CN111909873B - 一组具有多环芳烃降解能力的混合菌及其筛选方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一组具有多环芳烃降解能力的混合菌及其筛选方法与应用。混合菌株包括嗜麦芽单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)SY‑1、芽孢杆菌(Bacillus sp)SY‑2和小麦苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)SY‑3，于2020年7月13日在中国典型微生物保藏中心保藏，Stenotrophomonas maltophilia SY‑1保藏号CCTCC M 2020310、Bacillus sp.SY‑2保藏号CCTCC M 2020309和Ochrobactrum tritici SY‑3保藏号CCTCC M 2020308。该混合菌能以高分子量多环芳烃苯并[a]芘为唯一碳源和能源生长，在实验室摇瓶条件下该菌株在一周内对50mg/L的苯并[a]芘降解率为39.2％，并且对其他高分子量多环芳烃(如芘)也有一定的降解效果。

Description

一组具有多环芳烃降解能力的混合菌及其筛选方法与应用

技术领域

本发明涉及一组微生物，具体涉及一组具有多环芳烃降解能力的混合菌及其筛选方法与应用。

背景技术

多环芳烃(PAHs)是由两个或两个以上苯环或杂环以线性、弯接或簇聚的方式构成的混合物，是一类广泛分布于环境中的持久性有机污染物。通常情况下，2～3环的PAHs称之为低分子量PAHs；4环及以上PAHs称之为高分子量PAHs。PAHs非常普遍的存在于环境中，由于其高毒性，难于降解，易于生物富集的特点而被重视。多环芳烃作为环境中现阶段最主要的有机污染物，具有生物富集性高、毒性高、极难降解等特点。PAHs的污染对人类身体状况造成了恶劣的影响而引起全世界的关注。国际癌症研究中心(IARC)于1976年发布了九十四种动物致癌物中PAHs占15.9％，多环芳烃已经被大部分国家列入最先治理的名单^[1]。

随着多环芳烃污染的问题逐渐严重，找到绿色、高效、经济的修复手段已经成为刻不容缓的问题。苯并芘是多环芳烃中最难降解的一类，因其毒性极大而众所周知，是致癌物质中被研究的最多的PAHs^[2]。目前，土壤中多环芳烃去除方法主要为物理、化学生物修复方法消耗高，耗能高，且易产生二次污染，需要进一步改进，相比之下，生物结合修复具有绿色安全、经济利用价值高、符合环保要求的特点。生物修复成为除去环境中PAHs的优选方法^[3]。然而目前微生物修复方法主要集中在四环及以下环数多环芳烃，五环及以上多环芳烃由于环数多，结构复杂，难于降解，最典型的是苯并[a]芘。

苯并[a]芘是第一个被发现的化学致癌物质，被世界卫生组织定为一级致癌物，同时也是多环芳烃中毒性最大的一种，约占环境中致癌多环芳烃化合物20％，它被包含在超级毒性化合物组中，并且其在生态系统的所有目标中的含量都受到强制控制。环境中的苯并芘散布与其他多芳烃类污染物有一定关联，是环境中污染重要检测项目之一。已有相关研究报道，某些农作物受到了PAHs的污染。Zohair^[4]对英国某有机农场中土壤PAHs含量进行测定，并考察了在该土壤下生长获得的不同品种马铃薯中富集的PAHs含量，结果显示苯并芘的最高含量可以达到15-20ug/kg，远超出了我国国标中规定的食物中的最大限定值5ug/kg，因此去除环境中PAHs成为一个迫在眉睫的问题。目前一些符合绿色发展理念的生物修复方法已经出现，但还不够完善，需要更好的降解菌，提高降解效率，缩短修复时间，筛选出具有高效降解多环芳烃的降解菌是目前要解决的重要问题。

本发明涉及的参考文献如下：

1.Wang C,Wu S,Zhou S,et al.Characteristics and Source Identificationof Polycyclic Aromatic Hydrocarbons(PAHs)in Urban Soils:A Review[J].Pedosphere,2017,27(1):17-26.

