CN110551818A - 一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组、试剂盒及其应用 - Google Patents
一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组、试剂盒及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110551818A CN110551818A CN201910749204.8A CN201910749204A CN110551818A CN 110551818 A CN110551818 A CN 110551818A CN 201910749204 A CN201910749204 A CN 201910749204A CN 110551818 A CN110551818 A CN 110551818A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- primer
- seq
- gene
- probe
- methylated
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000523 sample Substances 0.000 title claims abstract description 106
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 62
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 title claims abstract description 46
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 45
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 101000632056 Homo sapiens Septin-9 Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 101150006446 PAX1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 101150095033 CADM1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 101150106827 SFRP2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 101150118392 sdc-2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 76
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 15
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 15
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 15
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 15
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 claims description 14
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 claims description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 11
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 8
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 8
- 206010054949 Metaplasia Diseases 0.000 claims description 7
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 6
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 6
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 6
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 claims description 6
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000004804 Adenomatous Polyps Diseases 0.000 claims description 4
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 claims description 3
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 claims description 3
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000020082 intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 claims description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 claims 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 abstract description 17
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 abstract description 17
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 77
- 102000006818 Cell Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 description 16
- 108010072135 Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 16
- 101000692109 Homo sapiens Syndecan-2 Proteins 0.000 description 15
- 102100026087 Syndecan-2 Human genes 0.000 description 15
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 14
- 101000864786 Homo sapiens Secreted frizzled-related protein 2 Proteins 0.000 description 13
- 102100030054 Secreted frizzled-related protein 2 Human genes 0.000 description 13
