CN111933216B - 肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途 - Google Patents
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- C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
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Abstract
本发明提供一种肠道微生物联合用于制备或筛选子痫前期检测产品的用途，所述肠道微生物选自具核梭杆菌属、韦荣氏菌属、梭菌属、毛螺旋菌属和乳球菌属中的一种或多种。本发明首次发现了肠道菌群在子痫前期疾病中的水平变化，通过检测菌群的变化，可以实现子痫前期的早期诊断，使用本发明的微生物标志物进行诊断，特异性高、敏感性强。检测对象采集处理简易、无侵害性、成本低；模型应用广泛，其应用对象不仅适用于大规模人群筛选，也可针对个体实现最终监测。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，特别是涉及肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途。
背景技术
子痫前期(Preeclampsia,PE)是以妊娠20周后出现血压升高和蛋白尿，同时伴随心血管功能、凝血功能、肝功能、肾功能等多脏器功能受损为特征的一组妊娠特异性症候群。PE的发生率为3-10％，全球每年约有850万新发病例，且近年来有增高趋势，是导致孕产妇、围产儿死亡的首要原因。因子痫前期和子痫死亡者约占孕产妇死亡的15％，其中有2/3与子痫前期有关。因此，对于子痫前期仍需要足够重视。
目前，PE的发病机制尚不明确。其发病被认为与多种因素相关，包括免疫功能、环境因素、遗传因素、营养状况、致病微生物及精神因素等。但缺乏有效的预防措施，常在妊娠中、晚期出现相应的临床症状后采取对症治疗，引起孕产妇及新生儿预后不良。早期识别PE高危人群并采取相应预防、干预措施，有助于降低PE发病率，改善母婴结局。目前的筛查方案包括PE高危因素评估、胎盘生长因子和可溶性血管内皮生长因子等生物标志分子，因其特异性和敏感性有限，限制了其临床应用的实施和普及。国际妊娠期高血压研究学会在2018年5月24日的指南中提出，迄今为止，在妊娠第一、二阶段，没有能够可靠预测子痫前期的方法。好的诊断方法应考察不同参数以优化方法，使其自身具备高敏感性、高特异性，同时在临床应用上应满足高通量、易操作、无侵害性和低成本等要求。因此建立简便、经济，且具有较高敏感性和特异性的综合筛查方案，当属产科临床的最关键环节之一。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供肠道微生物联合用于制备或筛选子痫前期检测产品的用途，所述肠道微生物选自具核梭杆菌属、韦荣氏菌属、梭菌属、毛螺旋菌属和乳球菌属中的一种或多种。
本发明第二方面提供肠道微生物的特异性识别试剂联合用于制备子痫前期检测试剂盒的用途，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自具核梭杆菌属的特异性识别试剂、韦荣氏菌属的特异性识别试剂、梭菌属的特异性识别试剂、毛螺旋菌属的特异性识别试剂和乳球菌属的特异性识别试剂中的一种或多种。
本发明第三方面提供一种子痫前期检测试剂盒，包括肠道微生物的特异性识别试剂，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自具核梭杆菌属的特异性识别试剂、韦荣氏菌属的特异性识别试剂、梭菌属的特异性识别试剂、毛螺旋菌属的特异性识别试剂和乳球菌属的特异性识别试剂中的一种或多种。
本发明第四方面提供一种子痫前期检测芯片，所述芯片包括固相载体，以及固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异性识别具核梭杆菌属、韦荣氏菌属和乳球菌属的基因序列。
本发明第五方面提供前述子痫前期检测试剂盒在子痫前期筛查、诊断或辅助诊断中的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：
1)提供受试者的粪便样本；
2)对所述粪便样本进行粪便细菌基因组DNA进行抽提；
3)采用肠道微生物的特异性识别试剂进行PCR扩增并测序获得测序数据；
4)对所述测序数据进行OUT聚类分析；
5)对步骤5中得到的OTU采用随机森林算法进行分析；
6)预测所述受试者是否为子痫前期。
如上所述，本发明的肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途，具有以下有益效果：本发明首次发现了肠道菌群在子痫前期疾病中的水平变化，通过检测菌群的变化，可以实现子痫前期的早期诊断，使用本发明的微生物标志物进行诊断，特异性高、敏感性强。检测对象采集处理简易、无侵害性、成本低；模型应用广泛，其应用对象不仅适用于大规模人群筛选，也可针对个体实现最终监测。
附图说明
图1是子痫前期患者同健康孕妇机器学习随机森林模型的构建图，A～C依次是通过随机森林筛选出的差异菌属对模型的贡献度，诊断模型的ROC曲线图和验证模型的曲线图。
图2是子痫前期患者与健康孕妇的LEfse结果图；
图3是目标菌属在子痫前期患者中的ROC曲线图，图A～I依次是Clostridium、Fusobacterium、Lachnospira、Lactococcus、Veillonella、Fusobacterium+Lactococcus、Fusobacterium+Veillonella、Lactococcus+Veillonella、Lactococcus+Veillonella+Fusobacterium在子痫前期患者中的ROC曲线图。
具体实施方式
本发明提供肠道微生物联合用于制备或筛选子痫前期检测产品的用途，所述肠道微生物选自具核梭杆菌属(Fusobacterium)、韦荣氏菌属(Veillonella)、梭菌属(Clostridium)、毛螺旋菌属(Lachnospira)和乳球菌属(Lactococcus)中的一种或多种。
其中，毛螺旋菌属和乳球菌属在患者粪便中水平降低，具核梭杆菌属、韦荣氏菌属和梭菌属在患者中水平增加。
进一步的，所述肠道微生物作为子痫前期检测的生物标志物。
所述子痫前期检测产品用于子痫前期的判断、诊断。
在一种实施方式中，所述子痫前期检测产品包括所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂。
所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂包括所述肠道微生物的特异性识别试剂。
在一种实施方式中，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自所述肠道微生物的特异性识别引物、探针、反义寡核苷酸、适配体或抗体。
在一种实施方式中，所述肠道微生物的特异性的引物是能够检测所述肠道微生物的包括16SrRNA及其他可识别所述微生物的基因序列的引物。
本发明提供的肠道微生物的特异性识别试剂联合用于制备子痫前期检测试剂盒的用途，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自具核梭杆菌属的特异性识别试剂、韦荣氏菌属的特异性识别试剂、梭菌属的特异性识别试剂、毛螺旋菌属的特异性识别试剂和乳球菌属的特异性识别试剂中的一种或多种。
进一步的，所述肠道微生物作为子痫前期检测的生物标志物。
所述子痫前期检测产品用于子痫前期的判断、诊断。
在一种实施方式中，所述子痫前期检测产品包括所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂。
所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂包括所述肠道微生物的特异性识别试剂。
在一种实施方式中，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自所述肠道微生物的特异性识别引物、探针、反义寡核苷酸、适配体或抗体。
在一种实施方式中，所述肠道微生物的特异性的引物是能够检测所述肠道微生物的包括16SrRNA及其他可识别所述微生物的基因序列的引物。
所述试剂盒可以包含测试管或其他合适的容器、反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)、Taq-聚合酶逆转录酶等酶、SYBR Green荧光染料、DEPC-水等。
本发明提供的一种子痫前期检测试剂盒，包括肠道微生物的特异性识别试剂，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自具核梭杆菌属的特异性识别试剂、韦荣氏菌属的特异性识别试剂、梭菌属的特异性识别试剂、毛螺旋菌属的特异性识别试剂和乳球菌属的特异性识别试剂中的一种或多种。
进一步的，所述肠道微生物作为子痫前期检测的生物标志物。
所述子痫前期检测产品用于子痫前期的判断、诊断。
在一种实施方式中，所述子痫前期检测产品包括所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂。
所述肠道微生物的微生物丰度检测试剂包括所述肠道微生物的特异性识别试剂。
在一种实施方式中，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自所述肠道微生物的特异性识别引物、探针、反义寡核苷酸、适配体或抗体。
在一种实施方式中，所述肠道微生物的特异性的引物是能够检测所述肠道微生物的包括16SrRNA及其他可识别所述微生物的基因序列的引物。
所述试剂盒可以包含测试管或其他合适的容器、反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)、Taq-聚合酶逆转录酶等酶、SYBR Green荧光染料、DEPC-水等。
本发明提供的一种子痫前期检测芯片，所述芯片包括固相载体，以及固定在固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针特异性识别具核梭杆菌属、韦荣氏菌属和乳球菌属的基因序列。
进一步的，所述肠道微生物作为子痫前期检测的生物标志物。
所述子痫前期检测芯用于子痫前期的判断、诊断。
在本发明中，术语“探针”指能与另一分子的特定序列或亚序列或其它部分结合的分子。除非另有指出，术语“探针”通常指能通过互补碱基配对与另一多核苷酸(往往称为“靶多核苷酸”)结合的多核苷酸探针。根据杂交条件的严谨性，探针能和与该探针缺乏完全序列互补性的靶多核苷酸结合。探针可作直接或间接的标记，其范围包括引物。杂交方式，包括，但不限于：溶液相、固相、混合相或原位杂交测定法。
本发明中的示例性探针包括PCR引物以及基因特异性DNA寡核苷酸探针，例如固定于微阵列基底上的微阵列探针、定量核酸酶保护检验探针、与分子条形码连接的探针、以及固定于珠上的探针。
所述探针具有与靶点基因的特定的碱基序列互补的碱基序列。这里，所谓“互补”，只要是杂交即可，可以不是完全互补。这些多核苷酸通常相对于该特定的碱基序列具有80％以上、优选90％以上、更优选95％以上、特别优选100％的同源性。这些探针可以是DNA，也可以是RNA，另外，可以为在其一部分或全部中核苷酸通过PNA(Polyamide nucleicacid，肽核酸)、LNA(locked nucleic acid，Bridged Nucleic Acid，交联化核酸)、ENA(2′-O,4′-C-Ethylene-bridged nucleic acids)、GNA(Glycerolnucleic acid，甘油核酸)、TNA(Threose nucleic acid，苏糖核酸)等人工核酸置换得到的多核苷酸。
所述“样本”包括细胞、组织、脏器、体液(血液、淋巴液等)、消化液、咳痰、肺胞支气管清洗液、尿、粪便等。优选的，所述样本为组织、血液。在本发明的具体实施方式中，所述样本为粪便。
术语“丰度差异”是指，与正常孕妇体内水平相比，在患有子痫前期的患者体内得到更高或更低水平的微生物。从本发明的目的出发，将“丰度差异”视为从正常的或患有疾病的受试者中，或从患有疾病的受试者的各分期中的取得的微生物水平1.5倍或以上、约4倍或以上、约6倍或以上、约10倍或以上的差异时存在的现象。
在本发明中，术语“引物”的意思是，能够形成与模板链互补的碱基对(basepair)，并且起到用于复制模板链的起始点作用的7个～50个核酸序列。引物通常合成而得，但也可以使用自然生成的核酸。引物的序列并不一定需要与模板的序列完全相同，只要充分互补而能够与模板杂交即可。可以混入不改变引物的基本性质的追加特征。作为可以混入的追加特征的例子，有甲基化、带帽、一个以上的核酸被同系物取代和核酸间的修饰，但不限于此。在本申请中，术语“16s rRNA”指构成原核生物核糖体的30S小亚单位的rRNA，其一方面碱基序列的大部分被高度保留，另一方面部分区域显示出高的碱基序列多样性。特别是在同种之间几乎不存在多样性而异种间显示出多样性，因此通过比较16SrRNA的序列，能够有效鉴定原核生物。
作为一个实施方式，在本发明中，上述引物可以用于扩增相应微生物中保留的16SrRNA及其他可识别所述微生物的基因序列，扩增序列后，通过期望的产物的生成与否，能够检测出微生物的存在或测定微生物水平。利用引物的序列扩增方法可以使用本领域已知的多种多样的方法。例如，可以使用聚合酶链式反应(PCR)、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、多重PCR、降落(touchdown)PCR、热启动(hot start)PCR、巢式(nested)PCR、增效(booster)PCR、实时(real-time)PCR、差示PCR(differential display PCR：DD-PCR)、cDNA末端快速扩增(rapid amplificationof cDNA ends：RACE)、反向(inverse)聚合酶链式反应、载体介导(vectorette)PCR、热不对称交错PCR(TAIL-PCR(thermal asymmetricinterlaced PCR))、连接酶链式反应、修复链式反应、转录-介导的扩增、自主序列复制(self-sustainedsequence replication)、目标碱基序列的选择性扩增反应，但本发明的范围不限于此。
本发明还提供前述子痫前期检测试剂盒在子痫前期筛查、诊断或辅助诊断中的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：
1)提供受试者的粪便样本；
2)对所述粪便样本进行粪便细菌基因组DNA进行抽提；
3)采用肠道微生物的特异性识别试剂进行PCR扩增并测序获得测序数据；
4)对所述测序数据进行OUT聚类分析；
5)对步骤5中得到的OTU采用随机森林算法进行分析；
6)预测所述受试者是否为子痫前期。
除此之外，可以将本领域广泛使用的分子免疫学方法用于本发明的检测微生物或测定微生物水平。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。
实施例1筛选与子痫前期相关的肠道菌群，构建和优化孕妇肠道菌群的检测模型，包括下列内容：
1.样本的采集
2017年6月～2018年6月于南方医院，分别收集健康孕妇85例和子痫前期患者的粪便各80例，保存在-80℃冰箱内。纳入标准为：样本采集前30天未服用抗生素、益生菌产品；孕前及孕早期未被诊断为高血压者；未曾服用过可能干扰糖、脂代谢药物者；未合并影响肠道微生态的疾病；不抽烟饮酒者。整个实验流程各项细节及以后的数据公布等事宜征得患者本人同意，并签署知情同意书。
2.16S rRNA测序
2.1采用酚抽提法提取细菌基因组DNA。
向盛有50mg粪便的离心管中加入500μL PBS(含5％吐温)混匀，80℃10min、60℃5min，反复冻融3次，加入40μL裂解液(含5μL Proteinase k(20mg/m1)、10μL RnaseA(0.1mg/mL)、25μL 10％SDS)混匀，55℃金属浴l h。加入75uL苯酚，混匀；加入等体积的PCI(苯酚、氯仿、异丙醇)，13000rpm，4℃离心10min。取上清液，加入等体积的PCI，13000rpm，4℃离心10min；取上清液，加入等体积的氯仿和1/10体积的3M NaOAc，混匀，13000rpm，4℃离心10min；取上清液，加入2.5倍体积的冰乙醇，混匀，13000rpm，4℃离心10min；弃上清，加入1ml 80％乙醇，混匀，7500rpm，4℃离心5min；弃上清，吸干残留的乙醇，加入50ul的ddH2O水重悬。DNA产物置于-20℃冰箱保存。
2.2DNA样本纯度及浓度测定
采用分光光度仪测定DNA浓度，电泳检测DNA完整性。使用ddH2O稀释至10ng/μlDNA用于构建16S扩增文库。
2.3 16S rRNA引物构建
为获得相对准确的种系发育信息，选取16S rRNA片段V4区作为PCR扩增目标片段。确定PCR上游引物(5’-NNNNNNNNN-GTGTGYCAGCMGCCGCGGTAA-3’)(SEQ ID NO：1)及下游引物(5’-NNNNNNNNN-CCGGACTACNVGGGTWTCTAAT-3’)(SEQ ID NO：2)，NNNNNNNN即barcode，是为区别不同样品来源而设计的随机组合的碱基，分别加入上下游引物的5’端，以完成多个样品同时在测序仪上测序。
2.4PCR扩增及产物纯化
配置12μl PCR反应体系：6μL的SYBR Green,各0.5μL上下游引物，5μL基因组DNA，在ABI7500荧光实时定量PCR仪上进行反应。反应条件设定为：95℃预变性2min，94℃变性30s，退火56℃25s，72℃延伸25s，共30个循环，最后72℃延伸5min。PCR产物混合后进行凝胶电泳，将琼脂糖胶放置在紫外灯下，割取约500bp长度的DNA条带，按照Qiagen MiniElute试剂盒提供的操作流程进行回收、纯化目的片段DNA。
2.5Hiseq测序
使用TruSeqTM DNA Sample Prep Kit进行文库的构建，具体步骤按照说明书进行。通过Illumina HiSeq2500平台进行双末端测序，长度为双末端250碱基。
3.数据分析
3.1数据预处理
使用SeqPrep软件对Hiseq测序得到的PE reads根据overlap关系进行拼接，同时对序列质量进行质控和过滤；以Greengenes数据库作为参考库，使用SortMeRNA软件进行聚类操作，将序列按照97％的相似性归为同一类OTU。
3.2肠道菌群物种差异分析
使用数据进行线性判别耦合效应分析(LEfse)，估算每个物种丰度对差异效果影响的大小。
3.3肠道菌群的随机森林分析
使用randomForest机器学习方法进行建模，挑选出现率高于10％的重要菌属，将每个样本的这些属的丰度作为特征向量，读入各样本的分组信息，设置决策树为500，随机选择特征向量及样本建立决策树预测样本所属组别，与实际情况对比并打分；决策树形成的随机森林，使用R语言randomForest程序包中的重要性分析函数对菌属在疾病中的重要性进行计算。
4.结果
结果显示(图1)，使用40例子痫前期与45例健康孕妇的肠道菌群数据进行建模，随机森林结果曲线下面积为97.27[95％CI：95.88，98.66]，进一步，使用与建模样本不同的另外40例子痫前期与40例健康孕妇的肠道菌群数据对上述模型进行验证，所得的验证结果曲线下面积为85.30％[95％CI:76.70,93.91]。
与健康孕妇相比，具核梭杆菌属(Fusobacterium)、韦荣氏菌属(Veillonella)、梭菌属(Clostridium)、毛螺旋菌属(Lachnospira)和乳球菌属(Lactococcus)的水平在子痫前期患者中呈现显著性差异(如图2所示)。
实施例2荧光定量PCR验证相关菌群
1.对上述菌群进行大样本qPCR验证，按照实施例1中的样本收集方式收集健康孕妇和子痫前期患者的粪便样本各100例。
2.粪便细菌DNA的提取
使用实施例1中的酚抽提法提取粪便标本中的细菌DNA；使用分光光度计检测所提粪便细菌总DNA浓度与纯度，并将所有样品DNA的质量浓度统一至10ng/μL。
3.实时荧光定量PCR
3.1引物设计与合成
设计针对具核梭杆菌属(Fusobacterium)、韦荣氏菌属(Veillonella)、梭菌属(Clostridium)、毛螺旋菌属(Lachnospira)和乳球菌属(Lactococcus)的特异性引物，并以16SrRNA通用引物作为参考基因，引物合成于上海生工生物工程有限公司。
3.2qPCR扩增检测
配置12μl反应体系：模板DNA 5μl，SYBR Green 6μl，目的细菌的上下游引物各0.5μl；反应条件为：95℃10min，95℃15s，60℃2min，共40个循环。
以SYBR Green作为荧光标记物，在ABI7500荧光实时定量PCR仪上进行PCR反应，ΔΔCT法进行相对定量。
3.3ROC曲线分析
使用logistics回归模型对具核梭杆菌属(Fusobacterium)、韦荣氏菌属(Veillonella)、梭菌属(Clostridium)、毛螺旋菌属(Lachnospira)、乳球菌属(Lactococcus)进行分析，并且用pROC程序包绘制ROC曲线。
3.4相关菌属联合应用的ROC曲线分析
使用logistics多元回归模型对Fusobacterium、Veillonella、Clostridium、Lachnospira和Lactococcus进行分析，并且用pROC程序包绘制ROC曲线。
4.结果
结果显示，与健康孕妇相比，子痫前期患者中的具核梭杆菌属、荣氏菌属、艾克曼菌属和柔嫩梭菌属呈现显著性差异(P<0.05)，同16SrRNA测序结果一致。
相关菌属的ROC曲线如图3所示，Fusobacterium、Veillonella和Lactococcus的AUC值高于0.7。其中，Veillonella具有较高的特异性和敏感性，应用于子痫前期具有较高的准确性。相关菌群的联合应用的AUC值如表1所示，具核梭杆菌属、荣氏菌属联合诊断相比单独应用具有较高的准确性。
表1相关菌属联合应用的AUC值
实施例3子痫前期诊断试剂盒的制备
根据Fusobacterium和Veillonella与子痫前期的相关性，可以通过检测样本中Fusobacterium和Veillonella的丰度来诊断子痫前期，据此本发明提供了一种基于检测Fusobacterium和Veillonella丰度的诊断儿童反复呼吸道感染的试剂盒。试剂盒组分如下：DNA提取试剂、特异性检测Fusobacterium和Veillonella的引物对，反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)、Taq-聚合酶逆转录酶、DEPC-水、SYBR Green荧光染料等。
实施例4子痫前期诊断试剂盒的制
根据Fusobacterium和Lactococcus与子痫前期的相关性，可以通过检测样本中Fusobacterium和Lactococcus的丰度来诊断子痫前期，据此本发明提供了一种基于检测Fusobacterium和Lactococcus丰度的诊断儿童反复呼吸道感染的试剂盒。试剂盒组分如下：DNA提取试剂、特异性检测Fusobacterium和Lactococcus的引物对，反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)、Taq-聚合酶逆转录酶、DEPC-水、SYBR Green荧光染料。
实施例5子痫前期诊断试剂盒的制备
根据Fusobacterium、Veillonella和Lactococcus与子痫前期的相关性，可以通过检测样本中Fusobacterium、Veillonella和Lactococcus的丰度来诊断子痫前期，据此本发明提供了一种基于检测Fusobacterium、Veillonella和Lactococcus丰度的诊断儿童反复呼吸道感染的试剂盒。试剂盒组分如下：DNA提取试剂、特异性检测Fusobacterium、Veillonella和Lactococcus的引物对，反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)、Taq-聚合酶逆转录酶、DEPC-水、SYBR Green荧光染料。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
序列表
<110> 南方医科大学珠江医院
<120> 肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
nnnnnnnnng tgtgycagcm gccgcggtaa 30
<210> 2
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
nnnnnnnnnc cggactacnv gggtwtctaa t 31
Claims (3)
1.肠道微生物的特异性识别试剂用于制备子痫前期检测产品的用途，所述肠道微生物的特异性识别试剂检测肠道微生物的丰度，所述肠道微生物选自具核梭杆菌属、韦荣氏菌属、梭菌属、毛螺旋菌属和乳球菌属中的一种或多种。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述子痫前期检测产品用于子痫前期的诊断。
3.如权利要求1或2任一项所述的用途，其特征在于，所述肠道微生物的特异性识别试剂选自所述肠道微生物的特异性识别引物、探针、反义寡核苷酸、适配体或抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910393791.1A CN111933216B (zh) | 2019-05-13 | 2019-05-13 | 肠道微生物作为子痫前期生物标志物的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
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| Remodeling of the gut microbiota and structural shifts in Preeclampsia patients in South China;J. Liu等;Eur J Clin Microbiol Infect Dis;第36卷(第4期);第713-719页 * |
| 子痫前期与肠道菌群;余婷等;国际妇产科学杂志;第46卷(第2期);第169-172页 * |
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