaI和NdeI双酶切进行酶切处理，所获得的重组pLH1质粒导入上述菌株细胞内，实现了Gus基因在上述菌株的显著强启动和过表达。
综上，本申请提出了核糖体RNA启动子在强启动表达非RNA基因中的用途。对于各种微生物、动植物细胞，只要有其全基因组信息，找到其rRNA的启动子，该rRNA启动子在这种细胞里及同属细胞里几乎能达到最高强度的表达任何基因的目的。
附图说明
图1是根据本发明实施例的S.albidoflavus J1074的rRNA启动子和现有常用启动子的强度表征；
图2是根据本发明实施例的阿卡波糖游动放线菌的rRNA启动子和现有常用启动子的强度表征；
图3是根据本发明实施例的Sa.spinosa NRRL18395的rRNA启动子和现有常用启动子的强度表征；
图4是根据本发明实施例的枯草芽孢杆菌的rRNA启动子和现有常用启动子的强度表征；
图5是根据本发明实施例的小单胞菌的rRNA启动子和现有常用启动子的强度表征；
图6是根据本发明实施例的S.lividans TK24的rRNA启动子和现有常用启动子的强度表征；以及
图7是根据本发明实施例的核糖体RNA启动子的序列示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
实施例1链霉菌Streptomyces albidoflavus J1074过表达基因
从NCBI数据库中下载Streptomyces albidoflavus J1074的基因组序列，查找并预测其中的核糖体RNA(rRNA)，选择16s rRNA基因前700bp作为启动子(见附录)，通过在引物上添加UTR序列将启动子序列进行PCR，PCR得到一共7个启动子，引物序列见表1。经过XbaI和NdeI这两个酶切位点酶切之后插入到带有Gus基因的pLH1质粒的相应的酶切位点处，形成多个用核糖体RNA启动子控制基因表达的单交换质粒(见表2)，通过GusA的活性来测试启动子的强度。参照之前发表的文章《Development of Streptomyces sp.FR-008 asan emerging chassis[J].Synthetic&Systems Biotechnology,2016,1(3):207-214》将质粒转入S.albidoflavus J1074中表征rRNA启动子强度对于GusA表达的活性检测方法，同时以原文献中SPL44，KasOP,ermE*启动子作为对照。参考文献中的表征方法。
表1.扩增S.albidoflavus J1074的rRNA启动子的引物
表2.构建S.albidoflavus J1074的rRNA启动子的质粒
结果显示如图1所示，新发现的rRNA启动子的强度比目前报道的最强启动子强度还强约1倍。
实施例2阿卡波糖游动放线菌的启动子表征
从已测序的阿卡波糖游动放线菌基因组序列中，查找并预测其中的核糖体RNA(rRNA),选择rRNA基因前700bp作为启动子(见附录)，通过在引物上添加UTR序列将启动子序列进行PCR,PCR得到16SrRNA启动子5个，经过XbaI和NdeI这两个酶切位点酶切之后插入到带有Gus基因的pLH1质粒的相应的酶切位点处，形成多个用核糖体RNA启动子控制基因表达的单交换质粒(见表3)，通过GusA的活性来测试启动子的强度。参照之前发表的文章《Development of Streptomyces sp.FR-008as an emerging chassis[J].Synthetic&Systems Biotechnology,2016,1(3):207-214》将质粒转入阿卡波糖游动放线菌中表征rRNA启动子强度对于GusA表达的活性检测方法，同时以原文献中SPL44,KasOP,ermE*启动子作为对照。改造后的菌株在含50μg/mL阿泊拉霉素的AK平板上(土豆可溶性淀粉3％，葡萄糖2％，蛋白胨1％，酵母抽提物0.10％，黄豆饼粉2％，CaCO3 0.10％，琼脂2％，pH 7.0)分单，5天长出单菌。用牙签蘸取单菌落在含50μg/mL阿泊拉霉素的AK平板上点种，生长7天后，刮取单菌落于50mL TSB，28℃，250rpm培养42h。具体如下：每个菌株在TSBY中培养2天后，样品取20mL菌液两管，一管65度烘干，测干重，记为DW；另一管用于测定GusA酶活，离心后等体积ddH2O洗两遍，加入20mL Buffer1(50mM磷酸缓冲液[pH7.0]，5mM DTT，0.1％TritonX-100)，1200bar高压匀浆8min，后用Buffer1稀释至30mL。离心取100μL上清加入100μLBuffer 3(50mM磷酸缓冲液[pH7.0]，5mM DTT，0.1％TritonX-100，2mM对硝基苯-β-d葡糖苷酸)，放入酶标仪，415nm下，37℃测30min。计算吸光曲线斜率，记为A415/min，酶活计算公式：U/g＝90*A415/min/(14*DW)。结果如图2。
表3.阿卡波糖游动放线菌rRNA启动子的质粒
结果如图2所示，新发现的rRNA启动子的强度比目前报道的最强启动子强度还强约2倍。
实施例3刺糖多孢菌的启动子表征
从NCBI数据库中下载Saccharopolyspora spinosa DSM44228的基因组序列，查找并预测其中的核糖体RNA(rRNA)，选择16srRNA基因前700bp作为启动子(见附录)，通过在引物上添加UTR序列将启动子序列进行PCR，PCR得到一共5个启动子，引物序列见表4，经过XbaI和NdeI这两个酶切位点酶切之后插入到带有Gus基因的pLH1质粒的相应的酶切位点处，形成多个用核糖体RNA启动子控制基因表达的单交换质粒(见表5)，通过GusA的活性来测试启动子的强度。参考文献的方法构建接合转移菌株(Jha AK,Pokhrel A R,ChaudharyA K,et al.Metabolic Engineering of Rational Screened Saccharopolysporaspinosa for the Enhancement of Spinosyns A and D Production[J].Molecules&Cells,2014,37(10):727-33.)同时以SPL44，KasOP,ermE*启动子作为对照，将这些突变菌株在TSB培养基中培养3天后，按照实施例1的方法进行GUS活性检测，结果如图3所示。
表4.扩增Sa.spinosa NRRL18395的rRNA启动子的引物
表5.构建Sa.spinosa NRRL18395的rRNA启动子的质粒
结果如图3所示，新发现的rRNA启动子的强度比目前报道的最强启动子强度还强约1倍。
实施例4枯草芽孢杆菌的启动子表征
利用GUS-F,GUS-R引物PCR GUS基因，通过XbaI和SmaI将质粒pHT01酶切，通过Gibson方法将酶切后的质粒和PCR片段组装构建成为pHT01-GUS，该质粒可用Pgrac启动子控制GusA表达。从NCBI数据库中下载Bacillus subtilis 168的基因组序列，查找并预测其中的核糖体RNA(rRNA)，选择16s rRNA基因前700bp作为启动子(见附录)，PCR得到一共10个启动子。通过在引物上添加UTR序列将启动子序列进行PCR，并在引物两端加入KpnI和BamHI位点，引物序列见表4。通过KpnI和BamHI将质粒pHT01-GUS酶切，酶切后与16s rRNA启动子PCR片段进行酶连，形成多个用核糖体RNA启动子控制基因表达的质粒(见表6)，通过GusA的活性来测试启动子的强度。
从枯草芽孢杆菌WB800N平板(LB培养基：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母粉，10g/LNaCl)上，挑取单菌落接种于3mL LB液体培养基中，37度过夜培养。次日取过夜培养的WB800N菌液500Ul,转种于50mL电转培养基A(LB+0.5％山梨醇)中，37度水浴震荡培养4小时，OD值达到0.85-0.95之间。在超净工作台内，将上述菌液转移至无菌预冷的50mL离心管中，冰浴10分钟，4度离心(5000rpm,10分钟)，收集沉淀，向沉淀中加入预冷的电转培养基B(0.5M山梨醇，0.5M甘露醇，0.5M海藻糖，10％甘油)，重悬菌体，4度离心(5000rpm,5分钟)，收集菌体，重复用电转培养基B预漂洗4次，然后收集沉淀。用1mL电转培养基B重悬洗涤后的菌体，60uL每管分装。将8uL重组质粒加入1管WB800N感受态细胞中，轻轻混匀，冰上孵育2分钟，加入预冷的电击杯中(直径2mm)，立刻电击(2000V，5ms)。电击完毕后，立即加入1mL电转化复苏培养基(LB+0.5M山梨醇+0.38M甘露醇)，轻柔混匀，37度摇床中220rpm震荡培养3h。4000rpm离心5min后，弃去800uL上清后，重悬菌体，涂布与氯霉素抗性LB平板，过夜培养。
同时以pHT01-GUS作为对照，将这些重组菌株在含氯霉素抗性的LB培养基中过夜培养后，按照1:500的量转接至40mL含氯霉素抗性的LB培养基中，37度,220rpm培养8h后，pHT01组加入1mM的IPTG，而rRNA启动子组不做改变，继续培养8h后，收集菌体，按照实施例1的方法进行GUS活性检测，结果如图4所示。
表6.扩增引物
表7.构建枯草芽孢杆菌的表达质粒
图4结果证明了，枯草芽孢杆菌的核糖体RNA的启动子比常用的强启动子更强。
实施例5小单胞菌启动子强度表征
从已测序的小单胞菌基因组序列中，查找并预测其中的核糖体RNA(rRNA)，选择rRNA基因前700bp作为启动子(见附录)，通过在引物上添加UTR序列将启动子序列进行PCR，PCR得到1条16S rRNA启动子，经过XbaI和NdeI这两个酶切位点酶切之后插入到带有Gus基因的pLH1质粒的相应的酶切位点处，形成多个用核糖体RNA启动子控制基因表达的单交换质粒(见表8)，通过GusA的活性来测试启动子的强度。参照之前发表的文章《Developmentof Streptomyces sp.FR-008as an emerging chassis[J].Synthetic&SystemsBiotechnology,2016,1(3):207-214》将质粒转入阿卡波糖游动放线菌中表征rRNA启动子强度对于GusA表达的活性检测方法，同时以原文献中SPL44,KasOP,ermE*启动子作为对照。
启动子菌株在含50μg/mL阿泊拉霉素的平板培养基平板上(玉米淀粉1.5％，可溶性淀粉1％，甘露醇0.2％，葡萄糖0.2％，黄豆饼粉1.5％，蛋白胨0.5％，麸质粉0.5％，酵母提取物0.2％，天冬酰胺0.002％，氯化钠0.05％，硫酸镁0.05％，磷酸氢二钾0.03％，硝酸钾0.1％，碳酸钙0.1％，琼脂2.0％，pH7.2)分单，3天长出单菌。用牙签蘸取单菌落在含50μg/mL阿泊拉霉素的平板培养基平板上划线，生长3天后，刮取菌落于100mL TSB，34℃，250rpm培养42h。
每个样品取40mL菌液两管，一管65度烘干，测干重，记为DW；另一管用于测定GusA酶活，离心后等体积ddH2O洗两遍，加入20mL Buffer1(50mM磷酸缓冲液[pH7.0]，5mM DTT，0.1％TritonX-100)，1200bar高压匀浆8min，后用Buffer1稀释至45mL。离心取100μL上清加入100μL Buffer 3(50mM磷酸缓冲液[pH7.0]，5mM DTT，0.1％TritonX-100，2mM对硝基苯-β-d葡糖苷酸)，放入酶标仪，415nm下，37℃测30min。计算吸光曲线斜率，记为A415/min，酶活计算公式：U/g＝90*A415/min/(14*DW)。
表8.小单胞菌rRNA启动子的质粒
实施例6在S.lividans TK24中表征来源于S.albidoflavus J1074的rRNA启动子
按照实施例1的方法将构建的包含S.albidoflavus J1074的rRNA启动子的质粒转入S.lividans TK24，按照同样的方法进行表征，结果如图6所示，可看出来源于同属微生物的核糖体启动子在该属其他微生物中也属于强启动子。
实施例7用Streptomyces albidoflavus J1074中的强启动子表达抗性基因
通过Gibson的方法利用表9中的额引物将实施例1中表2中的质粒中的GUS基因替换成neo基因，形成多个用核糖体RNA启动子控制基因表达的单交换质粒(见表10)，通过Neo的基因表达kanamycin抗性。参照之前发表的文章《Development of Streptomyces sp.FR-008as an emerging chassis[J].Synthetic&Systems Biotechnology,2016,1(3):207-214》将质粒转入S.albidoflavus J1074中表征rRNA启动子强度，同时以原文献中SPL44,KasOP,ermE*启动子作为对照。表征方法为：将Streptomyces albidoflavus J1074在不同浓度的kanamycin的平板上划线的生长状态来测试启动子的强度。
结果显示，利用核糖体RNA启动子表达neo基因的菌株对kanamycin的敏感性高于200mg/L,而利用SPL44表达neo基因的菌株对kanamycin的敏感性约为100mg/L，利用KasOP表达neo基因的菌株对kanamycin的敏感性约为60mg/L，利用ermE*表达neo基因的菌株对kanamycin的敏感性约为30mg/L。
表9.构建S.albidoflavus J1074的rRNA启动子表达Neo基因的引物
表10.构建S.albidoflavus J1074的rRNA启动子表达Neo基因的质粒
上述结果充分证明了，来源于同属的核糖体RNA的启动子可在不同种的微生物中发挥类似的功效。
附录：以下为申请人在以上实验中使用的核糖体rRNA启动子的序列，其命名采用了“rRNA名+序号”的方式，如“16S-1”表示第一个16SRNA启动子序列。
Streptomyces albidoflavus J1074的启动子序列
16S-1
aggagcacgggccctgcttgacttcgttcccgccgatgcgtagtgttcaacgagctgccgtccagccccaagggctggggaagcacctcagccgcgcggagcgcggctcacttcaaaacctcagcaagaaccctccagaaatacctttcctcaggcatgccctcgggcaggcccggatttcttttttccggaggtcctcttgtcatctcggtacgacagtcagagccattcggccccgattgtgagagatcgagagagttcgctatggttctggacgtcggaacggcccaacagccgggaaggcgaatcccgctgactgggaatcaggcccgaaaggatctgatagagtcggaaccgccgaaagggaaaagcgaagcggaaacgcggagctggaaccggaaaggcaccgaggaaatcggacgcgaaagagtctgatagagtcgggaacacgaagtaccgaagggaagcgcccggaggaaagcccgagagggtgagtacaaaggaagcgtccgttccttgagaactcaacagcgtgctaaaagtcaacgccagatatgttgataccccgaccggccaggttcctggctggttgaggttcctttgaaatacaacagcgaggacgctgtgtgtgacagggactattcctccttgtcgcaccgctctcatgtctgttgcaccggattaccggtacacattcacgg(SEQ ID NO:75)。
16S-2
ggtatcgacgacgcgcgcttcgccgacgtcgtcccccgtatccaggaggtcctggagaagtcggcccaggacggcgtggtcgagccgcaccagctccagcagctggtgcgccgcaccctcggcaagtgggtctccgaccactaccgccggcgcccgatgatcctcccggtcgtcgtcgaggtctgagccgccggccggcgcaccacggagcggggctccccggatttgcatcggggagccccgctccagtacgtttacgtctccaccccagcgggaagcccggcgcacctctgtgtgcccacgcggaacggggcgggtggaaattccgacgcagagtctctgataaagtcggaaccgccgaaagggaaaagcgaagcggaaacgcggagctggaaccggaaaggcaccgaggaaatcggacgcgaaagagtctgatagagtcgggaacacgaaataccgaagggaagcgcccggaggaaagcccgagagggtgagtacaaaggaagcgtccgttccttgagaactcaacagcgtgctaaaagtcaacgccagatatgttgataccccgaccggccaggttcctggctggttgaggttcctttgaaatacaacagcgaggacgctgtgtgcgacagggattattcctccttgtcgcaccgctctcatgtctgttgcaccggattaccggtacacattcacgg(SEQ ID NO:76)。
16S-3
gccgaggcagccttcctcgtctacgtctacgcggtcggcggccgagcagcccgcgccggccgtaccggcgacctcgcagccgacgagaccgggagcggtgtccctgtggccacctgatgtgcatcggacggccgtgagctggtactgtcctcgacgccccggaaaaaccgttgacacggtcggaccggggaggtagattcgaacagttgcccgggagctggtacagtcctggaggcgaaggttgaacatcttcctgcttctcgctccggatcaaacatccgcacggagaagccaccgattcaccagaacggaccgccggtcaaaccggcgaaattcctctgatagagtcggaaccgccggaaagggaaaagcgaagcggaaacgcggagctggaaccggaaaggcgccgaggaaatcggacgcgaaagagtctgatagagtcgggaacacgaaataccgaagggaagcgcccggaggaaagcccgagagggtgagtacaaaggaagcgtccgttccttgagaactcaacagcgtgctaaaagtcaacgccagatatgttgataccccgaccggccaggttcctggctggttgaggttcctttgaaatacaacagcgaggacgctgtgtgcggcagggattattccttcttgtcgcaccgctctcatgtctgttgcaccggattaccggtacacattcacgg(SEQ ID NO:77)。
16S-4
gcggacctggactgagaagggccgcaggacggggttgacacgccccggccggatccgtaaggtactccgagctgccacagcccgacaggtgcttcgggcagcacctcagccgcgcaaggtcgcggcactccacaccccagcaacatccctcccgggaagatttccggcatgccgtcatggctgcctggaattcactttccggggctgacgcatctcgcccggaccgcatcggcccgattatgagttgcggcgggaatccactagggttctggacgtcggaacggcccaacagccgggaagacgaaacccgctgactgggaatcaggcccgaaaggatctgatagagtcggaaccgccggaaagggaaaagcgaagcggaaacgcggagctggaaccggaaaggcgccgaggaaatcggacgcgaaagagtctgatagagtcgggaacacgaaataccgaagggaagcgcccggaggaaagcccgagagggtgagtacaaaggaagcgtccgttccttgagaactcaacagcgtgctaaaagtcaacgccagatatgttgataccccgaccggccaggttcctggctggttgaggttcctttgaaatacaacagcgaggacgctgtgtgcggcagggattattccttcttgtcgcaccgctctcatgtctgttgcaccggattaccggtacacattcacgg(SEQ ID NO:78)。
16S-5
Gagcccgttgtacgtacgcgtggtcacgggggggagcttagaccgggaccaccccaagttgacagcccctggagcccctccgtatggtccaccgagttgcccgacgtgagcgccggttcccaccggtccccgggcagccgatccgcaggacctcttcagaacgcacagcgatctccgctgctcgttccgtcgcgcattgcggaatgaggaatccgcgtcccgacagggccgcccccgattagctcggggaaagggaatccgctaaagtctcaccagtcggaacggcccaacagccgggaagacgaatcccgctgactgggaatcaggcccgaaaggatctgatagagtcggaaccgccggaaagggaaaagcgaagcggaaacgcggagctggaaccggaaaggcaccgaggaaatcggacgcgaaagagtctgatagagtcggaacacgaagtaccgaagggaagcgcccggaggaaagcccgagagggtgagtacgaaggaagcgtccgttccttgagaactcaacagcgtgctaaaagtcaacgccagatatgttgataccccgaccggccaggttcctggctggttgaggttcctttgaaatacaacagcgaggatgctgtgtgcggcagggattattccttcttgtcgcaccgctctcatgtctgttgcaccggattaccggtacacattcacgg(SEQ ID NO:79)。
16S-6
cggcaccgctgcgcatcctcaccggccgcccggtccccgccgaccaggtccgcaccggcccccgcacgggagtggccggagaaggaggcatccggccctggcgctactggcaggccgaggaccgcacggtcagcccctaccgggcccacgcaccccggcgccggccacgaacttgactcgcccttggcggaggtctaacgtggcccgagccgctgaacacggttccgcacttctgcgggccgaggcggcacccactactccagcaagatcccttcaccgggcttctttcggcatgctccgaatgaaatcccgaatacctcgattatgaggtgcgaagagaatccgctaacgtagtgcccagccgaaaggcagaggccctccaacggccaccggagatgaaatccgcaccggaaacggaacggaaaaaggatctggtaaggttggaaacacgaaataccgaagggaagcgcccggaggaaagcccgagagggtgagtacaaaggaagcgtccgttccttgagaactcaacagcgtgctaaaagtcaacgccagatatgttgataccccgaccggccaggttcctggctggttgaggttcctttgaaatacaacagcgaggacgctgtgtgcggcagggattattcctccttgtcgcaccgctctcatgtctgttgcaccggattaccggtacacattcacgg(SEQ ID NO:80)。
16S-7
Ctcgcgcaccgggtcgatcgcggtaccgggccccaccatcgcgcccgagaagaccgggtcgggcaccgaggccagcccgacggcctggccgctgagcggggacatcacttcggtcatggcggaacctccgagaagatgagcaggtctgagaaggacaggagaaccgccgggcggacctggacggcacgttgccgagtagcgtaagtcatacgaagtcacgattccgcccaagacgtcctgttgaagacgtgggcccgtcgcgagcagaaacgatttgcatcgcgactccgcgcctgggtacagtcgactcctgcccagcgccgagcacgacattcgagcgtgccgacggggcgacccaaactcagcagattccctgaatccactgcatatccgcatgcctgcggacggtggtcggaggcaggaaaaagaactgatagagtcgggaacacgaaataccgaagggaagcgcccggaggaaagcccgagagggtgagtacaaaggaagcgtccgttccttgagaactcaacagcgtgctaaaagtcaacgccagatatgttgataccccgaccggccaggttcctggctggttgaggttcctttgaaatacaacagcgaggacgctgtgtgcgacagggactattcctccttgtcgcaccgctctcatgtctgttgcaccggattaccggtacacattcacgg(SEQ ID NO:81)。
阿卡波糖游动放线菌rRNA启动子
16sRNA-1
Gaccacggtcaccagcacgagcacgccgatcacgagctgccagagcggcacgatcaggtccagtaacccgtcgctcgccgacgcctcggatgggttcatgaggtcactctgtcacggtttccggcccgggtgtacgccgcgcggccgctgatgaccatgttcatcgatttgcgcgacggacgggcggtcaagtaatttcttctctgccagcgggaaagcggtacggacaggcacgaaagtgacaatccggatcgccacctcgagggccgctgcagcgagctagtcttgttttcagcgccgggcggtgcggcaggatctcgaaacctcgaggttgcgccagcgagaccgaccgggtatagtggatcagccagcaggagccgggcggacgttcgagtcggccggtctgcatgagccacttccacattcgtggaaaacacttgggcgaggccagcgagatccccggatttcgccgagcgaaaacgaccaggtaagcttgaacggttgcctcggaagcggttctccggacggagatcgggtttcgatgtgcggttgttctttgagaactcaacagggtgctttaaaagccagtgccaattatggcaataccccggctgatcgtttcggcggtcagtgggagattcctttggcaacatttttgttgccgggacagtttttcaacagattttgttgg(SEQ ID NO:82)。
16sRNA-2
Ttgcgccacggctgcccgccggtgacggtgcggctgctggccgagccggcacggctgaccctcgacgtgtccgacggtgatccggcgagcgagccgctgttcggcacccgccggccgttcggtgcgggcgggctggggctgctactggtgcggaccttcgcgcgggacagcggttggtatcgacggggcgcgagcaagcacgtctgggcggtattcgatcatcgggcctgactatccgaatgcgcttcattactcactgaatgatttccgcaccatccacatcacccgccccgacttggggggtcggtttggaggcggtgcgggcgaccgggtaatgttctccgagccggcagggaaacgggcgagcgagcttctggggttacccagcaagatccgcggccgtcctgccaaacccccgagatcgagtgcgacgcttcgtcgtgtaaggttccgcggggcccgagcgagattcggttccggcaaatccgagggaaaccgcggatttggcgaaacgaaagcgtaagggtaaagttgaacgagtgccccggagggcgggccgcgaaagcggaacgtgtgatggtgtgcggttgttctttgagaactcaacagggtgctttaaaagccagtgccaattatggcaataccccggctgatcgtttcggcggtcagtgggagattcctttggcaacatttttgttgccgggacagtttttcaacagattttgttgg(SEQ ID NO:83)。
16sRNA-3
Gggcagtccggtggcgagatgatcggggcggtggcggtggcggtgcacgccgaggtgccggtgtcgacgttgctcagccagatctgggcgtacccgacgtttcatcgggggctggggcaggcgcttcagtcgctggcctgaacttgccggtcgtctcatgcgggcctgaggttgctggttcccgccttcgctgtgcgggcctgaggttgccggtatccccgcgccggcccgagtttgctcgttttcctgcgctgacctggaacgacgcgggacactggaccccgatttggaggccagggaaccaacgggtaatgttttccgggccggtagggaaacgggcgagcgaacttctggggtcacccagcaagatccgcggccgtcctgccaaatcctctgatcttgggactacagcctcgctgtgtgctgagctcagagcggccgtactaggtcagatcggcaccaaccgggaaaaaccggttgacaacgccgaacggaccgagtaacgtagagcgagtgccccgggcgccgggccgcgaaagcgggtcgggcgaaggtgtgcggttgttctttgagaactcaacagggtgctttaaaagccagtgccaattatggcaataccccggctgatcgtttcggcggtcagtgggagattcctttggcaacatttttgttgccgggacagtttttcaacagattttgttgg(SEQ ID NO:84)。
16sRNA-4
Ctgtgcggagccccgccgagcagcgcgatgatccggcccgctccggaccgtccggcgcgtatcccgggtgtacgcgggtggttgcggtggtccgccccttcgctgtggtccagcgccgccgcaacgttccgggttgctgtcctcccttggcgttcaccgaccgctgcgatgatccatccgctggcgcccggtgaccgccgcgtgtcggtcgcgacgcccgggtttcgcggggctcgtcctccgaccgggtggtgtgatcggggtcgcgcccaccccggtttggagttgcggggcagggcctgtaatgttttccgagccgccagggagacgggcgagcgaacgagacccgcgaggggctcgggccggccgtcctgacggaaatcctccaacgatctcgcgatccagtgttgcgggttgctggatgggtgctgctcaccatttctggtgcgttgaaatccggttgcaaaacacggatttgacgaactgagaatggcgggtaaagtagagcgagtgccccggagggcgggccgcgaaagcggaacgtgtgatggtgtgcggttgttctttgagaactcaacagggtgctttaaaagccagtgccaattatggcaataccccggctgatcgtttcggcggtcagtgggagattcctttggcaacatttttgttgccgggacagtttttcaacagattttgttgg(SEQ ID NO:85)。
16sRNA-5
Aacgaggcccgccggacgatcagcgagggtggcgcctacctgaacaacgagcggatcaccgacgctgaggcgacggtgccggccgccgcgctgctgcacgggaggttcctggtgctgcgacgagggaagcggaccttcgccggtgtcgaactgacggcctgacccgccactcacggagtctccgtcctctttcaggggaccggggctccgtcgggtggccgtccgggggcggctattcccgcgctgacctgaggttttgtcgcggcgaagggtgtgacggtggtcgctggaccccgatttggcgttgcccgggggaagcgggtaatgttttcggagccgccagggagacgggcgagcgacacgggacccgcgaggggcccggagcggccgtcctgacggaaatcttacccagatctcgcgatctcgcatcgcgggttcctcggtgcgttgaaatccggttgcgaaacacggatttgacgaaacgagaatggtgagtaaagtagagcgagtgccccggacggggagctgcggaaagcggttcttcggatggtgtgcggttgttctttgagaactcaacagggtgctttaaaagccagtgccaattatggcaataccccggctgatcgtttcggcggtcagtgggagattcctttggcaacatttttgttgccgggacagtttttcaacagattttgttgg(SEQ ID NO:86)。
刺糖多孢菌的rRNA启动子序列
16S-1
Gcccgttgcgttcgcggcgccgggatcggcaccgcgctggtgtccaacgctggcggccttcgcgaaccggatctggctgatctgttcgacgcggtggtgctgtccggagcggtcggtgtctcgaagccgaacgccgagatctacctgctggccgcacgccgactgggactcgaaccgggccagtgcgttttcgtcgacgaccttccccggaacgtggccggggcggtcggtgcggggatggtcggcgtccaccactgcgacgtcgcttcgacggtcaccgaactggccgcgctcttcgacctggagatcaccctctgacctgctgtttcgatacttaagggggggtggttgccgggggtgtttcgggggtgtgtaactttatccaagtcagagcgacacgggacgggaaaccggaccgggcctgacagcgggtcgcgaaccaagcttcaaccttcgggtgacagagtgggcgaaccgaaaagaggaaatgctccccggagctgcgggtcccttggtggggtcgggtgatggtgtgggtgtgttctttgagaactcaacagcggactgtttcggttagtgttcttttatgcccccgaccatgcgggtttgtgtggttggtggtttctttgagtatcacgctccaagatcttttccttcgggtgggttttgttgagtgtgtgctgggattgtatccaatgca(SEQ ID NO:87)。
16S-2
gccctcgacggcggggtgacgacctccctcgccctcgacacccacggcaaagcgctcagctcccgactcctgtcctggacctcccgcgaccggatagatagtgatttacgcaggtgaatggccgtgagtgttttgggttgcgatagccgcccaaaacactcacggccccctcgccgacgcttaaggggggtggttgttgggggtgtttcggggccgtgtaacttattccaagtcagcgcgacacgggccgggaaaaccgggccgggcctgatgcgggtcccgcgaaccaagctctcacgaatgagtggtagagtgggcgggcctgaaaacggtaagacttgataaagtgaaacgcttgcgcgtgttgaaaactgaagaccgaatggttttccgaagataacgagttgggtcggatcggaaacgagccccccggtttgacagcggaaaacacgatggtctaaagtcggtgacacaagaaagcgaagaggaaatgctccccggagcttcctggccgttggctgggggtgatggtgtgggtgtgttctttgagaactcaacagcggactgttttggttagtgttcttttatgcccccgaccatgcgggtttgtgtggttggtggtttctttgagtatcacgctccaagatcttttccttcgggtgggttttgttgagtgtgtgctgggattgtatccaatgca(SEQ ID NO:88)。
16S-3
Gatcggtgtggagtccactgctacccccgttctggcgatcgtctgggaggctacctccgcagtccaggcgagtcgcggcgacaaatcaggaccacacgaacgtggacatcgatcggggcggcggacacgggcggcggcgcgacgccccaaaatcgtctctgacctggcgttttcaccttttgtggggggtggttgttgggggtgtttcggggccgtgtaacttattccaagtcagcgcgacacgggccgggaaaaccgggccgggcctgatgcgggtcccgcgaaccaagctctcacgaatgagtggtagagtgggcgggcctgaaaacggtaagacttgataaagtgaaacgcttgcgcgtgttgaaaactgaagaccgaatggttttccgaagataacgaattgggtcggatcggaaacgagcccccccggtttgacagcggaaaacacgatggtctaaagtcggtgacacaagaaagcgaagaggaaatgctccccggagcttcctggccgttggctgggggtgatggtgtgggtgtgttctttgagaactcaacagcggactgttttggttagtgttcttttatgcccccgaccatgcgggtttgtgtggttggtggtttctttgagtatcacgctccaggatcttttccttcgggtgggttttgttgagtgtgtgctgggattgtatccaatgca(SEQ ID NO:89)。