- 102100028024 Septin-9 Human genes 0.000 description 11
- 101000613575 Homo sapiens Paired box protein Pax-1 Proteins 0.000 description 10
- 102100040851 Paired box protein Pax-1 Human genes 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 8
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 8
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 8
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 6
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 230000015689 metaplastic ossification Effects 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 208000037062 Polyps Diseases 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 206010017817 Gastric polyps Diseases 0.000 description 2
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000003837 Second Primary Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组，属于生物医学领域。所述引物探针组包括选自以下五组引物和探针中的至少两组：（1）甲基化的SDC2基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；（2）甲基化的SFRP2基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；（3）甲基化的SEPT9基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；（4）甲基化的CADM1基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；（5）甲基化的PAX1基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针。本发明同时检测两个或两个以上甲基化标记物，灵敏度高、特异性好、检测方便、成本低，可用于消化道肿瘤的早期筛查和辅助诊断。
Description
技术领域
本发明属于生物医学领域，具体涉及一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组、试剂盒及其应用。
背景技术
消化道肿瘤(肝癌、胰腺癌、食管癌、胃癌和结直肠癌)均是中国人群最常见的恶性肿瘤，2015年中国癌症统计数据显示肝癌、结食管癌、胃癌和结直肠癌均位列中国男性和女性癌症发病类型的前五位，其中肝癌高居中国癌症死亡率的第二位。当前消化道癌的早期诊治比例不足20％，在生存期方面，I期患者的5年生存率可达90％以上，而IV期患者只有略大于10％的生存率。因此，实现消化道癌的早期筛查和早诊早治对于提高患者的生存率进而提升全民健康水平有着重要意义。当前胃癌和食管癌早期筛查手段主要是内窥镜，但由于该方法对操作者要求高，难以推广，同时作为一种侵入性的检查方式，患者的接受度较低，导致中国的胃癌和食管癌早期发现率远低于发达国家水平。而肝癌和胰腺癌目前尚无一种有效早期筛查手段，因此往往发现时都已经到了中晚期。
非正常DNA甲基化在癌症的诱发和维持中起着重要作用，使之成为很多癌症的很好的生物标志物。游离循环肿瘤DNA(ctDNA)是由肿瘤细胞坏死或者凋亡后释放到体液中的单链或者双链DNA，对ctDNA进行检测，可以对肿瘤进行实时监控、早期诊断与预后判断等。但是目前通过单一甲基化ctDNA所开发的产品和相关研究报道在检出灵敏度上都不高，因此难以作为消化道肿瘤早期初筛的有效方法。
发明内容
由于消化道发育来自同一胚层，因此在组织结构上有很大的相似性，而且发病状态、筛查人群和筛查方式都有很大的相似性，本申请人考虑可以利用多基因甲基化检测联合技术开发一种针对消化道肿瘤的特异性的早期筛查试剂盒。
因此，本发明的目的在于提供一种适用于多种消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组、试剂盒及其应用，以解决针对当前单一甲基化ctDNA所开发的产品检出灵敏度不高、难以作为消化道肿瘤早期筛查或诊断的有效方法等问题。
为实现上述目的，一方面，本发明提供了一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组，该多基因检测引物探针组包括选自以下五组引物和探针中的至少两组：
(1)甲基化的SDC2基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；
(2)甲基化的SFRP2基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；
(3)甲基化的SEPT9基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；
(4)甲基化的CADM1基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；
(5)甲基化的PAX1基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针。
进一步的，所述甲基化的SDC2基因的正向引物选自SEQ ID NO：1～3中的任意一条、反向引物选自SEQ ID NO：4～6中的任意一条、Blocker引物选自SEQ ID NO：7～9中的任意一条、探针选自SEQ ID NO：10～12中的任意一条。
进一步的，所述甲基化的SFRP2基因的正向引物选自SEQ ID NO：13～15中的任意一条、反向引物选自SEQ ID NO：16～18中的任意一条、Blocker引物选自SEQ ID NO：19～21中的任意一条、探针选自SEQ ID NO：22～24中的任意一条。
进一步的，所述甲基化的SEPT9基因的正向引物选自SEQ ID NO：37～39中的任意一条、反向引物选自SEQ ID NO：40～42中的任意一条、Blocker引物选自SEQ ID NO：43～45中的任意一条、探针选自SEQ ID NO：46～48中的任意一条。
进一步的，所述甲基化的CADM1基因的正向引物选自SEQ ID NO：25～27中的任意一条、反向引物选自SEQ ID NO：28～30中的任意一条、Blocker引物选自SEQ ID NO：31～33中的任意一条、探针选自SEQ ID NO：34～36中的任意一条。
进一步的，所述甲基化的PAX1基因的正向引物选自SEQ ID NO：49～51中的任意一条、反向引物选自SEQ ID NO：52～54中的任意一条、Blocker引物选自SEQ ID NO：55～57中的任意一条、探针选自SEQ ID NO：58～60中的任意一条。
