CN111893069B - 一株高效去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌hl-6 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物及水产品加工的技术领域，具体涉及一株高效去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌HL‑6，所述的解淀粉盐水球菌HL‑6的保藏编号为GDMCC No：60715。本发明首次筛选出一株可用于亚硝酸盐去除的解淀粉盐水球菌(Salinicoccus amylolyticus)，该菌株具有耐盐性质，对于高浓度和低浓度的亚硝酸盐均有很好的去除效果，特别是在高盐情况下对亚硝酸盐的去除依然可以达到90%以上。

Description

一株高效去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌HL-6
技术领域
本发明属于生物及水产品加工的技术领域，具体涉及一株高效去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌HL-6。
背景技术
亚硝酸盐是亚硝胺合成的的前体物质。大量的动物实验已确认亚硝胺是强致癌物，并能通过胎盘和乳汁引发后代肿瘤。同时，亚硝胺还能导致畸型和突变。流行病学调查表明，人类某些癌症，如胃癌、食道癌、肝癌、结肠癌和膀胱癌等与摄入亚硝胺有一定关联。因此，食品中的亚硝酸盐会带来很大的安全隐患。
鱼露，又名鱼酱油，营养丰富，味道鲜美，是深受东南亚各国和中国沿海区域居民喜爱的传统水产发酵调味品。鱼露通常是将小海鱼捕捞后即刻加盐腌制而成，或者加冰保藏等待上岸后立即加盐腌制而成，这样未经清洗的原材料和海水盐中不可避免地带入亚硝酸盐，而且其开放式的发酵过程也会产生一部分亚硝酸盐。传统发酵生产的鱼露中存在亚硝酸盐，但含量不一，目前中国的鱼露产品标准(SB/T10324-1999)中并没有规定亚硝酸盐的限量。江津津等检测了广州市售16种商品鱼露(鱼露产地分别为越南、香港、泰国、汕头和福建)和某企业的鱼露发酵液，亚硝酸盐含量为0.72～18.97mg/kg，小于腌制蔬菜的亚硝酸盐标准限量值(20mg/kg)。然而，对于我国沿海区域以鱼露为调味品的人群来说，鱼露在其日常饮食中食用比例高，其由亚硝酸带来的安全隐患仍不可忽视。有报道指出，南方沿海地区因为长期食用鱼露，所以患鼻咽癌和胃癌的人较多。因此，对于鱼露来说，去除其中的亚硝酸盐有很重要的意义。
目前，国内外已研发出多种方法消减亚硝酸盐含量，其中利用微生物发酵是研究得最多、消减亚硝酸盐效果最好且最安全的方法。目前，已报到的去除亚硝酸盐多为乳酸菌。然而，现有的乳酸菌耐盐能力较差，很难在鱼露这种高盐食品中去除其亚硝酸盐。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种解淀粉盐水球菌(Salinicoccus amylolyticus)，所述的解淀粉盐水球菌的保藏编号为：GDMCC NO：60715。
为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：
申请人自鱼露中筛选出一株可高效降解亚硝酸盐的细菌，通过生物形态和分子鉴定，该菌株鉴定为解淀粉盐水球菌，该菌株已于2019年7月5日送至广东省微生物菌种保藏中心保藏，保藏编号为：GDMCC NO：60715，分类命名：Salinicoccus amylolyticus HL-6，地址：中国广州市广东省微生物研究所。
菌株Salinicoccus amylolyticus HL-6在氯化钠含量为4％的营养琼脂培养基中，于25℃培养72小时的菌落形态如图1所示，菌落呈圆形，粉色至红色，边缘整齐，个体形态为球形。
解淀粉盐水球菌(Salinicoccus amylolyticus)HL-6在去除亚硝酸盐中的应用，包括利用该菌剂制备成水产发酵产品的亚硝酸盐去除剂，或者直接用于水体的亚硝酸盐的处理，特别是高盐环境下的亚硝酸盐处理；
以上所述的应用中，优选的，所述应用中的去除对象的氯化钠的含量≤35％。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明首次筛选出一株可用于亚硝酸盐去除的解淀粉盐水球菌(Salinicoccusamylolyticus)，该菌株具有耐盐性质，对于高浓度和低浓度的亚硝酸盐均有很好的去除效果，特别是在高盐情况下对亚硝酸盐的去除依然可以达到90％以上。
附图说明
图1为解淀粉盐水球菌(Salinicoccus amylolyticus)HL-6的菌落形态与个体形态图。
图2为氯化钠含量与温度对解淀粉盐水球菌HL-6的生长的影响示意图；
其中A为氯化钠含量对解淀粉盐水球菌HL-6的生长的影响；
B为温度对解淀粉盐水球菌HL-6的生长的影响。
具体实施方式
本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案，所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。
实施例1：
解淀粉盐水球菌(Salinicoccus amylolyticus)HL-6的分离与鉴定：
本发明的解淀粉盐水球菌(Salinicoccus amylolyticus)HL-6自鱼露中筛选分离，菌株HL-6的菌落形态如图1所示，菌落呈圆形，粉色至红色，边缘整齐，个体形态为球形。
分离菌株HL-6的鉴定利用27F和1492R细菌通用引物作为正反向引物，利用MightyAmp DNA Polymerase进行细菌菌落聚合酶链式反应(polymerase chain reactionPCR)扩增。PCR扩增体系：27F 1.5μL，1492R 1.5μL，MightyAmp DNAPolymerase 1.5μL，2×MightyAmp Buffer 30μL，ddH2O 25.5μL，反应条件：98℃(预变性)2min，98℃(变性)10s，55℃(复性)15s，68℃(延伸)90s，72℃延伸10min，从变性到第一次延伸这个过程循环40次，将PCR产物送至上海生工公司测序，将测序结果利用BLAST搜索程序从GenBank进行同源性检索，并下载相似性高的模式菌株的16S rDNA基因序列进行分析。将菌株HL-6的测序结果，通过NCBI进行16S rDNA数据库BLAST，菌株HL-6与标准菌株Salinicoccus amylolyticusJC304的相似性最高，高达99.58％。选取序列相似度达99％的部分菌种，采用软件Mega5.05，Maximum likelihood法制作系统发育树，菌株HL-6与Salinicoccusamylolyticus JC304在系统发育树上属于同一支系，鉴定菌株HL-6为解淀粉盐水球菌。该菌株已于2019年7月5日送至广东省微生物菌种保藏中心保藏，分类命名：Salinicoccusamylolyticus HL-6，保藏编号为：GDMCC NO：60715，地址：中国广州市广东省微生物研究所。
实施例2：
氯化钠含量与温度对解淀粉盐水球菌的生长的影响：
1)将解淀粉盐水球菌HL-6接种于营养肉汤中，于25℃、120r/min下培养24h作为解淀粉盐水球菌种子液。将种子培养液按5％的接种量分别接入不同盐度的液体营养肉汤培养基中，氯化钠含量设置梯度为4％(以4％为例，为1L培养基中含有40g氯化钠)、6％、9％、12％、15％、18％、21％、24％和27％，用96孔板于25℃培养48h，每隔4h于波长600nm测定吸光度。结果如图2中的A，由图中的结果可知，解淀粉盐水球菌有良好的耐盐特性，可以耐受27％的氯化钠含量，当氯化钠含量高达27％时，可以缓慢生长。
2)将解淀粉盐水球菌HL-6种子培养液按5％的接种量接入含有4％氯化钠的营养肉汤中液体培养基中，用96孔板培养，分别置于不同温度培养48h，每隔4h于波长600nm处测定吸光度，温度设置梯度为20℃、25℃、30℃、37℃。结果如图2中的B，由图中的结果可知，解淀粉盐水球菌在37℃培养时，在16h出现稳定期，但达到稳定期时，活菌数小于25℃培养的活菌数，说明当温度高时，解淀粉盐水球菌繁殖快，但达到稳定期时活菌数较低；当培养温度为20℃时，在36h出现稳定期，但此时活菌数依然小于25℃培养的活菌数，说明当温度太低时，不利于解淀粉盐水球菌的生长。
实施例3：
解淀粉盐水球菌HL-6在不同氯化钠含量中降解亚硝酸盐中的应用：
将解淀粉盐水球菌HL-6接种于4％氯化钠营养肉汤中，于25℃、120r/min下培养32h，发酵结束后，于5000r/min离心10min，收集菌体。配置含有氯化钠15％、18％、21％、24％、27％、30％和35％的营养肉汤培养基，并加入亚硝酸钠，使得亚硝酸钠浓度为20mg/L，并接入收集的解淀粉盐水球菌HL-6的菌体，使得解淀粉盐水球菌的终浓度为107CFU/mL，并将接种菌后的培养基置于37℃、120r/min下培养16h。发酵结束后测定培养基中的亚硝酸盐含量。按照《GB/T 5009.33-2010食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》中盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐，结果如下表所示。由下表结果可知，当解淀粉盐水球菌的浓度为107CFU/mL时，解淀粉盐水球菌HL-6在高浓度的盐度下仍然有较好的亚硝酸盐去除效果，并且随着氯化钠含量的增加，对亚硝酸盐的去除影响不大。
表1不同氯化钠含量对解淀粉盐水球菌去除亚硝酸盐的影响
Figure BDA0002628642700000041
实施例4：
解淀粉盐水球菌HL-6在鱼露中降硝酸盐应用
将解淀粉盐水球菌HL-6接种于4％氯化钠营养肉汤中，于25℃、120r/min下培养32h，发酵结束后，于5000r/min离心10min，收集菌体。取市售鱼露(氯化钠含量为27％，亚硝酸盐含量为5.82mg/L)分成5份，分别加上亚硝酸钠，使得外源添加的亚硝酸钠的终浓度分别为0、20、40、60和80mg/L，然后再接入收集的将解淀粉盐水球菌HL-6的菌体，使得解淀粉盐水球菌HL-6的终浓度为107CFU/mL，并将接入解淀粉盐水球菌的鱼露置于37℃、120r/min下培养16h。
发酵结束后测定鱼露中的亚硝酸盐含量，结果如下表所示。由下表结果可知，解淀粉盐水球菌HL-6在鱼露中有很好的去除亚硝酸盐的能力，在没有添加外源亚硝酸盐的鱼露中，通过微生物的发酵，将亚硝酸盐的含量从5.82mg/L降到0.042mg/L，亚硝酸去除率达到99.3％；甚至通过添加外源亚硝酸盐，使鱼露中亚硝酸盐浓度达到85.82mg/L时，亚硝酸盐的去除率仍可达到92.4％。
表2解淀粉盐水球菌在鱼露中对不同浓度的亚硝酸钠的去除效果
Figure BDA0002628642700000051

Claims (1)

1.一株分离的去除亚硝酸盐的解淀粉盐水球菌（Salinicoccus amylolyticus），所述解淀粉盐水球菌的保藏编号为GDMCC No：60715。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116590373B (zh) * 2023-06-29 2023-11-17 广东海洋大学 一种发酵粘液乳杆菌胞外多糖、制备方法及应用
CN116849291B (zh) * 2023-07-04 2023-12-08 广东海洋大学 一种强化动物免疫功能的发酵饲料及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106479928A (zh) * 2016-11-02 2017-03-08 中国科学院微生物研究所 一株耐高盐耐高cod盐水球菌菌株和来源该菌株的内源质粒
WO2019049150A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 Technion Research & Development Foundation Limited KITS AND TOPICAL COMPOSITIONS AND THEIR USE
CN110157630A (zh) * 2018-03-27 2019-08-23 新疆水处理工程技术研究中心有限公司 一种应用于高盐有机废水的复合菌剂及其制备方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014025938A1 (en) * 2012-08-07 2014-02-13 TopGeniX, Inc. Topical composition comprising transformed bacteria expressing a compound of interest

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106479928A (zh) * 2016-11-02 2017-03-08 中国科学院微生物研究所 一株耐高盐耐高cod盐水球菌菌株和来源该菌株的内源质粒
WO2019049150A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 Technion Research & Development Foundation Limited KITS AND TOPICAL COMPOSITIONS AND THEIR USE
CN110157630A (zh) * 2018-03-27 2019-08-23 新疆水处理工程技术研究中心有限公司 一种应用于高盐有机废水的复合菌剂及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
alinicoccus amylolyticus sp. nov., isolated from a saltern;Srinivas A 等;《International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology》;20161001;第66卷(第10期);第3814-3820页 *
Salinicoccus cyprini sp. nov., isolated from the gut of mirror carp, Cyprinus carpio var. specularis;Talwar C 等;《International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology》;20200615;第70卷(第7期);第4111-4118页 *
自生物絮团养殖池分离具有亚硝酸盐去除功能的细菌及其鉴定和特性;王志杰 等;《渔业科学进展》;20150215;第36卷(第02期);第100-105页 *

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