2.Gui,E.M,et al.,Optimisation of extraction methods andquantification of benzo[a]pyrene and benz[a]anthracene in yerba matétea byisotope dilution mass spectrometry[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry,2017,409(26):6069-6080.

3.Ni N,Song Y,Wang F,et al.A Review of Researches on Intensified Bio-Remediation of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons Contaminated Soils[J].ActaPedologica Sinica,2016,53:561-571.

4.Zohair A,Salim A B,Soyibo A A,et al.Residues of polycyclic aromatichydrocarbons(PAHs),polychlorinated biphenyls(PCBs)and organochlorinepesticides in organically-farmed vegetables[J].Chemosphere,2006,63(4):541-553.

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一组由嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)SY-1、芽孢杆菌(Bacillus sp.)SY-2和小麦苍白杆菌(Ochrobactrumtritici)SY-3组成的混合降解菌及其筛选方法与应用，该混合降解菌能高效降解多环芳烃，特别是能够降解高分子量多环芳烃苯并[a]芘。

本发明提供了一组具有多环芳烃降解能力的混合降解菌，所述混合菌可以降解多换芳烃；所述混合菌为按浓度比为1-10％v/v：1-10％v/v：1-10％v/v混合的嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)SY-1、芽孢杆菌(Bacillus sp.)SY-2和小麦苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)SY-3，所述嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)SY-1于2020年7月13日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为CCTCC M 2020310；所述芽孢杆菌(Bacillus sp.)SY-2于2020年7月13日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为CCTCC M 2020309；所述小麦苍白杆菌(Ochrobactrumtritici)SY-3于2020年7月13日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为CCTCC M2020308。

进一步地，上述技术方案中，所述多环芳烃为三环及三环以上多环芳烃。

优选的，所述多环芳烃为四环或五环芳烃。

进一步地，上述技术方案中，所述多环芳烃包括苯并[a]芘、芘和菲。

优选的，所述多环芳烃为苯并[a]芘。

本发明还提供了具有多环芳烃降解能力的混合菌的筛选方法，包括如下步骤：

(1)取石油污染土壤种植的根部带有土壤的水稻，将带有土壤的水稻根部超声清洗，得到带有根泥的清洗液，静置后取上清液备用；

(2)将步骤(1)所述上清液加入含有多环芳烃的无机盐培养基中，采用梯度筛选法摇床震荡培养，即得到具有多环芳烃降解能力的混合菌；

其中，所述梯度筛选法为以5mg/L为一个梯度逐步提升无机盐培养基中多环芳烃的终浓度，使多环芳烃在无机盐培养基中的终浓度为5～100mg/L。

进一步地，上述技术方案中，步骤(1)中静置的时间为10～60min。

进一步地，上述技术方案中，步骤(2)中摇床震荡培养的条件为30～37℃、140～170r/min摇床振荡培养3～15天。

进一步地，上述技术方案中，所述多环芳烃包括苯并[a]芘、芘和菲。

进一步地，上述技术方案中，梯度筛选时混合菌培养液的OD₆₀₀值调整为1，接种量为液体总体积的5％～10％。

进一步地，上述技术方案中，所述无机盐培养基为K₂HPO₄ 4.4g/L、KH₂PO₄ 1.7g/L、NH₄Cl 2.1g/L、NaCl 3g/L、酵母粉0.05g/L、基础盐溶液10mg/L、余量为水；

所述基础盐溶液为MgSO₄ 19.5g/L、MnSO₄.H₂O 5g/L、FeSO₄.H₂O 1g/L、CaCl₂.H₂O0.3g/L，滴加浓硫酸至沉淀消失。

本发明还提供了一组具有多环芳烃降解能力混合菌在修复多环芳烃对环境污染中的应用。

本发明提供的多环芳烃混合降解菌在实验室摇床条件下能够高效降解多环芳烃，特别是高分子量多环芳烃芘和苯并[a]芘，苯并[a]芘是第一个被发现的化学致癌物质且是多环芳烃中毒性最大的一种，目前对于苯并[a]芘的生物降解效果差，降解能力低，本发明的一组多环芳烃混合降解菌能耐受高浓度苯并[a]芘，目前结果表明本发明的混合菌能耐受100mg/L浓度的苯并[a]芘，且具有高效降解能力，在一周内降解50mg/L浓度的苯并[a]芘39.2％，同时对多环芳烃芘也具有良好的降解能力，在芘作苯并[a]芘的共代谢底物时，一周内对100mg/L的芘降解率为11.28％，为生物修复提供了良好的选择。

本发明提供的多环芳烃降解菌的筛选方法简便有效，易于操作。

附图说明

图1是菌株的菌落形态；A为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)SY-1、B为芽孢杆菌(Bacillus sp.)SY-2，C为小麦苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)SY-3。

图2是本发明所述混合菌的扫描电镜图片。

图3是不同苯并[a]芘浓度下混合菌的生长曲线图。

图4是不同pH条件下混合菌对苯并[a]芘的降解率图。

具体实施方式

下述非限定性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1多环芳烃混合降解菌的分离、纯化和鉴定

1.实施例中所涉及的无机盐培养基的组成如下：

无机盐培养基组成为：K₂HPO₄ 4.4g/L、KH₂PO₄ 1.7g/L、NH₄Cl 2.1g/L、NaCl 3g/L、酵母粉0.05g/L、基础盐溶液10mg/L、其余为水、pH7.0。

固体无机盐培养基组成为：K₂HPO₄ 4.4g/L、KH₂PO₄ 1.7g/L、NH₄Cl 2.1g/L、NaCl3g/L、酵母粉0.05g/L、基础盐溶液10mg/L、琼脂15mg/L，其余为水、pH7.0。

所述基础盐溶液为：MgSO₄ 19.5g/L、MnSO₄·H₂O 5g/L、FeSO₄·H₂O 1g/L、CaCl₂·H₂O 0.3g/L，滴加浓硫酸至沉淀消失。

苯并[a]芘的丙酮溶液：将苯并[a]芘溶于丙酮中，配制成2mg/mL的苯并[a]芘的丙酮溶液。

具体的筛选过程如下：

2.分离与纯化：取油田区石油污染土壤种植的水稻，将其带有土壤的水稻根部用无菌水进行简单清洗，洗去大块污泥，后将水稻根部放入无菌水中超声清洗，将装有100mL无机盐培养基的锥形瓶(容积250mL)进行灭菌，将水稻根部放入无菌水中超声清洗得到的带有根泥的清洗液加入到灭菌后的锥形瓶中，使锥形瓶中的清洗液体积为100mL，向锥形瓶中加入苯并[a]芘，使苯并[a]芘在培养基中的终浓度为5mg/L，将锥形瓶置于37℃、170r/min摇床中振荡培养14天后，取OD₆₀₀＝1的混合菌液按照10％体积接种到新鲜的无机盐培养基中，该无机盐培养基中加入了终浓度为10mg/L的苯并[a]芘。继续于37℃、170r/min摇床中振荡培养14天后，取OD₆₀₀＝1的混合菌液按照10％体积转接到苯并[a]芘终浓度为10mg/L的新鲜的无机盐培养基中于37℃、170r/min摇床中振荡培养14天，再次取OD₆₀₀＝1的混合菌液按照10％体积转接到苯并[a]芘终浓度为10mg/L的新鲜的无机盐培养基中于37℃、170r/min摇床中振荡培养14天后，再次取OD₆₀₀＝1的混合菌液按照10％体积转接到苯并[a]芘终浓度为20mg/L的新鲜的无机盐培养基中于37℃、170r/min摇床中振荡培养2代。(如果菌株纯化效果不好，可继续以5mg/L为一个梯度提升苯并[a]芘终浓度直至50mg/L进行混合菌的分离纯化。)

将OD₆₀₀＝1.0的菌液稀释成10^-6、10^-7、10^-8倍不同浓度梯度，分别为涂在表面有0.5mg苯并[a]芘的固体无机盐培养基平板上，挑出生长速度快且良好的三株不同菌株作为研究菌株(经分离与纯化步骤，培养基上仅筛选保留了三株菌株)，分别命名为SY-1、SY-2、SY-3。将三株菌在LB固体培养基上进行多次划线纯化培养。

3.菌落形态观察及生理生化性质测定

将纯化好的三株菌在LB平板上稀释培养，观察平板上菌落的生长形态，如图1A为菌株SY-1，菌落形成圆形、光滑、湿润、浅黄色的菌落，产生刺激的气味；图1B为菌株SY-2，菌落呈乳白色，形态为边缘整齐、不凸起、湿润，无皱褶，菌落较大；图1C为菌株SY-3，菌落较小呈无色，边缘光滑。后将LB培养的三株菌进行革兰氏染色后观察发现，SY-1为革兰氏阴性菌，SY-2为革兰氏阳性菌，SY-3为革兰氏阴性菌。

将三株菌的混合生长菌液前处理进行扫描电子显微镜观察。前处理过程为通过酒精浓度分别为30％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％梯度分别进行脱水10分钟，每个梯度脱水后8000转离心5min，最后100％脱水结束离心后将混合菌涂在玻璃片上用戊二醛固定30分钟，最后将固定的菌液放入50摄氏度的烘箱烘干水分和酒精，完成混合菌的固定处理。将处理过的混合菌通过扫描电镜观察经处理后的菌株形态，图2为混合菌的电镜形态。生理生化特征鉴定由梅里埃VITEK2 Compact全自动微生物鉴定仪完成，根据结果显示SY-1具有嗜麦芽单孢菌特性，SY-2具有芽孢杆菌特性，SY-3具有苍白杆菌特性。

4.16SrDNA的PCR扩增、序列分析和系统发育树的构建

筛选纯化的三株菌交由生工生物工程(上海)股份有限公司进行16SrDNA测序鉴定，将测序结果在NCBI官网进行在线查询分析，利用Blast软件在GenBank中与其它的16SrDNA序列进行同源性比较，使用MEGA7软件构建三株菌的16SrDNA进行系统发育树分析。结合该菌株的生理生化特征，菌株SY-1鉴定为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)，属革兰氏阴性菌，兼性好氧；菌株SY-2鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.)，属革兰氏阳性菌，兼性好氧；菌株SY-3鉴定为小麦苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)，属革兰氏阴性菌，兼性好氧。嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)的16SrDNA序列如SEQ ID NO.1所示，芽孢杆菌(Bacillus sp.)的16SrDNA序列如SEQ ID NO.2所示，小麦苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)的16SrDNA序列如SEQ ID NO.3所示。

嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)SY-1保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：武汉市武昌珞珈山，中国典型培养物保藏中心，邮编430072)，保藏日期为2020年7月13日。嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)SY-1的菌种保藏号为CCTCC M 2020310，分类命名为嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)，菌株名称SY-1。

芽孢杆菌(Bacillus sp.)SY-2保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：武汉市武昌珞珈山，中国典型培养物保藏中心，邮编430072)，保藏日期为2020年7月13日。芽孢杆菌(Bacillus sp.)SY-2的菌种保藏号为CCTCC M 2020309，分类命名为芽孢杆菌(Bacillus sp.)，菌株名称为SY-2。

小麦苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)SY-3保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：武汉市武昌珞珈山，中国典型培养物保藏中心，邮编430072)，保藏日期为2020年7月13日。小麦苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)SY-3的菌种保藏号为CCTCC M2020308，分类命名为小麦苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)，菌株名称为SY-3。

实施例2三株菌混合(后称混合菌)对多环芳烃的降解效果

设置实验，将三株菌单菌及其混合培养菌株的OD₆₀₀值调节为1.0，然后分别将菌株嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)SY-1、芽孢杆菌(Bacillus sp.)SY-2、小麦苍白杆菌(Ochrobactrum tritici)SY-3和三株菌株混合菌按照5％的体积比接种到以苯[a]并芘为唯一碳源的无机盐培养基中，培养基中苯并[a]芘的终浓度为10mg/L。通过实验看出单独接种三株菌株的培养基中，菌株的生长均极其缓慢，当三株菌株混合培养时生长迅速。后期使用混合菌进行降解实验。将培养所得混合菌室温下经过三次离心、清洗，离心机转速8500r/min，使用无菌水进行清洗，调节OD₆₀₀值为1.0，按照5％体积的接种量接种到装有含有苯并[a]芘的无机盐培养基的锥形瓶中，锥形瓶中液体终体积为100mL，苯并[a]芘的终浓度为10mg/L，设置6个平行样，6个空白对照，空白对照中加入同样的灭活混菌，苯并[a]芘为10mg/L，上述实验样品分别在14天、28天取3个降解样品，三个空白样品进行降解能力测定，测定方法为：将实验样品中加入3倍体积的乙酸乙酯(即300ml)进行萃取苯并[a]芘，萃取后使用分液漏斗分离有机相，分离后将有机相进行旋转蒸发浓缩，蒸干乙酸乙酯后使用20～100mL正己烷萃取苯并[a]芘，使用液相色谱仪对萃取液进行定量分析，以空白对照组的苯并[a]芘含量与降解组的苯并[a]芘平均含量差量为降解量，将降解量与空白对照苯并[a]芘含量的比值为降解率，即降解能力。结果显示，混合菌对10mg/L苯并[a]芘14天降解率为31.1％，28天降解率为66.21％。

实施例3混合菌对苯并[a]芘降解条件的优化

为了探究实施例1得到的混合菌对苯并[a]芘的降解能力的影响因素，进而优化其降解能力，调节不同的苯并[a]芘浓度、pH值、接种量、降解体系探索其对苯并[a]芘降解的最适条件。

将培养所得混合菌室温下经过三次离心、清洗(离心机转速8500r/min，使用无菌水进行清洗)，调节OD₆₀₀值为1.0，按照5％体积的接种量接种到装有含有苯并[a]芘的无机盐培养基的锥形瓶中，锥形瓶中液体终体积为100mL，苯并[a]芘的终浓度分别为10mg/L、20mg/L、50mg/L，每隔12小时测量一次混合菌的OD₆₀₀值，共检测120小时。通过实验发现，结果如图3所示，混合菌在10mg/L、20mg/L浓度苯并[a]芘中生长快速，10mg/L、20mg/L苯并[a]芘中生长72小时达到生物量最大值，OD₆₀₀达到1.48和1.98。在50mg/L苯并[a]芘中生长4天生物量最大值OD₆₀₀达到2.9，说明混合菌能够耐受50mg/L浓度苯并[a]芘，且生长状态良好。随后进行了苯并[a]芘终浓度为50mg/L的降解实验，其他条件与实施例2所述降解效果实验相同，结果混合菌对50mg/L浓度的对苯并[a]芘14天的降解率为39.2％。

将培养所得混合菌室温下经过三次离心、清洗(离心机转速8500r/min，使用无菌水进行清洗)，调节OD₆₀₀值为1.0，按照5％体积的接种量接种到装有含有苯并[a]芘的无机盐培养基的锥形瓶中，锥形瓶中液体终体积为100mL，苯并[a]芘的浓度为10mg/L，分别调节pH为5、6、7、8、9条件下的降解能力，其他条件与实施例2所述降解效果实验相同，结果如图4所示，混合菌在pH值为6的降解体系中降解能力最好为36％。

调节降解菌的接种量体积分别为1％和10％进行降解实验，其余步骤同实施例2，结果表明，混合菌的接种量为10％体积的降解率为46.48％，接种量为1％体积的降解率为43％。

对比不同降解体系对降解能力的影响，将降解菌分别置于40mL小棕瓶中和250mL透明锥形瓶中，小棕瓶中装液量10mL，透明锥形瓶中100mL，其他条件均与实施例2相同，降解14天后小棕瓶中混合菌对苯并[a]芘的降解率为18.75％，透明锥形瓶中混合菌对苯并[a]芘的降解率为31.1％，透明锥形瓶降解体系明显好于小棕瓶。

上述实施例只是用于对本发明的举例和说明，而非意在将本发明限制于所描述的实施例范围内。此外本领域技术人员可以理解的是，本发明不局限于上述实施例，根据本发明的教导还可以做出更多种的变型和修改，这些变型和修改均落在本发明所要求保护的范围内。

SEQUENCE LISTING

<110> 大连理工大学

<120> 一组具有多环芳烃降解能力的混合菌及其筛选方法与应用

<130> 2020

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1478

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 1

cagagtgaac gctggcggta ggcctaacac atgcaagtcg aacggcagca caggagagct 60

tgctctctgg gtggcgagtg gcggacgggt gaggaataca tcggaatcta ctttttcgtg 120

ggggataacg tagggaaact tacgctaata ccgcatacga cctacgggtg aaagcagggg 180

atcttcggac cttgcgcgat tgaatgagcc gatgtcggat tagctagttg gcggggtaaa 240

ggcccaccaa ggcgacgatc cgtagctggt ctgagaggat gatcagccac actggaactg 300

agacacggtc cagactccta cgggaggcag cagtggggaa tattggacaa tgggcgcaag 360

cctgatccag ccataccgcg tgggtgaaga aggccttcgg gttgtaaagc ccttttgttg 420

ggaaagaaat ccagctggct aatacccggt tgggatgacg gtacccaaag aataagcacc 480

ggctaacttc gtgccagcag ccgcggtaat acgaagggtg caagcgttac tcggaattac 540

tgggcgtaaa gcgtgcgtag gtggtcgttt aagtccgttg tgaaagccct gggctcaacc 600

tgggaactgc agtggatact gggcgactag agtgtggtag agggtagcgg aattcctggt 660

gtagcagtga aatgcgtaga gatcaggagg aacatccatg gcgaaggcag ctacctggac 720

caacactgac actgaggcac gaaagcgtgg ggagcaaaca ggattagata ccctggtagt 780

ccacgcccta aacgatgcga actggatgtt gggtgcaatt tggcacgcag tatcgaagct 840

aacgcgttaa gttcgccgcc tggggagtac ggtcgcaaga ctgaaactca aaggaattga 900

cgggggcccg cacaagcggt ggagtatgtg gtttaattcg atgcaacgcg aagaacctta 960

cctggccttg acatgtcgag aactttccag agatggattg gtgccttcgg gaactcgaac 1020

acaggtgctg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac 1080

gagcgcaacc cttgtcctta gttgccagca cgtaatggtg ggaactctaa ggagaccgcc 1140

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ctacacacgt actacaatgg tagggacaga gggctgcaag ccggcgacgg taagccaatc 1260

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cttgccacgg tgtggccgat gactggggtg aagtcgta 1478

<210> 2

<211> 1438

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 2

tcaggatgaa cgctggcggc gtgcctaata catgcaagtc gagcgaatgg attaagagct 60

tgctcttatg aagttagcgg cggacgggtg agtaacacgt gggtaacctg cccataagac 120

tgggataact ccgggaaacc ggggctaata ccggataaca ttttgaaccg catggttcga 180

aattgaaagg cggcttcggc tgtcacttat ggatggaccc gcgtcgcatt agctagttgg 240

tgaggtaacg gctcaccaag gcaacgatgc gtagccgacc tgagagggtg atcggccaca 300

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agctaatctc ataaaaccgt tctcagttcg gattgtaggc tgcaactcgc ctacatgaag 1320

ctggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcat gccgcggtga atacgttccc gggccttgta 1380

cacaccgccc gtcacaccac gagagtttgt aacacccgaa gtcggtgggg taaccttt 1438

<210> 3

<211> 1415

<212> DNA

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<400> 3

cagaacgaac gctggcggca ggcttaacac atgcaagtcg agcgccccgc aaggggagcg 60

gcagacgggt gagtaacgcg tgggaacgta ccttttgcta cggaataact cagggaaact 120

tgtgctaata ccgtatgtgc ccgaaagggg aaagatttat cggcaaagga tcggcccgcg 180

ttggattagc tagttggtga ggtaaaggct caccaaggcg acgatccata gctggtctga 240

gaggatgatc agccacactg ggactgagac acggcccaga ctcctacggg aggcagcagt 300

ggggaatatt ggacaatggg cgcaagcctg atccagccat gccgcgtgag tgatgaaggc 360

cctagggttg taaagctctt tcaccggtga agataatgac ggtaaccgga gaagaagccc 420

cggctaactt cgtgccagca gccgcggtaa tacgaagggg gctagcgttg ttcggattta 480

ctgggcgtaa agcgcacgta ggcggacttt taagtcaggg gtgaaatccc ggggctcaac 540

cccggaactg cctttgatac tggaagtctt gagtatggta gaggtgagtg gaattccgag 600

tgtagaggtg aaattcgtag atattcggag gaacaccagt ggcgaaggcg gctcactgga 660

ccattactga cgctgaggtg cgaaagcgtg gggagcaaac aggattagat accctggtag 720

tccacgccgt aaacgatgaa tgttagccgt tggggagttt actcttcggt ggcgcagcta 780

acgcattaaa cattccgcct ggggagtacg gtcgcaagat taaaactcaa aggaattgac 840

gggggcccgc acaagcggtg gagcatgtgg tttaattcga agcaacgcgc agaaccttac 900

cagcccttga cataccggtc gcggacacag agatgtgtct ttcagtttgg ctggaccgga 960

tacaggtgct gcatggctgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa 1020

cgagcgcaac cctcgccctt agttgccagc atttagttgg gcactctaag gggactgccg 1080

gtgataagcc gagaggaagg tggggatgac gtcaagtcct catggccctt acgggctggg 1140

ctacacacgt gctacaatgg tggtgacagt gggcagcgag cacgcgagtg tgagctaatc 1200

tccaaaagcc atctcagttc ggattgcact ctgcaactcg agtgcatgaa gttggaatcg 1260

ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc 1320

cgtcacacca tgggagttgg ttttacccga aggcgctgtg ctaaccgcaa ggaggcaggc 1380

gaccacggta gggtcagcga ctggggtgaa gtcgt 1415

Claims (2)

1.一组具有多环芳烃降解能力的混合菌，其特征在于：所述混合菌降解多环芳烃，所述多环芳烃为苯并[a]芘；所述混合菌由嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）SY-1、芽孢杆菌（Bacillus sp.）SY-2和小麦苍白杆菌（Ochrobactrum tritici）SY-3组成，所述嗜麦芽窄食单胞菌（Stenotrophomonas maltophilia）SY-1于2020年7月13日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为 CCTCC M 2020310；所述芽孢杆菌（Bacillus sp.）SY-2于2020年7月13日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为CCTCC M 2020309 ；所述小麦苍白杆菌（Ochrobactrum tritici）SY-3于2020年7月13日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为CCTCC M 2020308。

2.权利要求1所述的一组具有多环芳烃降解能力的混合菌在修复多环芳烃对环境污染中的应用，所述多环芳烃为苯并[a]芘。

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