另一方面，本发明提供了一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的试剂盒，该试剂盒包含上述用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组。
进一步的，所述试剂盒还包括一组内参基因的正向引物、反向引物和探针，所述内参基因选自ACTB、GAPDH和HBB中的任意一个，所述ACTB的正向引物为SEQ ID NO:61所示序列、反向引物为SEQ ID NO:62所示序列、探针为SEQ ID NO:63所示序列；所述GAPDH的正向引物为SEQ ID NO:64所示序列、反向引物为SEQ ID NO:65所示序列、探针为SEQ ID NO:66所示序列；所述HBB的正向引物为SEQ ID NO:67所示序列、反向引物为SEQ ID NO:68所示序列、探针为SEQ ID NO:69所示序列。
进一步的，所述试剂盒检测的样本为由人源样本经过基因组DNA提取、经亚硫酸盐转化及纯化后获得的DNA样本，其中所述人源样本选自血液、粪便、唾液、痰液以及组织中的一种或多种。
另一方面，本发明提供了上述试剂盒作为检测、诊断或筛查消化道肿瘤或消化道癌前病变试剂的应用。
进一步的，所述消化道肿瘤包括胃癌、食管癌、肝癌、结直肠癌和胰腺癌，所述消化道癌前病变包含结直肠腺瘤性息肉、食管腺瘤性息肉、胃腺瘤性息肉、胃腺体肠化生、胃高等级不典型增生、食管高等级不典型增生、结直肠高等级不典型增生以及上述各类消化道组织高等级上皮内瘤变。
与现有技术相比，本发明具有以下有益技术效果：
本发明同时检测生物样本中与消化道癌或消化道癌前病变相关的两个或两个以上甲基化标记物，具有灵敏度高、特异性好、检出率高、检测方便以及成本低等优势，可用于消化道肿瘤的早期筛查和辅助诊断，实现消化道肿瘤的无创检测，进而实现消化道肿瘤的早诊早治。
附图说明
图1为甲基化CADM1和HBB引物探针组检测甲基化阳性样本扩增曲线图；
图2为甲基化PAX1和GAPDH引物探针组检测甲基化阳性样本扩增曲线图；
图3为甲基化SDC2和甲基化SEPT9引物探针组检测41例上消化道癌(10例食管癌和31例胃癌)血清样本和36例正常对照组血清样本的ROC曲线；
图4为甲基化SDC2和甲基化SFRP2引物探针组检测122例结直肠癌和91例正常对照组样本的ROC曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
一、引物和探针
表1各引物和探针序列
二、试剂盒的组分
1、多基因检测引物探针组
本发明的多基因检测引物探针组包括：甲基化的SDC2基因、SFRP2基因、CADM1基因、SEPT9基因和PAX1基因中的任意2个或2个以上基因的任一正向引物、任一反向引物、任一Blocker引物和任一探针。
所述SDC2基因、SFRP2基因、CADM1基因、SEPT9基因和PAX1基因所使用的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针的序列如SEQ ID NO:1～60所示，见表1。
2.一组内参基因的正向引物、反向引物和探针，所述内参基因选自ACTB、GAPDH和HBB中的任意一个，所述ACTB、GAPDH和HBB的正向引物、反向引物和探针的序列如SEQ IDNO:61～69所示，见表1。
3、PCR反应试剂：包含4种dNTPs混合溶液、Mg2+溶液、DNA聚合酶、PCR buffer、PCR去离子水。
4、阴性外质控
阴性外质控为SDC2基因、SFRP2基因、CADM1基因、SEPT9基因和PAX1基因均呈现甲基化阴性的基因组序列或合成基因序列。
5、阳性外质控
阳性外质控指SDC2基因、SFRP2基因、CADM1基因、SEPT9基因和PAX1基因均呈现甲基化阳性的基因组序列或合成基因序列。
三、试剂盒阳性判别标准
当内参基因有信号且甲基化的SDC2基因、SFRP2基因、CADM1基因、SEPT9基因和PAX1基因中任意一个基因为阳性则该样本判别为阳性。
四、检测样本和检测方法
本发明采用的检测方法为甲基化特异性荧光定量PCR，检测样本为由人源样本经过基因组DNA提取、经亚硫酸盐转化及纯化后获得的DNA。所述的人源样本包含且不限于血液、粪便、唾液、痰液、组织等。
五、具体实施例
下述实施例中所述试剂原料除特别注明来源外，均为市售的常见原料，试剂的配制采用常规方法。实施例中未详述的实验方法、测试手段均为本领域常规方法和手段，未注明的实验条件均为本领域常规条件。
实施例1：
1)选取CADM1正向引物、反向引物、Blocker引物和探针序列如下：SEQ ID NO:25,28,31,34；选取内参基因HBB，HBB的正反向引物和探针如SEQ ID NO:67～69所示；
2)在上述选取的引物和探针中加入0.4mM 4种dNTPs混合溶液、5mM Mg2+溶液、1.5X PCR buffer、0.1U/μL DNA聚合酶和PCR去离子水，检测消化道肿瘤甲基化阳性样本，结果如图1所示，该结果表明甲基化的CADM1扩增效果良好，其作为甲基化标记物可以有效检测消化道肿瘤。
实施例2：
1)选取PAX1正向引物、反向引物、Blocker引物和探针序列如下：SEQ ID NO:49,52,55,58；选取GADPH作为内参基因，GADPH的正反向引物和探针如SEQ ID NO:64～66所示；
2)在上述选取的引物和探针中加入0.5mM 4种dNTPs混合溶液、6mM Mg2+溶液、1XPCR buffer、0.08U/μL DNA聚合酶和PCR去离子水，检测消化道肿瘤甲基化阳性样本，结果如图2所示，该结果表明甲基化的PAX1基因同样扩增效果良好，作为甲基化标记物可以有效检测消化道肿瘤。
实施例3
1)选取SDC2、SFRP2、PAX1和CADM1正向引物、反向引物、Blocker引物和探针序列如下：SDC2:SEQ ID NO:2,5,8,11；SFRP2:SEQ ID NO：SEQ ID NO：14,17,20,23；PAX1：SEQ IDNO：50,53,56，59；CADM1：SEQ ID NO：26,29,32,35；选取ACTB为内参基因，ACTB的正反向引物和探针如SEQ ID NO:61～63所示；
2)加入0.5mM 4种dNTPs混合溶液、5mM Mg2+溶液、1X PCR buffer、0.1U/μL DNA聚合酶和PCR去离子水，同时检测79例胃癌血清样本，体积均为3.5mL；所有样本均是使用苏州唯善生物科技有限公司制造的游离DNA提取试剂盒和亚硫酸氢盐转化试剂盒进行处理后的样本。
3)同时采用CEA、CA72-4、CA19-9、CA242对上述79例胃癌血清样本进行检测，对比SDC2、SFRP2、PAX1和CADM1四种甲基化标记物联合检测与CEA、CA72-4、CA19-9、CA242四种血清蛋白标记物的检测效果，检测结果见表2。
表2.SDC2、SFRP2、PAX1和CADM1四种甲基化标记物联合检测与CEA、CA72-4、CA19-9、CA242四种血清蛋白标记物同时检测79个胃癌样本结果。
由表2可以看出：甲基化标记物联合检测灵敏度明显高于蛋白标记物，证明甲基化标记物联合检测是一种有效的消化道癌症早期检测方法。
实施例4
1)选取SDC2和SEPT9正向引物、反向引物、Blocker引物和探针序列如下：SDC2:SEQID NO:1,4,7,10；SEPT9:SEQ ID NO：37,40,43,46；选取ACTB为内参基因，ACTB的正反向引物、探针如SEQ ID NO:61～63所示。
2)加入0.4mM 4种dNTPs混合溶液、6mM Mg2+溶液、1X PCR buffer、0.1U/μL DNA聚合酶和PCR去离子水，同时检测41例上消化道癌(10例食管癌和31例胃癌)、16个胃肠化生、26个胃腺息肉血清样本和36例正常对照组血清样本；所有样本均是使用苏州唯善生物科技有限公司制造的游离DNA提取试剂盒和亚硫酸氢盐转化试剂盒进行处理后的样本。
3)对上述41例上消化道癌和36例正常对照组血清样本检测结果进行分析，以敏感性为纵坐标、1-特异性为横坐标作图绘制成ROC曲线，如图3所示，然后计算ROC曲线下的面积(AUC)。在本实施例中，计算出的AUC＝0.777(95％CI:0.673～0.882)，说明甲基化的SDC2和SEPT9引物探针组诊断上消化道癌的准确性较高。
同时，甲基化SDC2和SEPT9组合检测食管癌、胃癌、胃肠化生、胃腺息肉和正常对照组的检出率见表3。
表3.甲基化SDC2和SEPT9组合检测食管癌、胃癌、胃肠化生、胃腺息肉和正常对照组结果
| 样本分类 | 总数 | 阳性数 | 阳性率 |
| 胃癌 | 31 | 20 | 64.5％ |
| 食管癌 | 10 | 8 | 80.0％ |
| 胃肠化生 | 16 | 9 | 56.3％ |
| 胃腺息肉 | 26 | 9 | 34.6％ |
| 对照组 | 36 | 6 | 16.7％ |
由表3可以看出：甲基化SEPT9和SDC2组合可以很好的检出胃癌、食管癌等消化道癌症及胃肠化生、胃腺息肉等癌前病变；而且检出率与对照组样本有明显的差异。
实施例5
1)选取SDC2和SFRP2正向引物、反向引物、Blocker引物和探针序列如下：SDC2:SEQID NO:2,5,8,11；SFRP2:SEQ ID NO：14,17,20,23；选取ACTB为内参基因，ACTB的正反向引物和探针如SEQ ID NO:61～63所示；
2)加入0.5mM 4种dNTPs混合溶液、5mM Mg2+溶液、1X PCR buffer、0.1U/μL DNA聚合酶和PCR去离子水，同时检测122例结直肠癌血浆样本(结直肠癌组)和91例正常对照组血浆样本，体积均为1mL，所有样本均是使用苏州唯善生物科技有限公司制造的游离DNA提取试剂盒和亚硫酸氢盐转化试剂盒进行处理后的样本。对结直肠癌组和对照组检测结果进行分析，以敏感性为纵坐标、1-特异性为横坐标作图绘制成ROC曲线，如图4所示，然后计算AUC。在本实施实例中，甲基化的SDC2和SFRP2引物探针联合诊断结直肠癌的AUC＝0.856(95％CI:0.806～0.905)，说明检测的准确性较高。
实施例6
1)选取SEPT9、PAX1和CADM1正向引物、反向引物、Blocker引物和探针序列如下：SEPT9:SEQ ID NO：37,40,43,46；PAX1:SEQ ID NO:51,54,57,60；CADM1:SEQ ID NO:27,30,33,36；选取ACTB为内参基因，ACTB的正反向引物、探针如SEQ ID NO:61～63所示；
2)加入0.4mM 4种dNTPs混合溶液、5mM Mg2+溶液、1.5X PCR buffer、0.1U/μL DNA聚合酶和PCR去离子水，同时检测45例肝癌、21例胰腺癌和40例正常对照组血浆样本，所有样本均是使用苏州唯善生物科技有限公司制造的游离DNA提取试剂盒和亚硫酸氢盐转化试剂盒进行处理后的样本。检测结果见表4。
表4.甲基化SEPT9、PAX1和CADM1组合检测肝癌、胰腺癌和对照组样本。
| 样本分类 | 总数 | 阳性数 | 阳性率 |
| 肝癌 | 45 | 40 | 88.9％ |
| 胰腺癌 | 21 | 13 | 61.9％ |
| 对照组 | 40 | 1 | 2.5％ |
由表4可以看出：甲基化SEPT9、PAX1和CADM1组合检测可以检测出大部分的肝癌、胰腺癌，检出率较高，其对肝癌的检出率尤其高(达到将近90％)，而且检出率显著高于对照组样本，证明检测效果良好，可以用于消化道癌的早期筛查。
实施例7
1)选取SFRP2和CADM1正向引物、反向引物、Blocker引物和探针序列如下：SFRP2：SEQ ID NO:14,17,20,23；CADM1：SEQ ID NO:25,28,31,34；选取ACTB为内参基因，ACTB的正反向引物、探针如SEQ ID NO:61～63所示；
2)加入0.6mM 4种dNTPs混合溶液、6mM Mg2+溶液、1X PCR buffer、0.08U/μL DNA聚合酶和PCR去离子水，同时检测10例食管癌和36例正常对照组血清样本，所有样本均是使用苏州唯善生物科技有限公司制造的游离DNA提取试剂盒和亚硫酸氢盐转化试剂盒进行处理后的样本。检测结果见表5。
表5.甲基化SFRP2和CADM1联合检测食管癌样本。
由表5可以看出，甲基化SFRP2和CADM1联合检测可以检出80％的食管癌，相对于单一标记物检出率有明显提升，而对照组检出率仅有25％。证明甲基化SFRP2和CADM1联合检测可以作为消化道癌早期诊断的有效标记物组合。
本发明未详尽所有实施例，除上述实施例外，未具体举例说明的其他引物探针组合同样可以作为消化癌早期诊断的有效标记物组合，从而用于消化道癌的早期筛查。
以上已以较佳实施例公布了本发明，然其并非用以限制本发明，凡采取等同替换或等效变换的方案所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。
序列表
<110> 苏州唯善生物科技有限公司
<120> 一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组、试剂盒及其应用
<160> 69
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
cgcgttttcg gggcgtag 18
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
ctacgccccg aaaacgcg 18
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 3
ggaggaagcg agygtttt 18
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 4
gtttcggatt cgtgtgcgc 19
<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 5
gcgcacacga atccgaaac 19
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 6
cggattcgtg tgcgcgggtt 20
<210> 7
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 7
gtaggtgtag gaggaggaag tgag 24
<210> 8
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
ctcacttcct cctcctacac ctac 24
<210> 9
<211> 22
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 9
tttggggtgt agttgtgggt gg 22
<210> 10
<211> 17
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 10
cccgccgccc gcaacta 17
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 11
agttcgagtt ttcgagtttg ag 22
<210> 12
<211> 25
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 12
