CN111902532A - 用于癌症治疗的精氨酸酶抑制 - Google Patents
用于癌症治疗的精氨酸酶抑制 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111902532A CN111902532A CN201980021913.2A CN201980021913A CN111902532A CN 111902532 A CN111902532 A CN 111902532A CN 201980021913 A CN201980021913 A CN 201980021913A CN 111902532 A CN111902532 A CN 111902532A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- cells
- arginase
- immune
- expression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 148
- 108700024123 Arginases Proteins 0.000 title claims abstract description 133
- 102000004452 Arginase Human genes 0.000 title claims abstract description 132
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 70
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 50
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title description 11
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 claims abstract description 142
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 90
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 83
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 69
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 61
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 claims abstract description 52
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims abstract description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 128
- 102100030356 Arginase-2, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 24
- 101000792835 Homo sapiens Arginase-2, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 23
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 23
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 21
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 18
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 17
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 17
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 15
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 15
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 15
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 14
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 14
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 14
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 13
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 13
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 claims description 10
- 102100038929 V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Human genes 0.000 claims description 10
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 claims description 10
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 101001021491 Homo sapiens HERV-H LTR-associating protein 2 Proteins 0.000 claims description 8
- 229940123309 Immune checkpoint modulator Drugs 0.000 claims description 8
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 8
- 102100038078 CD276 antigen Human genes 0.000 claims description 6
- 102100035943 HERV-H LTR-associating protein 2 Human genes 0.000 claims description 6
- 101000955999 Homo sapiens V-set domain-containing T-cell activation inhibitor 1 Proteins 0.000 claims description 6
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 claims description 6
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 5
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 claims description 4
- 102000000506 Adenosine A2 Receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 108010041368 Adenosine A2 Receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 4
- 101710185679 CD276 antigen Proteins 0.000 claims description 4
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100029722 Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 claims description 4
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 claims description 4
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 claims description 4
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 claims description 4
- 101001012447 Homo sapiens Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000868279 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD47 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 claims description 4
- 101000596234 Homo sapiens T-cell surface protein tactile Proteins 0.000 claims description 4
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 4
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 102100032913 Leukocyte surface antigen CD47 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 claims description 4
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 claims description 4
- 102100035268 T-cell surface protein tactile Human genes 0.000 claims description 4
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 claims description 4
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 claims description 4
- 108010079206 V-Set Domain-Containing T-Cell Activation Inhibitor 1 Proteins 0.000 claims description 4
- IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N fluquinconazole Chemical compound C=1C=C(Cl)C=C(Cl)C=1N1C(=O)C2=CC(F)=CC=C2N=C1N1C=NC=N1 IJJVMEJXYNJXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 3
- -1 VSIG Proteins 0.000 claims description 3
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 claims description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 claims description 2
- 102100026882 Alpha-synuclein Human genes 0.000 claims 2
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 claims 1
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 claims 1
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 claims 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 16
- 230000035772 mutation Effects 0.000 abstract description 10
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 8
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 abstract description 6
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 abstract description 6
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 abstract description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 abstract description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 abstract description 5
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract description 5
- 229940080328 Arginase inhibitor Drugs 0.000 abstract description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 50
- 101150026173 ARG2 gene Proteins 0.000 description 45
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 24
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 22
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 22
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 19
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 17
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 15
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 15
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 13
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 13
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 13
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 102100021723 Arginase-1 Human genes 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 108091033773 MiR-155 Proteins 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 9
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 9
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 8
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- 101000752037 Homo sapiens Arginase-1 Proteins 0.000 description 7
- 101000800287 Homo sapiens Tubulointerstitial nephritis antigen-like Proteins 0.000 description 7
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 7
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 7
- 102000008299 Nitric Oxide Synthase Human genes 0.000 description 6
- 108010021487 Nitric Oxide Synthase Proteins 0.000 description 6
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 6
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 5
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 5
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 5
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 5
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 239000002924 silencing RNA Substances 0.000 description 5
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 5
- 101710129000 Arginase-1 Proteins 0.000 description 4
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 4
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 4
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 4
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 101710120463 Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 description 3
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 description 3
- 108010034634 Repressor Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000009661 Repressor Proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 3
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 238000010362 genome editing Methods 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 3
- 210000004964 innate lymphoid cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein succinimidyl ester Chemical compound C=1C(O)=CC=C2C=1OC1=CC(O)=CC=C1C2(C1=C2)OC(=O)C1=CC=C2C(=O)ON1C(=O)CCC1=O VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 2
- 238000009172 cell transfer therapy Methods 0.000 description 2
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 2
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005746 immune checkpoint blockade Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 2
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 2
- 101100327165 Arabidopsis thaliana CCD8 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100423701 Arabidopsis thaliana OVA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710186578 Arginase-2, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 108010008629 CA-125 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 238000011357 CAR T-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011523 CAR-T cell immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 102000003846 Carbonic anhydrases Human genes 0.000 description 1
- 108090000209 Carbonic anhydrases Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 1
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 1
- 201000001342 Fallopian tube cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000013452 Fallopian tube neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- 102000010782 Interleukin-7 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038498 Interleukin-7 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000012218 Kunkel's method Methods 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012220 PCR site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 208000026149 Primary peritoneal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical class C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GQLCLPLEEOUJQC-ZTQDTCGGSA-N [(1r)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-1-[3-[2-[2-[[2-[3-[(1r)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-1-[(2s)-1-[(2s)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)butanoyl]piperidine-2-carbonyl]oxypropyl]phenoxy]acetyl]amino]ethylamino]-2-oxoethoxy]phenyl]propyl] (2s)-1-[(2s)-2-(3,4,5-trimethoxyph Chemical compound C([C@@H](OC(=O)[C@@H]1CCCCN1C(=O)[C@@H](CC)C=1C=C(OC)C(OC)=C(OC)C=1)C=1C=C(OCC(=O)NCCNC(=O)COC=2C=C(C=CC=2)[C@@H](CCC=2C=C(OC)C(OC)=CC=2)OC(=O)[C@H]2N(CCCC2)C(=O)[C@@H](CC)C=2C=C(OC)C(OC)=C(OC)C=2)C=CC=1)CC1=CC=C(OC)C(OC)=C1 GQLCLPLEEOUJQC-ZTQDTCGGSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000011467 adoptive cell therapy Methods 0.000 description 1
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011712 cell development Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000037011 constitutive activity Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 1
- 108010087914 epidermal growth factor receptor VIII Proteins 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000004077 genetic alteration Effects 0.000 description 1
- 231100000118 genetic alteration Toxicity 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 201000010659 intrinsic asthma Diseases 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000002220 organoid Anatomy 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229950004008 rimiducid Drugs 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 208000012201 sexual and gender identity disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015891 sexual disease Diseases 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000007761 synergistic anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 230000004143 urea cycle Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
- C12Y305/03—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in linear amidines (3.5.3)
- C12Y305/03001—Arginase (3.5.3.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/50—Colon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/57—Skin; melanoma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/70—Enzymes
- C12N2501/73—Hydrolases (EC 3.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及一种治疗癌症的方法，所述癌症包括血液学癌症和实体瘤。在实施例中，所述方法包括损害免疫细胞(特别是患有癌症的患者的T细胞)中的精氨酸酶活性和/或表达。通过精氨酸酶编码基因的突变(包括缺失或截短)、RNA干扰或精氨酸酶抑制剂的施用可能会损害精氨酸酶的表达。在优选的实施例中，T细胞在CAR(嵌合抗原受体)治疗框架中进行修饰。本发明还提供了将精氨酸酶活性受损与抗体介导的负性免疫检查点调节剂的阻断(PDL1‑PD1和B7‑CTLA4抑制途径)组合的治疗方法。
Description
技术领域
本发明涉及用于治疗癌症的免疫细胞、试剂盒、方法和组合物，特别是在癌症免疫疗法和/或过继细胞转移疗法领域。本发明还涉及用于生产细胞、试剂盒和组合物的方法。
背景技术
免疫系统在抑制恶性肿瘤的发生、抑制肿瘤进展和促进肿瘤消除方面发挥根本作用。为了逃逸免疫监视，肿瘤倾向于执行多种逃逸机制。免疫逃逸策略包括产生抗炎细胞因子、募集包含调节性T细胞(Tregs)和髓样来源的抑制性细胞(MDSC)的抑制性细胞、负性T细胞共刺激分子的表达以及T细胞免疫抑制代谢途径的活化。通过抑制这种逃逸机制增强靶向肿瘤的免疫应答是具有重大治疗前景的策略。抗体介导的负性免疫检查点调节剂阻断是迄今为止最有希望和最成功的免疫治疗方法之一。此类免疫检查点途径通常通过终止或减弱过度T细胞应答以预防或减轻免疫病理。肿瘤细胞利用这种机制防止T细胞攻击。通过治疗干预的方式释放这些“阻碍”可因此恢复有效的抗肿瘤免疫应答。然而，尽管通过干扰PDL1-PD1和B7-CTLA4抑制途径获得了空前的成功，但目前的检查点阻断疗法并未在所有患者中引发有效的抗肿瘤免疫应答，并未对所有类型的癌症均有作用，仅具有部分疗效，或肿瘤对检查点阻断产生耐受性。
癌症免疫疗法的另一种形式包括利用患者的免疫细胞通过过继细胞疗法根除癌症，其形式为患者肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的离体扩增和对肿瘤抗原产生应答的活化T淋巴细胞群的回输，或取出患者的外周血T淋巴细胞，然后进行离体基因修饰，以表达转基因T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)靶向已知的肿瘤抗原，然后回输至患者体内以破坏癌细胞。CAR T细胞免疫疗法已在血液学肿瘤中显示出空前的成功，但到目前为止，使用CAR T细胞治疗实体瘤在很大程度上是不成功的，部分原因是免疫抑制性肿瘤的微环境。另外，在体外产生过程中需要予以相当的关注以防止CAR T细胞过度耗竭或分化。
因此，迫切需要开发旨在单独使用或与现有疗法联合使用以诱导强抗肿瘤应答的新策略。特别地，涉及不同免疫治疗剂的协同治疗联合以及其他互补疗法可能构成将来成功抗癌治疗的基础。
值得进一步研究的一种治疗策略是通过抑制抗肿瘤免疫应答来干扰有利于肿瘤生长的代谢途径。在这些证据中，越来越多的证据表明，L-精氨酸代谢的治疗性操纵可有助于增强抗肿瘤免疫应答。L-精氨酸是半必需氨基酸，需要某些细胞特别是免疫系统的某些细胞(包括T细胞和巨噬细胞)从细胞外环境中吸收。充分的L-精氨酸可获得性对于这些细胞的最佳功能至关重要。在T细胞的情况下，L-精氨酸消耗导致CD3-ζ链表达减少，经T细胞受体(TCR)-CD3复合物的信号传导受损以及抗原特异性T细胞活化、增殖和细胞毒性的抑制。
L-精氨酸是精氨酸酶(ARG)和一氧化氮合酶(NOS)的底物。NOS的L-精氨酸分解代谢导致NO和其他反应性氮中间体的产生，这是导致巨噬细胞抗病原体细胞毒活性的关键机制。ARG将L-精氨酸转化为尿素和L-鸟氨酸，该反应因其在尿素循环中对肝脏中氨的解毒作用而闻名。L-鸟氨酸被进一步加工成多胺和脯氨酸。已经发现，ARG和NOS酶在肿瘤中的表达增加，无论是在肿瘤细胞本身中还是在肿瘤浸润细胞中，诸如巨噬细胞和髓样来源的抑制细胞(MDSC)。在肿瘤微环境(TME)中，NOS介导的NO产生促进肿瘤血管生成和转移，而ARG介导的脯氨酸可获得性增加和多胺合成促进肿瘤细胞增殖。此外，肿瘤中由ARG和NOS表达诱导的L-精氨酸消耗有助于通过上述机制建立免疫抑制性微环境，这种微环境损害抗肿瘤T细胞应答。
哺乳动物有两种ARG酶，分别是由两个不同的基因编码的精氨酸酶1(ARG1)和精氨酸酶2(ARG2)。两种酶催化相同的生化应答，在其催化位点显示100％同源性，并且均被目前可获得的ARG抑制剂抑制。ARG1和ARG2在细胞内定位和表达方式方面有所差异。ARG1是一种胞质酶，主要在肝脏中表达，但也可以在几种非肝组织和细胞类型中表达。ARG2位于线粒体中，并在多种组织中广泛表达。
在Dunand-Sauthier I.et al,"Repression of arginase-2 expression indendritic cells by microRNA-155 is critical for promoting T cellproliferation",J Immunol.193:1690-1700(2014)的出版物中发现ARG2是树突细胞(DC)中表达的主要精氨酸酶，并且在DC成熟过程中，miR155抑制其相应的mRNA。在活化的miR155缺失的DC中观察到ARG2表达和活性异常升高。相反，miR155的过表达抑制DC中ARG2的表达。众所周知，miR155可控制不同细胞类型中的不同基因，而且尚未报道miR155是否也可控制其他细胞类型(包括T细胞)中ARG2的表达。
WO2014059248教导了通过将编码miR155转录物的核酸分子离体引入从受试者分离的T细胞中以增加T细胞介导的免疫的方法。US2015/275209类似地教导了分离的或纯化的CD8+T细胞，其包括抗原特异性T细胞受体(TCR)和编码微小RNA分子的外源核酸。WO2014059248和US2015/275209均未公开miR-155在T细胞中的活性方式。在Gracias D.etal,“MicroRNA-155 controls CD8+T cell responses by regulating interferonsignaling”,Nat Immunol.14:593-602(2013)中发现miR155调节CD8+T细胞中845个基因的表达，其中大多数显示小于2倍的差异表达，这表明miR155适度影响大量转录本，而不是对单独靶标具有强影响。Gracias et al.在miR155调节其表达的845个基因中未识别ARG2。因此，这些参考文献并未表明ARG2可能是T细胞中miR155的靶标且miR155的作用是通过抑制T细胞中的ARG2介导的。
若干专利文献涉及精氨酸酶抑制剂。EP2768491B1公开了用于治疗多种病症的小分子精氨酸酶抑制剂，所述病症诸如心血管疾病、性疾病、伤口愈合疾病、胃肠疾病、自身免疫疾病、免疫疾病、感染、肺疾病、纤维化疾病和溶血性疾病。EP2083812B1公开了用于治疗过敏性和非过敏性哮喘以及过敏性鼻炎的小分子精氨酸酶抑制剂，诸如6-硼诺-L-正亮氨酸(ABH)。WO2007/111626公开了用于治疗动脉粥样硬化疾病的ARG2活性调节，包括用于沉默ARG2的siRNA。US9789169公开了用于消耗血浆精氨酸水平的重组ARG1蛋白，其目的是调节免疫系统，特别是防止移植器官的排斥。
本发明的目的是提供一种治疗癌症的方法，其优选地有效抗造血肿瘤和/或实体瘤。
本发明的目的是改善基于嵌合抗原受体(CAR)T细胞和/或转基因T细胞受体T细胞的疗法和/或基于与免疫检查点调节剂的相互作用和/或阻断的疗法的疗效。例如，目的是提供改善现有癌症疗法或现有治疗概念的方法。
本发明的目的是提供可以与其他癌症治疗(包括免疫治疗剂)协同使用的癌症治疗。
本发明的目的是通过促进癌症定向免疫应答来治疗癌症。特别地，本发明的目的是抑制癌细胞利用其逃逸癌症定向免疫应答的机制。
本发明解决了上述需求和目的。
发明内容
值得称道的是，本发明人开展的实验表明，具有受损的精氨酸酶活性和/或表达的免疫细胞对于治疗癌症(包括实体瘤)更有效。
一方面，本发明提供了具有受损的精氨酸酶活性和/或表达的免疫细胞，用于治疗癌症，包括实体瘤。
一方面，本发明提供表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞，所述免疫细胞进一步具有受损的精氨酸酶活性和/或表达。
一方面，本发明提供了具有受损的精氨酸酶活性和/或表达的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。优选地，所述TIL已经从患有癌症的人或动物分离。
一方面，本发明提供表现出组成性或诱导性精氨酸酶活性和/或表达受损的免疫细胞，用于通过过继细胞转移治疗癌症。
一方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括损害免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达。
一方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用精氨酸酶活性和/或表达受损的免疫细胞。优选地，所述方法是通过过继细胞转移治疗癌症的方法。
一个方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括施用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，所述TIL还具有受损的精氨酸酶活性和/或表达。
一方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括施用表达CAR的免疫细胞，所述免疫细胞具有受损的精氨酸酶活性和/或表达。
一方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，所述方法包括：提供表达CAR和/或TIL的细胞，处理所述细胞，优选在体外和/或离体进行，以降低精氨酸酶活性和/或在所述细胞中的表达，以及向有需要的受试者，优选为患有癌症的受试者，施用所述细胞。
一方面，本发明提供了一种用于改善免疫细胞的抗癌活性的方法，所述方法包括：损害所述免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达，优选地离体损害所述免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达。
一方面，本发明提供了一种改善用于过继细胞转移的免疫细胞抗癌活性的方法，所述方法包括：离体损害所述免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达。
一方面，本发明提供了一种用于准备和/或产生抗癌治疗，特别是用于过继细胞转移的抗癌治疗的方法，所述方法包括：提供免疫细胞，以及离体损害所述免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达。
一方面，本发明提供了能够降低免疫细胞中的精氨酸酶活性以治疗癌症的制剂。
一方面，本发明提供了用于治疗癌症的试剂盒，所述试剂盒包括适合于损害免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达的制剂。
一方面，本发明提供了一种联合治疗，其包括施用具有受损的精氨酸酶活性和/或表达的免疫细胞和阻断免疫抑制途径的制剂，诸如PDL1-PD1和B7-CTLA4抑制途径。优选地，所述制剂是抗体(Ab)，例如，抗PD1 Ab或抗CTLA4 Ab。
一方面，本发明提供了一种组合物，其包括免疫细胞，特别是本发明的免疫细胞。
一方面，本发明提供了具有受损的精氨酸酶活性和/或表达的免疫细胞，用于减小患有肿瘤和/或癌症的受试者的肿瘤大小和/或体积。一方面，本发明提供了具有受损的精氨酸酶活性和/或表达的免疫细胞，用于增加患有癌症的受试者的生存率和/或时间。
一方面，本发明提供了一种用于产生癌症治疗的方法，所述方法包括提供分离的免疫细胞并对所述免疫细胞进行处理以使精氨酸酶活性和/或表达受损。
本发明的其他方面和优选实施例在下文和所附权利要求书中定义。通过以下提供的优选实施例的描述，本发明的其他特征和优势对于技术人员将变得显而易见。
附图说明
在附图中，为了说明本发明的实施例和/或实例，示出了实验部分的结果。
图1A和1B示出了在植入B16-OVA或MC38-OVA肿瘤细胞的WT和Arg2-/-小鼠中肿瘤的生长情况。这些图示出了Arg2-/-小鼠的肿瘤生长受损。
图2A和2B示出了在如图1A和1B所述小鼠体内的抗肿瘤免疫力。这些图示出了在Arg2-/-小鼠中抗肿瘤免疫力增强。
图3A示出了在WT(圆形)和Arg2-/-(方形)小鼠中MC38-OVA肿瘤的生长，这些小鼠消耗了(空心圆形和方形)或未消耗(实心圆形和方形)CD8+T细胞。在这些实验中，CD8+细胞消耗使肿瘤生长增加。
图3B示出了图3A中所述的消耗CD8+细胞的小鼠的动物生存率降低。
图4A、4B和4C分别示出了接受(图4A：空心圆形和方形)或不接受(图4A：实心圆形和方形)抗PD1或同种型对照Ab的WT(图4A：圆形)和Arg2-/-(图4A：方形)小鼠的MC38-OVA肿瘤生长、肿瘤清除率和存活率。结果显示抗PD1 Ab治疗和Arg2缺陷对肿瘤大小(图4A：空心方形)，肿瘤清除率和存活率具有强联合作用。
图5示出了在嵌合小鼠中MC38-OVA肿瘤的生长，该小鼠是通过用全部四种配对联合使用的源自WT或Arg2-/-小鼠的骨髓(BM)细胞重建亚致死剂量照射的WT或Arg2-/-小鼠而产生的。结果表明减少肿瘤生长主要归因于源自BM的细胞中的Arg2缺陷。因此，接受来自Arg2-/-小鼠的BM细胞的小鼠(空心圆形和方形)的肿瘤大小较小。
图6A和6B分别比较了从OTI WT小鼠和双重纯合子Arg2-/-OTI小鼠分离的T细胞的体外活化(图6A)和增殖(图6B)。结果表明，与Arg2+/+OTI T细胞相比，Arg2-/-OTI T细胞表现出增强的活化和增殖。
图7A示出了根据本发明的实施例的用于细胞疗法的体内系统的产生。
图7B示出了按图7A所示处理的小鼠中的肿瘤生长。接受Arg2-/-OTI T细胞的WT小鼠表现出明显较慢的肿瘤生长。
图7C示出了如图7A所示处理的小鼠的动物存活率。接受Arg2-/-OTI T细胞的WT小鼠表现出明显增加的存活率。
图8A、8B和8C示出了在携带MC38-OVA的WT受体中，Arg2-缺陷的过继转移CD8+T细胞产生更多IFN(图8A)，耗竭变少(图8B)并持续更长的时间(图8C)。
图9A、9B和9C分别示出了在通过i.p.注射T细胞转移(箭头)后第8、11和14天，接受WT OTI T细胞(图9A：圆形)或Arg2-缺陷的OTI T细胞(图9A：方形)以及接受(图9A：实心圆形和方形)或未接受(图9A：空心圆形和方形)抗PD1或同种型对照Ab的WT小鼠中，在d60时MC-38-OVA的肿瘤体积、存活率和肿瘤清除率。结果显示抗PD1 Ab治疗和过继CD8+T细胞中Arg2缺陷对肿瘤体积、存活率和肿瘤清除率的强联合作用。
图10A和10B示出了ARG抑制在体外增加人T细胞活化。从PBMC纯化的人T细胞未经处理(-)或在体外用抗CD3和抗CD28 Ab(+)活化，在存在或不存在ARG抑制剂的情况下在96孔板的RPMI中培养，并评估其活化24h后的活化情况(CD69染色)。这些图示出了在存在指示的ARG抑制剂的情况下，CD4+(图10A)和CD8+T细胞(图10B)中CD69+细胞的频率增加。
在下文中，为了说明本发明而描述了本发明的优选实施例，但并不旨在限制本发明的范围。
具体实施方式
在一些方面，本发明涉及具有受损的精氨酸酶活性和/或表达的免疫细胞，用于治疗癌症。所述细胞优选用于癌症免疫治疗。
表述“受损的精氨酸酶活性和/或表达”中的术语“受损的”是指与未处理、修饰和/或工程改造的相应野生型免疫细胞相比具有降低的精氨酸酶活性和/或表达，例如，如本说明书中所公开的，以使所述精氨酸酶活性和/或表达受损。在优选的实施例中，使所述精氨酸酶活性和/或表达受损至无法检测到精氨酸酶活性和/或表达的程度。优选地，所述精氨酸酶活性完全不存在。
表述“受损的精氨酸酶活性和/或表达”涵盖其中由于编码精氨酸酶的mRNA转录和/或翻译受损而使精氨酸酶活性降低的情况。此外，尽管在本说明书中经常同时提及受损的精氨酸酶“活性”和/或“表达”，但应理解的是，精氨酸酶表达受损导致精氨酸酶活性受损，因此表达“受损的精氨酸酶活性”涵盖了由于精氨酸酶表达降低而使活性受损的情况。在优选的实施例中，免疫细胞产生活性精氨酸酶的能力受损，优选地通过对免疫细胞的基因表达过程的技术干扰而受损，所述过程包括诸如转录、RNA剪接、翻译、翻译后修饰的过程，特别是一种或多种编码精氨酸酶的基因。
所述精氨酸酶可以是精氨酸酶1(ARG1)和/或精氨酸酶2(ARG2)。在优选的实施例中，所述受损的精氨酸酶活性和/或表达是受损的精氨酸酶2(ARG2)活性和/或表达。如上所述，ARG1和ARG2在细胞内定位和表达方式方面有所差异。ARG2位于线粒体中，并在多种组织中广泛表达。在实施例中，ARG1和ARG2的活性均受损。
在优选的实施例中，所述免疫细胞选自T细胞、TIL、天然杀伤细胞(NK细胞)、先天性淋巴样细胞(ILC)和树突细胞。例如，所述ILC可以选自ILC-1和ILC-2细胞。在优选的实施例中，所述免疫细胞是T细胞，其优选选自CD3+和/或CD4+和/或CD8+T细胞。也可以使用包含两种或更多种不同类型的具有受损的精氨酸酶活性和/或表达的免疫细胞的组合。
在实施例中，所述免疫细胞是树突细胞。在可选的实施例中，所述免疫细胞不是树突细胞和/或不包括树突细胞。
为了本说明书的目的，术语“包括”及其各种语法形式旨在表示“包括其中其他”。其并非旨在表示“仅由……组成”。
在优选的实施例中，向有需要的受试者，特别是患有癌症的受试者，施用免疫细胞。在实施例中，本发明涉及用于治疗癌症的细胞疗法。优选地，所述免疫细胞通过过继细胞转移(ACT)或在ACT治疗的框架中施用。ACT是癌症免疫疗法，诸如自体癌症免疫疗法。术语“过继”通常被理解为表示ACT是将细胞转移至患者。例如，这些细胞可能源自患者或另一个体。在优选的实施例中，ACT是指通常通过基因上的和/或在表达蛋白方面已经选择、工程改造和/或修饰的细胞的转移，从而使细胞更有效或易于治疗所考虑的病症，通常是癌症。
在优选的实施例中，所述免疫细胞是分离和/或纯化的。
所述免疫细胞可以源自待治疗的患者个体。在这种情况下，是指自体免疫疗法。换句话说，改善患者免疫细胞的功能和特性，以提高其抵抗患者所患癌症的能力。
在实施例中，所述免疫细胞获自患者的肿瘤。以这种方式可以获得TIL。
在另一实施例中，免疫细胞取自供体。在这种情况下，一种情况可以参考同种异体免疫疗法。
在又另一实施例中，所述免疫细胞获自干细胞和/或前体免疫细胞。
当免疫细胞源自患者和/或供体时，本发明的方法可以包括从所述患者或所述供体，特别是从患者或供体的血液，或例如，如果在TIL的情况下，则是供体的肿瘤，收集和/或提取所述免疫细胞。
在另一实施例中，所述细胞预先从个体(例如，待治疗的受试者或供体)中收集和/或提取。
如果免疫细胞源自供体，则优选地进行选择或修饰，以免攻击患者的健康组织。例如，供体的免疫细胞优选与患者相容。例如，供体可以是患者的家庭成员。
在一些实施例中，包括供体是否是家族成员，供体的细胞具有失活的天然T细胞受体(在免疫细胞是T细胞的情况下)，从而防止免疫细胞攻击健康的患者组织。例如，优选对细胞进行修饰和/或工程改造以不表达天然T细胞受体或不表达其无活性形式。
如所述，在一些实施例中，免疫细胞可以源自干细胞，例如，多能干细胞。因此，免疫细胞优选从现成的细胞制备，并根据本说明书进一步工程改造。例如，可以基于人工胸腺类器官(ATO)系统获得免疫细胞。ATO系统是人工模仿胸腺环境以概括人T细胞发育的体外模型。ATO系统支持使用各种来源的造血干细胞，以及多能干细胞，如胚胎干细胞和诱导性多能干细胞，对正常T细胞进行有效分化和阳性选择。例如，该技术还为进一步的基因工程改造提供了灵活性，以产生用于治疗用途的现成异基因工程改造的T细胞产品。例如，在WO2016/187459和WO2017/075389中公开了这种技术。
根据本发明，免疫细胞的精氨酸酶活性和/或表达受损。所述免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达可能以任何合适的方式受损。在实施例中，通过将所述免疫细胞暴露于用于损害所述精氨酸酶活性和/或表达的治疗和/或工程改造来损害所述精氨酸酶活性。优选地，所述处理是离体处理。例如，一旦从个体(诸如患者或供体)中提取细胞，则将细胞暴露于处理。
在一些实施例中，本发明包括将细胞暴露于精氨酸酶抑制剂，从而直接阻断精氨酸酶。例如，抑制剂可以例如通过与蛋白的相关部分(诸如活性位点)共价应答来永久灭活精氨酸酶。精氨酸酶抑制剂先前已经公开，例如，在本申请的引言中引用的文献中。
优选地，通过基因手段和/或在基因或其表达的水平上修饰所述细胞，以在基因上防止精氨酸酶表达。
在优选的实施例中，所述精氨酸酶活性通过损害所述精氨酸酶的表达而使所述精氨酸酶活性受损，例如，通过
-突变、截短或删除编码所述精氨酸酶的基因，
-施用、突变、截短或删除编码转录因子的基因，所述转录因子是所述编码精氨酸酶的基因的转录因子，
-施用对能够与编码所述精氨酸酶的mRNA结合的核苷酸序列进行编码的核苷酸序列，或施用将能够与编码所述精氨酸酶的mRNA结合的核苷酸序列包括在内的核苷酸序列(administering a nucleotide sequence encoding or comprising a nucleotidesequence capable of binding to an mRNA encoding said arginase)。例如，该步骤可以包括施用核酸分子，所述核酸分子包括对编码所述精氨酸酶的mRNA进行编码的核苷酸序列，或所述核酸分子包括与所述mRNA结合的核苷酸序列(For example,this step maycomprise administrating a nucleic acid molecule comprising a nucleotidesequence encoding an mRNA encoding said arginase or binding to said mRNA)。
为了本说明书的目的，术语“突变(mutation)”及其各种语法形式(诸如“突变(mutating)”)涵盖基因的截短和缺失。例如，术语“突变”还包括点突变、点缺失(基因编码区中单个核苷酸的缺失)以及基因编码区中一段核苷酸的插入或缺失。因此，更通常第，术语“突变”涵盖导致基因表达与不携带突变的细胞中的表达不同的任何基因改变。仅出于清楚的原因，提到了某些突变可能未导致基因表达发生改变，并且此类沉默突变通常不被认为是适合于损害精氨酸酶表达的突变。
例如，可以通过删除对精氨酸酶、特别是精氨酸酶2进行编码的一个或多个基因来修饰细胞。例如，可以对细胞进行处理以使其相对于精氨酸酶1和/或2(Arg1-/-和/或Arg2-/-)双敲除。例如，可以通过定点突变进行编码精氨酸酶的基因或其他与精氨酸酶表达的控制有关的基因(诸如转录因子)中的突变。用于定点突变可用的方法很多，诸如Kunkel法、盒突变或PCR定点突变。在实施例中，可以通过基因编辑的方式，例如，通过使用CRISPR/Cas9技术，来修饰精氨酸酶编码基因或转录因子。
精氨酸酶表达可以通过促进精氨酸酶基因的阻遏蛋白的表达而受损，例如，通过用构建为在插入细胞时产生这种阻遏蛋白的载体转染免疫细胞，或通过基因编辑技术插入编码合适阻遏蛋白的基因。
在优选的实施例中，所述精氨酸酶表达通过RNA干扰(RNAi)降低。在实施例中，所述受损的精氨酸酶活性是由于在所述免疫细胞中施用能够与编码所述精氨酸酶的mRNA结合的核酸分子，或施用编码此类核酸分子的载体。所述核酸分子或所述载体的施用优选为离体施用，即在分离的细胞，例如，从个体提取的细胞中。
在实施例中，本发明的方法包括施用或转录抑制基因表达或中和精氨酸酶mRNA的RNA。例如，可以将小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)或短发夹RNA(shRNA)施用于细胞或编码选自此类干扰RNA的任一种的载体。这些分子可以通过合适的递送系统和/或载体递送至细胞中，所述递送系统和/或载体能够在细胞内递送干扰RNA，或者当转移至细胞中时能够转录此类干扰RNA。
在实施例中，本发明的方法包括施用或转录特异性抑制基因表达或中和精氨酸酶mRNA的核酸分子，诸如RNA。例如，可以将特别定制的小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)或短发夹RNA(shRNA)施用于细胞，或编码选自这种抑制性RNA的任一种的载体。这些分子可以通过合适的递送系统和/或载体递送至细胞中，所述递送系统和/或载体能够在细胞内递送抑制性RNA，或者当转移至细胞中时能够转录这种抑制性RNA。
在实施例中，通过仅将干扰和/或抑制核酸分子与编码精氨酸酶的mRNA互补碱基配对，而不与编码其他蛋白的其他mRNA分子互补碱基配对，和/或仅与调节精氨酸酶表达的RNA分子互补配对，而不与调节其他蛋白表达的RNA分子互补碱基配对，特别是在所述免疫细胞中，而提供特异性。
在实施例中，所述抑制和/或干扰核酸分子，优选为RNA，不是microRNA-155和/或不包含microRNA-155。
在其他实施例中，例如，在非特异性抑制和/或干扰精氨酸酶表达和/或精氨酸酶mRNA的中和的情况下，所述抑制和/或干扰核酸分子可以包括和/或基本上由microRNA-155组成。
在优选的实施例中，使用在细胞中表达和/或转录抑制性和/或定向干扰RNA的载体。此类载体允许长期基因特异性沉默。此类载体，例如，用于使精氨酸酶1或精氨酸酶2沉默的载体，可购自例如Santa Cruz Biotechnology,Inc.,USA，该公司提供了完整的RNAi基因沉默产品线，包括siRNA、shRNA质粒和shRNA慢病毒产品。因此，可以施用编码干扰RNA的质粒或载体，或者可以例如使用合适的递送载体将干扰RNA定向引入细胞中。根据另一实例，病毒颗粒可以用于施用shRNA编码质粒。对人精氨酸酶2mRNA具有特异性的示例性siRNA分子的序列可以源自精氨酸酶2的RNA或DNA序列，例如，GenBank中以登录号NM_001172所公开。SiRNA分子还如Setty BA,et al.Hypoxic Proliferation of Osteosarcoma CellsDepends on Arginase II,Cell.Physiol.Biochem.39(2),802-813(2016)所公开。
根据本发明，精氨酸酶活性和/或表达的降低可以是组成性的或诱导性的。在一些实施例中，精氨酸酶活性的降低是诱导性的，即，可以由可以控制的外部因素引发，例如，由进行过继细胞转移的细胞修饰的工作人员进行控制。精氨酸酶表达的降低可以通过合适启动子的存在而被诱导，例如，在编码干扰RNA的载体上。由于启动子，基因沉默仅在启动子活化后发生。例如，可以选择启动子以使其可以被特定的小分子活化，所述小分子可以单独施用于细胞或接受细胞的患者。
另一方面，通过使用具有组成性活性的启动子，沉默RNA可以组成性表达，导致精氨酸酶表达的组成性受损。
此外，精氨酸酶活性的降低可以是瞬时的或稳定的。精氨酸酶表达的瞬时或稳定损伤可以通过选择干扰RNA和细胞处理方式确定。例如，通过用适当的siRNA直接转染细胞，精氨酸酶的表达可以瞬时沉默。通过在启动子的控制下用编码干扰RNA的载体转染，精氨酸酶的表达可以在细胞中稳定沉默(以诱导性或组成性的方式)。
在一些实施例中，免疫细胞进一步包括用于治疗癌症的其他有利特征和/或功能。优选地，将细胞进一步修饰以具有改善的癌症治疗功能。免疫细胞的进一步修饰可以与上述精氨酸酶活性受损同时进行，或者可以使用例如相同的免疫细胞在单独的、先前的或后续的步骤中进行。本发明还涵盖独立地基因改造其他免疫细胞以具有改善的癌症治疗功能，其中在根据本发明的治疗中，将这些其他细胞与本发明的免疫细胞同时或顺序施用。
在实施例中，所述免疫细胞是肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和/或所述方法包括施用TIL。优选地，所述TIL是肿瘤浸润T细胞。优选地，所述TIL表现出组成性或诱导性精氨酸酶活性受损。优选地，向有需要的受试者(特别是患有癌症的受试者)施用所述TIL。优选地，所述TIL预先从所述受试者中分离和/或纯化。优选地，所述方法包括损害所述TIL中的精氨酸酶活性，优选地离体进行，例如，在分离和/或纯化所述TIL之后和/或在施用所述TIL之前。
在实施例中，免疫细胞包含和/或表达嵌合抗原受体(CAR)和/或转基因T细胞受体(TCR)。在实施例中，所述CAR包括经接头与T细胞信号传导结构域融合的抗原结合结构域，特别是CD3ζ(ζ)信号传导结构域。抗原结合结构域优选包括抗体的一个或多个可变结构域。优选地，所述接头包括跨膜结构域。当在CAR细胞的表面表达时，抗原结合结构域在细胞的细胞外侧，而信号传导结构域在细胞的细胞内侧。
根据CAR的设计和功能，可以选择合适的细胞内结构域。如果选择细胞外结构域以识别(结合)癌细胞上的靶标，则优选地选择细胞内结构域以在结合细胞外结构域时活化免疫细胞。通常，在CAR T细胞中，例如，CAR的结合通常导致T细胞增殖和细胞因子的产生。CART细胞与靶位点(诸如CD19)的结合可以定向导致癌细胞被杀死，例如，通过诱导癌细胞凋亡。因此，通过选择适当的细胞内结构域来控制从细胞外结构域的结合获得的特异性作用。通常，CAR免疫细胞包括信号传导结构域(包括CD3ζ)和任选的其他信号传导结构域。然而，本发明不限于免疫细胞可以表达的CAR的胞内或胞外结构域。本领域技术人员可以根据待靶向的特定癌细胞以及希望通过结合引发的免疫应答来选择合适的结构域。
例如，抗原结合结构域可以对B细胞抗原CD19具有特异性。当前针对血液癌症(诸如白血病和淋巴瘤)的细胞转移疗法基于CAR T细胞，其中CAR的抗体可变结构域对CD19具有特异性。
根据待治疗的癌症，CAR的抗体可变结构域优选对癌细胞表面表达的靶标具有特异性。在本领域中，针对通过CAR疗法治疗相应的癌症，已经检测了以下抗原结合结构域特异性。对以下项具有特异性的抗原结合结构域：碳酸酐酶，特别是用于抗肾癌的CAR细胞疗法；表皮生长因子受体，特别是用于治疗胶质母细胞瘤的变体EGFRvIII CAR；抗前列腺癌的CAR治疗中的前列腺特异性抗原(PSMA)和/或前列腺干细胞抗原(PSCA)；治疗选自卵巢癌、输卵管癌和原发性腹膜癌中任一项的卵巢肿瘤抗原粘蛋白16(MUC16)。
根据本发明的实施例，免疫细胞优选经工程改造以表达一种或多种CAR，诸如具有选自上述抗原的组的特异性的CAR。
在实施例中，免疫细胞表达CAR和/或所述方法包括施用表达CAR的免疫细胞。优选地，所述表达CAR的细胞表现出组成性或诱导性精氨酸酶活性受损。优选地，向有需要的受试者(特别是患有癌症的受试者)施用表达CAR的细胞。优选地，预先从所述受试者分离和/或纯化的所述免疫细胞和所述方法包括处理所述细胞的步骤，以表达所述CAR和/或提供预先从患者或其他供体分离的细胞，并且所述细胞预先经处理以表达所述CAR。在实施例中，所述方法包括优选损害所述CAR表达细胞中的精氨酸酶活性，优选离体进行。
根据本发明所涵盖的免疫细胞的另一种修饰是内部信号传导结构域的转换。
在实施例中，免疫细胞包括和/或表达IL-4受体，其经修饰或失活以减少、消除和/或逆转由肿瘤微环境引发的抑制性IL-4信号传导。例如，可以将IL-4受体的信号传导结构域转换为IL-7受体的信号传导结构域，以逆转抑制性IL-4信号传导。
在实施例中，免疫细胞表达两种CAR。第一CAR优选免疫细胞靶向特定癌细胞，具有定向于癌细胞表达的抗原(诸如PSCA)的抗原结合结构域。第二CAR可以例如与合成或外源化合物(例如，小分子)结合。所述化合物可以单独和/或与CAR细胞一起向患者施用。当施用时，小分子与第二CAR结合。当免疫细胞与靶细胞接触时，与化合物的共同刺激导致免疫细胞的有效和/或强活化。共表达两种CAR的T细胞，与rimiducid(具有同型二聚活性的脂质渗透性他克莫司类似物)的第二结合，目前在进行I期试验。
在实施例中，免疫细胞经工程改造以表达失活的检查点蛋白或缺乏抑制性检查点蛋白。示例性免疫检查点调节剂是PD-L1/PD1、CTLA4、B7-H3(CD276)、B7-H4(B7x/B7S1/VTCN1)、HHLA2(B7H7/B7-H5)、VISTA(PD1H、DD1alpha、c10orf54、Gi24、Dies1、SISP1)、VSIG、LAG-3、TIGIT、CD96、CD39、CD73、腺苷A2受体、CD47、嗜乳脂蛋白(BTN)和/或TIM-3(T细胞-免疫球蛋白-粘蛋白结构域)。
在免疫细胞的实施例中，检查点蛋白的免疫应答抑制信号传导结构域被失活或与共刺激结构域交换(取代)。例如，可以使PD1的抑制性CD28结构域(程序性细胞死亡蛋白1)突变，使其失活或可以用共刺激结构域(例如，CD3ζ信号传导结构域或CD137结构域)进行转变。
通过使免疫细胞的免疫检查点蛋白失活或通过将细胞内结构域转换为刺激性结构域(例如，通过取代细胞内结构域)，可以避免肿瘤细胞和/或肿瘤微环境的免疫抑制活性。
在实施例中，免疫细胞重组表达当被外部因素引发时能够诱导细胞凋亡的蛋白。这可以看作是一种安全性措施，例如，在向患者施用免疫细胞后，如果发现非预期的副作用，则可以靶向方式破坏本发明的免疫细胞。例如，可以以与细胞外结构域结合导致细胞凋亡的方式提供信号传导结构域。如本说明书其他地方所述，细胞外结构域可以结合人工化合物，诸如小分子。
通过用合适的载体转染细胞，或在基因组中插入用于表达受体的基因和/或启动子，例如，使用诸如CRISPR/Cas9技术的基因编辑，可以对免疫细胞进行工程改造以表达CAR和/或转基因T细胞受体。
为了治疗癌症，优选地向个体施用免疫细胞，例如，向需要癌症治疗的个体施用。所述个体优选是患有癌症的患者。可以以任何合适的方式，优选地肠胃外施用免疫细胞。在优选的实施例中，静脉内施用免疫细胞。
在优选的实施例中，除了另一种癌症治疗之外，还施用免疫细胞。优选地，免疫细胞与另一种癌症治疗联合使用。该另一种癌症治疗可以同时和/或单独施用。此外，该另一种癌症治疗可以以单独的组合物的形式单独施用，或者可以以单一组合物联合施用。
在优选的实施例中，使用免疫细胞和/或与靶向和/或特异性结合负性免疫检查点调节剂的癌症治疗联合施用。免疫检查点调节剂已在本说明书的其他地方公开。在一个实施例中，免疫细胞可以表达与可以由癌细胞表达的免疫检查点调节剂结合的细胞表面蛋白，例如，受体。例如，如上所述，免疫细胞可以表达与免疫检查点调节蛋白结合的CAR。根据该实施例，阻断免疫检查点调节剂的实体可以以免疫细胞上的细胞表面蛋白的形式表达，而不是未结合/游离的抗体。
在另一实施例中，所述(其他或另外的)癌症治疗包括抗癌剂和/或分子，例如，免疫检查点调节剂抑制剂。优选地，所述癌症治疗包括抗体，优选地与免疫检查点调节剂特异性结合的抗体。在优选的实施例中，所述癌症治疗包括与一种或多种选自以下项的组特异性结合的抗体：PD1、PD-L1、CTLA4、B7-H3、B7-H4、HHLA2、VISTA、VSIG、LAG-3、TIGIT、CD96、CD39、CD73、腺苷A2受体、CD47、嗜乳脂蛋白(BTN)和/或TIM-3。
特异性结合免疫检查点调节剂的抗体，诸如纳武利尤单抗和帕博利珠单抗，二者均特异性结合PD-1，可商购获得，并用于治疗多种不同的癌症。
此类抗体通常可称为免疫检查点调节剂。本发明人已观察到，当本发明的精氨酸酶受损的免疫细胞与包括免疫检查点调节剂抑制剂的治疗联合使用时，产生协同的抗癌活性。在实施例中，抗体特异性结合由癌细胞表达并在癌细胞表面上提供的免疫检查点调节蛋白。在另一实施例中，抗体特异性结合蛋白，例如，本发明的免疫细胞表面表达的受体，其中，所述抗体阻止免疫细胞的蛋白与癌细胞上表达的相应蛋白质接触。在优选的实施例中，免疫检查点调节剂抑制剂是单克隆抗体。
在优选的实施例中，免疫细胞用于治疗和/或预防癌症的方法。在实施例中，选择用于治疗的癌症选自包括白血病、淋巴瘤和/或实体瘤的组。本发明人的一个惊人的发现是免疫细胞不仅在减少血液癌症和/或血液学癌症方面有效，而且在减小实体瘤的大小和/或体积方面特别有效。这是令人惊讶的，因为当前使用的基于CAR T细胞的过继细胞转移疗法被用于治疗血液癌症，通常是由于难以获得针对实体瘤的足够疗效。在当前的CAR T细胞疗法中，实体瘤的治疗有时伴随着重大的副作用和毒性问题。本发明人公开了在不存在毒性副作用的情况下通过过继细胞转移治疗实体瘤。
本发明涉及几种方法，包括治疗和/或预防癌症的方法、免疫治疗方法、细胞治疗方法、改善现有免疫治疗的方法、产生可用于治疗和预防癌症的免疫细胞的方法、用于准备和/或产生癌症治疗的方法，和/或改善免疫细胞的抗癌活性和/或疗效的方法。如本说明书中详述，优选地将免疫细胞处理为具有改善的抗癌活性。更具体地，细胞优选在由癌细胞(包括实体瘤细胞)产生的免疫抑制环境中具有增加的活性和/或存活率。优选地，免疫细胞通过在某种程度上对癌细胞的至少一些免疫抑制活性保持惰性来保持其抗癌活性和/或功能。
优选地，对免疫细胞进行处理和/或工程改造以表现出改善的抗癌活性。如本说明书中详述，所述处理优选导致精氨酸酶活性降低。细胞的处理优选离体地和/或在体外进行，即，优选在人或动物体外。在实施例中，本发明的方法包括从个体提取和/或收集尚未处理或野生型的免疫细胞。在实施例中，本发明的方法包括在施用所述免疫细胞之前，离体损害所述免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达。在实施例中，所述方法包括向患者施用免疫细胞。
如本说明书其他地方所公开的，免疫细胞可以源自待治疗的患者、供体，或者可以源自培养物，例如，获自干细胞。
免疫细胞优选以药物组合物的形式提供。优选地，所述组合物包括合适的辅料和/或载体，例如，选自其中悬浮细胞的近似生理和/或等渗溶液的溶液，例如，生理盐水。在一些实施例中，药物组合物可以包括血清，例如，从待治疗的患者或从供体获得。
本发明还提供了用于治疗癌症方法的试剂盒。所述试剂盒优选包括适合于损害免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达的制剂。在一些实施例中，所述试剂盒包括当施用于免疫细胞时能够诱导RNA干扰的试剂，其中所述RNAi导致精氨酸酶表达受损。例如，所述试剂盒包括一种或多种如本说明书其他地方公开的试剂(siRNA载体等)。在一些实施例中，所述试剂盒包括免疫细胞，例如，精氨酸酶活性受损的现成免疫细胞，例如，Arg2-/-免疫细胞。
尽管以上已经描述并具体示例性说明了本发明的某些优选实施例，但并不表示本发明限于这些实施例。如所附权利要求书所述，在不背离本发明的范围和精神的情况下可以对其进行各种修改。在下文中，公开了本发明的实例。这些实例仅用于说明，而并不旨在限制本发明的范围。
实例
实例1：在Arg2-/-小鼠中肿瘤生长受损和抗肿瘤免疫力增强
对于本实例，使用从Charles River Laboratories，Inc.获得的Arg2缺陷型(双基因敲除)小鼠。作为第一种方法，比较了WT和Arg2-/-小鼠的肿瘤生长。使用两种可移植的肿瘤模型：B16黑色素瘤模型和MC38结肠癌模型。在这两个模型中，均使用表达卵清蛋白(OVA)作为替代肿瘤抗原的肿瘤变体。
在第一个实验中，皮下注射0.5x106个B16-OVA或MC38-OVA细胞至WT或Arg2-/-小鼠的背部，并监测肿瘤生长2周。N＝9，数据来自两个独立实验的合并。
在第二个实验中，按照第一个实验植入肿瘤细胞。肿瘤注射后11(B16-OVA)或13(MC38-OVA)天，i.v.注射高剂量的细胞紫色示踪剂(CTVhi)OVA脉冲和低剂量(CTVlo)非脉冲的WT脾细胞进行荧光标记。二十四小时后，切除肿瘤并通过流式细胞术分析来自TdLN和ndLN的细胞悬浮液。特定的体内杀伤计算如下：[1-(％CTVhi TdLN/％CTVlo TdLN)/(％CTVhindLN/％CTVlo TdLN)]x 100。
结果显示在图1A、1B，2A和2B中(*，p<0.05；**，p<0.01；****，p<0.0001)。如图1A和1B所示，在Arg2-/-小鼠中，B16-OVA和MC38-OVA肿瘤的生长均显著受损。肿瘤生长受损与肿瘤引流淋巴结中体内OVA特异性肿瘤细胞杀伤的增加有关(图2A和2B)。对于B16-OVA，显示了两个实验的代表。对于MC38-OVA，数据来自两个独立的实验。
为了进一步研究，我们主要关注MC38-OVA模型。
实例2：CD8+T细胞对控制肿瘤生长和动物存活的贡献
为了确定Arg2-/-小鼠中MC38-OVA生长受损是否可能是由于CD8+T细胞的增强控制，我们进行了CD8+T细胞消耗实验。
S.c.注射0.5x106个MC38-OVA细胞至WT或Arg2-/-小鼠的背部，并监测肿瘤生长和动物存活4周。CD8+T细胞消耗通过数次i.p.注射抗CD8a+消耗抗体(αCD8a)或IgG2a同种型对照抗体(αIgG2A)。
如图3A和3B所示，在Arg2-/-小鼠中，肿瘤生长降低和动物存活率增加通过CD8+T细胞的消耗而显著恢复，表明CD8+T细胞介导的免疫控制具有重要作用。但是，抗肿瘤CD8+T细胞应答并不是唯一起作用的机制，因为CD8+T细胞缺失的Arg2-/-小鼠的肿瘤生长并未完全恢复到CD8+T细胞缺失的WT小鼠中观察到的结果。
实例3：抗PD1治疗和Arg2缺陷对肿瘤生长抑制和动物存活的协同作用
MC38肿瘤对使用可阻断T细胞抑制性PDL1-PD1检查点轴的抗体的免疫疗法敏感。为了确定由PDL1-PD1阻断诱导的对MC38肿瘤控制增强是否可以与由Arg2缺陷导致的对MC38肿瘤控制增强的机制协同，MC38-OVA荷瘤的WT和Arg2-/-小鼠接受抗PD1抗体治疗。
S.c.注射0.5x106个MC38-OVA细胞至WT或Arg2-/-小鼠的背部。肿瘤注射后第9、11和14天，向小鼠注射抗PD1(αPD-1)Ab或IgG2a同型对照Ab(αIgG2A)(绿色箭头)。
从图4A中可以看出(数据来自2个实验的合并，****，p＜0.0001)，接受抗PD1抗体治疗的WT小鼠中的肿瘤生长降低到与未接受治疗的Arg2-/-小鼠中的肿瘤生长降低相同的程度。重要的是，接受抗PD1抗体治疗Arg2-/-小鼠导致肿瘤生长几乎完全消除。实际上，许多小鼠中的肿瘤已经清除，如图4B所示。图4C示出了在接受抗PD1抗体治疗的Arg2-/-小鼠中动物存活大大增加。因此，抗PD1治疗和Arg2缺陷对肿瘤生长表现出很强的协同作用。
实例4：BM来源的细胞中的Arg2缺陷可改善对肿瘤生长的控制
产生相互的骨髓(BM)嵌合小鼠，以确定是否受损的MC38-OVA生长是BM来源细胞或非造血来源细胞中Arg2缺陷的结果。WT和Arg2-/-小鼠受亚致死性照射以破坏宿主BM。然后以所有四种配对组合，通过移植来自WT或Arg2-/-小鼠的BM细胞重建造血。
S.c.注射0.5x106个MC38-OVA细胞至BM嵌合小鼠的背部，并监测肿瘤生长4周。N＝11只小鼠。
从图5可以看出(数据抽取自3个独立实验的合并，****，p<0.0001)，与接受来自WT小鼠的BM细胞相比(WT>WT和WT>Arg2-/-)，接受来自Arg2-/-小鼠(Arg2-/->WT和Arg2-/->Arg2-/-)的BM细胞的嵌合体表现出强降低肿瘤生长。这些结果表明，肿瘤生长的降低主要归因于BM来源的细胞中的Arg2缺陷。
实例5：Arg2-/-OTI细胞在体外表现出活化和增殖增强
为了确定CCD8+T细胞中Arg2缺陷是否可能导致对肿瘤生长的控制改善，我们将Arg2突变进入OTI小鼠中以获得双纯合的Arg2-/-OTI小鼠。
OTI小鼠仅具有OVA特异性CD8+T细胞，因为它们表达编码MHC I类限制性OVA特异性TCR的转基因。这使我们能够比较AArg2+/+和Arg2-/-OVA特异性T细胞的功能特性。
从杂交小鼠中分离出WT OTI或Arg2-/-OTI T细胞，并在体外用抗CD3和抗CD28 Ab活化，在96孔板的RPMI中培养，并在60℃下评估其活化后的第1、2和3天的活化(CD69染色)。在活化后第4天测定T细胞增殖(羧荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)稀释)。
结果显示在图6A和6B中(数据代表2次独立实验，**，p<0.01；***，p<0.001)。
图6A和6B所示的体外T细胞活化试验表明，与Arg2+/+OTI细胞相比，Arg2-/-OTI细胞表现出活化和增殖增强。
实例6：MC38-OVA肿瘤的OTI
T细胞疗法
开发了一种体内系统，以比较WT背景下Arg2+/+和Arg2-/-OTI细胞对MC38-OVA肿瘤生长和动物存活的控制。
体内系统的产生在图7A中示出。首先，产生混合的BM嵌合体，其中用Rag2-/-小鼠来源的BM和Arg2+/+或Arg2-/-OTI小鼠来源的BM细胞的9:1混合物重建受辐照的WT小鼠。在这些混合的BM嵌合体中，Arg2-/-和Arg2+/+OTI T细胞在表现出正常Arg2表达的环境中产生，因此其功能特性的任何差异均可归因于Arg2表达的细胞内在差异。应当注意，源自Arg2-/-和Arg2+/+OTI BM的B细胞在Arg2状态方面当然也会有所不同，但这不太可能产生任何影响，因为检查ImmGen联合数据表明B细胞不表达Arg2mRNA。
混合的BM嵌合体用作Arg2+/+和Arg2-/-OTI T细胞的供体，这些细胞被过继转移至MC38-OVA荷瘤的WT小鼠中。更具体地，将106个脾和淋巴结Arg2+/+或Arg2-/-OTI T细胞从混合的BM嵌合体转移到5天前已注射0.5x106个MC38-OVA肿瘤细胞的WT受体中。
然后在OTI T细胞转移后一天，用CpG-B+OVA1肽免疫荷瘤受体，并监测肿瘤的生长。
结果显示在图7B和7C中。与未接受OTI细胞或Arg2+/+OTI细胞的小鼠相比，接受Arg2-/-OTI T细胞的小鼠的肿瘤生长明显降低(图7B)，动物存活率提高(图7C)。该实验设置正式证明Arg2-/-OTI T细胞比Arg2+/+OTI细胞在WT环境中控制MC38-OVA肿瘤的生长方面更好。
实例7：Arg2-/-OTI细胞在MC38-OVA荷瘤动物中表现出IFN产生增加，消耗较少且持
续时间较长
为了进一步研究Arg2缺陷对体内CD8+T细胞的效应子功能的影响，将相等数量的原始OTI和Arg2-/-OTI CD8+T细胞转移至MC38-OVA荷瘤的WT小鼠中。OTI转移后一天，然后用CpG-B+OVA-1肽免疫荷瘤受体，免疫后7天，引流LN(dLN)中的OTI细胞和流式细胞仪分析肿瘤。在dLN和肿瘤中，Arg2-/-OTI细胞中IFN+细胞的频率均较高(图8A)。在肿瘤中的Arg2-/-OTI细胞上，PD-1表达水平显著降低(图8B)。
为了研究Arg2缺陷对肿瘤特异性T细胞应答的时间和空间动态的影响，将相等数量的原始OTI和Arg2-/-OTI CD8+T细胞转移到MC38-OVA荷瘤小鼠中，在OVA257–264免疫后的不同时间，通过流式细胞术评估dLN和肿瘤中它们在宿主中的分布。CD45.1标志物用于区分OTI(CD45.1+/+)和Arg2-/-OTI(CD45.1+/-)细胞。至第15天，在dLN和肿瘤中，Arg2-/-OTI细胞的频率明显高于OTI WT细胞(图8C)，表明它们具有更持久的抗肿瘤应答。
实例8：T细胞固有的Arg2缺陷与PD-1阻断协同
我们探索了在WT MC38-OVA荷瘤小鼠中联合使用过继Arg2-/-OTI转移和PD1阻断的益处。WT小鼠受到MC38-OVA肿瘤的攻击，五天后，当肿瘤可被触知时，小鼠接受如图7A所示的过继转移细胞，除了供体不是嵌合体小鼠外，其于次日进行免疫。在T细胞转移后的第8、11和14天，小鼠经i.p.注射接受200μg相关抗体。在这种情况下，我们再次观察到T细胞固有的Arg2缺乏与PD1阻断之间的协同作用。与仅接受Arg2-/-OT-I细胞或抗PD1抗体的小鼠相比，接受联合治疗的小鼠表现出更强的肿瘤生长降低(图9A)，延长的存活时间(图9B)，和增加的肿瘤清除率(图9C)。
实例9：抑制ARG增强体外人T细胞活化
接下来，我们确定了人CD4+和CD8+T细胞中ARG的抑制作用是否可能影响它们在体外的活化。从PBMC纯化的人T细胞未经处理或在体外用抗CD3和抗CD28 Ab活化，在存在或不存在ARG抑制剂的情况下在96孔板的RPMI中培养，并评估其活化24h后的活化情况(CD69染色)。抑制ARG酶功能增加CD4+(图10A)或CD8+细胞(图10B)中CD69+细胞的频率，表明ARG抑制在体外增加人T细胞的活化。
Claims (20)
1.一种免疫细胞，所述免疫细胞具有组成性或诱导性受损的精氨酸酶活性和/或表达，其用于通过过继细胞转移来治疗癌症。
2.根据权利要求1所述的免疫细胞，其中，所述受损的精氨酸酶活性和/或表达是受损的精氨酸酶2活性和/或表达。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的免疫细胞，用于治疗选自由白血病、淋巴瘤和/或实体瘤组成的组的一种或多种癌症。
4.根据前述权利要求中任一项所述的免疫细胞，其中，通过损害所述精氨酸酶的表达而使所述精氨酸酶活性受损，例如通过：
-突变、截短或删除编码所述精氨酸酶的基因，
-施用、突变、截短或删除编码转录因子的基因，所述转录因子是所述编码精氨酸酶的基因的转录因子，
-施用对能够与编码所述精氨酸酶的mRNA结合的核苷酸序列进行编码的核苷酸序列，或施用将能够与编码所述精氨酸酶的mRNA结合的核苷酸序列包括在内的核苷酸序列。
5.根据前述权利要求中任一项所述的免疫细胞，其中，所述精氨酸酶活性通过将所述细胞暴露于用于损害所述精氨酸酶活性和/或表达的离体处理而受损。
6.根据权利要求1所述的免疫细胞，其中，所述受损的精氨酸酶活性是由于在所述免疫细胞中离体施用能够与编码所述精氨酸酶的mRNA结合的核酸分子，或施用编码此类核酸分子的载体。
7.根据前述权利要求中任一项所述的免疫细胞，其选自T细胞、自然杀伤细胞也即NK细胞、先天性淋巴样细胞和树突细胞。
8.根据权利要求7所述的免疫细胞，其选自CD3+和/或CD4+和/或CD8+T细胞。
9.根据前述权利要求中任一项所述的免疫细胞，其进一步包含嵌合抗原受体CAR和/或转基因T细胞受体，其中，所述CAR优选地包括通过接头与T细胞信号传导结构域融合的抗原结合结构域，优选地在CD3ζ信号传导结构域中。
10.根据前述权利要求中任一项所述的免疫细胞，其与靶向和/或特异性结合负性免疫检查点调节剂的癌症治疗联合使用。
11.根据权利要求10所述的免疫细胞，其中，所述癌症治疗靶向免疫检查点调节剂PD-L1/PD1、CTLA4、B7-H3(CD276)、B7-H4(B7x/B7S1/VTCN1)、HHLA2(B7H7/B7-H5)、VISTA(PD1H、DD1alpha、c10orf54、Gi24、Dies1、SISP1)、VSIG、LAG-3、TIGIT、CD96、CD39、CD73、腺苷A2受体、CD47、嗜乳脂蛋白BTN和/或TIM-3也即T细胞–免疫球蛋白-粘蛋白结构域3。
12.根据权利要求10和/或11所述的免疫细胞，其中，所述癌症治疗包括与一种或多种选自以下项的组特异性结合的抗体：PD1、PD-L1、CTLA4、B7-H3、B7-H4、HHLA2、VISTA、VSIG、LAG-3、TIGIT、CD96、CD39、CD73、腺苷A2受体、CD47、嗜乳脂蛋白BTN和/或TIM-3。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的免疫细胞，其是分离的和/或纯化的。
14.一种用于准备抗癌治疗，特别是用于过继细胞转移的方法，所述方法包括：
-提供免疫细胞，和
-离体损害所述免疫细胞的精氨酸酶活性和/或表达。
15.一种改善用于过继细胞转移的免疫细胞抗癌活性的方法，所述方法包括：离体损害所述免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达。
16.根据权利要求1至13中任一项所述的免疫细胞，其预先已从个体收集，所述个体例如为待治疗的受试者。
17.一种改善免疫细胞的抗癌活性的方法，所述方法包括：离体损害所述免疫细胞的精氨酸酶活性和/或表达。
18.一种通过过继细胞转移治疗癌症的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用精氨酸酶活性和/或表达受损的免疫细胞。
19.根据权利要求18所述的方法，其包括在施用所述免疫细胞之前，离体损害所述免疫细胞中的精氨酸酶活性和/或表达。
20.一种包括权利要求1-13和16中任一项的免疫细胞的组合物。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP18153782.0 | 2018-01-28 | ||
| EP18153782 | 2018-01-28 | ||
| PCT/EP2019/051806 WO2019145453A1 (en) | 2018-01-28 | 2019-01-24 | Arginase suppression for cancer treatment |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111902532A true CN111902532A (zh) | 2020-11-06 |
Family
ID=61074351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201980021913.2A Pending CN111902532A (zh) | 2018-01-28 | 2019-01-24 | 用于癌症治疗的精氨酸酶抑制 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210177897A1 (zh) |
| EP (1) | EP3743510A1 (zh) |
| JP (1) | JP2021517454A (zh) |
| CN (1) | CN111902532A (zh) |
| AU (1) | AU2019211067A1 (zh) |
| CA (1) | CA3125797A1 (zh) |
| WO (1) | WO2019145453A1 (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL417066A1 (pl) | 2016-05-04 | 2017-11-06 | Oncoarendi Therapeutics Spółka Z Ograniczoną Odpowiedzialnością | Inhibitory arginazy oraz ich zastosowania terapeutyczne |
| TWI723366B (zh) | 2018-03-29 | 2021-04-01 | 波蘭商昂科艾倫迪治療法股份公司 | 二肽哌啶衍生物 |
| GB201912030D0 (en) * | 2019-08-21 | 2019-10-02 | Cancer Research Tech Ltd | Binding molecules |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2431080A1 (en) * | 2003-06-02 | 2004-12-02 | Catherine Adele O'brien | Enhancement of anticancer immunity through inhibition of arginase |
| WO2014059248A1 (en) * | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Philadelphia Health & Education Corporation D/B/A/ Drexel | Mir-155 enhancement of cd8+ t cell immunity |
| US20150275209A1 (en) * | 2012-10-22 | 2015-10-01 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Service | Compositions and methods for enhancing cancer immunotherapy |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007111626A2 (en) | 2006-03-23 | 2007-10-04 | The Johns Hopkins University | Arginase ii: a target for the prevention and treatment of atherosclerosis |
| EP2083812B1 (en) | 2006-11-21 | 2017-04-05 | Rijksuniversiteit Groningen | Use of arginase inhibitors in the treatment of asthma and allergic rhinitis |
| WO2013059437A1 (en) | 2011-10-19 | 2013-04-25 | Mars, Incorporated | Inhibitors of arginase and their therapeutic applications |
| CN113144178A (zh) | 2014-04-29 | 2021-07-23 | 康达医药科技有限公司 | 采用精氨酸酶i调节免疫系统的方法和组合物 |
| WO2016187459A1 (en) | 2015-05-20 | 2016-11-24 | The Regents Of The University Of California | Method for generating human dendritic cells for immunotherapy |
| IL258899B2 (en) | 2015-10-30 | 2024-03-01 | Univ California | Methods for producing T cells from stem cells and immunotherapy methods using T cells |
| US11291674B2 (en) * | 2016-11-08 | 2022-04-05 | Calithera Biosciences, Inc. | Arginase inhibitor combination therapies |
-
2019
- 2019-01-24 WO PCT/EP2019/051806 patent/WO2019145453A1/en active Application Filing
- 2019-01-24 US US16/963,380 patent/US20210177897A1/en active Pending
- 2019-01-24 AU AU2019211067A patent/AU2019211067A1/en not_active Abandoned
- 2019-01-24 CA CA3125797A patent/CA3125797A1/en active Pending
- 2019-01-24 EP EP19705288.9A patent/EP3743510A1/en active Pending
- 2019-01-24 JP JP2020541437A patent/JP2021517454A/ja active Pending
- 2019-01-24 CN CN201980021913.2A patent/CN111902532A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2431080A1 (en) * | 2003-06-02 | 2004-12-02 | Catherine Adele O'brien | Enhancement of anticancer immunity through inhibition of arginase |
| WO2014059248A1 (en) * | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Philadelphia Health & Education Corporation D/B/A/ Drexel | Mir-155 enhancement of cd8+ t cell immunity |
| US20150275209A1 (en) * | 2012-10-22 | 2015-10-01 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Service | Compositions and methods for enhancing cancer immunotherapy |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ADRIÀ-ARNAU MARTÍ I LÍNDEZ等: "Mitochondrial arginase-2 is a cell-autonomous regulator of CD8 + T cell function and antitumor efficacy", 《JCI INSIGHT》 * |
| ISABELLE DUNAND-SAUTHIER等: "Repression of Arginase-2 Expression in Dendritic Cells by MicroRNA-155 Is Critical for Promoting T Cell Proliferation.", 《THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY》 * |
| ROGERGEIGER等: "L-Arginine Modulates T Cell Metabolism and Enhances Survival and Anti-tumor Activity", 《CELL》 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA3125797A1 (en) | 2019-08-01 |
| US20210177897A1 (en) | 2021-06-17 |
| JP2021517454A (ja) | 2021-07-26 |
| WO2019145453A1 (en) | 2019-08-01 |
| EP3743510A1 (en) | 2020-12-02 |
| AU2019211067A1 (en) | 2020-08-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107206024B (zh) | 改变cart细胞中的基因表达及其用途 | |
| JP2021522820A (ja) | 癌を治療するための方法及び組成物 | |
| Tomuleasa et al. | Chimeric antigen receptor T-cells for the treatment of B-cell acute lymphoblastic leukemia | |
| JP7235391B2 (ja) | 人工的に操作された免疫細胞 | |
| CN109121413A (zh) | 使用靶向核酸纳米载体编程治疗性细胞的组合物和方法 | |
| US20230348855A1 (en) | Reducing fratricide of immune cells expressing nkg2d-based receptors | |
| CN115151275A (zh) | 用于向细胞递送核酸的组合物和方法 | |
| KR20200142037A (ko) | 인간 t 세포 수용체 알파 불변 영역 유전자에 대한 특이성을 갖는 최적화된 조작된 뉴클레아제 | |
| CN111902532A (zh) | 用于癌症治疗的精氨酸酶抑制 | |
| CA3076095A1 (en) | A grna targeting hpk1 and a method for editing hpk1 gene | |
| JP2022509017A (ja) | 抗ｐｔｋ７免疫細胞癌療法 | |
| JP2022512922A (ja) | キメラ抗原受容体記憶様（ｃａｒｍｌ）ｎｋ細胞ならびにその産生および使用方法 | |
| WO2019118793A2 (en) | Subject-specific tumor inhibiting cells and the use thereof | |
| Tuomela et al. | Eras of designer Tregs: Harnessing synthetic biology for immune suppression | |
| US20200397824A1 (en) | In vivo priming of natural killer cells | |
| US20180066253A1 (en) | Methods and compositions for modifying endothelial cells | |
| EP3720951A1 (en) | Compositions and methods for improving persistence of cells for adoptive transfer | |
| EP4279085A1 (en) | Compositions and methods for treating a refractory or relapsed cancer or a chronic infectious disease | |
| Kong et al. | Chimeric antigen receptor-natural killer cell therapy: current advancements and strategies to overcome challenges | |
| US20200101106A1 (en) | In vivo priming of natural killer cells | |
| WO2024059821A2 (en) | Car t cell compositions for treatment of cancer | |
| WO2024062138A1 (en) | Immune cells comprising a modified suv39h1 gene | |
| CN114929867A (zh) | 一种经修饰的免疫效应细胞及其用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20201106 |