CN111902526A - 清净空间维持装置、建筑结构体、细胞培养方法及细胞制造方法 - Google Patents

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CN111902526A CN201880091624.5A CN201880091624A CN111902526A CN 111902526 A CN111902526 A CN 111902526A CN 201880091624 A CN201880091624 A CN 201880091624A CN 111902526 A CN111902526 A CN 111902526A
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Abstract

实现能够持续地进行细胞培养的细胞培养方法等。作业室(40)包括对作业空间(48)内供给正负离子的离子产生器(47)。

Description

清净空间维持装置、建筑结构体、细胞培养方法及细胞制造 方法
技术领域
本发明关于清净空间的细胞培养方法及为此的装置、设施等。
背景技术
在进行细胞培养的情况下，为了防止污染，会在清净空间(无菌空间)内进行作业。在专利文献1，公开有形成清净空间的安全柜的例子。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本公开特许公报“特开2016-165249号公报”
发明内容
本发明所要解决的技术问题
为了维持清净空间，有在细胞培养的区段内的好的时机进行除菌处理的必要。也有针对研究设施整体进行除菌处理的情形。作为除菌处理，一般而言进行使用了福马林、过氧乙酸制剂、过氧化氢或紫外线等的处理。
在如此的现有的除菌处理，有以下问题：在进行所述除菌处理的期间(从数小时到一周左右)，无法进行细胞培养以及与细胞培养有关的作业。
本发明的一方案是将实现能够持续地进行细胞培养或与细胞培养有关的作业的清净空间维持装置以及细胞培养方法等设为目的。
解决问题的方案
为了解决上述的课题，本发明的一实施方式的清净空间维持装置，包括：空间形成部，对用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间进行划分；以及抑制因子供给部，对所述空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或对被供给到所述空间的气体所通过的过滤器供给第二微生物生育抑制因子。
本发明的一实施方式的细胞培养方法，包含以下工序：对用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或将利用第二微生物生育抑制因子而生成的清净气体对所述空间供给；以及在被供给有所述第一微生物生育抑制因子的所述空间内或被供给有所述清净气体的所述空间内进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业。
本发明的一实施方式的细胞制造方法，包含以下工序：对用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或将利用第二微生物生育抑制因子而生成的清净气体对所述空间供给；以及在被供给有所述第一微生物生育抑制因子的所述空间内或被供给有所述清净气体的所述空间内进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业，藉此制造培养细胞。
本发明的一实施方式的建筑结构体，划定用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间，包括：抑制因子供给部，对所述空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或对被供给到所述空间的气体所通过的过滤器供给第二微生物生育抑制因子。
发明效果
根据本发明的一方案，能够不因除菌处理而中断，持续地进行细胞培养或与细胞培养有关的作业。
附图说明
图1是表示实施方式1的安全柜的构成的剖面图。
图2是表示离子产生器的构成的图。
图3是表示实施方式2的清洁室的构成的剖面图。
图4是将实施方式3的培养箱在与其正面平行的平面切断时的剖面图。
图5是表示实施方式4的细胞培养系统的构成的示意图。
图6是表示过滤方式的抑制因子供给部与过滤器的位置关系的图。
图7是表示正负离子对于支原体(Mycoplasma)的效果的图。
图8是表示正负离子对于浮游细菌的效果的图。
具体实施方式
[实施方式1]
以下，针对本发明的一实施方式，进行详细地说明。在本说明书中，所谓除菌的概念，不仅使细菌、霉菌类、病毒等的微生物死灭，还包含抑制所述微生物的生育以及增殖、以及将所述微生物藉由过滤等物理性地去除。另外，在以下，有将所述微生物称为细菌等。
图1是表示本实施方式的安全柜1的构成的剖面图。安全柜1为维持用以进行与细胞培养有关的作业的清净空间(无菌空间)的清净空间维持装置。安全柜1尤其是假设为对与再生医疗有关的多细胞生物(例如，人类)的细胞进行培养而设计。成为上述细胞培养对象的细胞，例如为人工多能性干细胞(iPS细胞)。但是，也可以为了用以再生医疗的细胞培养以外的无菌操作(例如，细菌、真菌或植物细胞的培养)而使用安全柜1。
如图1所示，安全柜1包括空间形成部4，其划分用以进行与细胞培养有关的作业的作业空间3。空间形成部4的底面被利用作为作业台5。前面挡门12也能够视为空间形成部4的一部分。
从作为前面挡门12与作业台5之间的间隙即开口部13吸入的室内空气14，向形成在作业台5的开口部15流入后，通过形成在本体2的内部的循环流路16，被吸入送风机9。被吸入到送风机9的空气，由给气用HEPA(High Efficiency Particulate Air Filter)过滤器7过滤后，通过离子产生器8(抑制因子供给部)，藉此被赋予正离子及负离子(第一微生物生育抑制因子)。被赋予正离子及负离子的空气，作为清净空气17(清净气体)被供给到作业空间3。
离子产生器8，较佳为以作业空间3内的正离子及负离子的浓度分别为7000个/cm3以上、100万个/cm3以下，更佳为7000个/cm3以上、40万个/cm3以下的方式供给正离子及负离子。将正离子及负离子的浓度设为7000个/cm3以上，藉此能够抑制细菌等的生育以及增殖。又，将正离子及负离子的浓度设为100万个/cm3以下，藉此能够抑制对成为培养对象的细胞的不良影响。进而，将所述浓度设为40万个/cm3以下，藉此能够更确实地抑制所述不良影响。本发明的发明者确认了以下事态：若将所述浓度设为40万个/cm3以下，则在培养iPS细胞的情况下，针对阳性率、生存率以及增殖率会获得与对照组相同的值。另外，在以下的说明中，有将正离子及负离子总称称为正负离子。
如此般离子产生器8内置在安全柜1，对向作业空间3供给的气体供给作为第一微生物生育抑制因子的正负离子。由于在清净空气17含有正负离子，因此能够抑制存在于作业空间3内的细菌等的生育以及增殖。
向作业空间3内供给的清净空气17的一部分，向开口部15流入后，被吸入送风机9，再次被赋予正负离子。如此对在安全柜1的内部进行循环的空气持续地赋予正负离子，藉此维持作业空间3的清净度。
另一方面，在循环流路16上升的空气的一部分，由排气用HEPA10过滤，作为清净空气从排气口11向装置外排出。
在本说明书中的微生物生育抑制因子，是指具有使细菌、霉菌类等对细胞培养造成不良影响的微生物的生育以及增殖获得抑制的能力的物质、具有使病毒等的微生物不活化的能力的物质、或为了从空气中去除上述的微生物而被利用的物质。作为微生物生育抑制因子的利用方式，考虑有将微生物生育抑制因子向作业空间3供给的方式(放出方式)、与对被供给到作业空间3内的气体通过的过滤器供给微生物生育抑制因子的方式(过滤方式)。
在放出方式使用的第一微生物生育抑制因子，虽然具有抑制细菌或霉菌类的生育及增殖的能力、或使病毒不活化的能力，但是较佳为对人体无害，实质上不会阻碍多细胞生物的细胞增殖的因子。
在放出方式中，作为可利用的第一微生物生育抑制因子，能够列举出包含正负离子、及自由基的奈米尺寸的带电微粒子。在过滤方式中，作为可利用的第二微生物生育抑制因子，能够列举出电荷、低温等离子体及氯化合物。针对正负离子以外的微生物生育抑制因子的细节在下面说明。
虽然给气用HEPA过滤器7为用以捕捉细菌、病毒等的微生物或不活化对象的过滤器，但是在藉由正负离子的抑制微生物的生育及增殖的效果充分的情况下，也可省略给气用HEPA过滤器7。
图2是表示离子产生器8的构成的图。如图2的(a)所示，离子产生器8包括在相对于气流F1、F2垂直的方向上并排的两个离子产生部8A及8B。未图示的给电部对离子产生部8A以及8B供给电压，藉此离子产生部8A及离子产生部8B分别进行电晕(corona)放电，产生离子。离子产生部8A产生正离子，离子产生部8B产生负离子。
又，如图2的(a)所示，也可以并排使两个以上的离子产生部8A并排而成的第一单元81、与使两个以上的离子产生部8B并排而成的第二单元82来作为离子产生器8。
离子产生部8A及8B，分别具有呈尖锐状的放电电极凸部8Aa、8Ba、以及围绕放电电极凸部8Aa、8Ba的感应电极环8Ab、8Bb。放电电极凸部8Aa及8Ba分别配置在感应电极环8Ab、8Bb的中心部。
另外，放电电极凸部8Aa、8Ba，可以为面电极、针电极、刷电极等，只要是可放电，则不论放电电极凸部8Aa、8Ba的形状、种类以及原材料为何皆可。
离子产生部8A被施加正电压。若对离子产生部8A施加正电压，则在放电所致的等离子区域，空气中的水分子被电解，主要生成氢离子H+。而且，在已生成的氢离子H+的周围凝集空气中的水分子，形成稳定的电荷为正的簇离子H+(H2O)m。
离子产生部8B被施加负电压。若对离子产生部8B施加负电压，则在放电所致的等离子区域，空气中的氧分子被电解，主要生成氧离子O2 -。而且，在已生成的氧离子O2 -的周围凝集空气中的水分子，形成稳定的电荷为负的簇离子O2 -(H2O)n。在此，m、n为任意的整数。在本说明书中，称为“正离子”时是指正的簇离子，称为“负离子”时是指负的簇离子。另外，正负的簇离子的生成，能够藉由飞行时间分解质谱(Time of flight mass spectrometry)来确认。
(安全柜1的效果)
若正离子以及负离子同时被放出到空气中，则在空气中浮游的微生物的表面凝集而包围所述等微生物。并且，瞬间正离子与负离子结合，而[·OH](羟基自由基)或H2O2(过氧化氢)被凝集生成在微生物的表面上。[·OH]及H2O2，由于是氧化力非常高的活性种，因此藉由化学反应分解微生物表面的蛋白质以抑制微生物活动。
因此，藉由离子产生器8使正离子及负离子产生，向作业空间3供给，藉此能够使存在于作业空间3内的病毒不活化，抑制存在于作业空间3内的细菌及霉菌类的生育及增殖。
正负离子由于对人体及培养细胞无害，因此能够一边进行细胞培养的作业，一边进行作业空间3的除菌。因此，不会产生为了除菌处理而不能进行细胞培养的作业的时期。其结果，能够进行效率良好的细胞培养。
虽然在现有的安全柜中，也能够藉由给气用HEPA过滤器7捕捉细菌等，但是难以抑制侵入到作业空间3的细菌等的生育以及增殖。
[实施方式2]
针对本发明的其他的实施方式，在进行以下说明。另外，为了便于说明，针对具有与在上述实施方式已说明的构件相同功能的构件，标注相同的符号，不重复其说明。
图3是表示本实施方式的清洁室20的构成的剖面图。清洁室20为内置有离子产生器8的清净空间维持装置。如图3所示，清洁室20使送风机9动作藉此从给气口21供给空气，已供给的空气通过给气用HEPA过滤器7。进而，清洁室20对于通过给气用HEPA过滤器7的空气，藉由离子产生器8赋予正负离子。已被赋予正负离子的空气(清净空气17)，向作业空间3供给。
离子产生器8较佳为以作业空间3内的正离子以及负离子的浓度分别为7000个/cm3以上、100万个/cm3以下，更佳为7000个/cm3以上、40万个/cm3以下的方式供给正负离子。
藉由清净空气17所含有的正负离子，能够使存在于作业空间3内的病毒不活化，且抑制存在于作业空间3内的细菌以及霉菌类的生育以及增殖。清洁室20除了用以与再生医疗有关的细胞培养的作业以外，还能够作为用以进行其他的无菌操作(例如，用以细菌、真菌或植物细胞的培养的作业)的清净空间维持装置而使用。
[实施方式3]
针对本发明的再另外的实施方式，在以下进行说明。另外，为了便于说明，针对具有与在上述实施方式已说明的构件相同功能的构件，标注相同的符号，不重复其说明。
图4是表示本实施方式的培养箱(incubator)30(恒温装置)的构成的剖面图。图4是将培养箱30在与其正面平行的平面切断时的剖面图。培养箱30是内置有离子产生器35(抑制因子供给部)的清净空间维持装置。
如图4所示，培养箱30，包括用以载置培养皿等的多个层架31、保持层架31的框32、送风机34、离子产生器35以及加热器36。离子产生器35与离子产生器8相同地使正负离子产生。
离子产生器35，较佳为以作业空间3内的正离子及负离子的浓度分别为7000个/cm3以上、100万个/cm3以下，更佳为7000个/cm3以上、40万个/cm3以下的方式供给正负离子。
藉由培养箱30的本体37(恒温空间形成部)，划分用以培养细胞的培养空间38(恒温空间)。此培养空间藉由加热器36调节成对培养较佳的温度。又，也可以将用以将CO2向培养空间38供给的供给管(未图示)设置在本体37。
藉由送风机34，在培养箱30的内部产生气流。此气流在流路33进行循环，并且通过形成在框32的多个开口部而通过层架31之间。离子产生器35，位于在流路33中较送风机34靠气流下游的位置。因此，离子产生器35产生的正负离子，能够在培养箱30的内部循环，且维持培养箱30的内部的清净度。
[实施方式4]
针对本发明的再另外的实施方式，在以下说明。图5是表示本实施方式的细胞培养系统60的构成的示意图。细胞培养系统60为用以培养与再生医疗有关的多细胞生物的细胞的系统(细胞培养设施)。但是，也可以将细胞培养系统60作为用以再生医疗的细胞培养以外的细胞培养的系统而使用。
细胞培养系统60，包括作业室40(建筑结构体)及控制装置50。细胞培养系统60也可以包括多个作业室40。作业室40，具有多个壁面41、底板42及顶板(未图示)，藉由这些构件来划分作业空间48。作业空间48为用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间。在壁面41的至少一个，设置至少一个门43。向作业空间48的进出，能够藉由开闭门43而进行。
在作业空间48，配置有安全柜1、清洁室20以及培养箱30。这些装置的配置没有特别限定，也可以仅配置这些装置中的一部分。又，也可以取代这些装置，而配置现有的安全柜、清洁室或培养箱。
在壁面41或顶板的至少一处，设置有空调机44(抑制因子供给部)。空调机44为装配的装置，具有一般的空调功能以及使正负离子产生的功能。此空调机44包括HEPA过滤器45、送风机46以及离子产生器47。离子产生器47与离子产生器8相同地使正负离子产生。已产生的正负离子，乘着送风机46产生的气流，放出到作业空间48。只要以送风机46产生的气流遍布到作业空间48的各角落的方式，设定空调机44的设置位置及送风方向即可。
离子产生器47，较佳为以作业空间48内的正离子及负离子的浓度分别为7000个/cm3以上、100万个/cm3以下，更佳为7000个/cm3以上、40万个/cm3以下的方式供给正负离子。若是正负离子的浓度分别为7000个/cm3以上的话，则能够抑制细菌及病毒等的生育及增殖。另一方面，若正离子及负离子的浓度过高，有对细胞培养带来阻碍的疑虑。因此，正离子及负离子的浓度较佳分别为100万个/cm3以下，更佳为40万个/cm3以下。
但是，正离子以及负离子的浓度的上限值，根据成为培养对象的细胞而不同。因此，也可以根据在开始细胞培养前成为培养对象的细胞种类，设定作业空间48中的正负离子的浓度。
作为使作业空间48内的正负离子的浓度变化的方法，能够使用以下方法：(1)变更空调机44的设置台数、(2)变更设置的多个空调机44(或离子产生器47)之中的，进行动作的空调机44(或离子产生器47)的数量、(3)变更空调机44的设置位置、(4)变更送风机46的风速、风量或风向等。为了使如此的调整成为可能，也可以使空调机44并非为装配的装置，而是作为可移动的装置而实现。
控制装置50为控制空调机44的装置，可以设置在作业室40的内部，也可以设置在作业室40的外部，也可以内置在空调机44。控制装置50，也可以控制设置在多个作业室40的各个的空调机44。
控制装置50，遵从使用作业室40的用户的指示来控制空调机44的动作。尤其是，控制装置50也可以遵从所述用户的指示而对离子产生器47产生的正负离子的量进行调节。离子产生器47只要持续地产生正负离子即可。但是，也可以在不进行无菌操作的时间带(例如，夜间)中，控制装置50以离子产生器47不产生正负离子的方式控制离子产生器47。
又，控制装置50，也可以根据门43的开闭，使离子产生器47的正负离子的供给量变化。例如，控制装置50，也可以从门43打开后经过既定的时间(例如，5分钟)，使藉由离子产生器47的正负离子的供给量增加。藉由此构成，能够在易于产生污染的状况中提高由正负离子产生的除菌效果。相反的，也可以在长时间不进行门43的开闭的情况下，使藉由离子产生器47的正负离子的供给量降低。
门43的开闭，藉由与控制装置50可通信地连接的传感器51而被检测。传感器51可以是物理性地检测门43的开闭的装置，也可以是红外线传感器等，光学性地检测门43的开闭的装置。
(细胞培养系统60的效果)
在细胞培养系统60中，藉由离子产生器47使正离子及负离子产生，向作业空间48供给，藉此能够使存在于作业空间48内的病毒等不活化，且抑制存在于作业空间48内的细菌以及霉菌类等的生育以及增殖。
进而，在配置在作业空间48内的安全柜1、清洁室20以及培养箱30的内部中，也由正负离子进行除菌，藉此能够更确实地进行除菌。
正负离子由于对人体及培养细胞无害，因此能够一边进行细胞培养的作业，一边进行作业空间48的除菌。因此，不会产生为了除菌处理而不能进行细胞培养的作业的期间。其结果，能够进行效率良好的细胞培养。
又，在现有的使用福马林等的除菌方法中，无法防止在除菌处理之后产生污染。但是，在细胞培养系统60的除菌方法中，即便在作业中也能够持续地进行除菌。因此，即便在作业者附着细菌等的情况下，也能够抑制所述细菌等的生育以及增殖。
在如此的作业空间48的内部培养(被制造)出的培养细胞也包含在本发明的技术性范围。
[实施方式5]
在上述的实施方式1～4中，作为微生物生育抑制因子，能够使用除了正负离子以外的物质。
也可以使用电荷以及低温等离子体(第二微生物生育抑制因子)作为微生物生育抑制因子。在此情况下，安全柜1、清洁室20、培养箱30以及空调机44，取代离子产生器8、35、47，而包括离子化部以及放电装置作为抑制因子供给部。在所述构成中，上述放电装置装入在离子化部，在所述离子化部的下游(空气的流动的下游)设置静电过滤器以及触媒过滤器。
上述离子化部，包括用以使空气中的较小的尘埃、细菌、病毒等(以下，称为细菌等)带电的多个离子化线以及多个对向电极。这些离子化线以及对向电极，位于与上述静电过滤器平行的一片假想面上。藉由上述离子化部而带有正电的细菌等，被带有负电的静电过滤器捕集。
上述放电装置为产生低温等离子体的装置，包括放电电极以及对向电极。所述放电装置包括的对向电极，与上述离子化部的对向电极共用。在这些放电电极与对向电极之间施加放电电压。所述放电装置朝向位于下游的触媒过滤器供给低温等离子体。
在放电装置产生的低温等离子体包含有反应性高的物质(电子、离子、臭氧、自由基等的活性种)。这些反应性高的物质，若到达触媒过滤器，则进而活性化而分解去除空气中的有害物质以及臭气物质。
作为微生物生育抑制因子，也可以使用包含自由基的奈米尺寸的带电微粒子(第一微生物生育抑制因子)。所述带电微粒子为对人体无害的微生物生育抑制因子。在此情况下，安全柜1，取代离子产生器8、35、47，而包括生成所述带电微粒子的静电雾化装置作为抑制因子供给部。以静电雾化产生的雾，当电场强度为700～1200V/mm时，成为具有3～100nm的粒子径的奈米尺寸的微粒子的集合。这些微粒子，具有自由基(羟基自由基、超氧化物等)，且具有强的电荷量。
将上述带电微粒子向作业空间3、48或培养箱30的内部供给，藉此能够维持作业空间3、48以及培养箱30的内部的清净度。
也可以使用氯化合物(第二微生物生育抑制因子)，作为微生物生育抑制因子。在此情况下，安全柜1，取代离子产生器8、35、47，而包括将氯化合物向空气中供给的氯化合物供给部(抑制因子供给部)、和与上述氯化合物进行反应的气体处理用过滤器。气体处理用过滤器，藉由保持具有一级胺基(Primary amino group)的化合物、氨、以及铵盐的任一个的纤维而构成，且关于送风机9、34、46产生的气流，设置在与上述氯化合物供给部相比为下游。
上述氯化合物供给部，也可以包含贮存含有氯化合物的水的贮水部与将含有氯化合物的水进行喷雾的喷雾部的组合、或所述贮水部与以促进含有氯化合物的水的挥发的方式使气液接触效率提升的挥发促进部的组合。所述挥发促进部，例如为多数个具有分歧形状的吸水性的纤维体。
又，上述氯化合物供给部，进而也可以包括对含有氯化物离子的水进行电解藉此生成所述含有氯化合物的水的电解单元。所述电解单元包括电极板，生成包含氯化物离子的水，例如对溶有氯化钠的水进行通电，藉此生成以次氯酸为代表的含有氯化合物的水(电解水)。所生成的含有氯化合物的水贮存在上述贮水部。
由所述氯化合物供给部供给的氯化合物，藉由与所述气体处理用过滤器上的，具有一级胺基的化合物、氨、以及铵盐的任一个进行反应而成为结合氯。因此，所述氯化合物供给部，可以说是朝向所述气体处理用过滤器供给氯化合物。
当从送风机9、34、46产生的气流通过上述气体处理用过滤器时，所述气流所包含的细菌等与结合氯接触，藉此能够抑制所述细菌等的生育及增殖。
图6是表示对被供给到作业空间3内的气体通过的过滤器供给第二微生物生育抑制因子的实施方式的抑制因子供给部与过滤器的位置关系的图。如图6所示，在利用第二微生物生育抑制因子的实施方式中，在使第二微生物生育抑制因子产生的抑制因子供给部80的下游，配置有与第二微生物生育抑制因子进行作用的，所述的各种的过滤器(总称为过滤器70)。此构成可适用于上述的安全柜1、清洁室20、培养箱30以及空调机44。
如以上，抑制因子供给部也可以对用以细胞培养的培养空间38或作业空间3、48供给微生物生育抑制因子。又，抑制因子供给部也可以对被供给到培养空间38或作业空间3、48内的空气(气体)通过的过滤器供给微生物生育抑制因子。
[实施例1]
一边参照图7一边对正负离子的效果进行说明。在本实施例中，调查了正负离子的对于支原体(霉浆菌)(Mycoplasma pneumoniae NBRC14401)的效果。
将支原体生长的10μl培养液，点在已在培养皿中制备的琼脂培养基上(共12盘)。在这些之中的六盘的培养皿照射正负离子，剩下的培养皿作为对照组使用。正负离子的照射，使用夏普公司制的离子产生元件(A272AK)，并在安全柜内设置的压克力盒内进行了24小时或48小时。对上述离子产生元件施加DC5V作为输入电压，使上述离子产生元件放电而产生离子。
其后，为了形成菌落(colony)，在放入了Anellopack微有氧(三菱气体)的广口瓶内放置共12盘培养皿，在37℃下培养五天。培养后，使用显微镜(40倍)来计算菌落。在图6表示其结果。
如图7所示，明确得知：因照射正负离子(PCI)，支原体的生育数显着地(p＜0.002)较未照射的情况(对照组)减少。
如在后述实施例2的例子所示，已明确得知：正负离子有抑制各种的细菌的生育以及增殖的效果以及使病毒不活化的效果。又，明确得知其效果依赖于正负离子的浓度。因此，被认为正负离子对于支原体的效果也是浓度依赖性的。
在本实施例中培养皿周围的正负离子的浓度为约7000个/cm3左右，被认为能够以与为了抑制其他细菌等的生育以及增殖所需的正负离子的浓度相等的浓度来抑制支原体的生育以及增殖。
在进行用以再生医疗的细胞培养时，支原体成为污染的主要原因。支原体被推测为源自作业者的身体，有可能在培养细胞的移植时引起污染。如此的污染，难以以现有的除菌方法来防止。
正负离子由于对人体以及培养细胞为无害，因此即便在作业中也可照射。照射这种正负离子，藉此能够防止支原体所致的污染，因此可效率良好地进行用以再生医疗的细胞培养。
[实施例2]
在本实施例中，对正负离子对于浮游细菌的效果进行了调查。图8是表示正负离子对于浮游细菌的效果的图。成为除菌对象的浮游细菌，为MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)以及MDRP(多药耐性绿脓杆菌)。
在内部空间的容积为1m3即腔内设置夏普公司制的离子产生装置后，对腔内喷雾包含MRSA以及MDRP的菌液。藉由离子产生装置使正负离子产生后，在0、10、20、30、40、50分后将腔内的浮游菌利用采集器(impinger)回收，评估捕集液中的菌数。
如图8的(a)所示，在使7千个/cm3的浓度的正负离子产生的情况下，与自然衰减的情况进行比较，MRSA在30分内被除去了约99.9％。在使2万5千个/cm3的浓度的正负离子产生的情况下，MRSA在20分内被去除了约99.9％。
如图8的(b)所示，在使7千个/cm3的浓度的正负离子产生的情况下，与自然衰减的情况进行比较，MDRP在40分内被去除了约99.9％。在使2万5千个/cm3的浓度的正负离子产生的情况下，MDRP在30分内被去除了约99.9％。
从以上的结果可知，正负离子有抑制MRSA以及MDRP的生育及增殖的效果，所述效果依赖于正负离子的浓度。因此，被认为实施例1所示的正负离子对于支原体的效果也是浓度依赖性的。
[总结]
本发明的方案1的清净空间维持装置，构成为包括：空间形成部，对用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间进行划分；以及抑制因子供给部，对所述空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或对被供给到所述空间的气体所通过的过滤器供给第二微生物生育抑制因子。
藉由上述的构成，由于能够不对人体以及培养细胞造成影响地进行除菌，因此能够不因除菌处理而中断，持续地进行细胞培养。
本发明的方案2的清净空间维持装置，也可以构成为，在上述方案1中，所述抑制因子供给部藉由放电或电解而生成所述第一或第二微生物生育抑制因子。
本发明的方案3的清净空间维持装置，也可以构成为，在上述方案1或2中，所述第一微生物生育抑制因子包含正离子以及负离子。
将正负离子作为微生物生育抑制因子，藉此能够不对人体以及培养细胞造成影响地、有效地除菌。
本发明的方案4的清净空间维持装置，也可以构成为，在上述方案3中，所述抑制因子供给部，以所述空间内的正离子及负离子的浓度分别成为7000个/cm3以上的方式供给正离子及负离子。
本发明的方案5的清净空间维持装置，也可以构成为，在上述方案4中，所述抑制因子供给部，以所述空间内的正离子及负离子的浓度分别成为7000个/cm3以上、100万个/cm3以下的方式供给正离子及负离子。
根据上述的构成，使正离子及负离子的浓度成为7000个/cm3以上，藉此能够抑制细菌等的生育及增殖。又，使正离子及负离子的浓度成为100万个/cm3以下，藉此能够抑制对成为培养对象的细胞的不良影响。
本发明的方案6的细胞培养方法，包含以下工序：对用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或将利用第二微生物生育抑制因子而生成的清净气体对所述空间供给；以及在被供给有所述第一微生物生育抑制因子的所述空间内或被供给有所述清净气体的所述空间内进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业。
在本发明的方案7的细胞培养方法中，也可以是根据成为所述细胞培养的对象的细胞的种类，设定所述空间的所述第一微生物生育抑制因子或所述第二微生物生育抑制因子的浓度。
本发明的方案8的细胞培养方法中，成为所述细胞培养的对象的细胞，也可以是人工多能性干细胞。
本发明的方案9的细胞制造方法，包含以下工序：对用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或将利用第二微生物生育抑制因子而生成的清净气体对所述空间供给；以及在被供给有所述第一微生物生育抑制因子的所述空间内或被供给有所述清净气体的所述空间内进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业，藉此制造培养细胞。
本发明的方案10的建筑结构体，对用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间进行划定，构成为包括：抑制因子供给部，对所述空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或对被供给到所述空间的气体所通过的过滤器供给第二微生物生育抑制因子。
本发明的方案8的建筑结构体，也可以构成为，在上述方案7中，包括：门，用以进出所述空间；其中所述抑制因子供给部根据所述门的开关使所述第一微生物生育抑制因子的供给量变化。
藉由上述的构成，可根据易引起污染的状况，即门被开闭与否而调节第一微生物生育抑制因子的除菌效果。
附图标记说明
1…安全柜；3…作业空间；4…空间形成部；8、35、47…离子产生器(抑制因子供给部)；20…清洁室；30…培养箱；38…培养空间；40…作业室；43…门；44…空调机；48…作业空间；50…控制装置；60…细胞培养系统；70…过滤器；80…抑制因子供给部。

Claims (11)

1.一种清净空间维持装置，其特征在于，包括：
空间形成部，对用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间进行划分；以及
抑制因子供给部，对所述空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或对被供给到所述空间的气体所通过的过滤器供给第二微生物生育抑制因子。
2.根据权利要求1所述的清净空间维持装置，其特征在于，
所述抑制因子供给部藉由放电或电解而生成所述第一或第二微生物生育抑制因子。
3.根据权利要求1或2所述的清净空间维持装置，其特征在于，
所述第一微生物生育抑制因子包含正离子以及负离子。
4.根据权利要求3所述的清净空间维持装置，其特征在于，
所述抑制因子供给部以所述空间内的正离子及负离子的浓度分别成为7000个/cm3以上的方式供给正离子及负离子。
5.根据权利要求4所述的清净空间维持装置，其特征在于，
所述抑制因子供给部以所述空间内的正离子及负离子的浓度分别成为7000个/cm3以上、100万个/cm3以下的方式供给正离子及负离子。
6.一种细胞培养方法，其特征在于，包含以下工序：
对用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或将利用第二微生物生育抑制因子而生成的清净气体对所述空间供给；以及
在被供给有所述第一微生物生育抑制因子的所述空间内或被供给有所述清净气体的所述空间内进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业。
7.根据权利要求6所述的细胞培养方法，其特征在于，包括：
根据成为所述细胞培养的对象的细胞的种类，设定所述空间的所述第一微生物生育抑制因子或所述第二微生物生育抑制因子的浓度。
8.根据权利要求6或7所述的细胞培养方法，其特征在于，
成为所述细胞培养的对象的细胞，为人工多能性干细胞。
9.一种细胞制造方法，其特征在于，包含以下工序：
对用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或将利用第二微生物生育抑制因子而生成的清净气体对所述空间供给；以及
在被供给有所述第一微生物生育抑制因子的所述空间内或被供给有所述清净气体的所述空间内进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业，藉此制造培养细胞。
10.一种建筑结构体，其特征在于，划定用以进行细胞培养或与所述细胞培养有关的作业的空间，包括：
抑制因子供给部，对所述空间供给对人体无害的第一微生物生育抑制因子、或对被供给到所述空间的气体所通过的过滤器供给第二微生物生育抑制因子。
11.根据权利要求10所述的建筑结构体，其特征在于，包括：
门，用以进出所述空间；其中
所述抑制因子供给部根据所述门的开关使所述第一微生物生育抑制因子的供给量变化。
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