aactcgaaaa ctcgaactcg aaact 25
<210> 13
<211> 22
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 13
gtcgtcgttc gttcgtttta gg 22
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 14
tcgtcgttcg ttcgttttag 20
<210> 15
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 15
aacgaaacga ccgaaatt 18
<210> 16
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 16
cgcgaaatac cctacgtacc c 21
<210> 17
<211> 19
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 17
cgcgaaatac cctacgtac 19
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 18
gttagttttt tggggtttcg 20
<210> 19
<211> 29
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 19
atgtaccccc cactcctgca acctgtgcc 29
<210> 20
<211> 19
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 20
tcctgcaacc tgtgcccta 19
<210> 21
<211> 34
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 21
atgtaccccc cactcctgca acctgtgccc tact 34
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 22
tcccgcaacc cgcgccctac t 21
<210> 23
<211> 19
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 23
tcccgcaacc cgcgcccta 19
<210> 24
<211> 19
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 24
gaacttatcc cgaacccgc 19
<210> 25
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 25
attttattag ttgttcgttc gggt 24
<210> 26
<211> 25
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 26
gttgagggta tttgtgagtt ttttt 25
<210> 27
<211> 25
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 27
gatttttata ggtaggtgtg ggtat 25
<210> 28
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 28
ctcgacaaca ctacactcgc c 21
<210> 29
<211> 25
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 29
aaattatctt taaaccatcc ccttc 25
<210> 30
<211> 25
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 30
taaaaactct cattcacact taacc 25
<210> 31
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 31
acctacctca aactaatgat gttaactacc tctga 35
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 32
tttggtttgg tgcggggtgt 20
<210> 33
<211> 26
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 33
tgattggttg gtttttaaat ttttga 26
<210> 34
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 34
acctacctca aactaacgac gttaactacc tccga 35
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 35
ttcggtttgg cgcggggtgt 20
<210> 36
<211> 26
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 36
cgatcggttg gtttttaaat tttcga 26
<210> 37
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 37
aaataatccc atccaactac 20
<210> 38
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 38
gtagttggat gggattattt 20
<210> 39
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 39
aaataatccc atccaactac g 21
<210> 40
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 40
tcgtcgttgt ttttcgcgcg a 21
<210> 41
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 41
tcgcgcgaaa aacaacgacg a 21
<210> 42
<211> 25
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 42
cataataact aataaacaac raatc 25
<210> 43
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 43
ttggattttg tggttaatgt gtag 24
<210> 44
<211> 26
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 44
tgttggattt tgtggttaat gtgtag 26
<210> 45
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 45
gttattatgt tggattttgt g 21
<210> 46
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 46
atttcgcggt taacgcgt 18
<210> 47
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 47
acgcgttaac cgcgaaat 18
<210> 48
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 48
gttaaccgcg aaatccga 18
<210> 49
<211> 30
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 49
cggttagacg aatttttttt aatcggatga 30
<210> 50
<211> 29
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 50
ttcggttaga cgaatttttt ttaatcgga 29
<210> 51
<211> 31
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 51
agacgaattt tttttaatcg gatgaagttt a 31
<210> 52
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 52
cgcccgctcc aaaaccta 18
<210> 53
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 53
cgctaccgcc cgctccaa 18
<210> 54
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 54
cgcgctaccg cccgctcc 18
<210> 55
<211> 26
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 55
agtggtggtg gtaggttttg gagtgg 26
<210> 56
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 56
tggtggtggt aggttttgga gtgg 24
<210> 57
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 57
gtggtggtgg taggttttgg agtg 24
<210> 58
<211> 15
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 58
cccgcgaccc caaac 15
<210> 59
<211> 19
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 59
ctccacgccc gcgacccca 19
<210> 60
<211> 19
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 60
ccacgcccgc gaccccaaa 19
<210> 61
<211> 23
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 61
gtgatggagg aggtttagta agt 23
<210> 62
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 62
ccaataaaac ctactcctcc ctta 24
<210> 63
<211> 28
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 63
ccaccaccca acacacaata acaaacac 28
<210> 64
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 64
gttgggtatg gaggtttggt 20
<210> 65
<211> 25
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 65
ttcaccttcc ccataatatc taaac 25
<210> 66
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 66
gggaggcgtg tgtgtcggtc g 21
<210> 67
<211> 25
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 67
atttgatttt tgaggagaag tttgt 25
<210> 68
<211> 26
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 68
ccacataccc aatttctatt aatctc 26
<210> 69
<211> 22
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 69
gtggggtaag gtgaacgtgg at 22
Claims (11)
1.一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组，其特征在于，包括选自以下五组引物和探针中的至少两组：
（1）甲基化的SDC2基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；
（2）甲基化的SFRP2基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；
（3）甲基化的SEPT9基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；
（4）甲基化的CADM1基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针；
（5）甲基化的PAX1基因的正向引物、反向引物、Blocker引物和探针。
2.根据权利要求1所述的多基因检测引物探针组，其特征在于，所述甲基化的SDC2基因的正向引物选自SEQ ID NO：1~3中的任意一条、反向引物选自SEQ ID NO：4~6中的任意一条、Blocker引物选自SEQ ID NO：7~9中的任意一条、探针选自SEQ ID NO：10~12中的任意一条。
3.根据权利要求1所述的多基因检测引物探针组，其特征在于，所述甲基化的SFRP2基因的正向引物选自SEQ ID NO：13~15中的任意一条、反向引物选自SEQ ID NO：16~18中的任意一条、Blocker引物选自SEQ ID NO：19~21中的任意一条、探针选自SEQ ID NO：22~24中的任意一条。
4.根据权利要求1所述的多基因检测引物探针组，其特征在于，所述甲基化的SEPT9基因的正向引物选自SEQ ID NO：37~39中的任意一条、反向引物选自SEQ ID NO：40~42中的任意一条、Blocker引物选自SEQ ID NO：43~45中的任意一条、探针选自SEQ ID NO：46~48中的任意一条。
5.根据权利要求1所述的多基因检测引物探针组，其特征在于，所述甲基化的CADM1基因的正向引物选自SEQ ID NO：25~27中的任意一条、反向引物选自SEQ ID NO：28~30中的任意一条、Blocker引物选自SEQ ID NO：31~33中的任意一条、探针选自SEQ ID NO：34~36中的任意一条。
6.根据权利要求1所述的多基因检测引物探针组，其特征在于，所述甲基化的PAX1基因的正向引物选自SEQ ID NO：49~51中的任意一条、反向引物选自SEQ ID NO：52~54中的任意一条、Blocker引物选自SEQ ID NO：55~57中的任意一条、探针选自SEQ ID NO：58~60中的任意一条。
7.一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-6任一项所述的多基因检测引物探针组。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包括一组内参基因的正向引物、反向引物和探针，所述内参基因选自ACTB、GAPDH和HBB中的任意一个，所述ACTB的正向引物为SEQ ID NO：61所示序列、反向引物为SEQ ID NO：62所示序列、探针为SEQ ID NO：63所示序列；所述GAPDH的正向引物为SEQ ID NO：64所示序列、反向引物为SEQ ID NO：65所示序列、探针为SEQ ID NO：66所示序列；所述HBB的正向引物为SEQ ID NO：67所示序列、反向引物为SEQ ID NO：68所示序列、探针为SEQ ID NO：69所示序列。
9.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒检测的样本为由人源样本经过基因组DNA提取、经亚硫酸盐转化及纯化后获得的DNA样本，其中所述人源样本选自血液、粪便、唾液、痰液以及组织中的一种或多种。
10.权利要求7所述的试剂盒作为检测、诊断或筛查消化道肿瘤或消化道癌前病变试剂的应用。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述消化道肿瘤包括胃癌、食管癌、肝癌、结直肠癌和胰腺癌，所述消化道癌前病变包含结直肠腺瘤性息肉、食管腺瘤性息肉、胃腺瘤性息肉、胃腺体肠化生、胃高等级不典型增生、食管高等级不典型增生、结直肠高等级不典型增生以及各类消化道组织高等级上皮内瘤变。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910749204.8A CN110551818A (zh) | 2019-08-14 | 2019-08-14 | 一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组、试剂盒及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910749204.8A CN110551818A (zh) | 2019-08-14 | 2019-08-14 | 一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组、试剂盒及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110551818A true CN110551818A (zh) | 2019-12-10 |
Family
ID=68737511
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910749204.8A Pending CN110551818A (zh) | 2019-08-14 | 2019-08-14 | 一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组、试剂盒及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110551818A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111560434A (zh) * | 2020-05-18 | 2020-08-21 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 消化道肿瘤标记物检测的引物探针组、试剂盒、检测方法及其应用 |
| CN112011619A (zh) * | 2020-09-17 | 2020-12-01 | 山东大学深圳研究院 | Sfrp2作为标志物在乙型肝炎病毒相关肝细胞癌早期诊断中的应用及检测试剂盒 |
| CN112195243A (zh) * | 2020-09-22 | 2021-01-08 | 北京华大吉比爱生物技术有限公司 | 一种检测多基因甲基化的试剂盒及其应用 |
| CN112646891A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-04-13 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 消化道肿瘤标志物组合、检测试剂盒及其用途 |
| WO2021169874A1 (zh) * | 2020-02-25 | 2021-09-02 | 博尔诚（北京）科技有限公司 | 一种检测3种管腔性器官肿瘤的探针组合物 |
| WO2021180106A1 (zh) * | 2020-03-10 | 2021-09-16 | 博尔诚（北京）科技有限公司 | 一种检测消化道5种肿瘤的探针组合物 |
| CN116179692A (zh) * | 2022-10-20 | 2023-05-30 | 广州尔立简生物科技有限公司 | 一种用于筛查胃癌的引物探针组合物、试剂盒和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108796080A (zh) * | 2018-06-06 | 2018-11-13 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 用于结直肠癌诊断、检测或筛查的引物和探针组 |
| CN109097471A (zh) * | 2018-08-21 | 2018-12-28 | 杭州和壹基因科技有限公司 | 一种用于结直肠癌及癌前病变检测的试剂盒及其使用方法 |
| CN109811056A (zh) * | 2019-02-28 | 2019-05-28 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 用于结直肠癌及其癌前病变早期诊断、检测或筛查的引物探针组和试剂盒 |
-
2019
- 2019-08-14 CN CN201910749204.8A patent/CN110551818A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108796080A (zh) * | 2018-06-06 | 2018-11-13 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 用于结直肠癌诊断、检测或筛查的引物和探针组 |
| CN109097471A (zh) * | 2018-08-21 | 2018-12-28 | 杭州和壹基因科技有限公司 | 一种用于结直肠癌及癌前病变检测的试剂盒及其使用方法 |
| CN109811056A (zh) * | 2019-02-28 | 2019-05-28 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 用于结直肠癌及其癌前病变早期诊断、检测或筛查的引物探针组和试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 柏愚 等: "联合检测SDC2和SFRP2甲基化在结直肠癌筛查中的价值", 《中华消化内镜杂志》 * |
| 熊枝繁 等: "CADM1与DAL-1/4.1B在结直肠癌中的表达及临床意义", 《世界华人消化杂志》 * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021169874A1 (zh) * | 2020-02-25 | 2021-09-02 | 博尔诚（北京）科技有限公司 | 一种检测3种管腔性器官肿瘤的探针组合物 |
| WO2021180106A1 (zh) * | 2020-03-10 | 2021-09-16 | 博尔诚（北京）科技有限公司 | 一种检测消化道5种肿瘤的探针组合物 |
| CN111560434A (zh) * | 2020-05-18 | 2020-08-21 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 消化道肿瘤标记物检测的引物探针组、试剂盒、检测方法及其应用 |
| CN112011619A (zh) * | 2020-09-17 | 2020-12-01 | 山东大学深圳研究院 | Sfrp2作为标志物在乙型肝炎病毒相关肝细胞癌早期诊断中的应用及检测试剂盒 |
| CN112195243A (zh) * | 2020-09-22 | 2021-01-08 | 北京华大吉比爱生物技术有限公司 | 一种检测多基因甲基化的试剂盒及其应用 |
| CN112646891A (zh) * | 2020-12-30 | 2021-04-13 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 消化道肿瘤标志物组合、检测试剂盒及其用途 |
| WO2022143226A1 (zh) * | 2020-12-30 | 2022-07-07 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 消化道肿瘤标志物组合、检测试剂盒及其用途 |
| CN112646891B (zh) * | 2020-12-30 | 2023-09-05 | 苏州唯善生物科技有限公司 | 消化道肿瘤标志物组合、检测试剂盒及其用途 |
| CN116179692A (zh) * | 2022-10-20 | 2023-05-30 | 广州尔立简生物科技有限公司 | 一种用于筛查胃癌的引物探针组合物、试剂盒和应用 |
| CN116179692B (zh) * | 2022-10-20 | 2024-09-13 | 广州尔立简生物科技有限公司 | 一种用于筛查胃癌的引物探针组合物、试剂盒和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110551818A (zh) | 一种用于消化道肿瘤早期诊断、筛查或检测的多基因检测引物探针组、试剂盒及其应用 | |
| CN108350504B (zh) | 膀胱癌的诊断方法 | |
| EP2210942B1 (en) | Gene associated with liver cancer, and method for determination of the risk of acquiring liver cancer | |
| CN109811056A (zh) | 用于结直肠癌及其癌前病变早期诊断、检测或筛查的引物探针组和试剂盒 | |
| US10214778B2 (en) | Methods and nucleotide fragments of predicting occurrence, metastasis of cancers and patients' postoperative survival in vitro | |
| US20220307091A1 (en) | Unbiased dna methylation markers define an extensive field defect in histologically normal prostate tissues associated with prostate cancer: new biomarkers for men with prostate cancer | |
| WO2022143226A1 (zh) | 消化道肿瘤标志物组合、检测试剂盒及其用途 | |
| JP2022113769A (ja) | 食道新生物および／または食道における化生を検出するための方法および組成物 | |
| US12071672B2 (en) | Unbiased DNA methylation markers define an extensive field defect in histologically normal prostate tissues associated with prostate cancer: new biomarkers for men with prostate cancer | |
| US20120135877A1 (en) | DNA Methylation Markers For Prostate Cancer Field Defect | |
| CN109554476A (zh) | 基于甲基化修饰的肿瘤标记物stamp-ep3 | |
| CN112410425A (zh) | 用于肝癌早期筛查的基因甲基化数字pcr试剂盒及其应用 | |
| CN117363733B (zh) | Per1和lox双基因甲基化联合诊断的检测引物探针组在制备膀胱癌诊断试剂中的应用 | |
| CN111363811B (zh) | 基于foxd3基因的肺癌诊断剂及试剂盒 | |
| CN109371138A (zh) | 基于甲基化修饰的肿瘤标记物stamp-ep4 | |
| CN114107498B (zh) | 结直肠癌血液检测标记物及其应用 | |
| CN109971860A (zh) | 基于甲基化修饰的肿瘤标记物stamp-ep8及其应用 | |
| CN116064786A (zh) | 一种用于检测胃癌的组合物，试剂盒及其用途 | |
| WO2017167034A1 (zh) | 膀胱癌检测方法及套组 | |
| EP2978861B1 (en) | Unbiased dna methylation markers define an extensive field defect in histologically normal prostate tissues associated with prostate cancer: new biomarkers for men with prostate cancer | |
| TW201514308A (zh) | 偵測膀胱癌之新穎表基因生物標記及其方法 | |
| CN114045344A (zh) | 前列腺癌诊断用尿液miRNA标志物、诊断试剂及试剂盒 | |
| CN111363812B (zh) | 基于dmrta2基因的肺癌诊断剂及试剂盒 | |
| CN109988844A (zh) | 基于甲基化修饰的肿瘤标记物stamp-ep7及其应用 | |
| CN111549140B (zh) | 一种检测肺癌相关基因C2orf40、FIBIN和GRP甲基化的试剂盒及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20191210 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |