CN111926079A - 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用 - Google Patents

一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111926079A
CN111926079A CN202010830660.8A CN202010830660A CN111926079A CN 111926079 A CN111926079 A CN 111926079A CN 202010830660 A CN202010830660 A CN 202010830660A CN 111926079 A CN111926079 A CN 111926079A
Authority
CN
China
Prior art keywords
stem cells
target gene
kit
primer
cdh1
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010830660.8A
Other languages
English (en)
Inventor
喻堃
徐国锋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chengdu Regencell Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Chengdu Regencell Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chengdu Regencell Biotechnology Co ltd filed Critical Chengdu Regencell Biotechnology Co ltd
Priority to CN202010830660.8A priority Critical patent/CN111926079A/zh
Publication of CN111926079A publication Critical patent/CN111926079A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6858—Allele-specific amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/154—Methylation markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes

Abstract

本发明提供了一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用，属于干细胞技术领域，所述试剂盒包括P16、RASSF1A、GSTP1和CDH1四个目的基因对应的引物及内参基因β‑actin引物，所述试剂盒应用于快速检测传代干细胞恶性转化，本发明在检测干细胞恶性转化方面，具有操作简单、准确性好及敏感性高的优点。

Description

一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用
技术领域
本发明是申请号为201710483461.2的分案申请，原申请的申请日为2017.06.23，发明名称为一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒。
本发明属于干细胞技术领域，具体涉及一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用。
背景技术
目前，干细胞发展如火如荼。干细胞治疗领域的发展，将帮助人类实现修复创伤和病理组织，治愈终末期疾病的梦想，有望解决人类面临的诸多重大医学难题。
肿瘤的发生机制和细胞的起源是现今肿瘤学研究的热点和难点。肿瘤干细胞理论认为，肿瘤起源于与其自身组织或器官相关并具有其自身组织或器官特异性的干细胞的恶性转化。肿瘤的发生很可能是由于干细胞在长期的自我更新过程中发生基因突变，调控干细胞增殖分化的信号传导通路部分发生变化，干细胞在增殖分化过程中被不正常信号干扰而恶变为肿瘤干细胞，继而过度增殖形成肿瘤，干细胞常常是恶性转化的靶点细胞。但是，具体到某种肿瘤究竟由何种干细胞恶性转化产生，目前这方面的研究还比较少。