16S-4
Gtcccgatcggccgaacccatgcggtcaccgcctctgacctgctggaagcgatcgacgcggcgggttcggcgagcaccgtgaagctctggctgcggccgaagcagaagtgacccaagatcccccgaaggagcgccgtcaagagtttgaccaggcgatttgactttcacgtagggtgtgcgtaactttcccttcgccgcatggaaagccggacgaaacaggacacaagagcctgacgaggacggcctggggagcgccccggagatcggaaacgaactccgcggagcgcacaccaaccggggcacgcggtttgacaccgcgaagtgcaccgggtaacgtaaagcggtcgccaagtagacgtcaaggctacgaggcgcgttgataactcaagcaacgggctcgatcttcggagcgatcagcgcggggttgacccccctgaaaacgccgaaatgagcgcctgctacagttaccgacacaagaaagcgaagaggaaatgctccccggagcttcctggccgttggctgggggtggtggtgtgggtgtgttctttgagaactcaacagcggactgttttggttagtgttcttttatgcccccgaccatgcgggtttgtgtggttggtggtttctttgagtatcacgctccaggactttttccttcgggtgggttttgttgagtgtgtgctgggattgtatccaatgca(SEQ ID NO:90)。
16S-5
Tggtcgccggacaaggacgacctgctgcacggccgctggctggtaattcgccgtggcaagcgtcacactgcgggcgtcagggtcgtgcattagcctggaatcagcaccggaaagggcgctgagctgcatgttcggttccttccggggttgacttgagccgatttgacttggtgcggatcaacgcgtaaattatttcaggtcagcgcggaacgggccgatgaaaacggaacgggcactgacacgggtcgcgaaccaagctcctgccttctggtggtagagtgggtgccccgatggaaaaccgaaatttctggcgggcttttcgtccgcaggacgaggttgcggtttccaaccagatctttgatacaacagtgcttggctgtggccgagtggaatagcgagccgaaattcggcggtgatccggtggggtgaccccccggtgagcccgaaaaagggcctgctactctggtcgatagcaaaagcacaagaggaaatgctccccggagcttcctggccgttggctgggggtgatggtgtgggtgtgttctttgagaactcaacagcggactgttttggttagtgttcttttatgcccccgaccatgcgggtttgtgtggttggtggtttctttgagtatcacgctccaggactttttccttcgggtgggttttgttgagtgtgtgctgggattgtatccaatgca(SEQ ID NO:91)。
枯草芽孢杆菌的rRNA启动子
16s-1
Aggaagaatcacacgtccttatcgtaactgaaaaagggtacggaaaacgaactcctgctgaagagtacagaacccaaagccggggcggaaaaggactcaaaacagcgaaaatcaccgagaacaacggccaactagtagcagtgaaagctactaaaggtgaagaggatctaatgattattacagctagcggcgtactcatcagaatggacatcaatgatatctccatcaccggacgtgtcactcaaggtgtgcgtctcatcagaatggcagaagaagagcatgttgctacagtagctttagttgagaaaaacgaagaagatgagaatgaagaagaacaagaagaagtgtgaaaaaaagcgcagctgaaatagctgcgcttttttgtgtcataaccctttacagtcataaaaattatggtataatcatttctgttgtctttttaaagacacaagcatgaccattatgactagtaaaaactttttcaaaaaagtattgacctagttaactaaaaatgttactattaagtagtcgctttgagagaagcacacaaagttctttgaaaactaaacaagacaaaacgtacctgttaattcatttttataaatcgcacagcgatgtgcgtagtcagtcaaactagggcctgcacgacgcaggtcacacaggtgtcgccgcaggatgcggtgaacttaacctgtgatcc(SEQ ID NO:92)。
16s-2
Gctggttgaaaaaagcttagaaccgtctgctgaagtgttatacgaactgaaagtagctgaagcgaagtattttttttacttaagggaagcgaagcagcgaaatttaaaaatcagccggtggaagtaagtggtctaaactcctggatcttctcataagcttgtactagaacaagcgaaggagatgagaagattcatggagcctatttttattattgggattattttaggactggttattcttctttttttatcaggttcagcagcgaagcctttaaagtggattggcatcacagctgttaaatttgtggcaggtgctttgctgctggtttgtgtaaatatgtttggcggcagtcttggcattcatgtgccgattaatctggttacaacagctatcagcggaattttaggaatacccggaatagctgcgttagtcgtcattaagcaatttatcatttaattgatattatgtattgacttagacaactgaaggtgttattctaatatacgtcgctgatgacgaacagcttttttgaaaagaaaatgctaaaaagttgttgacagtagcggcggtaaatgttatgataataaagtcgcttaaacgagcggtaaacaaagttctttgaaaactaaacaagacaaaacgtacctgttaattcatttttataaatcgcacagcaatgtgcgtagtcagtcaaactac(SEQ ID NO:93)。
16s-3
Cttcgaacaaaaaattgaagaaacgcttattcagccaacgtttatttacgggcatcctgtagaaatttctcctcttgctaagaaaaaccctgaggacccgcgttttacagaccgttttgagctgtttatcgttggccgtgaacatgccaacgcgtttacagagctgaatgatcctattgatcaaagagaacgctttgaagcgcaattaaaagagcgtgaagccggtaatgatgaagctcatttaatggatgaagactttgttgaagctctggaatacggtatgccgccaacaggaggtttaggcatcggtatcgaccgtctggttatgctgctgacgaatgccccttctattcgcgatgtgctgttattcccgcaaatgagacaacgctaataaaaaagagcggtatcctccatagggaaaggatgccgctctttttaaatcccttagtatttcttcaaaaaaactattgcactattatttactaggtggtatattattattcgttgccgctaaacaaggcgataacgaaaaaaagaacttcaaaaaaagttattgacttcactgagtcaacgagttataataataaagtcgcttgaacgaagtgaacaaaatgatctttgaaaactaaacaagacaaaacgtacctgttaattcagtttttaaaaatcgcacagcgatgtgcgtagtcagtcaaactac(SEQ ID NO:94)。
16s-4
Gtgtctttatgacgtgggggttcaagtcccttcacccgcattatataggataacagttagaaaaactggacatcctgtctgcggaagtagttcagtggtagaacaccaccttgccaaggtgggggtcgcgggttcgaatcccgtcttccgctccaactataccatccacgccggggtggtggaattggcagacacacaggacttaaaatcctgcggtaggtgactaccgtgccggttcaagtccggccctcggcattatgttttgcgcccgtagctcaattggatagagcgtttgactacggatcaaaaggttaggggttcgactcctctcgggcgcgccatatcttttaatagaatagataggaaatcgggaagtagctcagcttggtagagcacatggtttgggaccatggggtcgcaggttcgaatcctgtcttcccgaccatttttttatggggccttagctcagctgggagagcgcctgctttgcacgcaggaggtcagcggttcgatcccgctaggctccaccaaaagtttttaaaaaagttgttgactttgaagaagtgacgttgtatactaataaagttgctttaacaaagcggacaaacaaaatgatctttgaaaactaaacaagacaaaacgtacctgttaattcagtttttaaaaatcgcacagcgatgtgcgtagtcagtcaaactac(SEQ ID NO:95)。
16s-5
Gcccatgctcccgatttgatggccgtcctttacgatacgggccactgtgtcgggatggcgttctgcccaagaagcggacaggaaaaacgttgcgtttttaatcccgtttgctttcagagtattaagtatcggttctgctctctcatcaccccagctgatatcgaaagtaagtgaaatatctttagagtctgtttctcctttataaatggctttaggtccggtgtcagttgaaaacacgggaagcgggacagctctttggatataaaaaaagctggcagctgcaaatgcggcgataagtataataattaattgttttacccgtttaatgtgccacacatagaagtgattcactgatgatgcctccttatcttgtccatcattcttgttttacatcttatgagcatggacaattgaatataaccgataaaatgtctcttcacatacagcctaaattgggtgttgaccttttgataatatccgtgatatattattattcgtcgctgataaacagctgacatcaactaaaagcttcattaaatactttgaaaaaagttgttgacttaaaagaagctaaatgttatagtaataaagctgcttcgttaagcggcagtaatgatctttgaaaactaaacaagacaaaacgtacctgttaattcatttttataaatcgcacagcgatgtgcgtagtcagtcaaactac(SEQ ID NO:96)。
16s-6
Cgtaggttcgaatcctacctgcggagcattgcttccatagctcagcaggtagagcacttccatggtaaggaagaggtcagcggttcgagcccgcttggaagcttaaatgtattattaccaaggtttctcataaggagaaagctttttttattgcgatatgcggaagtagttcagtggtagaacaccaccttgccaaggtgggggtcgcgggttcgaatcccgtcttccgctccatttacctaacgggatattgtaaattgaattgcgcccgtagctcaattggatagagcgtttgactacggatcaaaaggttaggggttcgactcctctcgggcgcgccatatcttttaatagaatagataggaaatcgggaagtagctcagcttggtagagcacatggtttgggaccatggggtcgcaggttcgaatcctgtcttcccgaccattttttatggggccttagctcagctgggagagcgcctgctttgcacgcaggaggtcagcggttcgatcccgctaggctccaccaaaagtttttaaaaaaggttattgactttgaagaagtgacattgtatactaataaagttgctttaacaaagcggacaaacaaaatgatctttgaaaactaaacaagacaaaacgtacctgttaattcagtttttaaaaatcgcacagcgatgtgcgtagtcagtcaaactac(SEQ ID NO:97)。
16s-7
Cgcccattaaagcggtacgcgagctgggttcagaacgtcgtgagacagttcggtccctatccgtcgcgggcgcaggaaatttgagaggagctgtccttagtacgagaggaccgggatggacgcaccgctggtgtaccagttgttctgccaagggcatcgctgggtagctatgtgcggacgggataagtgctgaaagcatctaagcatgaagcccccctcaagatgagatttcccattccgcaaggaagtaagatccctgaaagatgatcaggttgataggtctgaggtggaagtgtggcgacacatggagctgacagatactaatcgatcgaggacttaaccatatttttgaatgatgtcacacctgttatctagttttgagagaacactctcaatttgtttggtggcgatagcgaagaggtcacacccgttcccataccgaacacggaagttaagctcttcagcgccgatggtagtcgggggtttccccctgtgagagtaggacgccgccaagcaattgcacattagtgtaattttttaaaaaagttattgactttgaagaagtgacattgtatactaataaagttgctttaacaaagcggacaaacaaaatgatctttgaaaactaaacaagacaaaacgtacctgttaattcagtttttaaaaatcgcacagcgatgtgcgtagtcagtcaaactac(SEQ ID NO:98)。
16s-8
Tccggtttaatgatattaatcagttcctctttgtagtaatacataacacgcctcatttcttcttaagagattttcttatattatttgtaagatgagataaaatatatacatgataagcatgggaaggcgtgaaagaagaaaataaaaaaatacaggaaaagtgttgaccaaataaaacaggcatggtatattattaaacgtcgctgatgaacagcgtgaaacaaaacagaaaaacaaaaaagttttcctaaggtgtttacaagattttaaaaatgtgtataataagaaaagtcgaattgaaaaagattcgaaaaaacattaaaaaacttcttgacttcaacatcaaatgatagtatgatagttaagtcgctcaataagcgcccgtagctcaattggatagagcgtttgactacggatcaaaaggttaggggttcgactcctctcgggcgcgccatataagataccacgcgggtgtagtttagtggtaaaacctcagccttccaagctgatgtcgtgagttcgattctcatcacccgctccattattgaatgatctttgaaaactaaacaagacaaaacgtacctgttaattcagtttttgaaaatcgcacagcgatgtgcgtagtcagtcaaactagggcctgcacgatgcaggtcacacaggtgtcaccgcgggatgcggtggacttaacctgtgatcc(SEQ ID NO:99)。
16s-9
Agcacgtattgaagtaatcgacagaggattccatcccgaaaccacggtgtggagccaagtgcgccagatggagccccaagtgtacaaattatattccgagctgattgaaagtcatgagagcctggaaaaaagacttgaattattattcttagcaaatgattttctcatccattccaaagccgagatcggttcggcgcatcttttcgaagtaatgaaagaaaaagacatttggcaattcggtgagcttcttcaacatcatgacctaaagcactttacccaagatcttggcgttatgcttgattacttgacggaaaagggacttatcaacgtctgccagatagaaacgaaaggacaggctgtctatcaccgaggatattcttttaaaaaaggtgttgactctgattcttgaccgtgttatattattaaacgtcgctgatgcgcttctgagaaaacaagctcacagcggcgggaaaataaatcaaaaaaacatttgacaaaagaaagtcaaaatgttatattaataaagtcgcttcaacaagaagtgaaaatgatctttgaaaactaaacaagacaaaacgtacctgttaattcagtttttaaaaaatcgcacagcgatgtgcgtagtcagtcaaactagggcctgcacgacgcaggtcacacaggtgtcgccgcaggatgcggtgaacttaacctgtgatcc(SEQ ID NO:100)。
16s-10
Tcaataaggcgaaccagttgcttagattgattcatatctatctccttccattgacagacaaccaaaaggacaacaaaaaagcagcacgcggaaggatgagaaaagttccacgcactgctttacgatctgcaattcatttgactttgccacatccctacgccagcgttaactaacaggttcaaagggtcagaacgaaaccgctcactctcagctttaatgctccccttgtggtcatcagtatttagttcgtttctactatacaagaaaacgaaaaaaacaacaagatcacatgactgatgtatatgttcttttaagaaacttatatgatacacacgctttagaaatcatggcgaggattatagtttatttgttttatagattttttttaaaaaactattgcaataaataaatacaggtgttatattattaaacgtcgctgatgcacagcggacacaaactagatgcttcaaaacaacttgaaaaaagttgttgacaaaaaagaagctgaatgttatattagtaaagctgcttcattgagaagtaacgaaatgatctttgaaaactaaacaagacaaaacgtacctgttaattcagtttttaaaaatcgcactgcgatgtgcgtagtcagtcaaactagggcctgcacgacgcaggtcacacaggtgtcgccgcaggatgcggtgaacttaacctgtgatcc(SEQ ID NO:101)。
小单胞菌rRNA启动子
16S
GCCGGGGCAAGCGGTCGTTCGCCGGTGTTGAGCTGCGTAAATAGCCGTACGGCGATGATGTGACGTGGGACGCGTCCAGCGGATTTGACGTTCAAACCGCTGGACGCGTAACTTTCTCTCTGCCAGCGCGGAACGGACGAAACAGGCAAAACGCCTGGGAGTCCGGTTCGGGAATGGCACCGGGTCAGACGGGGCAACTTCCCTGAGGTCCGGTCCGGGTGGTGCTTCATCGGTCGACCGAGGGGTCGATTTGGCGGGGCGGAACCGACCGGGTAAGGTTGACGACCGGCAGGGAACCGGGCGAGCGAGCGGGAGACCGCAGCGGCCGGCCTGTCAAAAACCACGGCAACGGACGGCGGAAACGCCGAATGGATTCGTGGTGCATCAAACCGGATAGAAGCACGACAAAGCGCCACAGAGCGGTTTGACACGGCGGAAACGGTGAGGTAACGTAGTAGAAGTGCTCGACGCGGAAGCGGCGGGTGCGAGGACGAGATGCCCCGGATGGGGCCCCTGAGGGGGTTTCCGGATGGTGTGTGGTTGTTCTTTGAGAACTCAACAGGGTGCTTGATAAGCCAGTGCCAATTAAGTTATACCCCGTGCTGGTCGGGCCTTATGTCTGGCTGGTGGGGATTCCTTTGGCAACACTTTGTTGCTGGGATGATTGTTCAACAAGTTTTTGTTGGAGA(SEQ ID NO:102)。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
SEQUENCE LISTING
<110> 武汉臻智生物科技有限公司
<120> 核糖体RNA启动子在强启动表达非RNA基因中的用途
<130> PIDC3190706
<160> 102
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 50
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-GUS-16S-1-F
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gactctagat atcggaacga tcgttggctg aggagcacgg gccctgcttg 50
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<212> DNA
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<212> DNA
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cagcatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tccccgtgaa tgtgtaccgg 60
taatc 65
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<212> DNA
<213> Artificial
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cagcatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tccccgtgaa tgtgtaccgg 60
taatc 65
<210> 7
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<212> DNA
<213> Artificial
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taatc 65
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-GUS-16S-6-F
<400> 11
gactctagat atcggaacga tcgttggctg cggcaccgct gcgcatcctc 50
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<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-GUS-16S-6-R
<400> 12
cagcatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tccccgtgaa tgtgtaccgg 60
taatc 65
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<211> 50
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
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<400> 13
cgactctaga tatcggaacg atcgttggct gctcgcgcac cgggtcgatc 50
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<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-GUS-16S-7-R
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cagcatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tccccgtgaa tgtgtaccgg 60
taatc 65
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<212> DNA
<213> Artificial
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cgctctagat atcggaacga tcgttggctg gaccacggtc accag 45
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<213> Artificial
<220>
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cgccatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tccccaacaa aatctgttga 60
aaaac 65
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
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<213> Artificial
<220>
<223> pAK-16S-2 6-R
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cgccatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tccccaacaa aatctgttga 60
aaaac 65
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<212> DNA
<213> Artificial
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<213> Artificial
<220>
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cgccatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tccccaacaa aatctgttga 60
aaaac 65
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<212> DNA
<213> Artificial
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cgccatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tccccaacaa aatctgttga 60
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<213> Artificial
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cgctctagat atcggaacga tcgttggctg aacgaggccc gccggacgat c 51
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<213> Artificial
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cgccatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tccccaacaa aatctgttga 60
aaaac 65
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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<223> SA-GUS-16S-1-R
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cagcatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tcctgcattg gatacaatcc 60
cag 63
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<213> Artificial
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gactctagat atcggaacga tcgttggctg gccctcgacg gcggggtgac 50
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<212> DNA
<213> Artificial
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<223> SA-GUS-16S-2-R
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cagcatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tcctgcattg gatacaatcc 60
cag 63
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<212> DNA
<213> Artificial
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gactctagat atcggaacga tcgttggctg gatcggtgtg gagtccactg 50
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<213> Artificial
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cagcatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tcctgcattg gatacaatcc 60
cag 63
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<213> Artificial
<220>
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gactctagat atcggaacga tcgttggctg gtcccgatcg gccgaaccca tg 52
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<223> SA-GUS-16S-4-R
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cagcatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tcctgcattg gatacaatcc 60
cag 63
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<213> Artificial
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gactctagat atcggaacga tcgttggctg tggtcgccgg acaaggacga c 51
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> SA-GUS-16S-5-R
<400> 34
cagcatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tcctgcattg gatacaatcc 60
cag 63
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> GUS-F
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aattgtgagc ggataacaat tcccaattaa aggaggaagg atcctctaga tgctgcgccc 60
ggtcgagacc 70
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> GUS-R
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tccatggacg cgtgacgtga aaaaagcccg ctcattaggc gggctgcccc tcactgcttg 60
ccgccctgct g 71
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<213> Artificial
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<223> BS-16s-1-F
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gcttggtacc aggaagaatc acacgtcctt atcgtaac 38
<210> 38
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<213> Artificial
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<223> BS-16s-1-R
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tagaggatcc ttcctccttt aattgggaat tgttatccgc tcacaattcc acaaggatca 60
caggttaagt tcac 74
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<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-2-F
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gcttggtacc gctggttgaa aaaagcttag 30
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<212> DNA
<213> Artificial
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tgactgacta cgcac 75
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-3-F
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gcttggtacc cttcgaacaa aaaattgaag 30
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-3-R
<400> 42
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<213> Artificial
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<223> BS-16s-4-F
<400> 43
gcttggtacc gtgtctttat gacgtggggg ttc 33
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<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-4-R
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tagaggatcc ttcctccttt aattgggaat tgttatccgc tcacaattcc acaatgtagt 60
ttgactgact acgcac 76
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-5-F
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gcttggtacc gcccatgctc ccgatttgat ggccg 35
<210> 46
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<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-5-R
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tagaggatcc ttcctccttt aattgggaat tgttatccgc tcacaattcc acaatgtagt 60
ttgactgact acgcac 76
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<213> Artificial
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<223> BS-16s-6-F
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gcttggtacc cgtaggttcg aatcctacct gcggagc 37
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-6-R
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ttgactgact acgcac 76
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-7-F
<400> 49
gcttggtacc cgcccattaa agcggtacgc gagc 34
<210> 50
<211> 76
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-7-R
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tagaggatcc ttcctccttt aattgggaat tgttatccgc tcacaattcc acaatgtagt 60
ttgactgact acgcac 76
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-8-F
<400> 51
gcttggtacc tccggtttaa tgatattaat c 31
<210> 52
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-8-R
<400> 52
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acaggttaag tccac 75
<210> 53
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-9-F
<400> 53
gcttggtacc agcacgtatt gaagtaatcg acag 34
<210> 54
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-9-R
<400> 54
tagaggatcc ttcctccttt aattgggaat tgttatccgc tcacaattcc acaatggatc 60
acaggttaag ttcac 75
<210> 55
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-10-F
<400> 55
gcttggtacc tcaataaggc gaaccagttg 30
<210> 56
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> BS-16s-10-R
<400> 56
tagaggatcc ttcctccttt aattgggaat tgttatccgc tcacaattcc acaatggatc 60
acaggttaag ttcac 75
<210> 57
<211> 57
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 10-F
<400> 57
cgctctagat atcggaacga tcgttggctg gccggggcaa gcggtcgttc gccggtg 57
<210> 58
<211> 63
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> pGen-16S 10-R
<400> 58
cgccatatgg cgtatcccct ttcagatacc tgtcgtattc tcctctccaa caaaaacttg 60
ttg 63
<210> 59
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-16S-1-F
<400> 59
ggggagaata cgacaggtat ctgaaagggg atacgccaat gattgaacaa gatggattg 59
<210> 60
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-16S-2-F
<400> 60
ggggagaata cgacaggtat ctgaaagggg atacgccaat gattgaacaa gatggattg 59
<210> 61
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-16S-3-F
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ggggagaata cgacaggtat ctgaaagggg atacgccaat gattgaacaa gatggattg 59
<210> 62
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-16S-4-F
<400> 62
ggggagaata cgacaggtat ctgaaagggg atacgccaat gattgaacaa gatggattg 59
<210> 63
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-16S-5-F
<400> 63
ggggagaata cgacaggtat ctgaaagggg atacgccaat gattgaacaa gatggattg 59
<210> 64
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-16S-6-F
<400> 64
ggggagaata cgacaggtat ctgaaagggg atacgccaat gattgaacaa gatggattg 59
<210> 65
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-16S-7-F
<400> 65
ggggagaata cgacaggtat ctgaaagggg atacgccaat gattgaacaa gatggattg 59
<210> 66
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-R
<400> 66
cattatggtg aaagttggaa cctcttacgt gccgatcatc agaagaactc gtcaagaag 59
<210> 67
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-ZT-F
<400> 67
gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgatg atcggcacgt aagaggttc 59
<210> 68
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-ZT-16S-1-R
<400> 68
ttggcgtatc ccctttcaga tacctgtcgt attctccccg tgaatgtgta ccggtaatc 59
<210> 69
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-ZT-16S-2-R
<400> 69
ttggcgtatc ccctttcaga tacctgtcgt attctccccg tgaatgtgta ccggtaatc 59
<210> 70
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-ZT-16S-3-R
<400> 70
ttggcgtatc ccctttcaga tacctgtcgt attctccccg tgaatgtgta ccggtaatc 59
<210> 71
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-ZT-16S-4-R
<400> 71
ttggcgtatc ccctttcaga tacctgtcgt attctccccg tgaatgtgta ccggtaatc 59
<210> 72
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-ZT-16S-5-R
<400> 72
ttggcgtatc ccctttcaga tacctgtcgt attctccccg tgaatgtgta ccggtaatc 59
<210> 73
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-ZT-16S-6-R
<400> 73
ttggcgtatc ccctttcaga tacctgtcgt attctccccg tgaatgtgta ccggtaatc 59
<210> 74
<211> 59
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> J1074-Neo-ZT-16S-7-R
<400> 74
ttggcgtatc ccctttcaga tacctgtcgt attctccccg tgaatgtgta ccggtaatc 59
<210> 75
<211> 701
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Streptomyces albidoflavus J1074 16S-1
<400> 75
aggagcacgg gccctgcttg acttcgttcc cgccgatgcg tagtgttcaa cgagctgccg 60
tccagcccca agggctgggg aagcacctca gccgcgcgga gcgcggctca cttcaaaacc 120
tcagcaagaa ccctccagaa atacctttcc tcaggcatgc cctcgggcag gcccggattt 180
cttttttccg gaggtcctct tgtcatctcg gtacgacagt cagagccatt cggccccgat 240
tgtgagagat cgagagagtt cgctatggtt ctggacgtcg gaacggccca acagccggga 300
aggcgaatcc cgctgactgg gaatcaggcc cgaaaggatc tgatagagtc ggaaccgccg 360
aaagggaaaa gcgaagcgga aacgcggagc tggaaccgga aaggcaccga ggaaatcgga 420
cgcgaaagag tctgatagag tcgggaacac gaagtaccga agggaagcgc ccggaggaaa 480
gcccgagagg gtgagtacaa aggaagcgtc cgttccttga gaactcaaca gcgtgctaaa 540
agtcaacgcc agatatgttg ataccccgac cggccaggtt cctggctggt tgaggttcct 600
ttgaaataca acagcgagga cgctgtgtgt gacagggact attcctcctt gtcgcaccgc 660
tctcatgtct gttgcaccgg attaccggta cacattcacg g 701
<210> 76
<211> 701
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Streptomyces albidoflavus J1074 16S-2
<400> 76
ggtatcgacg acgcgcgctt cgccgacgtc gtcccccgta tccaggaggt cctggagaag 60
tcggcccagg acggcgtggt cgagccgcac cagctccagc agctggtgcg ccgcaccctc 120
ggcaagtggg tctccgacca ctaccgccgg cgcccgatga tcctcccggt cgtcgtcgag 180
gtctgagccg ccggccggcg caccacggag cggggctccc cggatttgca tcggggagcc 240
ccgctccagt acgtttacgt ctccacccca gcgggaagcc cggcgcacct ctgtgtgccc 300
acgcggaacg gggcgggtgg aaattccgac gcagagtctc tgataaagtc ggaaccgccg 360
aaagggaaaa gcgaagcgga aacgcggagc tggaaccgga aaggcaccga ggaaatcgga 420
cgcgaaagag tctgatagag tcgggaacac gaaataccga agggaagcgc ccggaggaaa 480
gcccgagagg gtgagtacaa aggaagcgtc cgttccttga gaactcaaca gcgtgctaaa 540
agtcaacgcc agatatgttg ataccccgac cggccaggtt cctggctggt tgaggttcct 600
ttgaaataca acagcgagga cgctgtgtgc gacagggatt attcctcctt gtcgcaccgc 660
tctcatgtct gttgcaccgg attaccggta cacattcacg g 701
<210> 77
<211> 701
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Streptomyces albidoflavus J1074 16S-3
<400> 77
gccgaggcag ccttcctcgt ctacgtctac gcggtcggcg gccgagcagc ccgcgccggc 60
cgtaccggcg acctcgcagc cgacgagacc gggagcggtg tccctgtggc cacctgatgt 120
gcatcggacg gccgtgagct ggtactgtcc tcgacgcccc ggaaaaaccg ttgacacggt 180
cggaccgggg aggtagattc gaacagttgc ccgggagctg gtacagtcct ggaggcgaag 240
gttgaacatc ttcctgcttc tcgctccgga tcaaacatcc gcacggagaa gccaccgatt 300
caccagaacg gaccgccggt caaaccggcg aaattcctct gatagagtcg gaaccgccgg 360
aaagggaaaa gcgaagcgga aacgcggagc tggaaccgga aaggcgccga ggaaatcgga 420
cgcgaaagag tctgatagag tcgggaacac gaaataccga agggaagcgc ccggaggaaa 480
gcccgagagg gtgagtacaa aggaagcgtc cgttccttga gaactcaaca gcgtgctaaa 540
agtcaacgcc agatatgttg ataccccgac cggccaggtt cctggctggt tgaggttcct 600
ttgaaataca acagcgagga cgctgtgtgc ggcagggatt attccttctt gtcgcaccgc 660
tctcatgtct gttgcaccgg attaccggta cacattcacg g 701
<210> 78
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Streptomyces albidoflavus J1074 16S-4
<400> 78
gcggacctgg actgagaagg gccgcaggac ggggttgaca cgccccggcc ggatccgtaa 60
ggtactccga gctgccacag cccgacaggt gcttcgggca gcacctcagc cgcgcaaggt 120
cgcggcactc cacaccccag caacatccct cccgggaaga tttccggcat gccgtcatgg 180
ctgcctggaa ttcactttcc ggggctgacg catctcgccc ggaccgcatc ggcccgatta 240
tgagttgcgg cgggaatcca ctagggttct ggacgtcgga acggcccaac agccgggaag 300
acgaaacccg ctgactggga atcaggcccg aaaggatctg atagagtcgg aaccgccgga 360
aagggaaaag cgaagcggaa acgcggagct ggaaccggaa aggcgccgag gaaatcggac 420
gcgaaagagt ctgatagagt cgggaacacg aaataccgaa gggaagcgcc cggaggaaag 480
cccgagaggg tgagtacaaa ggaagcgtcc gttccttgag aactcaacag cgtgctaaaa 540
gtcaacgcca gatatgttga taccccgacc ggccaggttc ctggctggtt gaggttcctt 600
tgaaatacaa cagcgaggac gctgtgtgcg gcagggatta ttccttcttg tcgcaccgct 660
ctcatgtctg ttgcaccgga ttaccggtac acattcacgg 700
<210> 79
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Streptomyces albidoflavus J1074 16S-5
<400> 79
gagcccgttg tacgtacgcg tggtcacggg ggggagctta gaccgggacc accccaagtt 60
gacagcccct ggagcccctc cgtatggtcc accgagttgc ccgacgtgag cgccggttcc 120
caccggtccc cgggcagccg atccgcagga cctcttcaga acgcacagcg atctccgctg 180
ctcgttccgt cgcgcattgc ggaatgagga atccgcgtcc cgacagggcc gcccccgatt 240
agctcgggga aagggaatcc gctaaagtct caccagtcgg aacggcccaa cagccgggaa 300
gacgaatccc gctgactggg aatcaggccc gaaaggatct gatagagtcg gaaccgccgg 360
aaagggaaaa gcgaagcgga aacgcggagc tggaaccgga aaggcaccga ggaaatcgga 420
cgcgaaagag tctgatagag tcggaacacg aagtaccgaa gggaagcgcc cggaggaaag 480
cccgagaggg tgagtacgaa ggaagcgtcc gttccttgag aactcaacag cgtgctaaaa 540
gtcaacgcca gatatgttga taccccgacc ggccaggttc ctggctggtt gaggttcctt 600
tgaaatacaa cagcgaggat gctgtgtgcg gcagggatta ttccttcttg tcgcaccgct 660
ctcatgtctg ttgcaccgga ttaccggtac acattcacgg 700
<210> 80
<211> 701
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Streptomyces albidoflavus J1074 16S-6
<400> 80
cggcaccgct gcgcatcctc accggccgcc cggtccccgc cgaccaggtc cgcaccggcc 60
cccgcacggg agtggccgga gaaggaggca tccggccctg gcgctactgg caggccgagg 120
accgcacggt cagcccctac cgggcccacg caccccggcg ccggccacga acttgactcg 180
cccttggcgg aggtctaacg tggcccgagc cgctgaacac ggttccgcac ttctgcgggc 240
cgaggcggca cccactactc cagcaagatc ccttcaccgg gcttctttcg gcatgctccg 300
aatgaaatcc cgaatacctc gattatgagg tgcgaagaga atccgctaac gtagtgccca 360
gccgaaaggc agaggccctc caacggccac cggagatgaa atccgcaccg gaaacggaac 420
ggaaaaagga tctggtaagg ttggaaacac gaaataccga agggaagcgc ccggaggaaa 480
gcccgagagg gtgagtacaa aggaagcgtc cgttccttga gaactcaaca gcgtgctaaa 540
agtcaacgcc agatatgttg ataccccgac cggccaggtt cctggctggt tgaggttcct 600
ttgaaataca acagcgagga cgctgtgtgc ggcagggatt attcctcctt gtcgcaccgc 660
tctcatgtct gttgcaccgg attaccggta cacattcacg g 701
<210> 81
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> Streptomyces albidoflavus J1074 16S-7
<400> 81
ctcgcgcacc gggtcgatcg cggtaccggg ccccaccatc gcgcccgaga agaccgggtc 60
gggcaccgag gccagcccga cggcctggcc gctgagcggg gacatcactt cggtcatggc 120
ggaacctccg agaagatgag caggtctgag aaggacagga gaaccgccgg gcggacctgg 180
acggcacgtt gccgagtagc gtaagtcata cgaagtcacg attccgccca agacgtcctg 240
ttgaagacgt gggcccgtcg cgagcagaaa cgatttgcat cgcgactccg cgcctgggta 300
cagtcgactc ctgcccagcg ccgagcacga cattcgagcg tgccgacggg gcgacccaaa 360
ctcagcagat tccctgaatc cactgcatat ccgcatgcct gcggacggtg gtcggaggca 420
ggaaaaagaa ctgatagagt cgggaacacg aaataccgaa gggaagcgcc cggaggaaag 480
cccgagaggg tgagtacaaa ggaagcgtcc gttccttgag aactcaacag cgtgctaaaa 540
gtcaacgcca gatatgttga taccccgacc ggccaggttc ctggctggtt gaggttcctt 600
tgaaatacaa cagcgaggac gctgtgtgcg acagggacta ttcctccttg tcgcaccgct 660
ctcatgtctg ttgcaccgga ttaccggtac acattcacgg 700
<210> 82
<211> 691
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 阿卡波糖游动放线菌rRNA启动子16sRNA-1
<400> 82
gaccacggtc accagcacga gcacgccgat cacgagctgc cagagcggca cgatcaggtc 60
cagtaacccg tcgctcgccg acgcctcgga tgggttcatg aggtcactct gtcacggttt 120
ccggcccggg tgtacgccgc gcggccgctg atgaccatgt tcatcgattt gcgcgacgga 180
cgggcggtca agtaatttct tctctgccag cgggaaagcg gtacggacag gcacgaaagt 240
gacaatccgg atcgccacct cgagggccgc tgcagcgagc tagtcttgtt ttcagcgccg 300
ggcggtgcgg caggatctcg aaacctcgag gttgcgccag cgagaccgac cgggtatagt 360
ggatcagcca gcaggagccg ggcggacgtt cgagtcggcc ggtctgcatg agccacttcc 420
acattcgtgg aaaacacttg ggcgaggcca gcgagatccc cggatttcgc cgagcgaaaa 480
cgaccaggta agcttgaacg gttgcctcgg aagcggttct ccggacggag atcgggtttc 540
gatgtgcggt tgttctttga gaactcaaca gggtgcttta aaagccagtg ccaattatgg 600
caataccccg gctgatcgtt tcggcggtca gtgggagatt cctttggcaa catttttgtt 660
gccgggacag tttttcaaca gattttgttg g 691
<210> 83
<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 阿卡波糖游动放线菌rRNA启动子16sRNA-2
<400> 83
ttgcgccacg gctgcccgcc ggtgacggtg cggctgctgg ccgagccggc acggctgacc 60
ctcgacgtgt ccgacggtga tccggcgagc gagccgctgt tcggcacccg ccggccgttc 120
ggtgcgggcg ggctggggct gctactggtg cggaccttcg cgcgggacag cggttggtat 180
cgacggggcg cgagcaagca cgtctgggcg gtattcgatc atcgggcctg actatccgaa 240
tgcgcttcat tactcactga atgatttccg caccatccac atcacccgcc ccgacttggg 300
gggtcggttt ggaggcggtg cgggcgaccg ggtaatgttc tccgagccgg cagggaaacg 360
ggcgagcgag cttctggggt tacccagcaa gatccgcggc cgtcctgcca aacccccgag 420
atcgagtgcg acgcttcgtc gtgtaaggtt ccgcggggcc cgagcgagat tcggttccgg 480
caaatccgag ggaaaccgcg gatttggcga aacgaaagcg taagggtaaa gttgaacgag 540
tgccccggag ggcgggccgc gaaagcggaa cgtgtgatgg tgtgcggttg ttctttgaga 600
actcaacagg gtgctttaaa agccagtgcc aattatggca ataccccggc tgatcgtttc 660
ggcggtcagt gggagattcc tttggcaaca tttttgttgc cgggacagtt tttcaacaga 720
ttttgttgg 729
<210> 84
<211> 703
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 阿卡波糖游动放线菌rRNA启动子16sRNA-3
<400> 84
gggcagtccg gtggcgagat gatcggggcg gtggcggtgg cggtgcacgc cgaggtgccg 60
gtgtcgacgt tgctcagcca gatctgggcg tacccgacgt ttcatcgggg gctggggcag 120
gcgcttcagt cgctggcctg aacttgccgg tcgtctcatg cgggcctgag gttgctggtt 180
cccgccttcg ctgtgcgggc ctgaggttgc cggtatcccc gcgccggccc gagtttgctc 240
gttttcctgc gctgacctgg aacgacgcgg gacactggac cccgatttgg aggccaggga 300
accaacgggt aatgttttcc gggccggtag ggaaacgggc gagcgaactt ctggggtcac 360
ccagcaagat ccgcggccgt cctgccaaat cctctgatct tgggactaca gcctcgctgt 420
gtgctgagct cagagcggcc gtactaggtc agatcggcac caaccgggaa aaaccggttg 480
acaacgccga acggaccgag taacgtagag cgagtgcccc gggcgccggg ccgcgaaagc 540
gggtcgggcg aaggtgtgcg gttgttcttt gagaactcaa cagggtgctt taaaagccag 600
tgccaattat ggcaataccc cggctgatcg tttcggcggt cagtgggaga ttcctttggc 660
aacatttttg ttgccgggac agtttttcaa cagattttgt tgg 703
<210> 85
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 阿卡波糖游动放线菌rRNA启动子16sRNA-4
<400> 85
ctgtgcggag ccccgccgag cagcgcgatg atccggcccg ctccggaccg tccggcgcgt 60
atcccgggtg tacgcgggtg gttgcggtgg tccgcccctt cgctgtggtc cagcgccgcc 120
gcaacgttcc gggttgctgt cctcccttgg cgttcaccga ccgctgcgat gatccatccg 180
ctggcgcccg gtgaccgccg cgtgtcggtc gcgacgcccg ggtttcgcgg ggctcgtcct 240
ccgaccgggt ggtgtgatcg gggtcgcgcc caccccggtt tggagttgcg gggcagggcc 300
tgtaatgttt tccgagccgc cagggagacg ggcgagcgaa cgagacccgc gaggggctcg 360
ggccggccgt cctgacggaa atcctccaac gatctcgcga tccagtgttg cgggttgctg 420
gatgggtgct gctcaccatt tctggtgcgt tgaaatccgg ttgcaaaaca cggatttgac 480
gaactgagaa tggcgggtaa agtagagcga gtgccccgga gggcgggccg cgaaagcgga 540
acgtgtgatg gtgtgcggtt gttctttgag aactcaacag ggtgctttaa aagccagtgc 600
caattatggc aataccccgg ctgatcgttt cggcggtcag tgggagattc ctttggcaac 660
atttttgttg ccgggacagt ttttcaacag attttgttgg 700
<210> 86
<211> 699
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 阿卡波糖游动放线菌rRNA启动子16sRNA-5
<400> 86
aacgaggccc gccggacgat cagcgagggt ggcgcctacc tgaacaacga gcggatcacc 60
gacgctgagg cgacggtgcc ggccgccgcg ctgctgcacg ggaggttcct ggtgctgcga 120
cgagggaagc ggaccttcgc cggtgtcgaa ctgacggcct gacccgccac tcacggagtc 180
tccgtcctct ttcaggggac cggggctccg tcgggtggcc gtccgggggc ggctattccc 240
gcgctgacct gaggttttgt cgcggcgaag ggtgtgacgg tggtcgctgg accccgattt 300
ggcgttgccc gggggaagcg ggtaatgttt tcggagccgc cagggagacg ggcgagcgac 360
acgggacccg cgaggggccc ggagcggccg tcctgacgga aatcttaccc agatctcgcg 420
atctcgcatc gcgggttcct cggtgcgttg aaatccggtt gcgaaacacg gatttgacga 480
aacgagaatg gtgagtaaag tagagcgagt gccccggacg gggagctgcg gaaagcggtt 540
cttcggatgg tgtgcggttg ttctttgaga actcaacagg gtgctttaaa agccagtgcc 600
aattatggca ataccccggc tgatcgtttc ggcggtcagt gggagattcc tttggcaaca 660
tttttgttgc cgggacagtt tttcaacaga ttttgttgg 699
<210> 87
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 刺糖多孢菌的rRNA启动子序列16S-1
<400> 87
gcccgttgcg ttcgcggcgc cgggatcggc accgcgctgg tgtccaacgc tggcggcctt 60
cgcgaaccgg atctggctga tctgttcgac gcggtggtgc tgtccggagc ggtcggtgtc 120
tcgaagccga acgccgagat ctacctgctg gccgcacgcc gactgggact cgaaccgggc 180
cagtgcgttt tcgtcgacga ccttccccgg aacgtggccg gggcggtcgg tgcggggatg 240
gtcggcgtcc accactgcga cgtcgcttcg acggtcaccg aactggccgc gctcttcgac 300
ctggagatca ccctctgacc tgctgtttcg atacttaagg gggggtggtt gccgggggtg 360
tttcgggggt gtgtaacttt atccaagtca gagcgacacg ggacgggaaa ccggaccggg 420
cctgacagcg ggtcgcgaac caagcttcaa ccttcgggtg acagagtggg cgaaccgaaa 480
agaggaaatg ctccccggag ctgcgggtcc cttggtgggg tcgggtgatg gtgtgggtgt 540
gttctttgag aactcaacag cggactgttt cggttagtgt tcttttatgc ccccgaccat 600
gcgggtttgt gtggttggtg gtttctttga gtatcacgct ccaagatctt ttccttcggg 660
tgggttttgt tgagtgtgtg ctgggattgt atccaatgca 700
<210> 88
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 刺糖多孢菌的rRNA启动子序列16S-2
<400> 88
gccctcgacg gcggggtgac gacctccctc gccctcgaca cccacggcaa agcgctcagc 60
tcccgactcc tgtcctggac ctcccgcgac cggatagata gtgatttacg caggtgaatg 120
gccgtgagtg ttttgggttg cgatagccgc ccaaaacact cacggccccc tcgccgacgc 180
ttaagggggg tggttgttgg gggtgtttcg gggccgtgta acttattcca agtcagcgcg 240
acacgggccg ggaaaaccgg gccgggcctg atgcgggtcc cgcgaaccaa gctctcacga 300
atgagtggta gagtgggcgg gcctgaaaac ggtaagactt gataaagtga aacgcttgcg 360
cgtgttgaaa actgaagacc gaatggtttt ccgaagataa cgagttgggt cggatcggaa 420
acgagccccc cggtttgaca gcggaaaaca cgatggtcta aagtcggtga cacaagaaag 480
cgaagaggaa atgctccccg gagcttcctg gccgttggct gggggtgatg gtgtgggtgt 540
gttctttgag aactcaacag cggactgttt tggttagtgt tcttttatgc ccccgaccat 600
gcgggtttgt gtggttggtg gtttctttga gtatcacgct ccaagatctt ttccttcggg 660
tgggttttgt tgagtgtgtg ctgggattgt atccaatgca 700
<210> 89
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 刺糖多孢菌的rRNA启动子序列16S-3
<400> 89
gatcggtgtg gagtccactg ctacccccgt tctggcgatc gtctgggagg ctacctccgc 60
agtccaggcg agtcgcggcg acaaatcagg accacacgaa cgtggacatc gatcggggcg 120
gcggacacgg gcggcggcgc gacgccccaa aatcgtctct gacctggcgt tttcaccttt 180
tgtggggggt ggttgttggg ggtgtttcgg ggccgtgtaa cttattccaa gtcagcgcga 240
cacgggccgg gaaaaccggg ccgggcctga tgcgggtccc gcgaaccaag ctctcacgaa 300
tgagtggtag agtgggcggg cctgaaaacg gtaagacttg ataaagtgaa acgcttgcgc 360
gtgttgaaaa ctgaagaccg aatggttttc cgaagataac gaattgggtc ggatcggaaa 420
cgagcccccc cggtttgaca gcggaaaaca cgatggtcta aagtcggtga cacaagaaag 480
cgaagaggaa atgctccccg gagcttcctg gccgttggct gggggtgatg gtgtgggtgt 540
gttctttgag aactcaacag cggactgttt tggttagtgt tcttttatgc ccccgaccat 600
gcgggtttgt gtggttggtg gtttctttga gtatcacgct ccaggatctt ttccttcggg 660
tgggttttgt tgagtgtgtg ctgggattgt atccaatgca 700
<210> 90
<211> 701
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 刺糖多孢菌的rRNA启动子序列16S-4
<400> 90
gtcccgatcg gccgaaccca tgcggtcacc gcctctgacc tgctggaagc gatcgacgcg 60
gcgggttcgg cgagcaccgt gaagctctgg ctgcggccga agcagaagtg acccaagatc 120
ccccgaagga gcgccgtcaa gagtttgacc aggcgatttg actttcacgt agggtgtgcg 180
taactttccc ttcgccgcat ggaaagccgg acgaaacagg acacaagagc ctgacgagga 240
cggcctgggg agcgccccgg agatcggaaa cgaactccgc ggagcgcaca ccaaccgggg 300
cacgcggttt gacaccgcga agtgcaccgg gtaacgtaaa gcggtcgcca agtagacgtc 360
aaggctacga ggcgcgttga taactcaagc aacgggctcg atcttcggag cgatcagcgc 420
ggggttgacc cccctgaaaa cgccgaaatg agcgcctgct acagttaccg acacaagaaa 480
gcgaagagga aatgctcccc ggagcttcct ggccgttggc tgggggtggt ggtgtgggtg 540
tgttctttga gaactcaaca gcggactgtt ttggttagtg ttcttttatg cccccgacca 600
tgcgggtttg tgtggttggt ggtttctttg agtatcacgc tccaggactt tttccttcgg 660
gtgggttttg ttgagtgtgt gctgggattg tatccaatgc a 701
<210> 91
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 刺糖多孢菌的rRNA启动子序列16S-5
<400> 91
tggtcgccgg acaaggacga cctgctgcac ggccgctggc tggtaattcg ccgtggcaag 60
cgtcacactg cgggcgtcag ggtcgtgcat tagcctggaa tcagcaccgg aaagggcgct 120
gagctgcatg ttcggttcct tccggggttg acttgagccg atttgacttg gtgcggatca 180
acgcgtaaat tatttcaggt cagcgcggaa cgggccgatg aaaacggaac gggcactgac 240
acgggtcgcg aaccaagctc ctgccttctg gtggtagagt gggtgccccg atggaaaacc 300
gaaatttctg gcgggctttt cgtccgcagg acgaggttgc ggtttccaac cagatctttg 360
atacaacagt gcttggctgt ggccgagtgg aatagcgagc cgaaattcgg cggtgatccg 420
gtggggtgac cccccggtga gcccgaaaaa gggcctgcta ctctggtcga tagcaaaagc 480
acaagaggaa atgctccccg gagcttcctg gccgttggct gggggtgatg gtgtgggtgt 540
gttctttgag aactcaacag cggactgttt tggttagtgt tcttttatgc ccccgaccat 600
gcgggtttgt gtggttggtg gtttctttga gtatcacgct ccaggacttt ttccttcggg 660
tgggttttgt tgagtgtgtg ctgggattgt atccaatgca 700
<210> 92
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 枯草芽孢杆菌的rRNA启动子16s-1
<400> 92
aggaagaatc acacgtcctt atcgtaactg aaaaagggta cggaaaacga actcctgctg 60
aagagtacag aacccaaagc cggggcggaa aaggactcaa aacagcgaaa atcaccgaga 120
acaacggcca actagtagca gtgaaagcta ctaaaggtga agaggatcta atgattatta 180
cagctagcgg cgtactcatc agaatggaca tcaatgatat ctccatcacc ggacgtgtca 240
ctcaaggtgt gcgtctcatc agaatggcag aagaagagca tgttgctaca gtagctttag 300
ttgagaaaaa cgaagaagat gagaatgaag aagaacaaga agaagtgtga aaaaaagcgc 360
agctgaaata gctgcgcttt tttgtgtcat aaccctttac agtcataaaa attatggtat 420
aatcatttct gttgtctttt taaagacaca agcatgacca ttatgactag taaaaacttt 480
ttcaaaaaag tattgaccta gttaactaaa aatgttacta ttaagtagtc gctttgagag 540
aagcacacaa agttctttga aaactaaaca agacaaaacg tacctgttaa ttcattttta 600
taaatcgcac agcgatgtgc gtagtcagtc aaactagggc ctgcacgacg caggtcacac 660
aggtgtcgcc gcaggatgcg gtgaacttaa cctgtgatcc 700
<210> 93
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 枯草芽孢杆菌的rRNA启动子16s-2
<400> 93
gctggttgaa aaaagcttag aaccgtctgc tgaagtgtta tacgaactga aagtagctga 60
agcgaagtat tttttttact taagggaagc gaagcagcga aatttaaaaa tcagccggtg 120
gaagtaagtg gtctaaactc ctggatcttc tcataagctt gtactagaac aagcgaagga 180
gatgagaaga ttcatggagc ctatttttat tattgggatt attttaggac tggttattct 240
tcttttttta tcaggttcag cagcgaagcc tttaaagtgg attggcatca cagctgttaa 300
atttgtggca ggtgctttgc tgctggtttg tgtaaatatg tttggcggca gtcttggcat 360
tcatgtgccg attaatctgg ttacaacagc tatcagcgga attttaggaa tacccggaat 420
agctgcgtta gtcgtcatta agcaatttat catttaattg atattatgta ttgacttaga 480
caactgaagg tgttattcta atatacgtcg ctgatgacga acagcttttt tgaaaagaaa 540
atgctaaaaa gttgttgaca gtagcggcgg taaatgttat gataataaag tcgcttaaac 600
gagcggtaaa caaagttctt tgaaaactaa acaagacaaa acgtacctgt taattcattt 660
ttataaatcg cacagcaatg tgcgtagtca gtcaaactac 700
<210> 94
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 枯草芽孢杆菌的rRNA启动子16s-3
<400> 94
cttcgaacaa aaaattgaag aaacgcttat tcagccaacg tttatttacg ggcatcctgt 60
agaaatttct cctcttgcta agaaaaaccc tgaggacccg cgttttacag accgttttga 120
gctgtttatc gttggccgtg aacatgccaa cgcgtttaca gagctgaatg atcctattga 180
tcaaagagaa cgctttgaag cgcaattaaa agagcgtgaa gccggtaatg atgaagctca 240
tttaatggat gaagactttg ttgaagctct ggaatacggt atgccgccaa caggaggttt 300
aggcatcggt atcgaccgtc tggttatgct gctgacgaat gccccttcta ttcgcgatgt 360
gctgttattc ccgcaaatga gacaacgcta ataaaaaaga gcggtatcct ccatagggaa 420
aggatgccgc tctttttaaa tcccttagta tttcttcaaa aaaactattg cactattatt 480
tactaggtgg tatattatta ttcgttgccg ctaaacaagg cgataacgaa aaaaagaact 540
tcaaaaaaag ttattgactt cactgagtca acgagttata ataataaagt cgcttgaacg 600
aagtgaacaa aatgatcttt gaaaactaaa caagacaaaa cgtacctgtt aattcagttt 660
ttaaaaatcg cacagcgatg tgcgtagtca gtcaaactac 700
<210> 95
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 枯草芽孢杆菌的rRNA启动子16s-4
<400> 95
gtgtctttat gacgtggggg ttcaagtccc ttcacccgca ttatatagga taacagttag 60
aaaaactgga catcctgtct gcggaagtag ttcagtggta gaacaccacc ttgccaaggt 120
gggggtcgcg ggttcgaatc ccgtcttccg ctccaactat accatccacg ccggggtggt 180
ggaattggca gacacacagg acttaaaatc ctgcggtagg tgactaccgt gccggttcaa 240
gtccggccct cggcattatg ttttgcgccc gtagctcaat tggatagagc gtttgactac 300
ggatcaaaag gttaggggtt cgactcctct cgggcgcgcc atatctttta atagaataga 360
taggaaatcg ggaagtagct cagcttggta gagcacatgg tttgggacca tggggtcgca 420
ggttcgaatc ctgtcttccc gaccattttt ttatggggcc ttagctcagc tgggagagcg 480
cctgctttgc acgcaggagg tcagcggttc gatcccgcta ggctccacca aaagttttta 540
aaaaagttgt tgactttgaa gaagtgacgt tgtatactaa taaagttgct ttaacaaagc 600
ggacaaacaa aatgatcttt gaaaactaaa caagacaaaa cgtacctgtt aattcagttt 660
ttaaaaatcg cacagcgatg tgcgtagtca gtcaaactac 700
<210> 96
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 枯草芽孢杆菌的rRNA启动子16s-5
<400> 96
gcccatgctc ccgatttgat ggccgtcctt tacgatacgg gccactgtgt cgggatggcg 60
ttctgcccaa gaagcggaca ggaaaaacgt tgcgttttta atcccgtttg ctttcagagt 120
attaagtatc ggttctgctc tctcatcacc ccagctgata tcgaaagtaa gtgaaatatc 180
tttagagtct gtttctcctt tataaatggc tttaggtccg gtgtcagttg aaaacacggg 240
aagcgggaca gctctttgga tataaaaaaa gctggcagct gcaaatgcgg cgataagtat 300
aataattaat tgttttaccc gtttaatgtg ccacacatag aagtgattca ctgatgatgc 360
ctccttatct tgtccatcat tcttgtttta catcttatga gcatggacaa ttgaatataa 420
ccgataaaat gtctcttcac atacagccta aattgggtgt tgaccttttg ataatatccg 480
tgatatatta ttattcgtcg ctgataaaca gctgacatca actaaaagct tcattaaata 540
ctttgaaaaa agttgttgac ttaaaagaag ctaaatgtta tagtaataaa gctgcttcgt 600
taagcggcag taatgatctt tgaaaactaa acaagacaaa acgtacctgt taattcattt 660
ttataaatcg cacagcgatg tgcgtagtca gtcaaactac 700
<210> 97
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 枯草芽孢杆菌的rRNA启动子16s-6
<400> 97
cgtaggttcg aatcctacct gcggagcatt gcttccatag ctcagcaggt agagcacttc 60
catggtaagg aagaggtcag cggttcgagc ccgcttggaa gcttaaatgt attattacca 120
aggtttctca taaggagaaa gcttttttta ttgcgatatg cggaagtagt tcagtggtag 180
aacaccacct tgccaaggtg ggggtcgcgg gttcgaatcc cgtcttccgc tccatttacc 240
taacgggata ttgtaaattg aattgcgccc gtagctcaat tggatagagc gtttgactac 300
ggatcaaaag gttaggggtt cgactcctct cgggcgcgcc atatctttta atagaataga 360
taggaaatcg ggaagtagct cagcttggta gagcacatgg tttgggacca tggggtcgca 420
ggttcgaatc ctgtcttccc gaccattttt tatggggcct tagctcagct gggagagcgc 480
ctgctttgca cgcaggaggt cagcggttcg atcccgctag gctccaccaa aagtttttaa 540
aaaaggttat tgactttgaa gaagtgacat tgtatactaa taaagttgct ttaacaaagc 600
ggacaaacaa aatgatcttt gaaaactaaa caagacaaaa cgtacctgtt aattcagttt 660
ttaaaaatcg cacagcgatg tgcgtagtca gtcaaactac 700
<210> 98
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 枯草芽孢杆菌的rRNA启动子16s-7
<400> 98
cgcccattaa agcggtacgc gagctgggtt cagaacgtcg tgagacagtt cggtccctat 60
ccgtcgcggg cgcaggaaat ttgagaggag ctgtccttag tacgagagga ccgggatgga 120
cgcaccgctg gtgtaccagt tgttctgcca agggcatcgc tgggtagcta tgtgcggacg 180
ggataagtgc tgaaagcatc taagcatgaa gcccccctca agatgagatt tcccattccg 240
caaggaagta agatccctga aagatgatca ggttgatagg tctgaggtgg aagtgtggcg 300
acacatggag ctgacagata ctaatcgatc gaggacttaa ccatattttt gaatgatgtc 360
acacctgtta tctagttttg agagaacact ctcaatttgt ttggtggcga tagcgaagag 420
gtcacacccg ttcccatacc gaacacggaa gttaagctct tcagcgccga tggtagtcgg 480
gggtttcccc ctgtgagagt aggacgccgc caagcaattg cacattagtg taatttttta 540
aaaaagttat tgactttgaa gaagtgacat tgtatactaa taaagttgct ttaacaaagc 600
ggacaaacaa aatgatcttt gaaaactaaa caagacaaaa cgtacctgtt aattcagttt 660
ttaaaaatcg cacagcgatg tgcgtagtca gtcaaactac 700
<210> 99
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 枯草芽孢杆菌的rRNA启动子16s-8
<400> 99
tccggtttaa tgatattaat cagttcctct ttgtagtaat acataacacg cctcatttct 60
tcttaagaga ttttcttata ttatttgtaa gatgagataa aatatataca tgataagcat 120
gggaaggcgt gaaagaagaa aataaaaaaa tacaggaaaa gtgttgacca aataaaacag 180
gcatggtata ttattaaacg tcgctgatga acagcgtgaa acaaaacaga aaaacaaaaa 240
agttttccta aggtgtttac aagattttaa aaatgtgtat aataagaaaa gtcgaattga 300
aaaagattcg aaaaaacatt aaaaaacttc ttgacttcaa catcaaatga tagtatgata 360
gttaagtcgc tcaataagcg cccgtagctc aattggatag agcgtttgac tacggatcaa 420
aaggttaggg gttcgactcc tctcgggcgc gccatataag ataccacgcg ggtgtagttt 480
agtggtaaaa cctcagcctt ccaagctgat gtcgtgagtt cgattctcat cacccgctcc 540
attattgaat gatctttgaa aactaaacaa gacaaaacgt acctgttaat tcagtttttg 600
aaaatcgcac agcgatgtgc gtagtcagtc aaactagggc ctgcacgatg caggtcacac 660
aggtgtcacc gcgggatgcg gtggacttaa cctgtgatcc 700
<210> 100
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 枯草芽孢杆菌的rRNA启动子16s-9
<400> 100
agcacgtatt gaagtaatcg acagaggatt ccatcccgaa accacggtgt ggagccaagt 60
gcgccagatg gagccccaag tgtacaaatt atattccgag ctgattgaaa gtcatgagag 120
cctggaaaaa agacttgaat tattattctt agcaaatgat tttctcatcc attccaaagc 180
cgagatcggt tcggcgcatc ttttcgaagt aatgaaagaa aaagacattt ggcaattcgg 240
tgagcttctt caacatcatg acctaaagca ctttacccaa gatcttggcg ttatgcttga 300
ttacttgacg gaaaagggac ttatcaacgt ctgccagata gaaacgaaag gacaggctgt 360
ctatcaccga ggatattctt ttaaaaaagg tgttgactct gattcttgac cgtgttatat 420
tattaaacgt cgctgatgcg cttctgagaa aacaagctca cagcggcggg aaaataaatc 480
aaaaaaacat ttgacaaaag aaagtcaaaa tgttatatta ataaagtcgc ttcaacaaga 540
agtgaaaatg atctttgaaa actaaacaag acaaaacgta cctgttaatt cagtttttaa 600
aaaatcgcac agcgatgtgc gtagtcagtc aaactagggc ctgcacgacg caggtcacac 660
aggtgtcgcc gcaggatgcg gtgaacttaa cctgtgatcc 700
<210> 101
<211> 700
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 枯草芽孢杆菌的rRNA启动子16s-10
<400> 101
tcaataaggc gaaccagttg cttagattga ttcatatcta tctccttcca ttgacagaca 60
accaaaagga caacaaaaaa gcagcacgcg gaaggatgag aaaagttcca cgcactgctt 120
tacgatctgc aattcatttg actttgccac atccctacgc cagcgttaac taacaggttc 180
aaagggtcag aacgaaaccg ctcactctca gctttaatgc tccccttgtg gtcatcagta 240
tttagttcgt ttctactata caagaaaacg aaaaaaacaa caagatcaca tgactgatgt 300
atatgttctt ttaagaaact tatatgatac acacgcttta gaaatcatgg cgaggattat 360
agtttatttg ttttatagat tttttttaaa aaactattgc aataaataaa tacaggtgtt 420
atattattaa acgtcgctga tgcacagcgg acacaaacta gatgcttcaa aacaacttga 480
aaaaagttgt tgacaaaaaa gaagctgaat gttatattag taaagctgct tcattgagaa 540
gtaacgaaat gatctttgaa aactaaacaa gacaaaacgt acctgttaat tcagttttta 600
aaaatcgcac tgcgatgtgc gtagtcagtc aaactagggc ctgcacgacg caggtcacac 660
aggtgtcgcc gcaggatgcg gtgaacttaa cctgtgatcc 700
<210> 102
<211> 689
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 小单胞菌rRNA启动子16S
<400> 102
gccggggcaa gcggtcgttc gccggtgttg agctgcgtaa atagccgtac ggcgatgatg 60
tgacgtggga cgcgtccagc ggatttgacg ttcaaaccgc tggacgcgta actttctctc 120
tgccagcgcg gaacggacga aacaggcaaa acgcctggga gtccggttcg ggaatggcac 180
cgggtcagac ggggcaactt ccctgaggtc cggtccgggt ggtgcttcat cggtcgaccg 240
aggggtcgat ttggcggggc ggaaccgacc gggtaaggtt gacgaccggc agggaaccgg 300
gcgagcgagc gggagaccgc agcggccggc ctgtcaaaaa ccacggcaac ggacggcgga 360
aacgccgaat ggattcgtgg tgcatcaaac cggatagaag cacgacaaag cgccacagag 420
cggtttgaca cggcggaaac ggtgaggtaa cgtagtagaa gtgctcgacg cggaagcggc 480
gggtgcgagg acgagatgcc ccggatgggg cccctgaggg ggtttccgga tggtgtgtgg 540
ttgttctttg agaactcaac agggtgcttg ataagccagt gccaattaag ttataccccg 600
tgctggtcgg gccttatgtc tggctggtgg ggattccttt ggcaacactt tgttgctggg 660
atgattgttc aacaagtttt tgttggaga 689
Claims (8)
1.一种过表达目的基因的方法，其特征在于，包括：
将核糖体RNA启动子与目的基因进行可操作的连接，所述核糖体RNA启动子设置于所述目的基因原有启动子的位置，所述目的基因为非核糖体RNA基因；
将连接有核糖体RNA启动子的目的基因导入受体细胞，以便实现所述目的基因在受体细胞的过表达。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核糖体RNA启动子与所述受体细胞来源于同一属；
优选地，所述核糖体RNA启动子与所述受体细胞来源于同一种。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核糖体RNA启动子与所述受体细胞来源于同属微生物；
优选地，所述核糖体RNA启动子与所述受体细胞来源于同种微生物。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述核糖体RNA启动子至少包括一段完整的核糖体RNA启动子功能单位；
优选地，所述核糖体RNA启动子为核糖体RNA基因序列5’端前的700bp的序列。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述核糖体RNA基因序列是通过NCBI数据库或测序获得。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目的基因预先设置于质粒载体中。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述质粒载体为pLH1；
任选地，所述目的基因为Gus；
任选地，所述核糖体RNA(rRNA)启动子设置于所述pLH1的XbaI和NdeI酶切位点之间。
8.核糖体RNA启动子在强启动表达非RNA基因中的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910408691.1A CN111944808A (zh) | 2019-05-16 | 2019-05-16 | 核糖体rna启动子在强启动表达非rna基因中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910408691.1A CN111944808A (zh) | 2019-05-16 | 2019-05-16 | 核糖体rna启动子在强启动表达非rna基因中的用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111944808A true CN111944808A (zh) | 2020-11-17 |
Family
ID=73335954
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910408691.1A Pending CN111944808A (zh) | 2019-05-16 | 2019-05-16 | 核糖体rna启动子在强启动表达非rna基因中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111944808A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010041021A2 (en) * | 2008-10-10 | 2010-04-15 | Ark Therapeutics Ltd. | Gene regulation using rna |
| WO2018195136A1 (en) * | 2017-04-18 | 2018-10-25 | Yale University | Compositions and methods for regulated gene expression |
-
2019
- 2019-05-16 CN CN201910408691.1A patent/CN111944808A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010041021A2 (en) * | 2008-10-10 | 2010-04-15 | Ark Therapeutics Ltd. | Gene regulation using rna |
| WO2018195136A1 (en) * | 2017-04-18 | 2018-10-25 | Yale University | Compositions and methods for regulated gene expression |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| J BROSIUS AND A HOLY: "Regulation of ribosomal RNA promoters with a synthetic lac operator", PROC. NATL. ACAD. SCI., vol. 81, no. 22, 1 November 1984 (1984-11-01), pages 2 - 3, XP009086798, DOI: 10.1073/pnas.81.22.6929 * |
| MICHIHISA MAEDA ET AL.: "Strength and Regulation of Seven rRNA Promoters in Escherichia coli", PLOS ONE, 30 December 2015 (2015-12-30), pages 1 - 19 * |
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