CN111936470B - 用作fgfr不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物 - Google Patents

用作fgfr不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物 Download PDF

Info

Publication number
CN111936470B
CN111936470B CN201980023858.0A CN201980023858A CN111936470B CN 111936470 B CN111936470 B CN 111936470B CN 201980023858 A CN201980023858 A CN 201980023858A CN 111936470 B CN111936470 B CN 111936470B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cancer
compound
alkyl
reaction
alkoxy
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201980023858.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111936470A (zh
Inventor
朱继东
曹恒义
糜婷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Yituo Pharmaceutical Technology Co ltd
Original Assignee
Shanghai Yituo Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Yituo Pharmaceutical Technology Co ltd filed Critical Shanghai Yituo Pharmaceutical Technology Co ltd
Publication of CN111936470A publication Critical patent/CN111936470A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111936470B publication Critical patent/CN111936470B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A61K31/4155—1,2-Diazoles non condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D231/38—Nitrogen atoms
    • C07D231/40—Acylated on said nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供了一种用作FGFR不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物、其制备方法和用途。具体地，本发明提供了式I化合物、其立体异构体、外消旋体、或其药学上可接受的盐。所述通式I的化合物具有FGFR抑制活性，能治疗FGFR活性或表达量诱发的癌症。

Description

用作FGFR不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物
技术领域
本发明涉及一类新的吡唑类衍生物，包括其制备方法、含有该衍生物的药物组合物，以及其作为成纤维细胞生长因子受体(FGFR)的不可逆抑制剂在癌症等疾病领域中的治疗用途。
技术背景
细胞的正常生长、组织的修复和重塑，离不开活性生长因子及其受体特异性的精准调控。成纤维细胞生长因子(FGF)是一类结构相关的、由150-200氨基酸组成的多肽，其家族大约有二十几个成员，参与发育的调控，并在多种组织中表达。成纤维细胞生长因子FGF能刺激增殖、细胞迁移和分化，并在骨骼和肢体的发育、伤口愈合、组织修复、造血、血管生成和肿瘤的发生中起重要作用。
成纤维细胞生长因子FGF的生物学作用是通过特定的细胞表面受体介导的，这种特定的细胞表面受体即成纤维细胞生长因子受体(FGFR)，是一种受体型蛋白酪氨酸激酶(RPTK)。该蛋白激酶均包括细胞外配体结合域，一个单跨膜结构域和一个胞内酪氨酸激酶结构域，其在与成纤维细胞生长因子FGF结合后，便发生磷酸化作用并激活下游信号通路。目前已知的FGFR主要包括4种类型：FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4。不同亚型的受体与不同的成纤维细胞生长因子FGF有不同的亲和力。
临床发现多种癌症的发生中伴随着肿瘤组织的FGFR异常表达和/或激活，因此，成纤维细胞生长因子受体FGFR被广泛认为是一类抗肿瘤的重要药物靶标，并吸引了许多药物化学家对其进行药物化学方面的研究，由此诞生了多个临床化合物分子。
前沿临床化合物AZD4547和BGJ398为泛FGFR(pan-FGFR)抑制剂：
Figure GPA0000294590850000021
这些pan-FGFR抑制剂虽然对FGFR1、FGFR2和FGFR3的生物活性有强的抑制作用，但其对FGFR4的抑制作用则弱得多，使得这类抑制剂对依赖FGFR4活性的肿瘤(如：某些肝癌)抑制效果不显著；另外，AZD4547和BGJ398均属于可逆性抑制剂，FGFR的变异将对其产生耐药性，导致抑瘤效果降低，甚至完全丧失。
综上所述，本领域迫切需要开发FGFR不可逆抑制剂，特别是对于FGFR4有良好抑制效果的不可逆抑制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种FGFR不可逆抑制剂，特别是对于FGFR4有良好抑制效果的不可逆抑制剂。
本发明的第一方面，提供了一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
Figure GPA0000294590850000031
在(I)中：
各个R1各自独立表示
卤素，
羟基基团，
氰基基团，
C1-C3烷基基团，所述基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷氧基、C3-环烷基、C1-C3烷基硫基、-NR4R5(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，
C3-5环烷基基团，所述基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C3-环烷基、C1-C3烷基硫基、-NR6R7(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，
C2-C3链烯基基团，所述基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷氧基、C3-环烷基、C1-C3烷基硫基、-NR8R9(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，
苯基基团，所述基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C3-环烷基、C1-C3烷基硫基、-NR10R11(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，
4至6-元杂环基基团，所述基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：
C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C3-环烷基、C1-C3烷基硫基、-NR12R13(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，
C1-C3烷氧基团，所述基因可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷氧基、C3-环烷基、-NR14R15(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氨基(-NH2)、单-和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，
-NR16R17基团，
-OCOR18基团，
-CO2R19基团，
-CONR20R21基团，
-NR22COR23基团，
-NR24CO2R25基因，
-OSO2R26基团，
或者两相邻R1基团与它们连接的原子一起形成4至7-元碳环或杂环，所述碳环或杂环任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C3-环烷基、C1-C3烷基硫基、-NR27R28(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基、氰基；
各个R2各自独立表示
卤素，
羟基基团，
氰基基团，
-CO2R29基团，
-CONR30R31基团，
-NR32COR33基团，
-NR34CO2R35基团，
-NR36R37基团，
-SO2R38基团，
-SO2NR39R40基团，
-NR41SO2R42基团，
C1-C6烷基基团，所述基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C1-C6烷基硫基、-NR43R44(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C3-C6环烷基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基、三氟甲基和可任选被一个或多个选自以下的取代基取代的4至7-元杂环基基团：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C3-C6环烷基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基、氰基和4至7-元杂环基基团，所述杂环基团可任选与4至7-元碳环基或杂环基基团稠合且可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C1-C6烷基硫基、-NR45R46、-CO2R47(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，C3-C6环烷基基团，所述基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C1-C6烷基硫基、-NR48R49(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基、氰基和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的4至7-元杂环基基团：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C1-C6烷基硫基、-NR50R51(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单-和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，
C2-C6链烯基基团，所述基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C1-C6烷基硫基、-NR52R53(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基、氰基和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的4至7-元杂环基基团：
C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C1-C6烷基硫基、-NR54R55(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，
4至7-元杂环基基团，所述杂环基团可任选与4至7-元碳环基或杂环基基团稠合且可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C6烷基、C2-C6链烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基羰基、C3-C6环烷基、C1-C6烷基硫基、-NR56R57、SO2R58(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：
C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、氧代、羟基、氰基和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的4至7-元杂环基基团：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C1-C6烷基硫基、-NR59R60、-SO2R61(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，
C1-C6烷氧基基团，所述基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、-NR62R63(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基、氰基和任选被一个或多个选自以下的取代基取代的4至7-元杂环基基团：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C6环烷基、C1-C6烷基硫基、-NR64R65(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基，
或者两相邻R2基团与它们连接的原子一起形成4至7-元碳环或杂环，所述碳环
或杂环可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C3-环烷基、C1-C3烷基硫基、-NR66R67(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、卤素、羟基、氰基和三氟甲基)、卤素、羟基和氰基；
n为0、1、2、3或4；
m为0、1、2、3或4；
R4和R5各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R4和R5与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R6和R7各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R6和R7与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R8和R9各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R8和R9与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R10和R11各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R10和R11与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R12和R13各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R12和R13与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R14和R15各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R14和R15与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R16和R17各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R16和R17它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单-和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R18代表C1-C4烷基或C1-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R19代表氢、C1-C4烷基、C2-C4链烯基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R20和R21各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R20和R21与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R22代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R23代表C1-C4烷基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R24代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R25代表C1-C4烷基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R26代表C1-C4烷基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R27和R28各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R27和R28与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R29代表氢、C1-C4烷基、C2-C4链烯基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R30和R31各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R30和R31与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R32代表氢、C1-C4烷基、C2-C4链烯基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R33代表氢、C1-C4烷基、C3-C6环烷基或可任选包含至少一个选自氮、氧和硫的环杂原子的5或6-元芳族基团(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R34代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R35代表氢、C1-C4烷基、C2-C4链烯基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R36和R37各自独立代表氢、C1-C4烷基、C2-C4炔基、C3-C6环烷基或任选包含至少一个选自氮、氧和硫的环杂原子的5或6-元芳族基团，或R36和R37与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和可任选被一个或多个选自以下的取代基取代的4至7-元碳环基或杂环基基团：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基、三氟甲基)；
R38代表C1-C4烷基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R39和R40各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R39和R40与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R41代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R42代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基(所述各基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基硫基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基和三氟甲基)；
R43和R44各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R43和R44与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R45和R46各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R45和R46与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R47代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基；
R48和R49各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R48和R49与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R50和R51各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R50和R51与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R52和R53各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R52和R53与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R54和R55各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环环基，或R54和R55与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R56和R57各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R56和R57与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R58代表C1-C4烷基或C3-C6环烷基；
R59和R60各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R59和R60与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R61代表C1-C4烷基或C3-C6环烷基；
R62和R63各自独立代表氢、C1-C4烷基或C3-C6环烷基，或R62和R63与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R64和R65各自独立代表氢、C1-C6烷基或C3-C6环烷基，或R64和R65与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R66和R67各自独立代表氢、C1-C6烷基或C3-C6环烷基，或R66和R67与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环；
R68和R69各自独立代表氢、C1-C6烷基或C3-C6环烷基，或R68和R69与它们连接的氮原子一起形成4至6-元饱和杂环。
在另一优选例中，各个R2各自独立地选自下组：-Cl、-F、-Br、-OH、-CN、-CH3、-CH2OH、-CH2N(CH3)2、-CH2CH(CH3)NH2、-OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OCH2CH3、-N(CH3)2、-NHPh、-NHCH2CH3、-NHCH2CH2N(CH3)2、-CONH2、-NHCOCH3、-NHCOH、-NHCOPh、-CO2H、-CO2CH3、-CO2CH2CH3、-SO2CH3、-NHSO2Me、-SO2N(CH3)2、-CO2CH3、-CO2CH2CH3、
Figure GPA0000294590850000091
在另一优选例中，各个R1各自独立地选自下组：卤素、C1-C3烷氧基基团，该烷氧基基团可任选被一个或多个选自以下的取代基取代：C1-C3烷氧基、C3-环烷基、-NR14R15、羟基、氰基、-CONR20R21(所述各基团可任选被一个或多个选自以下取代基取代：卤素、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、氨基(-NH2)、单和二-C1-C3烷基氨基、羟基、氰基和三氟甲基)。
在另一优选例中，各个R1各自独立地选自下组：-Cl、C1-C3烷氧基基团；
R2各自独立地选自下组：-Cl、-F、-Br、-OH、-CN、-CH3、-CH2OH、-CH2N(CH3)2、-CH2CH(CH3)NH2、-OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OCH2CH3、-N(CH3)2、-NHPh、-NHCH2CH3、-NHCH2CH2N(CH3)2、-CONH2、-NHCOCH3、-NHCOH、-NHCOPh、-CO2H、-CO2CH3、-CO2CH2CH3、-SO2CH3、-NHSO2Me、-SO2N(CH3)2、-CO2CH3、-CO2CH2CH3、
Figure GPA0000294590850000101
n为0、1、2、3或4；
m为0、1。
在另一优选例中，R1为C1-C3烷氧基基团。
在另一优选例中，R2各自独立地选自下组：F、-OH、-CN、-CH3、-CH2OH、-CH2N(CH3)2、-CH2CH(CH3)NH2、-OCH3、-OCH2CH2OH、-OCH2CH2OCH3、-OCH2CH2OCH2CH3、-N(CH3)2、-NHPh、-NHCH2CH3、-NHCH2CH2N(CH3)2、-CONH2、-NHCOCH3、-NHCOH、-NHCOPh、-CO2H、-CO2CH3、-CO2CH2CH3、-SO2CH3、-NHSO2Me、-SO2N(CH3)2、-CO2CH3、-CO2CH2CH3、
Figure GPA0000294590850000102
在另一优选例中，R1为3，5-二C1-C3烷氧基。
在另一优选例中，所述的化合物选自表格中所述的化合物F-4至F-51：
Figure GPA0000294590850000111
Figure GPA0000294590850000121
本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括：(a)作为活性成分的如本发明第一方面所述的式I化合物，或其外消旋体、R-异构体、S-异构体、可药用的盐或它们混合物，和(b)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述的药物组合物还包括(c)第二活性成分。
在另一优选例中，所述的药物组合物用于治疗或预防与FGFR的活性或表达量相关的疾病，优选地，所述的疾病选自下组：膀胱癌、肝癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、子宫颈癌、结肠癌、甲状腺癌、皮肤癌、胆管癌、急性淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、Burketts淋巴瘤、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、早幼粒细胞白血病、纤维肉瘤、横纹肌瘤、黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、成神经细胞瘤、神经胶状瘤。
本发明的第三方面，提供了一种如式I所述的化合物，及其外消旋体、R-异构体、S-异构体、可药用的盐或它们混合物用于选自下组的用途：(1)制备治疗或预防与FGFR激酶活性或表达量相关的疾病的药物组合物；(2)制备FGFR激酶抑制剂。
在另一优选例中，所述的FGFR激酶选自下组：FGFR1、FGFR2、FGFR3，和FGFR4。
在另一优选例中，所述的疾病选自下组：膀胱癌、肝癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、子宫颈癌、结肠癌、甲状腺癌、皮肤癌、胆管癌、急性淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、Burketts淋巴瘤、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、早幼粒细胞白血病、纤维肉瘤、横纹肌瘤、黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、成神经细胞瘤、神经胶状瘤。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1为实施例1中化合物与AZD4547和BGJ398的对于ERK磷酸化抑制的免疫印迹实验结果图。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，意外地发现，如式I所示的化合物具有优异的FGFR激酶抑制活性，特别是对于FGFR4的抑制活性，因此可以用于治疗或预防FGFR激酶相关的疾病。基于上述发现，发明人完成了本发明。
式(I)化合物及其用途
本发明为通式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure GPA0000294590850000131
其中，式(I)化合物可转化为药学上可接受的盐，例如加酸成盐：例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐或碱金属盐：例如钠盐或钾盐。
式(I)化合物还可以以立体异构体等形式存在，如常温下的互变异构体、几何异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体，或其混合物。
本发明的式(I)化合物中的氢原子可以以其同位素氘的形式而存在，例如-CH3可以以-CD3形式存在，-CH2-可以以-CD2-形式存在。
我们已发现本发明中定义的化合物或其药学上可接受的盐为有效的抗癌药，其性质被认为由FGFR活性的调节或抑制产生。因此本发明化合物被期望用于治疗完全由或部分由FGFR诱导的疾病或医学病症，即所述化合物可用于在需要此等治疗的温血动物中产生FGFR抑制作用。优选地，所述的FGFR包括：FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4。
本发明化合物被期望具有广谱抗癌特性，因为在众多人类癌症中已经观察到FGFR的非控表达或异常激活，包括但不限于膀胱、肝、胃、乳腺、前列腺和多发性骨髓瘤。因此期望本发明化合物将具有对抗这些癌症的抗癌活性。此外，期望本发明化合物将具有抗白血病、淋巴恶性肿瘤和实体瘤例如在组织：如肝、肾、膀胱、前列腺、乳腺和胰腺中的癌和肉瘤的活性。在一个实施方案中，本发明化合物被期望有利地延缓例如皮肤、结肠、甲状腺、肺和卵巢的原发性和再发性实体瘤的生长。更具体地，本发明化合物或其药学上可接受的盐被期望抑制与FGFR有关的肿瘤的生长，特别是生长和扩散显著依赖于FGFR的那些肿瘤，包括例如某些膀胱、肝、胃、乳腺和前列腺肿瘤和多发性骨髓瘤。
本发明另一方面，提供了如文中定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗以下疾病的药物中的用途：黑素瘤、乳头状甲状腺癌、胆管癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌、白血病、淋巴恶性肿瘤、多发性骨髓瘤；肝、肾、膀胱、前列腺、乳腺和胰腺中的癌和肉瘤；和皮肤、结肠、甲状腺、肺和卵巢的原发性和再发性的实体瘤。
药物组合物
本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物包括如文中定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料、稀释剂或载体。所述的药物组合物用于在温血动物如人中产生FGFR抑制作用或抗癌作用。
本发明提供了一种用于治疗温血动物如人中所患以下疾病的药物组合物：黑素瘤、乳头状甲状腺癌、胆管癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌、白血病、淋巴恶性肿瘤、多发性骨髓瘤；肝、肾、膀胱、前列腺、乳腺和政腺中的癌和肉瘤；和皮肤、结肠、甲状腺、肺的原发性和再发性的实体瘤。所述组合物包括如文中定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的稀释剂或载体。
可仅使用式(I)化合物及其药学上可接受的盐本身，但通常以药物组合物的形式给予，其中式(I)化合物或盐(活性成分)结合药学上可接受的辅料、稀释剂或载体。药物组合物可包含总组合物重量的0.01-99％w(重量百分比)、0.05-80％w、0.10-70％w，和/或甚至0.10-50％w的活性成分，这取决于给予方式。
本发明进一步提供了一种制备本发明药物组合物的方法，所述药物组合物包括将如文中定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的辅料、稀释剂或载体混合。
药物组合物可以局部(例如，皮肤或肺和/或气道)给予，例如以乳膏剂、溶液剂、混悬剂、六氟烷气雾剂和干粉制剂的形式；或全身给予，例如以片剂、胶囊剂、糖浆剂、粉剂或颗粒剂形式的口服给药；或以溶液剂或混悬剂形式的胃肠道给予；或皮下给予；或以栓剂形式的直肠给药；或经皮给予。
使用本领域熟知的常规药物赋形剂通过常规方法可得到本发明组合物。因此，意欲用于口服使用的组合物可包含例如一种或多种着色剂、甜味剂、矫味剂和/或防腐剂。
用于片剂制备的合适的药学上可接受的赋形剂，包括例如惰性稀释剂如乳糖、碳酸钠、磷酸钙或碳酸钙；成粒剂和崩解剂如玉米淀粉或algenic acid；粘合齐如淀粉；润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉；防腐剂如对羟基苯甲酸乙酯或丙脂，和抗氧剂如抗坏血酸。片剂可不包衣或使用本领域熟知的常规包衣料和方法包衣来改善其崩解和随后活性成分在胃肠道的吸收，或改善其稳定性和/或外观。
用于口服的组合物可为硬明胶胶囊形式，其中活性成分与惰性团体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合；或可为软明胶胶囊形式，其中活性成分可与水，或油：如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
混悬水溶液通常包含细小粉末形式的活性成分和一种或多种助悬剂如羧甲基纤维素纳、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、海藻酸纳、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；分散或润湿剂如卵磷脂或1，2-环氧烷烃与脂肪酸的缩合产物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七碳乙烯氧基鲸蜡醇)，或环氧乙烷与脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的缩合产物(如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯)，或环氧乙烷与脂肪酸和己糖醇酸肝衍生的偏酯的缩合产物(如聚氧化乙烯脱水山梨醇单油酸酯(Polyethylenesorbitanmonooleate))。混悬水溶液还可包含一种或多种防腐剂(如对羟基苯甲酸乙酯或丙酯、抗氧剂(如抗坏血酸)、着色剂、矫味剂和/或甜味剂(如蔗糖、糖精或阿司帕坦))。
油性混悬剂可通过将活性成分悬浮在植物油(如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(如液体石蜡)中来制备。油性混悬剂还可包含增稠剂如蜂蜡、硬石蜡或十六烷基醇。可加入如前所列的那些甜味剂和矫味剂来获得可口的口服制剂。这些组合物可通过加入抗氧剂如抗坏血酸来保存。
适合于通过加水来制备水性混悬剂的可分散的粉剂和颗粒剂通常通过包含活性成分和分散或润湿剂、助悬剂和一种或多种防腐剂。合适的分散剂或润湿剂和助悬剂已通过以上提及的那些举例说明。还可存在其他赋形剂如甜味剂、矫味剂和着色剂。
本发明药物组合物还可为水包油型乳剂的形式。油相可为植物油如橄榄油或花生油，或矿物油如液体石蜡，或任何这些的混合物。合适的乳化剂可为例如天然存在的树胶如阿拉伯胶或西黄蓍胶，天然存在的磷脂如大豆磷脂、卵磷脂，衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的酯或偏酯(例如脱水山梨醇单油酸酯)和所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳剂还可包含甜味剂、矫味剂和防腐剂。
糖浆剂和酏剂可与甜味剂如丙三醇、丙二醇、山梨醇、阿司帕坦或蔗糖配制，同时还可包含镇痛剂、防腐剂、矫味剂和/或着色剂。
药物组合物还可为无菌注射水性或油性混悬剂的形式，其可根据已知方法使用一种或多种以上已提及的适宜的分散剂或润湿剂和助悬剂。无菌注射制剂还可为在毒、在胃肠外可接受的稀释剂或溶剂(例如在1，3-丁二醇中的溶液)中的无菌注射溶液或混悬剂。
栓剂可通过将活性成分与合适的无刺激性的赋形剂混合来制备，该赋形剂在常温下为固体但在直肠温度下为液体并因此在直肠中熔化释放药物。合适的赋形剂包括例如可可脂和聚乙二醇。
局部用制剂如乳膏剂、软膏剂、凝胶剂或水性或油性的溶液剂或混悬剂，通常可使用本领域熟知的常规方法通过用活性成分与常规的、局部可接受的赋形剂或稀释剂配制得到。
吹入给药的组合物可以含，例如平均粒径30μ或更小的细小分散的粉末给予，该粉末仅含活性成分本身或用一种或多种生理学可接受的载体如乳糖稀释。随后方使地将用于吹入的粉末置于含，例如1-50mg活性成分的胶囊剂中，与涡轮吸入装置(turbo-inhalerdevice)使用，例如用于吹入已知药物色甘酸纳。
经吸入给予的组合物可为常规加压气雾剂的形式，该加压气雾剂将活性成分配制成含细小分散固体或液滴的气雾剂。可使用常规气雾剂推进剂如挥发性氟化烃类或烃类并且该气雾剂装置能方便地测定活性成分的量。
根据众所周知的医学原则，用于治疗目的的本发明化合物的剂量大小将自然地根据病症的性质和严重程度、动物或病人的年龄和性别以及给药途径而变化。
一般而言，给予的本发明化合物以便获得例如0.1mg至1000mg范围的活性成分/kg体重的日剂量，如果需要也可以用分剂量形式给予。但是，日剂量必须根据所治疗的宿主、具体的给药途径、所治疾病的严重程度而变化。因此，最佳剂量可由治疗任何具体患者的医师决定。一般而言，当使用非胃肠道途径时给予剂量较低。因此，例如对于静脉内给药，通常将使用在例如0.1mg至30mg活性成分/kg体重的剂量。类似地，对于吸入给予，通常将使用在例如0.1mg至25mg活性成分/kg体重的剂量。但是优选口服给药。例如意欲人口服给药的制剂通常将包含0.1mg至2g活性成分。
对于其他制剂、给药途径和剂量方案的信息，可参考Comprehensive MedicinalChemistry(Corwin Hansch；Chairman ofEditorial Board)的公开。
组合疗法
前文定义的抗癌治疗可用作单一疗法，也可用作组合疗法，即采用本发明化合物进行治疗外，还同时采用常规手术或放疗或化疗。此类化疗可包括一种或多种以下种类的抗肿瘤剂：
(1)用于肿瘤内科的其他抗增殖/抗肿瘤药及其组合：例如烷化剂(如顺铂、奥沙利铂、卡铂、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、替莫唑胺和硝基脲)，抗代谢药(如吉西他滨和抗叶酸剂如氟嘧啶如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶吟、阿糖胞苷和羟基脲)，抗肿瘤抗生素(如蒽环类如阿霉素、博来霉素、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、更生霉素和光辉霉素)，抗有丝分裂剂(长春花生物碱如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨，紫杉烷如紫杉醇和多西紫杉醇和polokinase抑制剂)，和拓扑异构酶抑制剂(鬼臼素如依托泊苷和替尼泊苷、安丫啶、托泊替康和喜树碱)；
(2)细胞生长抑制剂：抗雌激素药(如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和iodoxyfene)、抗雄激素药(如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和乙酸环丙氯地孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕激素类(如乙酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(如阿那曲唑、来曲唑、氟氯唑和依西美坦)和5*-还原酶抑制剂如非那雄胺；
(3)抑制癌细胞入侵的药物：例如c-Src激酶家族抑制剂如4-(6-氯代-2，3-亚甲二氧基苯胺基)-7-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]-5-四氢吡喃-4-基氧基喹唑啉(AZD0530；国际专利申请WO 01194341)和N-(2-氯代-6-甲基苯基)-2-{6-[4-(2-羟乙基)哌啶-1-基]-2-甲基咪啶-4-基氨基}噻唑-5-甲酰胺(dasatinib，BMS-354825，J.Med.Chem.，2004，47，6658-6661)，和金属蛋白酶抑制剂例如马立马司他，和尿激酶纤溶酶原激活剂受体功能的抑制剂或Heparanase的抗体；
(4)生长因子功能抑制剂：包括生长因子抗体和生长因子受体抗体(如抗erbB2抗体曲妥单抗[HerceptinTM]、抗-EGFR抗体帕尼单抗、抗erbB1抗体西妥昔单抗[Erbitux，C225])和由Stem等在Critical reviews in oncology/hematology，2005，第54卷，第11-29页中公开的任何生长因子或生长因子受体抗体)，这些抑制剂还包括酪氨酸激酶抑制剂例如表皮生长因子家族抑制剂(如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂如N-(3-氯代-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗琳代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼gefitinib，AZD1839)、N-(2-((2-(二甲基胺基)乙基)(甲基)胺基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯酰胺(AZD9291)、N-(3-乙块基苯基)-6，7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(erlotinib，OSI-774)和6-酰基酰氨基-N-(3-氯代-4-氟苯基)-7-(3-吗琳代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI 1033))、erbB2酪氨酸激酶抑制剂如拉帕替尼、血小板衍生生长因子家族抑制剂如伊马替尼、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂(例如Ras/Raf信号传导抑制剂如法尼基转移酶抑制剂，例如索拉非尼(BAY43-9006))、通过MEK和/或AKT激酶的细胞信号传导抑制剂、肝细胞生长因子家族抑制剂、c-kit抑制剂、ab1激酶抑制剂、IGF受体(胰岛素样生长因子)激酶抑制剂，aurora激酶抑制剂(例如AZD1152、PH739358、VX-680、MLN8054、R763、MP235、MP529、VX-528和AX39459)和细胞周期蛋白激酶抑制剂如CDK2和/或CDK4和/或CDK6抑制剂；
(5)抗血管生成剂：例如抑制血管内皮生长因子作用的抗血管生成剂(如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐羊抗[AvastinTM]和VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂如4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(AZD6474；WO 01132651中的实施例2)、4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯烷-1-基丙氧基)喹唑啉(AZD2171；WO 00/47212中的实施例240)、伐他拉尼(PTK787；WO98/35985)和SU11248(舒尼替尼；WO 01160814)，如公开于国际专利申请WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO98/13354的化合物和通过其它机制作用的化合物(如利诺胶、整合素αvb3功能抑制剂和血管生长抑素)；
(6)血管损伤剂：例如考布他汀A4和公开于国际专利申请WO99/02166、WO 00/40529、WO 00/41669、WO 01192224、WO 02/04434和WO 02/08213的化合物；
(7)反义疗法：如针对上述目标的疗法，如ISIS 2503(抗ras反义)；
(8)基因疗法：包括例如替代畸变基因如畸变p53或畸变BRCA1或BRCA2的方法、GDEPT(基因导向性酶前药疗法)法例如用胞咪啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的方法以及提高患者对化疗或放疗耐受性的方法例如多药耐药基因疗法；和
(9)免疫疗法：包括如免疫检查点封锁方法例如PD-1抗体如Opdivo和Keytruda和PD-L1抗体如Tecentriq，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(Chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy)，增加患者肿瘤细胞免疫原性的先体外后体内疗法和体内疗法，例如用细胞因子如白介素2、白介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子转染，降低T-细胞无反应性的方法，用转染免疫细胞例如细胞因子转染的树突状细胞的方法，用细胞因子转染肿瘤细胞系的方法和用抗独特型抗体的方法。
本发明的主要优点包括：
1.提供了一种如式I所示的化合物。
2.提供了一种结构新颖的FGFR抑制剂及其制备和应用，所述的抑制剂在极低浓度下即可抑制各类FGFR激酶的活性。
3.提供了一类治疗与FGFR激酶活性相关疾病的药物组合物。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。其中除非另有说明，否则：
(1)给出的温度是摄氏度(℃)；操作在室温或环境温度，即指在18-25℃范围的温度下进行；
(2)用无水硫酸钠干燥有机溶液；在至高60℃的浴温下用旋转蒸发器减压(600-4000Pascals；4.5-30mmHg)进行溶剂的蒸发；
(3)柱层析是在硅胶柱上进行层析；薄层层析(TLC)是在硅胶板上进行层析；
(4)通常，反应过程用TLC监测，给出的反应时间只用于举例说明；
(5)终产物具有良好的质子核磁共振(NMR)谱和/或质谱数据；
(6)给出的收率只用于举例说明，不一定是经不断的方法改进完善而得到的收率；如果需要更多原料则可重复制备；
(7)除非另外标明，否则给出的NMR数据采用主要标记质子的δ值形式，单位为相对于内标物四甲基甲硅烷(TMS)的百万分数(ppm)，在相应标明的氘代溶剂中于400MHz测定；
(8)化学符号具有其常用含义；使用SI单位和符号；
(9)给出的溶剂比是体积：体积比(v/v)；和
(10)使用以下缩写：
THF四氢呋喃
DMF N，N-二甲基甲酰胺
EtOAc乙酸乙酯
DCM二氯甲烷
DMSO二甲亚砜
DIPEAN，N-二异丙基乙基胺
PBS磷酸盐缓冲液
ADP二磷酸腺苷
ATP三磷酸腺苷
BSA牛血清蛋白
(11)使用适当的命名软件ChemBioOffice 2014给化合物命名，使用IUPAC命名规则；
(12)除非另有说明，否则起始原料均为市售商品。
表1实施例的化学结构式
Figure GPA0000294590850000191
Figure GPA0000294590850000201
表2对照物的化学结构式
Figure GPA0000294590850000211
中间体A：3-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑基-5-胺(合成路线参照CN101611014)
Figure GPA0000294590850000212
在圆底烧瓶中放入200mg(0.95mmol)3-(3，5-二甲氧基苯基)丙酸，加入1.5ml乙醇溶解之后滴加0.3ml浓硫酸，置于于90℃油浴中回流反应6h之后，将反应液在减压下旋干，加入乙酸乙酯溶解之后用饱和NaHCO3溶液洗涤，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na28O4干燥。硅胶柱层析分离纯化(梯度洗脱，石油醚∶乙酸乙酯＝30∶1至5∶1)得到黄色透明液体3-(3，5-二甲氧基苯基)丙酸乙酯(162mg，73％)。
在圆底烧瓶中放入搅拌子，N2保护下加入0.86ml THF，将圆底烧瓶置于-78℃搅拌10min后加入0.58ml的n-BuLi(2.5M，1.54mmol)，将69mg(1.68mmol)乙腈溶于1.6ml THF后滴加到反应液中，搅拌1h之后再把162mg化合物3-(3，5-二甲氧基苯基)丙酸乙酯(0.7mmol)溶于0.2ml THF中然后滴入反应液中。于-78℃搅拌3h之后缓慢升至室温，加醋酸淬灭反应，乙酸乙酯萃取，所得溶液用饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥。硅胶柱层析分离纯化(梯度洗脱，石油醚∶乙酸乙酯＝30∶1至5∶1)得到黄色粉末5-(3，5-二甲氧基苯基)-3-氧代戊腈(91mg，53％)。
在圆底烧瓶中放入82mg(0.35mmol)5-(3，5-二甲氧基苯基)-3-氧代戊腈，N2保护下加入3.5ml乙醇溶解，然后滴加109.5mg(175mmol)水合肼，升温至80℃反应。24h后将反应液在减压下旋干，加入乙酸乙酯萃取，所得溶液用H2O洗涤，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥。硅胶柱层析分离纯化(梯度洗脱，二氯甲烷∶甲醇＝200∶1至50∶1)得到黄色粉末的标题中间体A(76mg，88％)。
中间体B：2-丙烯酰胺基苯甲酸乙酯
Figure GPA0000294590850000221
在圆底烧瓶中加入搅拌子，N2保护下将2g(12.1mmol)邻氨基苯甲酸乙酯加入反应瓶中，然后加入12ml无水二氯甲烷溶解，将反应液放于冰水浴中搅拌10min之后加入1.8g(18.15mmol)三乙胺，然后加入1.4g(15.7mmol)丙烯酰氯，冰水浴中继续搅拌2h，然后升至室温，加入H2O淬灭反应，用10％HCl中和，乙酸乙酯萃取，所得到的有机层用饱和NaHCO3溶液洗涤，饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥。硅胶柱层析分离纯化(梯度洗脱，石油醚∶乙酸乙酯＝30∶1至5∶1)得到白色固体的标题中间体B(1.86，70％)。
中间体D：(2R，6S)-4-(3-丙烯酰胺基-4-(乙氧羰基)苯基)-2，6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure GPA0000294590850000222
在一圆底烧瓶中加入D1(2g)，顺式-2，6-二甲基哌嗪(1.07g)和三乙胺(2g)，并加入20mL DMSO，后加热至70度，搅拌16小时。LCMS监控原料反应完全，之后加入30mL冰水淬灭，乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(50mL×2)。无水硫酸钠干燥后，浓缩得2.8g D2。收率100％。
Figure GPA0000294590850000223
将化合物D2(2.8g)用50ml DCM溶解，加入TEA(1.84g)，后加(Boc)2O(1.98g)，加毕，RT条件下反应16小时。LCMS检测原料＜50％，加入40mL冰水淬灭，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，有机相无水硫酸钠干燥。粗品通过柱层析分离，得到固体D3(3.1g)，收率83％。
Figure GPA0000294590850000224
将化合物D3(3.1g)用90mL乙醇溶解，加500mg 10％钯碳，氢气置换三次后，室温(20～30℃)下搅拌过夜16小时。LCMS检测至原料反应完全。将反应液通过硅藻土垫过滤，滤液浓缩，得到固体D4(3.3g)，收率：89％。直接进行下一步反应。
Figure GPA0000294590850000231
将化合物D4(2.5g)溶于50mL二氯甲烷中，冰水浴冷却至0～5℃。加入三乙胺(1.04g)，丙烯酰氯(748mg)，保持冰水浴继续搅拌0.5～1小时，LCMS检测反应完全，加入50mL冰水淬灭，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，有机相无水硫酸钠干燥。粗品通过柱层析分离，得到D黄色固体1.3g，收率：46％。
中间体G：2-丙烯酰胺基-4-吗啡啉苯甲酸乙酯
Figure GPA0000294590850000232
在一圆底烧瓶中加入化合物D1(2g)，并加入40mL吗啡林，后RT条件下搅拌3小时。LCMS监控至原料完全，之后加入150mL冰水淬灭，乙酸乙酯萃取(100mL×2)，合并有机相，饱和食盐水洗涤(100mL×1)。无水硫酸钠干燥后，浓缩得6.5g棕色油状物G1。收率98％。
Figure GPA0000294590850000233
将化合物G1(6.5g)用80mL乙醇溶解，加入500mg 10％钯碳，氢气置换三次后，室温(20～30℃)下搅拌过夜16小时。LCMS检测至原料反应完全。将反应液通过硅藻土垫过滤，滤液浓缩，得到黄色固体G2(4.0g)，收率：90％。直接进行下一步反应。
Figure GPA0000294590850000234
将化合物G2(4.0g)溶于60mL二氯甲烷中，冰水浴冷却至0～5℃。加入三乙胺(2.42g)，丙烯酰氯(1.59g)，保持冰水浴继续搅拌0.5～1小时，LCMS检测反应完全，加入40mL冰水淬灭，二氯甲烷萃取，饱和食盐水洗涤，有机相无水硫酸钠干燥。粗品通过柱层析分离，得到黄色固体G 4.0g，收率：82％。
实施例1：2-丙烯酰胺基-N-(3-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-5-基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000241
在圆底烧瓶中放入76mg(0.31mmol)中间体A，N2保护下加入2ml干燥的甲苯溶解，在冰浴下搅拌10min后滴加0.29ml的三甲基铝溶液(1.6M，0.46mmol)，反应1h之后加入100mg(0.46mmol)中间体B，搅拌10min后移去冰浴，60℃反应18h之后，降温，滴加H2O将反应淬灭，乙酸乙酯萃取，所得溶液用饱和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥。硅胶柱层析分离纯化(梯度洗脱，二氯甲烷∶甲醇＝200∶1至70∶1)得到白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(3-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-5-基)苯甲酰胺(实施例1，67mg，52％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.24(s，1H)，11.09(s，1H)，10.89(s，1H)，8.34(d，J＝8.3Hz，1H)，7.86(d，J＝7.8Hz，1H)，7.53(t，J＝7.8Hz，1H)，7.19(t，J＝7.6Hz，1H)，6.46(s，1H)，6.42(d，J＝2.0Hz，2H)，6.40-6.35(m，1H)，6.32(s，1H)，6.23(d，J＝17.0Hz，1H)，5.80(d，J＝10.1Hz，1H)，3.72(s，6H)，2.88(m，4H).LCMS：m/z＝421.2(M+H)+。
实施例2：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000242
在二颈瓶中加入150mg化合物A(0.607mmol)，N2保护下加入2.2ml超干甲苯溶解之后，冰浴下搅拌片刻，然后再缓慢加入1.3ml三甲基铝溶液(1.6M，2.12mmol)，冰浴下继续搅拌一个小时。一小时后，加入194mg化合物C(0.607mmol)，然后将反应体系移到110℃油浴下继续搅拌。反应10小时后点板，反应结束。往反应液中加入10ml水将反应液淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。加入硅胶制砂，硅胶柱分离纯化(从DCM∶MeOH＝100∶1开始梯度洗脱至DCM∶MeOH＝10∶1)得乳白色粉末2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-((2-(二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯甲酰胺(实施例2，142mg，45％)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.13(d，J＝2.6Hz，1H)，7.75(d，J＝9.0Hz，1H)，6.53(dd，J＝9.1，2.6Hz，1H)，6.40-6.27(m，6H)，5.81(dd，J＝7.0，4.5Hz，1H)，3.75-3.71(m，6H)，3.62(t，J＝7.6Hz，2H)，3.07(s，3H)，2.91(dd，J＝4.8，3.7Hz，4H)，2.76-2.70(m，2H)，2.47(s，6H)。
实施例3：2-丙烯酰胺基-N-(3-(3，5二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-5-基)-4-((3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000243
将化合物A(745mg)在氮气保护下加入到20mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(4.5ml)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物D(1.3g)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应5小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入30mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，旋干溶剂，后制备，冻干，得白色固体2-丙烯酰胺基-N-(3-(3，5二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-5-基)-4-((3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(实施例3，48mg，3％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.04(s，1H)，10.61(s，1H)，8.25(s，1H)，8.22-8.19(m，1H)，7.90(d，J＝9.0Hz，1H)，6.81-6.65(m，1H)，6.47-6.19(m，6H)，5.82(d，J＝11.2Hz，1H)，3.71(s，8H)，2.89(m，6H)，2.36(t，J＝11.4Hz，2H)，1.09(d，J＝6.2Hz，6H).LCMS：m/z＝533.3(M+H)+。
实施例4：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H吡唑-3-基)-6-氟苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000251
将化合物A(366mg)和10mL甲苯加入至50mL圆底三口瓶中，氮气置换三次。反应液用冰水浴降温至0～10℃。2.2ml三甲基铝(2mol/L甲苯溶液)用注射器滴加至反应液中，0～10℃搅拌1小时。E(300mg)溶在10mL甲苯加入反应液中，升温至回流，反应3小时。LCMS检测反应结束，反应液倒入50mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得粗品，色谱制备(酸法∶甲酸)，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H吡唑-3-基)-6-氟苯甲酰胺(实施例4，253.73mg，39.1％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.17(s，1H)，10.89(s，1H)，9.84(s，1H)，7.73(d，J＝8.2Hz，1H)，7.53-7.41(m，1H)，7.08(t，J＝8.9Hz，1H)，6.49(dd，J＝17.0，10.2Hz，2H)，6.42(d，J＝2.2Hz，2H)，6.32(t，J＝2.2Hz，1H)，6.22(dd，J＝17.0，1.8Hz，1H)，5.75(dd，J＝10.2，1.8Hz，1H)，3.72(s，6H)，2.87(s，4H).LCMS：m/z＝439.2(M+H)+。
实施例5：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-5-甲氧基苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000252
将化合物A(347mg)和10mL甲苯加入至50mL圆底三口瓶中，氮气置换三次。反应液用冰水浴降温至0～10℃。2.1ml三甲基铝(2mol/L甲苯溶液)用注射器滴加至反应液中，0～10℃搅拌1小时。F(300mg)溶在10mL甲苯加入反应液中，升温至回流，反应3小时。LCMS检测反应结束，反应液倒入50mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得粗品，色谱制备(酸法∶甲酸)，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-5-甲氧基苯甲酰胺(实施例5，259.44mg，41.0％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.26(s，1H)，10.91(s，1H)，10.75(s，1H)，8.15(d，J＝8.9Hz，1H)，7.39(s，1H)，7.11(d，J＝9.0Hz，1H)，6.49-6.39(m，3H)，6.39-6.31(m，2H)，6.20(dd，J＝17.0，1.4Hz，1H)，5.76(d，J＝11.5Hz，1H)，3.83(s，3H)，3.72(s，6H)，2.88(s，4H).LCMS：m/z＝451.3(M+H)+。
实施例6：2-丙烯酰胺基-N-(3-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-5-基)-4-吗啡啉苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000261
将化合物A(2.23g)在氮气保护下加入到100mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(12.3ml)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物G(2.5g)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应5小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入100mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，脱溶后制备，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(3-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-5-基)-4-吗啡啉苯甲酰胺(实例6，1.2g，25％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.22(s，1H)，12.01(s，1H)，10.61(s，1H)，8.23(s，1H)，7.92(d，J＝9.0Hz，1H)，6.72(d，J＝11.3Hz，1H)，6.48-6.16(m，6H)，5.82(d，J＝11.6Hz，1H)，3.81-3.66(m，10H)，3.29-3.16(m，4H)，2.87(s，4H).LCMS：m/z＝506.2(M+H)+。
实施例7：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000262
将化合物A(100mg)在氮气保护下加入到3mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(627μL)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物H(113mg)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应过夜16小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入10mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，柱层析分离(中性氧化铝)后制备，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(实施例7，23mg，12.4％)1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ11.84(s，1H)，9.09(s，1H)，8.45(d，J＝2.6Hz，1H)，7.46(d，J＝9.0Hz，1H)，6.60(s，1H)，6.48(dd，J＝9.0，2.6Hz，1H)，6.41(dd，J＝17.0，1.6Hz，1H)，6.36-6.27(m，4H)，5.74(dd，J＝9.8，1.6Hz，1H)，3.74(s，6H)，3.36-3.27(m，4H)，2.97-2.88(m，4H)，2.51-2.43(m，4H)，2.30(s，3H)，1.24(s，1H).LCMS：m/z＝519.3(M+H)+。
实施例8：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(3，4，5-三甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000271
将化合物A(100mg)在氮气保护下加入到3mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(627μL)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物I(124mg)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应过夜16小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入10mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，柱层析分离(中性氧化铝)后制备，冻干，得16mg白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(3，4，5-三甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(实施例8，16mg，8.2％)。1HNMR(400MHz，Chloroform-d)δ11.87(s，1H)，8.67(s，1H)，8.43(d，J＝2.5Hz，1H)，7.46(d，J＝8.9Hz，1H)，6.58(s，1H)，6.51(dd，J＝9.0，2.5Hz，1H)，6.41(dd，J＝17.0，1.6Hz，1H)，6.37-6.27(m，4H)，5.74(dd，J＝9.8，1.6Hz，1H)，3.75(s，6H)，3.65(d，J＝13.3Hz，2H)，2.98-2.89(m，4H)，2.68(t，J＝12.2Hz，2H)，2.28(s，3H)，1.24(s，3H)，1.16(d，J＝6.2Hz，6H).LCMS：m/z＝547.3(M+H)+。
实施例9：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000272
将化合物A(100mg)在氮气保护下加入到3mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(627μL)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物J(118mg)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应过夜16小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入10mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，柱层析分离(中性氧化铝)后制备，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(4-乙基哌嗪-1-基)苯甲酰胺(实施例9，20mg，10.5％)。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ11.85(s，1H)，8.94(s，1H)，8.45(d，J＝2.6Hz，1H)，7.47(d，J＝9.0Hz，1H)，6.59(s，1H)，6.50(dd，J＝8.9，2.4Hz，1H)，6.41(dd，J＝17.0，1.6Hz，1H)，6.36-6.26(m，4H)，5.74(dd，J＝9.8，1.6Hz，1H)，3.75(s，6H)，3.39-3.30(m，4H)，2.97-2.86(m，4H)，2.55-2.50(m，4H)，2.43(q，J＝7.2Hz，2H)，1.24(s，1H)，1.10(t，J＝7.2Hz，3H).LCMS：m/z＝533.3(M+H)+。
实施例10：2-丙烯酰胺基-N-(5-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-吗啉苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000281
将化合物G(104mg)和5mL甲苯加入至50mL圆底三口瓶中，氮气置换三次。反应液用冰水浴降温至0～10℃。0.5ml三甲基铝(2mol/L甲苯溶液)用注射器滴加至反应液中，0～10℃搅拌1小时。5-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-胺(90mg)溶在5mL甲苯加入反应液中，升温至回流，反应3小时。LCMS检测反应结束，反应液倒入50mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得粗品，色谱制备(酸法∶甲酸)，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(2，6-二氯-3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-吗啉苯甲酰胺(实施例10，11.62mg，6.15％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.96(s，1H)，10.68(s，1H)，8.23(s，1H)，7.92(d，J＝9.1Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.73(dd，J＝9.1，2.4Hz，1H)，6.49-6.30(m，3H)，6.24(dd，J＝16.9，1.6Hz，1H)，5.81(dd，J＝10.1，1.5Hz，1H)，3.92(s，6H)，3.79-3.71(m，4H)，3.30-3.16(m，6H)，2.80-2.72(m，2H).LCMS：m/z＝574.2(M+H)+。
实施例11：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-((2-羟基乙基)(甲基)氨基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000282
将化合物A(230mg)在氮气保护下加入到5mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(1.3mL)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物M(260mg)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应5小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入10mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，旋干后制备，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-((2-羟基乙基)(甲基)氨基)苯甲酰胺(实施例11，100mg，21.2％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.19(d，J＝9.6Hz，2H)，10.45(s，1H)，8.06(d，J＝2.4Hz，1H)，7.89(d，J＝8.9Hz，1H)，6.50-6.34(m，4H)，6.34-6.20(m，3H)，5.81(d，J＝11.5Hz，1H)，3.72(s，6H)，3.55(dd，J＝14.9，4.7Hz，4H)，3.27(s，3H)，3.00(s，3H)，2.87(s，4H).LCMS：m/z＝508.4(M+H)+。
实施例12：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000283
将化合物A(380mg，1.54mmol)在氮气保护下加入到20mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(3ml)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物N(450mg，1.54mmol)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应5小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入30mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，旋干得800mg粗品，制备，冻干得到白色粉色状化合物2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(2-甲氧基乙氧基)苯甲酰胺(实施例12，38.54mg，5.07％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.26(s，1H)，11.79(s，1H)，10.78(s，1H)，8.17(s，1H)，7.96(d，J＝8.9Hz，1H)，6.76(d，J＝11.4Hz，1H)，6.46-6.21(m，6H)，5.83(d，J＝11.6Hz，1H)，4.20-4.12(m，2H)，3.72(s，6H)，3.69(dd，J＝5.2，3.7Hz，2H)，3.32(s，3H)，2.87(s，4H).LCMS：m/z＝495.2(M+H)+。
实施例13：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-甲氧基苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000291
将化合物A(324mg)和10mL甲苯加入至50mL圆底三口瓶中，氮气置换三次。反应液用冰水浴降温至0～10℃。2.0ml三甲基铝(2mol/L甲苯溶液)用注射器滴加至反应液中，0～10℃搅拌1小时。O(280mg)溶在5mL甲苯加入反应液中，升温至回流，反应3小时。LCMS检测反应结束，反应液倒入50mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得粗品，色谱制备(酸法∶甲酸)，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-甲氧基苯甲酰胺(实施例13，121mg，20.5％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.25(s，1H)，11.80(s，1H)，10.76(s，1H)，8.18(d，J＝2.6Hz，1H)，7.97(d，J＝8.9Hz，1H)，6.75(dd，J＝8.9，2.6Hz，1H)，6.44-6.30(m，5H)，6.25(dd，J＝17.0，1.7Hz，1H)，5.83(dd，J＝10.0，1.6Hz，1H)，3.82(s，3H)，3.72(s，6H)，2.87(s，4H).LCMS：m/z＝451.2(M+H)+。
实施例14：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(2，6-二甲基吗啉)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000292
将化合物A(572mg)在氮气保护下加入到5mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(3.1mL)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物P(700mg)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应5小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入10mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，后制备，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(2，6-二甲基吗啉)苯甲酰胺(实施例14，98mg，7.94％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.21(s，1H)，12.02(s，1H)，10.60(s，1H)，8.20(d，J＝2.4Hz，1H)，7.91(d，J＝9.0Hz，1H)，6.74(dd，J＝9.0，2.1Hz，1H)，6.44-6.21(m，6H)，5.82(dd，J＝9.9，1.8Hz，1H)，3.71(m，10H)，2.87(s，4H)，2.39(t，J＝11.8Hz，2H)，1.18(d，J＝6.1Hz，6H).LCMS：m/z＝534.4(M+H)+。
实施例15：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-吗啉甲基苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000301
将化合物A(357mg)和10mL甲苯加入至50mL圆底三口瓶中，氮气置换三次。反应液用冰水浴降温至0～10℃。2.2ml三甲基铝(2mol/L甲苯溶液)用注射器滴加至反应液中，0～10℃搅拌1小时。Q(400mg)溶在5mL甲苯加入反应液中，升温至回流，反应4小时。LCMS检测反应结束，反应液倒入50mL水中淬灭，乙酸乙酯40mL*2次萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得粗品，色谱制备(酸法：甲酸)，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-吗啉甲基苯甲酰胺(实施例15，120mg，16％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.28(s，1H)，11.22(s，1H)，10.87(s，1H)，8.36(s，1H)，7.85(d，J＝8.0Hz，1H)，7.12(d，J＝7.8Hz，1H)，6.47-6.30(m，5H)，6.23(d，J＝18.0Hz，1H)，5.81(d，J＝11.3Hz，1H)，3.72(s，6H)，3.63-3.56(s，4H)，3.50(s，2H)，2.87(s，4H)，2.38(s，4H).LCMS：m/z＝520.3(M+H)+。
实施例16：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-((2-羟基乙基)(甲基)氨基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000302
将化合物A(468mg)在氮气保护下加入到5mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(2.6ml)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物R(700mg)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应5小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入10mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，后制备，冻干，得16-TBS(800mg)油状物，无需纯化直接进入下一步反应。
Figure GPA0000294590850000303
将化合物16-TBS(800mg)加入到5mL THF中，后加TBAF(900mg)RT条件下搅拌过夜。LCMS检测原料反应完全，反应液降至室温。加入10mL水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，有机相用水和饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，得粗品后制备，冻干，得2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-((2-羟基乙基)(甲基)氨基)苯甲酰胺(实施例16，138mg，21.2％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.22(s，2H)，10.46(s，1H)，8.05(s，1H)，7.88(d，J＝9.0Hz，1H)，6.54-6.18(m，7H)，5.81(d，J＝10.0Hz，1H)，4.76(s，1H)，3.72(s，6H)，3.58(s，2H)，3.47(s，2H)，3.01(s，3H)，2.87(s，4H).LCMS：m/z＝494.3(M+H)+。
实施例17：2.丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(2-(二甲氨基)乙基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000311
将化合物A(323mg，1.31mmol)在氮气保护下加入到20mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(3ml)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物S(400mg，1.31mmol)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应5小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入30mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，旋干得2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(2-(二甲氨基)乙基)苯甲酰胺(实施例17，500mg粗品，75.4％)，制备，冻干得到白色粉色状化合物36.33mg。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.80(s，1H)，10.80(s，1H)，8.33(s，2H)，8.18(d，J＝2.6Hz，1H)，7.96(d，J＝8.9Hz，1H)，6.75(dd，J＝8.9，2.6Hz，1H)，6.45-6.21(m，6H)，5.83(dd，J＝10.0，1.6Hz，1H)，4.12(t，J＝5.7Hz，2H)，3.72(s，6H)，2.87(s，4H)，2.66(t，J＝5.7Hz，2H)，2.23(s，6H).LCMS：m/z＝508.3(M+H)+。
实施例18：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(2-吗啉乙氧基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000312
将化合物A(312mg)和10mL甲苯加入至50mL圆底三口瓶中，氮气置换三次。反应液用冰水浴降温至0～10℃。1.9ml甲基铝(2mol/L甲苯溶液)用注射器滴加至反应液中，0～10℃搅拌1小时。T(400mg)溶在5mL甲苯加入反应液中，升温至回流，反应3小时。LCMS检测反应结束，反应液倒入50mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得粗品，色谱制备(酸法∶甲酸)，冻干，得白色粉末状固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(2-吗啉乙氧基)苯甲酰胺(实施例18，57.51mg，8.29％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.79(s，1H)，10.79(s，1H)，8.30(s，1H)，8.18(d，J＝2.5Hz，1H)，7.96(d，J＝8.9Hz，1H)，6.76(dd，J＝8.9，2.6Hz，1H)，6.45-6.21(m，7H)，5.83(dd，J＝10.0，1.5Hz，1H)，4.15(t，J＝5.7Hz，2H)，3.72(s，6H)，3.61-3.56(m，4H)，2.87(s，4H)，2.72(t，J＝5.6Hz，2H)，2.48(s，4H).LCMS：m/z＝550.4(M+H)+。
实施例19：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3基)-4-((2-羟基丙基)氨基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000321
将化合物A(550mg)和20mL甲苯加入至50mL圆底三口瓶中，氮气置换三次。反应液用冰水浴降温至0～10℃。3.3ml三甲基铝(2mol/L甲苯溶液)用注射器滴加至反应液中，0～10℃搅拌1小时。U(1.0g)溶在10mL甲苯加入反应液中，升温至回流，反应3小时。LCMS检测反应结束，反应液倒入100mL水中淬灭，再加入100mL乙酸乙酯，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得1.5g油状物。将油状物加入至30mL二氯甲烷中，再加入6.5mL三氟乙酸，室温反应3小时。LCMS检测后，反应液加入20mL水，水相用30mL*2次二氯甲烷萃取，有机相饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥后减压浓缩得0.7g(63.8％)固体。色谱制备(酸法：甲酸)，冻干，得白色固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3基)-4-((2-羟基丙基)氨基)苯甲酰胺(实施例19，162.84mg)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.20(s，1H)，10.37(s，1H)，7.90(s，1H)，7.79(d，J＝8.7Hz，1H)，6.64-6.15(m，8H)，5.80(d，J＝9.9Hz，1H)，4.71(s，1H)，3.87-3.77(m，1H)，3.71(s，6H)，3.00(s，2H)，2.86(s，4H)，1.12(d，J＝5.9Hz，3H).LCMS：m/z＝494.3(M+H)+。
实施例20：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(3-羟基吡咯烷-1-基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000322
将化合物A(649mg)在氮气保护下加入到20mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(3.6ml)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物V(1.0g)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应5小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入30mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，旋干得20-TBS(1.5g粗品)，直接进入下一步反应。
Figure GPA0000294590850000323
将化合物20-TBS(粗品1.5g)加入到20mL THF中，后加TBAF(1.5g)RT条件下搅拌过夜。LCMS检测原料反应完全。加入10mL水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，有机相用水和饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，得粗品后制备，冻干，得2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(3-羟基吡咯烷-1-基)苯甲酰胺(实施例20，215mg，17.6％)白色粉末固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.26(s，1H)，10.47(s，1H)，7.95-7.85(m，2H)，6.42(d，J＝2.2Hz，2H)，6.38-6.20(m，5H)，5.81(dd，J＝9.8，1.9Hz，1H)，4.42(s，1H)，3.72(s，7H)，3.50-3.34(m，4H)，3.16(d，J＝10.0Hz，1H)，2.87(s，4H)，2.11-2.01(m，1H)，1.94(s，1H).LCMS：m/z＝506.2(M+H)+。
实施例21：2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(4-羟基哌啶-1-基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000331
将化合物A(628mg)在氮气保护下加入到20mL甲苯中，冰水浴下搅拌片刻，缓慢加入三甲基铝的2M甲苯溶液(3.5ml)，保持冰水浴搅拌0.5～1小时，加入化合物W(1.0g)，反应体系转移至油浴下加热回流(110-115℃)，反应5小时，LCMS检测反应结束，反应液倒入30mL水中淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥后，旋干得21-TBS(1.5g粗品)，直接进入下一步反应。
Figure GPA0000294590850000332
将化合物21-TBS(粗品1.5g)加入到20mL THF中，后加TBAF(1.5g)RT条件下搅拌过夜。LCMS检测原料反应完全。加入10mL水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取，有机相用水和饱和食盐水洗涤后，无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，得粗品后制备，冻干，得白色粉末固体2-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-4-(4-羟基哌啶-1-基)苯甲酰胺(实施例21，91mg，7.40％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.21(s，1H)，12.06(s，1H)，10.55(s，1H)，8.22(d，J＝2.4Hz，1H)，7.88(d，J＝9.1Hz，1H)，6.69(dd，J＝9.1，2.4Hz，1H)，6.46-6.19(m，6H)，5.81(dd，J＝9.9，1.8Hz，1H)，4.74(d，J＝4.2Hz，1H)，3.71(s，10H)，3.04(t，J＝10.2Hz，2H)，2.87(s，4H)，1.82(m，2H)，1.49-1.36(m，2H).LCMS：m/z＝520.3(M+H)+。
为了进一步阐明本发明的特点和作用机制，采用文献报道过的方法(例如：CN101611014)可制备如下对照物：
对照物aa：N-(3-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-5-基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000333
N-(3-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-5-基)苯甲酰胺(aa)可用与实施例1类似的制备方法，用苯甲酸乙酯和中间体A反应得到。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.17(s，1H)，10.67(s，1H)，7.98(d，J＝8.0，2H)，7.55(t，J＝7.3Hz，1H)，7.48(t，J＝7.4Hz，2H)，6.47(s，1H)，6.42(d，J＝2.2Hz，2H)，6.32(t，J＝2.2Hz，1H)，3.71(s，6H)，2.87(m，4H)。(未观察到其中一个NH)。
对照物bb：N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-丙酰胺基苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000341
N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)-2-丙酰胺基苯甲酰胺(bb)可用与实施例1类似的制备方法，用2-丙酰胺基苯甲酸乙酯和中间体A反应得到。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.77(s，1H)，10.18(s，1H)，8.56(d，J＝8.4Hz，1H)，7.55(d，J＝7.7Hz，1H)，7.41(t，J＝7.9Hz，1H)，6.97(t，J＝7.6Hz，1H)，6.66(s，1H)，6.33(s，3H)，3.75(d，J＝6.2Hz，6H)，2.95-2.88(m，4H)，2.44(q，J＝7.5Hz，2H)，1.25(t，J＝7.5Hz，3H)。
对照物cc：3-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000342
3-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)苯甲酰胺(cc)可用与实施例1类似的制备方法，用3-丙烯酰胺基苯甲酸乙酯和中间体A反应得到。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.15(s，1H)，7.84(d，J＝8.0Hz，1H)，7.64(d，J＝7.7Hz，1H)，7.44(t，J＝7.9Hz，1H)，6.43-6.40(m，2H)，6.36(t，J＝2.7Hz，2H)，6.34-6.26(m，2H)，5.78(dd，J＝9.1，2.7Hz，1H)，3.71(s，6H)，2.94-2.85(m，4H)。
对照物dd：4-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)苯甲酰胺
Figure GPA0000294590850000343
4-丙烯酰胺基-N-(5-(3，5-二甲氧基苯乙基)-1H-吡唑-3-基)苯甲酰胺(dd)可用与实施例1类似的制备方法，用4-丙烯酰胺基苯甲酸乙酯和中间体A反应得到。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.01(t，J＝8.3Hz，3H)，7.63(d，J＝8.7Hz，2H)，6.42(dd，J＝16.8，1.1Hz，1H)，6.37(d，J＝2.2Hz，2H)，6.32(t，J＝2.2Hz，1H)，6.16(dd，J＝16.8，10.3Hz，1H)，5.75(dd，J＝10.3，1.0Hz，1H)，5.34(s，1H)，3.76(d，J＝8.4Hz，6H)，2.92-2.85(m，2H)，2.85-2.79(m，2H)。
FGFR抑制剂的酶学活性测试-Caliper模型
化合物对FGFR酶活的抑制是通过Caliper技术来检测的。模型中所采用试剂如下：FGFR4(Invitrogen，Cat.No PR4380A，Lot.No.1856505A)；FGFR1(Carna，Cat.No 08-133，Lot.No.12CBS-0123K)；P22 peptide(GL Biochem，Cat.No.112393，Lot.No.P170622-SL112393)；ATP(Sigma，Cat.No.A7699-1G，CAS No.987-65-5)；96-well plate(Corning，Cat.No.3365，Lot.No.22008026)；384-well plate(Corning，Cat.No.3573，Lot.No.12608008)。具体操作如下：
1.准备1X激酶缓冲液(20mM HEPES，pH 7.5，0.0015％Brij-35)和反应终止缓冲液(100mM HEPES，pH 7.5，0.015％Brij-35，0.2％Coating Reagent#3，50mM EDTA)
2.化合物首先被系列稀释在5％的DMSO溶液中，在384孔板中加入5μL化合物溶液，化合物最高终浓度为1μM，三倍稀释，10个浓度。
3.在384孔板中加入10μL激酶溶液，室温孵育10分钟。
4.在384孔板中加入10μL P22多肽和ATP溶液，在28℃反应特定时间后，加入25μL反应终止缓冲液。
5.用Caliper读值采集数据，并计算抑制率：抑制率＝(max-conversion)/(max-min)*100。其中max是DMSO参照，conversion是化合物处理读值，min是最大抑制参照。采用XLfit excel add-in version 5.4.0.8软件计算化合物IC50值
部分实施例和对照物对FGFR1和FGFR4体外实验抑制试验结果：
Figure GPA0000294590850000351
以上结果显示，当苯环中不含有不饱和酰胺键时，对照物aa对于FGFR4的抑制活性很差，当邻位引入不饱和酰胺键时，实施例1对于FGFR1和FGFR4的抑制活性都大大增强。当不饱和酰胺键还原为饱和酰胺键时，对照物bb对于FGFR1和FGFR4的抑制活性又变得很弱。而在间位或对位引入不饱和酰胺键时，对照物cc和dd的活性并没有提高。该数据说明，邻位的不饱和酰胺键能够与FGFR蛋白活性中心天然存在的半胱氨酸形成共价结合而大大提高抑制活性，而该共价键的形成对于不饱和酰胺键的区域选择性有很高的要求。
人肝癌细胞Hep3B存活试验
人肝癌Hep3B细胞株来源于ATCC。细胞用DMEM液体培养基培养，另外加入胎牛血清(10％FBS)、青霉素-链霉素(100,000U/L)。细胞在培养基中保持37℃、95％的湿度和5％的二氧化碳。实验时将Hep3B细胞以每孔3000个细胞的密度铺种于96孔板中，细胞悬液体积为每孔100μL，并培养细胞过夜，使细胞附着。次日，将各化合物以三倍梯度用DMSO稀释，将1μL化合物DMSO溶液加入细胞培养基中，同时以1μL DMSO作为对照，每个化合物的各浓度均设三个平行副孔。之后将细胞置于37℃培养箱，经连续72小时化合物处理后，向细胞培养基中添加50μL CellTiter-Glo(Promega，Madison WI)，并确定各孔的相对发光单位(RLU)并计算细胞存活率和化合物活性(IC50)。
实施例体外酶学和Hep3B细胞抑制活性结果：
实施例 化合物编号 FGFR1(nM) FGFR4(nM) Hep3B(nM)
AZD4547 1.2 44 69
BGJ398 1.1 84 16
1 F-4 3.4 3.5 4.1
2 F-14 3.9 9.7 0.33
3 F-15 1.3 3.2 0.15
4 F-16 2.2 2.3 1.0
5 F-19 19 11 21.3
6 F-21 1.3 2.4 0.37
7 F-25 1.3 4.3 0.33
8 F-31 2.0 6.3 0.27
9 F-32 2.0 5.0 0.55
10 F-34 23 41 12.7
11 F-35 10 9.4 0.74
12 F-36 1.8 3.1 0.73
13 F-37 1.9 3.8 0.4
14 F-38 11 6.0 0.35
15 F-39 1.1 2.5 0.93
16 F-40 4.3 4.9 0.26
17 F-41 1.8 6.2 0.37
18 F-46 2.8 6.7 0.64
19 F-49 1.2 1.9 0.4
20 F-50 6.0 6.2 1.1
21 F-51 2.5 3.0 0.5
FGFR抑制剂对于ERK磷酸化抑制的免疫印迹实验
(1)实验用人肝癌JHH-7细胞株来源于ATCC，均用RPMI-1640液体培养基培养，另外加入牛胎儿血清(10％FBS)、青霉素-链霉素(100,000U/L)。细胞在培养器中保持37℃、95％的湿度和5％的二氧化碳。将细胞以每孔5×105的数量接种于六孔板，培养液体积为每孔2ml。37℃培养箱培养过夜。次日，将10倍梯度稀释的化合物(AZD4547、BGJ398和实施例1)的DMSO溶液以2μL的体积加入细胞培养基中，使其终浓度分别为50nM，5nM，500pM，50pM和5pM，同时以2μL DMSO作为对照。
(2)化合物处理三小时后，将细胞从培养箱中取出，吸去培养液，加入适量预冷的1×PBS洗涤2次，吸去PBS，加入200μL含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液，冰上静止20min，充分裂解细胞，随即用细胞刮刀和移液器将细胞裂解液移入1.5ml EP管中，按比例加入4×loading buffer，100℃以上加热10分钟，12000g离心10分钟，取上清，用于蛋白电泳分析。
(3)选用8％的分离胶进行蛋白电泳。每孔上样量为10μL细胞裂解液。浓缩胶80V20分钟，分离胶120V 60分钟。当染料到达胶底部时切断电源，停止电泳，进行下一步转膜。
(4)本实验采用半干式转的转膜模式，转膜缓冲液配方：48mM Tris，39mMglycine，0.04％SDS，20％甲醇。恒流0.35A转膜60分钟。转膜前将PVDF膜在甲醇中浸泡1-2分钟，再与滤纸、蛋白胶一起孵育于冰冷的电转缓冲液中。
(5)膜的封闭及抗体孵育：膜用5％BSA室温封闭1小时。根据说明书按1∶1000稀释抗体(p-ERK1/2抗体，Cell Signaling Technology，货号4370；ERK1/2抗体，CellSignaling Technology，货号9102)，将膜在4℃孵育过夜。孵育一抗的膜用TBST洗涤3次，每次20min。再按照1∶3000稀释HRP标记的二抗，与膜室温孵育1h。用TBST洗涤3次，每次20min。
(6)ECL化学发光检测：配制ECL发光液，根据用量，取ECL发光液A和B等量混匀，加在膜的正面暗室避光5分钟。AI600(GE)进行发光检测。检测结果如图1中所示，结果显示，实施例1化合物对于ERK磷酸化抑制活性要优于阳性对照化合物。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (7)

1.一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐：
Figure 776695DEST_PATH_IMAGE001
其中，所述的化合物选自下组：
Figure 822011DEST_PATH_IMAGE002
Figure 748379DEST_PATH_IMAGE003
。
2.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括：(a) 作为活性成分的如权利要求1所述的式I化合物，或其可药用的盐，和(b) 药学上可接受的载体。
3.一种如式I所述的化合物及其可药用的盐的用途，其特征在于，用于制备治疗或预防与FGFR激酶活性或表达量相关的疾病的药物组合物。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的FGFR激酶选自下组：FGFR1、FGFR2、FGFR3，和FGFR4。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的疾病选自下组：膀胱癌、肝癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、子宫颈癌、结肠癌、甲状腺癌、皮肤癌、胆管癌、急性淋巴细胞白血病、B-细胞淋巴瘤、Burketts淋巴瘤、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、早幼粒细胞白血病、纤维肉瘤、横纹肌瘤、黑色素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、成神经细胞瘤、神经胶状瘤。
6.一种如式I所述的化合物及其可药用的盐的用途，其特征在于，用于制备FGFR激酶抑制剂。
7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的FGFR激酶选自下组：FGFR1、FGFR2、FGFR3，和FGFR4。
CN201980023858.0A 2018-03-30 2019-03-29 用作fgfr不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物 Active CN111936470B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810294249.6A CN110317173B (zh) 2018-03-30 2018-03-30 用作fgfr不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物
CN2018102942496 2018-03-30
PCT/CN2019/080483 WO2019185033A1 (zh) 2018-03-30 2019-03-29 用作fgfr不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111936470A CN111936470A (zh) 2020-11-13
CN111936470B true CN111936470B (zh) 2022-10-21

Family

ID=68059488

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810294249.6A Active CN110317173B (zh) 2018-03-30 2018-03-30 用作fgfr不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物
CN201980023858.0A Active CN111936470B (zh) 2018-03-30 2019-03-29 用作fgfr不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810294249.6A Active CN110317173B (zh) 2018-03-30 2018-03-30 用作fgfr不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物

Country Status (2)

Country Link
CN (2) CN110317173B (zh)
WO (1) WO2019185033A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20220298143A1 (en) * 2019-08-31 2022-09-22 Etern Biopharma (Shanghai) Co., Ltd. Pyrazole Derivatives for FGFR Inhibitor and Preparation Method Thereof
CN111253314B (zh) * 2020-03-16 2023-04-07 创沐医药科技(上海)有限公司 乙烯基磺酰胺基取代的吡唑基苯甲酰胺类化合物

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101611014A (zh) * 2006-12-21 2009-12-23 阿斯利康(瑞典)有限公司 用作fgfr抑制剂的酰氨基吡唑类化合物
CN102123989A (zh) * 2008-06-19 2011-07-13 阿斯利康(瑞典)有限公司 吡唑化合物436
CN105524048A (zh) * 2014-08-19 2016-04-27 上海海和药物研究开发有限公司 作为fgfr激酶抑制剂的吲唑类化合物及其制备和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101611014A (zh) * 2006-12-21 2009-12-23 阿斯利康(瑞典)有限公司 用作fgfr抑制剂的酰氨基吡唑类化合物
CN102123989A (zh) * 2008-06-19 2011-07-13 阿斯利康(瑞典)有限公司 吡唑化合物436
CN105524048A (zh) * 2014-08-19 2016-04-27 上海海和药物研究开发有限公司 作为fgfr激酶抑制剂的吲唑类化合物及其制备和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Approaches to selective fibroblast growth factor receptor 4 inhibition through targeting the ATP-pocket middle-hinge region;Robin A. Fairhurst等;《MedChemComm》;20170608;第8卷(第8期);1604-1613 *
Robin A. Fairhurst等.Approaches to selective fibroblast growth factor receptor 4 inhibition through targeting the ATP-pocket middle-hinge region.《MedChemComm》.2017,第8卷(第8期),1604-1613. *
靶向FGFR4的抗肿瘤药物研究进展;伍代朝等;《肿瘤防治研究》;20170120;第44卷(第1期);61-65 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111936470A (zh) 2020-11-13
WO2019185033A1 (zh) 2019-10-03
CN110317173B (zh) 2022-10-11
CN110317173A (zh) 2019-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100783447B1 (ko) 피리미딘 유도체
CN102574842B (zh) 用于抑制pi3激酶的吡啶基咪唑酮衍生物
KR20110020904A (ko) 피라졸 화합물 436
CN107613769A (zh) 某些化学实体、组合物和方法
WO2009019518A1 (en) Pyrimidine compounds having a fgfr inhibitory effect
EP2953951B1 (en) N2-substituted-n6-(6-aryl-pyridine-3-ylmethyl)-9-cyclopentyl-9h-purine-2,6-diamine derivatives as tumor suppressor p53 activators for inhibiting angiogenesis and for treating cancer
EP1831181A2 (en) Pyrimidine inhibitors of erk protein kinase and uses thereof
JP2009512636A (ja) 細胞増殖抑制作用を有するイミダゾ［１，２−ａ］ピリジン類
KR20190098266A (ko) 치환된 축합 헤테로아릴기 화합물인 키나제 억제제 및 이의 응용
EP4028393A1 (en) 3, 5-disubstituted pyrazole compounds as kinase inhibitors and uses thereof
KR20060135035A (ko) 유사분열 키네신 억제제
CN111936470B (zh) 用作fgfr不可逆抑制剂的酰胺基吡唑类化合物
CN101687863A (zh) 氨基-噻唑基-嘧啶衍生物及其治疗癌症的用途
CN110312717A (zh) 取代的稠合杂芳三环化合物作为激酶抑制剂及其应用
WO2020020377A1 (zh) 用作fgfr4抑制剂的稠环衍生物
CN107501279B (zh) 呋喃并喹啉二酮类化合物及其医药用途
KR20190115017A (ko) 암을 치료하기 위한 ck1 및/또는 irak1 억제제로서의 n1-(4-(5-(사이클로프로필메틸)-1-메틸-1h-피라졸-4-일)피리딘-2-일)사이클로헥산-1,4-디아민 유도체 및 관련 화합물
CN103313707A (zh) 二苯基-胺衍生物的用途、合成方法及药物组合物
CN104603133A (zh) 用于治疗癌症和免疫抑制的组合疗法
CN103059002B (zh) 具有Aurora激酶抑制活性的嘧啶衍生物及其制备方法以及应用
CN111718325A (zh) 一种2,4,5-取代嘧啶类化合物及其制备方法和应用
CN111253314B (zh) 乙烯基磺酰胺基取代的吡唑基苯甲酰胺类化合物
WO2021037219A1 (zh) 用于fgfr抑制剂的吡唑类衍生物及其制备方法
CN102731525A (zh) 苯并吗啉衍生物
WO2019056375A1 (zh) 酸敏感的吉非替尼轴向取代酞菁硅配合物及其制备方法和在医药上的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20221009

Address after: 2nd Floor, Building 13, No. 80, Lane 1505, Zuchong Road, China (Shanghai) Pilot Free Trade Zone, Pudong New Area, Shanghai, 201210

Applicant after: Shanghai Yituo Pharmaceutical Technology Co.,Ltd.

Address before: 200032 No. 345, Lingling Road, Shanghai, Xuhui District

Applicant before: SHANGHAI INSTITUTE OF ORGANIC CHEMISTRY, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant