CN111893081B - 一种酸鱼乳杆菌菌株及其用途 - Google Patents

一种酸鱼乳杆菌菌株及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种酸鱼乳杆菌菌株及其应用,所述的菌株酸鱼乳杆菌(Lactobacillus acidipiscis),保藏编号为CGMCC No.20471,菌株的16s rDNA碱基序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还涉及将所述菌株用于种植及养殖的方法,具体步骤为:(1)发酵培养基配方;(2)发酵方法(包括发酵参数和方法);(3)发酵液种植应用方法;(4)发酵液养殖应用方法;本发明的有益效果是通过菌株在土壤、秸秆、饲料或水产养殖水体中快速繁殖,同时通过不断抑制其他微生物(包括致病菌)占据微生态区位优势,避免有害物质的形成,改善植物的生长环境,促进秸秆分解及分解产物的无害化,提高动物胃肠道功能,降解养殖水体亚硝酸盐。

Description

一种酸鱼乳杆菌菌株及其用途
技术领域
本发明涉及一种菌株及其应用,具体涉及一种促进作物生长、降解秸秆、促进动物生长和减少鱼虾养殖水体中亚硝酸盐积累的酸鱼乳杆菌菌株及其用途。
背景技术
目前,化肥农药过量使用,是种植业面源污染的主要原因,不仅导致耕地质量的下降,病虫害日益严重,也造成了农产品品质的下降。同时,我国的秸秆综合利用瓶颈依然存在,一方面要禁止焚烧秸秆以避免污染空气,但另一方面秸秆直接还田又存在容易引发病虫害,影响作物生长等一系列问题。国内的养殖业也正在进入恶性循环:低成本的高密度饲养导致养殖环境差、饲料原料品质低劣—动物抗病性差—大量使用抗生素—抗生素影响动物消化道系统—肠胃菌群紊乱和免疫力低下—药物及激素的使用剂量不断加大。最终导致人类健康受到威胁,环境受到污染。因此,在农业上需要大力进行技术革新,发展生物种植、生态养殖,快速推进农业绿色发展和现代化。
农用微生物菌剂在我国生产和应用已有几十年历史,经历了几个发展过程。目前农用微生物菌剂生产产品较为单一,主要是芽孢杆菌、酵母、梭菌等几类非常传统的微生物。生产厂家也只看重产量及活菌数而轻视实际应用效果,生产和市场管理也都存在许多不规范的现象。
发明内容
本发明的目的之一在于解决上述现有技术的不足,提供一种酸鱼乳杆菌。
本发明的目的之二在于解决上述现有技术的不足,提供一种酸鱼乳杆菌的用途,应用于农业种植及养殖,将所述酸鱼乳杆菌施用到土壤、秸秆、饲料或水产养殖水体中,所述酸鱼乳杆菌能够利用环境中的营养物质快速繁殖,同时通过不断抑制其他微生物(包括致病菌)占据微生态区位优势,避免有害物质的形成,改善植物的生长环境,促进秸秆分解及分解产物的无害化,提高动物胃肠道功能,降解养殖水体亚硝酸盐,实现农业绿色发展和现代化。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种酸鱼乳杆菌(Lactobacillus acidipiscis)菌株,菌株代码为LA-001,保藏编号为CGMCC No.20471,保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),保藏单位地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏日期为2020年07月30日。
所述菌株为革兰氏阳性细菌,经生理生化及16rDNA序列测定,菌株LA-001为酸鱼乳杆菌(Lactobacillus acidipiscis),菌株的16s rDNA碱基序列SEQ ID NO:1所示。
本发明还公开了所述酸鱼乳杆菌菌株应用于种植业、养殖业的方法,包括以下内容:
1.配制培养基:蔗糖1.5%(g/ml),酵母提取物1.5%(g/ml),氯化钠0.5%(g/ml),水补足,灭菌后备用;
2.液体深层发酵培养:将所述菌株单菌落接入上述培养基中,100r/min震荡培养,发酵温度为35℃,发酵时间48h,测得发酵液OD值为7;
3.促进作物生长方面的应用:需要将所述酸鱼乳杆菌的发酵液以基肥或者追肥的形式施入土壤,其中发酵液每亩土地使用量为20kg。
4.降解秸秆应用:将所述酸鱼乳杆菌发酵液与粉碎的秸秆以及速效氮肥一起翻耕,施入土壤,其中酸鱼乳杆菌发酵液每亩土地使用量为15kg,速效氮肥使用量为秸秆干重的6%。
5.促进动物生长应用:将所述酸鱼乳杆菌发酵液混合于饲料用于投喂,其中发酵液使用量体积为饲料质量的1‰(mL/g)。
6.减少鱼虾养殖水体中亚硝酸盐积累的应用:将所述酸鱼乳杆菌发酵液均匀施入水体,其中发酵液使用量为每亩水面15kg。
本发明的优点是:菌株LA-001是乳酸菌属微生物,生物安全性好,分解能力强,能够利用环境中的营养物质快速繁殖,同时通过不断抑制其他微生物(包括致病菌)占据微生态区位优势,避免有害物质的形成,改善植物的生长环境,促进秸秆分解及分解产物的无害化,提高动物胃肠道功能,降解养殖水体亚硝酸盐,实现农业绿色发展和现代化的目的,本发明方法简单易行,效果稳定。
附图说明
图1为:酸鱼乳杆菌CGMCC No.20471菌株的水稻促生效果图;
图2为:酸鱼乳杆菌CGMCC No.20471菌株的小麦秸秆降解效果图;
图3为:酸鱼乳杆菌CGMCC No.20471菌株的南美白对虾促生效果图;
图4为:酸鱼乳杆菌CGMCC No.20471菌株的罗氏沼虾养殖水体中亚硝酸盐降解效果图。
具体实施方式
下面通过具体实施例,对本发明的技术方案做进一步的阐述说明,实施例中所用试剂、原料均系市购常规原料。
实施例1:
一种酸鱼乳杆菌菌株的应用:
a.配制培养基:蔗糖1.5%(g/ml),酵母提取物1.5%(g/ml),氯化钠0.5%(g/ml),水补足,高压灭菌后备用;
b.液体深层发酵培养:将所述菌株单菌落接入上述培养基中,100r/min震荡培养,发酵温度为35℃,发酵时间48h,测得发酵液OD值为7;
c.2019年,于浙江省杭州市富阳区中国水稻研究所标准种植地块进行水稻促生试验,将酸鱼乳杆菌的发酵液以基肥的形式施入土壤,其中发酵液每亩土地使用20kg,施用后一周开始插秧(秧苗品种:甬优12),水稻成熟后统一采收稻米,统计亩产,期间肥水、病虫害正常管理,对照组未添加酸鱼乳杆菌的发酵液;
d.实验结果如附图1所示。从图1上可明显看出酸鱼乳杆菌CGMCC No.20471菌株处理组亩产出现显著增加,对照组为552.0kg/亩,处理组为652.1kg/亩,亩产增加了18.1%。
实施例2:
一种酸鱼乳杆菌菌株的应用:
a.配制培养基:蔗糖1.5%(g/ml),酵母提取物1.5%(g/ml),氯化钠0.5%(g/ml),水补足,高压灭菌后备用;
b.液体深层发酵培养:将所述菌株单菌落接入上述培养基中,100r/min震荡培养,发酵温度为35℃,发酵时间48h,测得发酵液OD值为7;
c.2020年,于浙江省杭州市富阳区中国水稻研究所标准种植地块进行小麦秸秆降解试验,将酸鱼乳杆菌发酵液(每亩15kg)与粉碎的小麦秸秆(温麦10号,每亩干重300kg,平均长度10cm左右)以及速效氮肥(尿素18kg)一起翻耕,施入土壤。于地下10-15cm处埋一纱网布包,内装小麦茎秆第四节间100根,灌水后一周,于水稻插秧前,收集预先埋好纱网布包中小麦茎秆,清水清洗自然风干(含水率<55%)后,微控电子万能试验机进行抗拉强度试验,检测秸秆降解情况;
d.实验结果如附图2所示。从图2上可明显看出酸鱼乳杆菌CGMCC No.20471菌株处理组小麦秸秆抗拉强度出现显著下降,对照组平均值为18.9MPa,处理组为10.1MPa,抗拉强度下降了46.6%。
实施例3:
一种酸鱼乳杆菌菌株的应用:
a.配制培养基:蔗糖1.5%(g/ml),酵母提取物1.5%(g/ml),氯化钠0.5%(g/ml),水补足,高压灭菌后备用;
b.液体深层发酵培养:将所述菌株单菌落接入上述培养基中,100r/min震荡培养,发酵温度为35℃,发酵时间48h,测得发酵液OD值为7;
c.2020年,于浙江省平湖市浙江省淡水水产研究所试验基地进行南美白对虾促生试验,将酸鱼乳杆菌发酵液混合于各阶段饲料(采购自扬州市宏大饲料有限公司,南美白对虾料)用于投喂,其中发酵液使用量为饲料1‰(mL/g),自投喂饲料开始全程添加,90天后抽样统计虾体长度平均值;
d.实验结果如附图3所示。从图3上可明显看出酸鱼乳杆菌CGMCC No.20471菌株处理组虾体增长较对照组更快,在养殖第三个月时对照组平均值为16.3cm,处理组为19.3cm,长度增长了18.4%。
实施例4:
一种酸鱼乳杆菌菌株的应用:
a.配制培养基:蔗糖1.5%(g/ml),酵母提取物1.5%(g/ml),氯化钠0.5%(g/ml),水补足,高压灭菌后备用;
b.液体深层发酵培养:将所述菌株单菌落接入上述培养基中,100r/min震荡培养,发酵温度为35℃,发酵时间48h,测得发酵液OD值为7;
c.2020年,于浙江省平湖市浙江省淡水水产研究所试验基地进行罗氏沼虾养殖水体中亚硝酸盐降解试验,在养殖塘肥水前将所述酸鱼乳杆菌发酵液一次性均匀施入水体,其中发酵液使用量为每亩水面15kg,期间采用快速检测试剂盒(比色法)监测亚硝酸盐含量情况;
d.实验结果如附图4所示。从图上可明显看出酸鱼乳杆菌CGMCC No.20471菌株处理组亚硝酸盐含量始终接近于0,远低于对照组平均值。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案,并非对本发明作任何形式上的限制,在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
序列表
<110> 森井生物工程(湖州)有限公司
<120> 一种酸鱼乳杆菌菌株及其用途
<130> 2020
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1441
<212> DNA
<213> 酸鱼乳杆菌(Lactobacillus acidipiscis)
<400> 1
ggcctaatac atggcaagtc gaacgcaatc tttagctaat gagtgcttgc actcagcagt 60
taaagtgcga gtggcgaacg ggtgagtaac acgtgggcaa tctgcccaaa agtgggggat 120
aacacttgga aacaggtgct aataccgcat caaccggctg accgcatggt cggccgggca 180
aagacggcgt cagctgtcgc ttttggatga gcccgcggcg tattaactag ttggtaaggt 240
aacggcttac caaggtgatg atacgtagcc gaactgagag gttgatcggc cacattggga 300
ctgagacacg gcccaaactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttcca caatggacgc 360
aagtctgatg gagcaacgcc gcgtgtatga agaaggtctt cggatcgtaa aatactgttg 420
tcagagaaga acacgtgata gagtaactgc tatggcgctg acggtatctg accagcaagt 480
cacggctaac tacgtgccag cagccgcggt aatacgtagg tggcaagcgt tgtccggatt 540
tattgggcgt aaagggaacg caggcggtct tttaagtctg atgtgaaagc cttcggctta 600
accggagaag tgcattggaa actggaagac ttgagtgcag aagaggagag tggaactcca 660
tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatatgg aagaacacca gtggcgaaag cggctctctg 720
gtctgtaact gacgctgagg ttcgaaagcg tggggagcga acaggattag ataccctggt 780
agtccacgct gtaaacgatg aatgctaggt gttggagggt ttccgccctt cggtgccgca 840
gctaacgcac taagcattcc gcctggggag tacgatcgca agattgaaac tcaaaggaat 900
tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac gcgaagaacc 960
ttaccaggtc ttgacatctt ttgaccatct gagagatcag aaattccctt cggggacaaa 1020
atgacaggtg gtgcatggct gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc 1080
aacgagcgca acccttattg tcagttgcca gcattcagtt gggcactctg gcgagactgc 1140
cggtgacaaa ccggaggaag gtggggatga cgtcaagtca tcatgcccct tatgacctgg 1200
gctacacacg tgctacaatg gacgatacaa cgagtcgcga gaccgcgagg tttagctaat 1260
ctctgaaagt cgttctcagt tcggatcgta ggctgcaact cgcctacgtg aagtcggaat 1320
cgctagtaat cgcggatcag catgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg 1380
cccgtcacac catgagagtt tgtaacaccc aaagccggtg cggtaaccat tttggagcca 1440
g 1441

Claims (10)

1.一种酸鱼乳杆菌(Lactobacillus acidipiscis)菌株,菌株代码为LA-001,其特征在于,保藏编号为CGMCC No. 20471,保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏单位地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏日期为2020年07月30日。
2.如权利要求1所述的酸鱼乳杆菌菌株在促进作物生长方面的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,将酸鱼乳杆菌的发酵液以基肥或者追肥的形式施入土壤,其中发酵液的使用量为每亩土地20 kg。
4.如权利要求1所述的酸鱼乳杆菌菌株在降解秸秆中的应用。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,将酸鱼乳杆菌的发酵液与粉碎的秸秆以及速效氮肥一起翻耕,施入土壤,其中发酵液的用量为每亩土地15 kg,速效氮肥使用量为秸秆干重的6%。
6.如权利要求1所述的酸鱼乳杆菌菌株在促进动物生长方面的应用。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于,将酸鱼乳杆菌的发酵液混合于饲料用于投喂,其中发酵液使用量体积ml为饲料质量g的1‰。
8.如权利要求1所述的酸鱼乳杆菌菌株在减少鱼虾养殖水体中亚硝酸盐积累的应用。
9.如权利要求8所述的应用,其特征在于,将酸鱼乳杆菌的发酵液均匀施入水体,其中发酵液使用量为每亩水面15 kg。
10.如权利要求3或5或7或9所述的应用,其特征在于,酸鱼乳杆菌发酵液的具体培养方法为:
(1)培养基配方:蔗糖质量浓度1.5%,酵母提取物质量浓度1.5%,氯化钠质量浓度0.5%,水补足,灭菌备用;
(2)液体深层发酵培养:将所述菌株单菌落接入上述培养基中,100 r/min振荡培养,发酵温度为35℃,发酵时间48h,测得发酵液OD值为7。
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