DNA甲基化是一项重要的表观遗传学机制，在人类癌症发生发展中发挥着重要的作用。特定基因的启动子区甲基化异常引起了人们的广泛关注，被认为是癌症诊断的潜在标志物。在癌症中只有极少数的单独基因被证明是甲基化比例很高的。因此，检测一组基因的甲基化状态，与检测单独基因的甲基化状态相比，诊断灵敏度更高、特异性更好。至今人们已研究了多种癌症的甲基化谱。对于一个理想的甲基化谱而言，准确的检测方法和逻辑的数据分析都是必不可少的。2012年，已经建立了一种统计多个基因的甲基化水平的方法，根据候选基因的甲基化水平进行癌症样本和正常样本的逐步累积分析。与以前的统计方法相比，这个方法充分考虑了不同基因的甲基化程度和影响，然而，这个方法需要对大量样本进行统计分析，因此很难应用于即时单个样本或少量样本的诊断。
发明内容
针对现有技术的缺点，本发明提供了一种操作简单、准确性好及敏感性高的试剂盒及其应用。该试剂盒包括P16、RASSF1A、GSTP1和CDH1四个目的基因对应的引物及内参基因β-actin引物，具体引物序列如下：
目的基因P16正向引物(SEQ ID NO.1)：TTATTAGAGGGTGGGGCGGATCGC
目的基因P16反向引物(SEQ ID NO.2)：GACCCCGAACCGCGACCGTAA
目的基因RASSF1A正向引物(SEQ ID NO.3)：GACCTCTGTGGCGACTTCATCTG
目的基因RASSF1A反向引物(SEQ ID NO.4)：GACCTAGTCCTCGGGAGCTGTC
目的基因GSTP1正向引物(SEQ ID NO.5)：TTCGGGGTGTAGCGGTCGTC
目的基因GSTP1反向引物(SEQ ID NO.6)：GCCCCAATACTAAATCACGACG
目的基因CDH1正向引物(SEQ ID NO.7)：TTAGGTTAGAGGGTTATCGCGT
目的基因CDH1反向引物(SEQ ID NO.8)：TAACTAAAAATTCACCTACCGAC
内参基因β-actin正向引物(SEQ ID NO.9)：GTGATGGAGGAGGTTTAG
内参基因β-actin反向引物(SEQ ID NO.10)：AAATTACAAAAACCACAA。
还包括所述四个目的基因P16、RASSF1A、GSTP1和CDH1甲基化位点对应的探针以及内参基因β-actin对应的探针，具体核苷酸序列如下：
目的基因P16探针：FAM-AGTAGTATGGAGTCGGCGGCGGG-TAMRA
目的基因RASSF1A探针：FAM-CCCTCTGCCGCGACTTGACCCG-TAMRA
目的基因GSTP1探针：FAM-CGGGGTGTAGCGGTCG-TAMRA
目的基因CDH1探针：FAM-TCGCGGGGTTCGTTTTTCGC-TAMRA
内参基因β-actin探针：FAM-CACCACCCAACACACAAT-TAMRA。
本发明所述试剂盒还包括PCR反应液、重亚硫酸盐。
本发明所述PCR反应液包括DNA聚合酶、dNTPs、10×PCR缓冲液和Mg2+。
所述干细胞包括肿瘤干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脂肪间充质干细胞中的任意一种或多种。
所述肿瘤干细胞包括肺癌干细胞、胃癌干细胞、肝癌干细胞、结肠癌干细胞中的一种或多种。
本发明的有益效果：
本发明在检测干细胞恶性转化方面，具有操作简单、准确性好及敏感性高的优点。
附图说明
图1为RT-PCR方法目的基因及内存基因扩增曲线图；
图2为未发生恶性转化干细胞培养20天后细胞形态；
图3为发生恶性转化干细胞培养90天后细胞形态。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例采用的Taq酶购于大连宝生物公司(TaKaRa)；细胞基因组提取试剂盒为AxyPrepTM Multisource Genomic DNAMiniprep Kit(Axygen Scientific,Inc.CA,USA)；硫化试剂盒为，EZ DNA Methylation kit(Zymo Research,Orange,CA,USA)；其他试剂为国产分析纯试剂。
本实施例所采用的干细胞为不同癌症组织分离的干细胞。
本实施例所涉及到的引物为：
目的基因P16正向引物：TTATTAGAGGGTGGGGCGGATCGC
目的基因P16反向引物：GACCCCGAACCGCGACCGTAA
目的基因RASSF1A正向引物：GACCTCTGTGGCGACTTCATCTG
目的基因RASSF1A反向引物：GACCTAGTCCTCGGGAGCTGTC
目的基因GSTP1正向引物：TTCGGGGTGTAGCGGTCGTC
目的基因GSTP1反向引物：GCCCCAATACTAAATCACGACG
目的基因CDH1正向引物：TTAGGTTAGAGGGTTATCGCGT
目的基因CDH1反向引物：TAACTAAAAATTCACCTACCGAC
内参基因β-actin正向引物：GTGATGGAGGAGGTTTAG
内参基因β-actin反向引物：AAATTACAAAAACCACAA。
方法：
一.干细胞提取DNA流程(DNA提取试剂盒，AxyPrepTM Multisource Genomic DNAMiniprep Kit(Axygen Scientific,Inc.CA,USA))
1.离心细胞：2000转/分钟离心细胞悬液2分钟，收集细胞，倒掉上层液体，加入4℃预冷的PBS 200ul，2000转/分钟离心细胞悬液2分钟，收集细胞，倒掉上层液体，加入200ulPBS溶解细胞。
2.加入25ul OB蛋白酶溶解液，混匀。
3.加入220ul BLBuffer
4.70℃水浴10min。
5.加入220ul无水乙醇混匀
6.将收集柱放入2ml收集管中，把步骤5中的液体加入收集柱中，
7.最大转速离心1min，大于等于10000转倒掉收集管中废液
8.收集管中加入500ul HBC Buffer最大转速(大于等于10000转)离心30s，
9.加入700ul DNA Wash Buffer最大转速(大于等于10000转)离心30s(2遍)
10.空离心收集管最大转速(大于等于10000转)离心2min
11.加入100ul dd水(加热到70℃)
12.静置2min，大转速(大于等于10000转)离心1min，收集DNA，测定浓度。
二、DNA硫化流程(DNA硫化试剂盒，ZYMO公司的EZ DNAMethylation-GoldTM Kitcatalog Nos.D5005&D5006)
1.对于CT conversion Reagent应用前，需每管加入900μl水，300μl的M-DilutionBuffer，50μl M-Dissolving Buffer到CT conversion Reagent；
2.硫化所使用的DNA的量为500ng，根据质量和浓度计算所加DNA体积，加入130μlCT-CR至20μl DNA样本中，如果DNA样本体积小于20μl，则加水补至20μl，混合后轻弹试管，然后低速离心将溶液至管底；
3.将配好的溶液进入热循环：
a.98℃10min
b.64℃2.5h
4.加入600μl M-Binding Buffer至Zymo-Spin IC Column，然后放入CollectionTube；
5.将第2步所得的DNA溶液放入Zymo-Spin IC Column，盖上盖子反复颠倒Column数次；
6.高速(大于10,000g)离心30s，弃滤液；
7.加入100μl M-Wash Buffer至Column，高速离心30s，弃滤液；
8.加入200μl M-Desulphonation Buffer至Column，室温(20-30℃)静置15-20min，孵育后高速离心离心30s，弃滤液；
9.加入200μl M-Wash Buffer至Column，高速离心30s；再加入200μl M-WashBuffer至Column，高速离心30s，弃滤液；
10.将Column至1.5ml microcentrifuge tube，加入15μl M-Elution Buffer至Column，高速离心30s，洗脱DNA。
三.RT-PCR流程(使用的荧光定量检测仪器为Invitrogen公司的7500fast，使用的试剂均为Invitrogen公司的Platinum TaqDNA聚合酶，货号为C10966-034；反应体系为20μl)
RT-PCR反应体系的配制以及反应条件如下表1和表2所示：
表1 RT-PCR反应体系的配制
组分 体积
模板 2ul
10×PCR Buffer 2ul
Mg<sup>2+</sup> 1ul
dNTPs(10um) 0.5ul
五个正向引物(10um) 各0.25ul，共1.25ul
五个反向引物(10um) 各0.25ul，共1.25ul
五个Probe(10um) 各0.2ul，共1ul
Taq酶(5U/ul) 0.2ul
超纯水 10.8ul
表2 RT-PCR反应条件
Figure BDA0002637834300000051
四、检测结果分析
利用上述反应体系对20例癌症干细胞样本进行检测，这20例干细胞样本运用甲基化特异性PCR方法对P16、RASSF1A、GSTP1、CDH1基因进行了验证，相应基因都发生了不同程度的甲基化(当四个基因同时发生甲基化，则认定干细胞已经恶化转化，下述“发生甲基化”均指四个基因同时甲基化)，其中包括7例肺癌干细胞(其中5例发生甲基化，2例没有发生甲基化)，5例胃癌干细胞(其中3例发生甲基化，2例没有发生甲基化)、5例肝癌干细胞(其中4例发生甲基化，1例没有发生甲基化)、3例结肠癌干细胞(3例都发生甲基化)；利用本发明的试剂盒检测结果如表3和图1所示。
表3 RT-PCR方法检测癌症干细胞甲基化结果
Figure BDA0002637834300000061
使用本发明的试剂盒可以快速准确的鉴定传代干细胞是否发生恶性转化，为干细胞的安全使用性提供技术保障。
五、干细胞长期培养试验
为了验证RT-PCR方法证实发生恶性转化的干细胞的真实性，对上述20例干细胞样本进行长期体外传代培养。方法如下所述：
1干细胞长期体外传代培养
(1)RT-PCR方法检测所在代干细胞长至80～90％融合后，开始进行细胞传代；
(2)吸出旧培养基，1×PBS洗两遍，加入0.25％胰蛋白酶/EDTA消化30s，待细胞回缩变圆，立即加入新鲜培养基终止消化，轻轻吹打；
(3)将吹打后的细胞悬液转移至10ml离心管，配平后400g离心10分钟；
(4)取沉淀的细胞以H-DMEM培养基稀释后以1:5的比例传至培养瓶或培养板中，2～3天换液，当细胞长满成致密单层时，可照上法再传代。
2细胞生长曲线MTT比色法
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
(1)接种细胞：用0.25％胰蛋白酶消化细胞，用基础培养基配制成单个细胞悬液，以每104个细胞接种于6块96孔板中，每孔体积200ul。
(2)培养细胞：将6块培养板放入37℃、5％CO2饱和湿度条件下培养。培养时间依次从6递减至1天。
(3)呈色：每天取出一块6孔板，每孔加入5mg/ml MTT溶液20ul，37℃继续孵育4小时终止培养，小心吸弃孔内培养上清液。每空加入150ulDMSO，震荡10min，使蓝紫色结物充分溶解。
(4)比色：选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值。
(5)绘图：以时间(天)为横轴，光吸收值(A)为纵轴，使用Excel软件绘制细胞生长曲线。
3干细胞长期传代培养结果
5例未发生甲基化干细胞在基础培养基长期体外培养下，生物学特征基本一致，平均存活时间为32天，细胞生长速率随传代逐渐变慢，平均细胞倍增时间从1.8天延长至3.8天，所有的未发生甲基化的干细胞始终保持成纤维样细胞形态并逐渐出现衰老实验，最终凋亡。结果如图2所示。
15例发生甲基化干细胞在基础培养基长期体外培养下，平均存活时间明显变长(平均时间在90天以上)，在培养至第10-20后天后，细胞生长速度明显加快，平均倍增时间从3.5天缩短至1.6天，细胞生长密度增加，失去正常的接触抑制，呈多层生长，发生甲基化干细胞在培养过程中呈现癌细胞生长特征，可以越过凋亡期，存活时间、生长速率及细胞形态等生物学特征均发生变化。结果如图3所示。
干细胞长期培养试验结果显示，通过本发明试剂盒检测出的发生恶性转化的干细胞在长期培养过程中出现细胞癌变的生长特征，进一步证明了本发明试剂盒的检测准确性，高效性。
序列表
<110> 成都睿杰森生物科技有限公司
<120> 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用
<160> 10
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ttattagagg gtggggcgga tcgc 24
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gaccccgaac cgcgaccgta a 21
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gacctctgtg gcgacttcat ctg 23
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gacctagtcc tcgggagctg tc 22
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ttcggggtgt agcggtcgtc 20
<210> 6
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gccccaatac taaatcacga cg 22
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
ttaggttaga gggttatcgc gt 22
<210> 8
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
taactaaaaa ttcacctacc gac 23
<210> 9
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
gtgatggagg aggtttag 18
<210> 10
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
aaattacaaa aaccacaa 18

Claims (6)

1.一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括P16、RASSF1A、GSTP1和CDH1四个目的基因对应的引物及内参基因β-actin引物，具体引物序列如下：
目的基因P16正向引物：TTATTAGAGGGTGGGGCGGATCGC
目的基因P16反向引物：GACCCCGAACCGCGACCGTAA
目的基因RASSF1A正向引物：GACCTCTGTGGCGACTTCATCTG
目的基因RASSF1A反向引物：GACCTAGTCCTCGGGAGCTGTC
目的基因GSTP1正向引物：TTCGGGGTGTAGCGGTCGTC
目的基因GSTP1反向引物：GCCCCAATACTAAATCACGACG
目的基因CDH1正向引物：TTAGGTTAGAGGGTTATCGCGT
目的基因CDH1反向引物：TAACTAAAAATTCACCTACCGAC
内参基因β-actin正向引物：GTGATGGAGGAGGTTTAG
内参基因β-actin反向引物：AAATTACAAAAACCACAA。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括所述四个目的基因P16、RASSF1A、GSTP1和CDH1甲基化位点对应的探针以及内参基因β-actin对应的探针，具体核苷酸序列如下：
目的基因P16探针：FAM-AGTAGTATGGAGTCGGCGGCGGG-TAMRA
目的基因RASSF1A探针：FAM-CCCTCTGCCGCGACTTGACCCG-TAMRA
目的基因GSTP1探针：FAM-CGGGGTGTAGCGGTCG-TAMRA
目的基因CDH1探针：FAM-TCGCGGGGTTCGTTTTTCGC-TAMRA
内参基因β-actin探针：FAM-CACCACCCAACACACAAT-TAMRA。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，还包括PCR反应液、重亚硫酸盐。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括DNA聚合酶、dNTPs、10×PCR缓冲液和Mg2+。
5.根据权利要求4所述的试剂盒在快速检测传代干细胞恶性转化上的应用，其特征在于，所述干细胞包括肿瘤干细胞、脐带间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脂肪间充质干细胞中的任意一种或多种；上述应用不用于疾病的诊断和治疗。
6.根据权利要求5所述的试剂盒在快速检测传代干细胞恶性转化上的应用，其特征在于，所述肿瘤干细胞包括肺癌干细胞、胃癌干细胞、肝癌干细胞、结肠癌干细胞中的一种或多种；上述应用不用于疾病的诊断和治疗。
CN202010830660.8A 2017-06-23 2017-06-23 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用 Pending CN111926079A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010830660.8A CN111926079A (zh) 2017-06-23 2017-06-23 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710483461.2A CN107119142A (zh) 2017-06-23 2017-06-23 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒
CN202010830660.8A CN111926079A (zh) 2017-06-23 2017-06-23 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710483461.2A Division CN107119142A (zh) 2017-06-23 2017-06-23 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111926079A true CN111926079A (zh) 2020-11-13

Family

ID=59719965

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010830660.8A Pending CN111926079A (zh) 2017-06-23 2017-06-23 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用
CN201710483461.2A Pending CN107119142A (zh) 2017-06-23 2017-06-23 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710483461.2A Pending CN107119142A (zh) 2017-06-23 2017-06-23 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (2) CN111926079A (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109097474A (zh) * 2018-08-29 2018-12-28 天津智鱼生物科技有限公司 一种rassf1a基因和p16基因甲基化检测的引物探针组合及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101153336A (zh) * 2006-09-27 2008-04-02 香港中文大学 检测dna甲基化程度的方法和试剂盒
US20090155791A1 (en) * 2007-07-19 2009-06-18 Aarhus Universitet Method for detecting methylation status by using methylation-independent primers
CN102628087A (zh) * 2012-04-25 2012-08-08 四川大学 肝癌早期预警和筛查试剂
US20150322512A1 (en) * 2014-05-09 2015-11-12 Lifecodexx Ag Multiplex detection of dna that originates from a specific cell-type

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101353695B (zh) * 2007-07-23 2013-05-01 上海市肿瘤研究所 尿沉淀dna甲基化谱式分析诊断膀胱癌的方法和试剂盒

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101153336A (zh) * 2006-09-27 2008-04-02 香港中文大学 检测dna甲基化程度的方法和试剂盒
US20090155791A1 (en) * 2007-07-19 2009-06-18 Aarhus Universitet Method for detecting methylation status by using methylation-independent primers
CN102628087A (zh) * 2012-04-25 2012-08-08 四川大学 肝癌早期预警和筛查试剂
US20150322512A1 (en) * 2014-05-09 2015-11-12 Lifecodexx Ag Multiplex detection of dna that originates from a specific cell-type

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
I-WEN TENG等: "Targeted Methylation of Two Tumor Suppressor Genes Is Sufficient to Transform Mesenchymal Stem Cells into Cancer Stem/Initiating Cells", 《CANCER RES》 *
JI SHIN LEE: "GSTP1 promoter hypermethylation is an early event in breast carcinogenesis", 《VIRCHOWS ARCHIV》 *
LIU, H等: "P16 Methylation as an Early Predictor for Cancer Development From Oral Epithelial Dysplasia: A Double-blind Multicentre Prospective Study.", 《EBIOMEDICINE》 *
WILLIAM M. GRADY等: "Methylation of the CDH1 promoter as the second genetic hit in hereditary diffuse gastric cancer", 《NATURE GENETICS》 *
XING CUI ET AL.: "Arsenic trioxide inhibits DNA methyltransferase and restores methylation-silenced genes in human liver cancer cells", 《HUMAN PATHOLOGY》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN107119142A (zh) 2017-09-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110964826B (zh) 一种结直肠癌抑癌基因甲基化高通量检测试剂盒及其应用
KR101569498B1 (ko) 위용종 및 위암 특이적 메틸화 마커 유전자를 이용한 위용종 및 위암의 검출방법
JP5394409B2 (ja) 肺癌特異的メチル化マーカー遺伝子を利用した肺癌検出方法
Chattopadhyay et al. Genome-wide analysis of chromosomal alterations in patients with esophageal squamous cell carcinoma exposed to tobacco and betel quid from high-risk area in India
US20090047667A1 (en) Salivary transcriptome diagnostics
WO2023071889A1 (zh) 用于检测胃癌淋巴结节转移相关的甲基化生物标记物或其组合及应用
CN110551818A (zh) 一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组、试剂盒及其应用
KR20160041905A (ko) 전암병변의 검출방법
KR20070088298A (ko) 바이오마커 스크리닝 시스템
WO2021180106A1 (zh) 一种检测消化道5种肿瘤的探针组合物
CN113462774A (zh) 一种癌症筛检的检验套组
Shih et al. Identification of novel keloid biomarkers through profiling of tissue biopsies versus cell cultures in keloid margin specimens compared to adjacent normal skin
CN112410425A (zh) 用于肝癌早期筛查的基因甲基化数字pcr试剂盒及其应用
CN109371138B (zh) 基于甲基化修饰的肿瘤标记物stamp-ep4
CN113025720B (zh) 一种用于检测原发性乳腺弥漫性大b细胞淋巴瘤的标志物及其试剂盒和应用
CN111926079A (zh) 一种快速检测传代干细胞恶性转化的试剂盒及其应用
WO2021169874A1 (zh) 一种检测3种管腔性器官肿瘤的探针组合物
CN109971860B (zh) 基于甲基化修饰的肿瘤标记物stamp-ep8及其应用
CN108588219B (zh) 一种用于早期膀胱癌检测的试剂盒及其使用方法
Yoshida et al. Screening of genes specifically activated in the pancreatic juice ductal cells from the patients with pancreatic ductal carcinoma
WO2021185275A1 (zh) 一种检测11种癌症的探针组合物
KR20060027893A (ko) 대장암 특이적 발현감소 유전자의 메틸화된 프로모터 및그 용도
Azarnezhad et al. Detection of CCND1, C-MYC, and FGFR1 amplification using modified SYBR Green qPCR and FISH in breast cancer
Croner et al. Comparability of microarray data between amplified and non amplified RNA in colorectal carcinoma
CN112195251B (zh) 一种用于宫颈癌早筛的分子标志物、引物、方法及试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination