CN111855862A - 党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，党参饮片中银柴胡的掺假量X与党参饮片色谱图中银柴胡成分的峰面积Y两个变量之间存在一次方函数关系，符合Lambert‑Berr定律，建立的二元一次方程为：

，式中：R²表示X与Y的线性离合程度，R²越大回归线性离合效果越好。本发明所述的高效液相色谱法(HPLC)检测党参饮片中掺假银柴胡的技术方案符合科学理论，实验操作简便，可在较短时间内完成样品的检测，对党参饮片是否掺假银柴胡，银柴胡的掺假比例能够进行简单、快速准确的检验，为检测中药饮片掺假提供了一种全新的方法。

Description

党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体的说是一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法。

背景技术

中药材及饮片是供中医临床用药、中成药生产的重要原料，是我国医疗保健事业的重要组成部分和医药宝库中的瑰宝。党参为常用中药，具有补中益气，健脾益肺功效，临床用于脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴。党参来源于桔梗科植物党参Codonopsis pilosula(Franch．) Nannf．、素花党参Codonopsis pilosula Nannf．var．modesta (Nannf．)L．T．Shen或川党参Codonopsis tangshen Oliv．的干燥根。主产于甘肃、四川、山西、湖北等地。党参饮片就是把党参原药材进行切片，加工成厚2-4cm的厚片，在中药制剂生产、临床调剂中得到广泛使用。

中药饮片的质量包括“真伪”和“优劣”两方面，《中国药典》为我国中药材、中药饮片质量检验的法定标准。标准中关于“真伪”检验的技术包括性状检验（即传统的经验鉴别）、显微鉴别和化学鉴别（以薄层色谱鉴别为主，个别采用高效液相色谱法HPLC、气相色谱法GC）。“优劣”检验的技术包括以高效液相色谱法HPLC、气相色谱法GC为主的含量测定、浸出物含量测定，以及其他检查指标的项目。

近年，中药饮片质量隐患较多，不法分子为了谋取暴利，肆意掺进外观相近的其他中药饮片或根本就不是中药饮片的植物、动物或矿物，中药饮片的掺假掺伪成为近年国家严厉打击的领域。传统鉴别方法是对药材或饮片的“形”、“色”、“气”、“味”为基本要素的判别，这对其辨识者的技术水平、实践能力、从业技术都有很高要求，需要具备丰富的经验和敏锐的判别能力，由于检验者的水平参差不一，检验的准确性、重复性和结论的一致性不高，误判情况时有发生。同样，对于人为掺假做假现象，国家标准收录的理化鉴定方法并不能满足中药饮片真伪、优劣鉴定的需要。必须借鉴现代科学技术及检测设备，根据市场出现掺假的具体饮片品种，有目的、有针对性的构建专属性量化检测检验方法，或针对现有鉴定方法中的鉴定特征进行替代研究，严重制约了中药饮片质量检验和质量判断。应该结合实际掺假掺伪的具体饮片来源，建立不同的检测方法，以供企业、流通、医疗和质检部门做为检验的依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，能够快速检测出市场购买的党参饮片中是否掺假银柴胡，并对银柴胡的掺假量进行快速、准确的计算，易于操作。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：

一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，党参饮片中银柴胡的掺假量X与党参饮片色谱图中银柴胡成分的峰面积Y两个变量之间存在一次方函数关系，两个变量之间存在一次方函数关系，符合Lambert-Berr定律，建立的二元一次方程为：

式中：R²表示X与Y的线性离合程度，R²越大回归线性离合效果越好。

优选的，所述党参饮片色谱图为选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，所得到的党参饮片的色谱图。

优选的，党参饮片中银柴胡掺假量的计算方法，它包括以下步骤：

步骤一、制备党参正品饮片溶液标准色谱，精密称定党参正品饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到党参正品标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到党参正品饮片的色谱图；

步骤二、制备银柴胡饮片参照饮片样品色谱图，精密称定银柴胡饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到银柴胡标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到银柴胡饮片的色谱图；

步骤三、制备供试品溶液进行色谱分析，取掺假比例为12.1%-94.1%的掺假党参饮片为供试品，粉碎成细粉，过60目筛，称取1.0g粉末，置于50mL具塞三角瓶中，加入25mL甲醇，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，将滤液再次摇匀，滤液临用前用0.45μm微孔滤膜滤过，收集续滤液为供试品溶液；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到供试品溶液的色谱图；

步骤四，将步骤三所制备的供试品溶液色谱图与步骤一所制备的党参正品饮片的色谱图和步骤二所制备的银柴胡饮片的色谱图进行比较，判断供试品中是否掺假银柴胡；

步骤五，测量步骤三所制备的供试品溶液色谱图中银柴胡成分的峰面积Y，代入公式即可计算出党参饮片中银柴胡的掺假量X。

本发明所述的流动相乙腈-0.2%磷酸梯度脱洗系统的洗脱梯度表见表1。

表1

为了验证所选取的梯度脱洗系统的适宜性，选取掺假量为50%的掺有银柴胡的党参饮片样品，按照本发明所述方法制备供试品溶液，在乙腈-0.2%磷酸流动相及285nm检测波长色谱条件下连续进样6次进行试验，得到精密度考察色谱图如图3所示，图3中S代表党参炔苷R代表银柴胡特征峰；分别计算色谱中党参炔苷峰、银柴胡成分A（相对保留时间0.55）峰面积平均值，结果两种特征峰的RSD<0.3%、RSD<0.2%，表明精密度良好。

取6份市场购买的掺假量为50%的掺有银柴胡的党参饮片样品，按照本发明所述方法制备供试品溶液，在乙腈-0.2%磷酸流动相及285nm检测波长色谱条件下，得到重复性考察色谱图如图4所示；分别计算色谱中党参炔苷峰、银柴胡成分A（相对保留时间0.55）峰面积平均值，结果两种特征峰的RSD<0.5%、RSD<2.6%，色谱峰的RSD<3.0%，表明重复性良好。

取掺假量为50%的掺有银柴胡的党参饮片样品，按照本发明所述方法制备供试品溶液，将供试品溶液分别于0、4、8、12、16、24小时时进样，在乙腈-0.2%磷酸流动相及285nm检测波长色谱条件下，得到稳定性考察色谱图如图5所示；分别计算色谱中党参炔苷峰、银柴胡成分A（相对保留时间0.55）峰面积平均值，结果两种特征峰的RSD<0.5%、RSD<0.3%，表明稳定性良好。

党参饮片中银柴胡的掺假量X与银柴胡成分A的峰面积Y存在的函数关系验证：

为了检测在正品党参饮片中掺假银柴胡饮片的比例，进行模拟试验，以正品中掺假银柴胡（掺假比例为11.2%-90.6%），与银柴胡成分A的峰面积进行线性关系考查（党参与银柴胡的总量为1.0g），结果见表2；银柴胡掺假量与特征峰线性关系图如图6所示。

表2

本发明所述的高效液相色谱法(HPLC)检测党参饮片中掺假银柴胡的技术方案符合科学理论，实验操作简便，可在较短时间内完成样品的检测，对党参饮片是否掺假银柴胡，银柴胡的掺假比例能够进行简单、快速准确的检验，为检测中药饮片掺假提供了一种全新的方法，为中药饮片质量控制提供新视野。本发明在中药饮片的生产、销售和使用领域的质量检验中具有重要的实用价值，特别是对于药品质量管理部门打击掺假、掺伪的不法行为具有十分重要的借鉴和推广意义。

本发明所选用的仪器包括：Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent TC－C18柱（250 mm×4.60mm，5μm）、G1322A型真空脱气机、G1315B型DAD检测器、G1312A型二元梯度泵；AS7240B型超声波清洗仪(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；BS124S型电子天平(精密度0.1mg)(德国Sartorius)。所选用的实验试剂包括党参炔苷对照品（批号 111732-200904）购自中国食品药品检定研究院；乙腈（产品批准号：Q/12NK 4021-2003，天津市光复精细化工研究所，色谱纯）；甲醇（天津是大茂化学试剂厂，分析纯）；水为双蒸水。所选用的实验材料包括党参样品购置甘肃陇西药材产地，为桔梗科植物党参Codonopsis pilosula（Franch.）Nannf.的干燥根。掺假饮片(样品1-3号)购置于国内药材市场，鉴定掺伪样品为石竹科植物银柴胡Stellaria dichotoma L．var．1anceolata Bge．的干燥根。

附图说明

图1为党参正品饮片标准溶液色谱图谱；

图2为银柴胡溶液色谱图；

图3为掺假量为50%的掺有银柴胡的党参饮片样品在色谱条件下连续进样6次的色谱图（精密度考察色谱图）；

图4取6份掺假量为50%的掺有银柴胡的党参饮片样品在色谱条件下的色谱图（重复性考察色谱图）；

图5为掺假量为50%的掺有银柴胡的党参饮片样品制备成供试品后分别于0、4、8、12、16、24小时时进样的色谱图（稳定性试验色谱图）；

图6为银柴胡掺假量与特征峰线性关系图。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步详细的表述。

制备模拟样品(参照饮片)是在正品党参饮片中分别掺进12.1%-94.1%不同比例的银柴胡饮片，进行检测方法的系统研究、验证试验和建立判别函数。

一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，党参饮片中银柴胡的掺假量X与党参饮片色谱图中银柴胡成分的峰面积Y两个变量之间存在一次方函数关系，符合Lambert-Berr定律，建立的二元一次方程为：

式中：R²表示X与Y的线性离合程度，R²越大回归线性离合效果越好。

党参饮片色谱图为选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，所得到的党参饮片的色谱图。

所述的流动相乙腈-0.2%磷酸梯度脱洗系统的洗脱梯度表见表1。

本发明确定梯度脱洗系统时，分别选取乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸和乙腈-0.2%磷酸四种梯度脱洗系统，通过对上述四种梯度脱洗下正品党参饮片中党参炔苷和掺假的银柴胡饮片的流动相及检测波长比较。乙腈-水、甲醇-水和乙腈-0.1%磷酸流动相分别在285nm波长检测党参饮片和银柴胡饮片所得到的色谱图的特征成分重叠，不易分辨，乙腈-0.2%磷酸流动相及285nm检测波长下党参饮片和银柴胡饮片所得到的色谱图的特征成分有很好的分辨度。最终选定乙腈-0.2%磷酸流动相及285nm检测波长为最终的梯度系统，在此条件下，银柴胡饮片在39分钟出现特征性的色谱峰（认定为银柴胡成分A），没有党参的阳性干扰，正品党参与掺假的银柴胡色谱分离良好、基线平稳。

实施例1

一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，它包括以下步骤：

步骤一、制备党参正品饮片溶液标准色谱，精密称定党参正品饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到党参正品标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到党参正品饮片的色谱图，如图1所示；

步骤二、制备银柴胡饮片参照饮片样品色谱图，精密称定银柴胡饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到银柴胡标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到银柴胡饮片的色谱图，如图2所示；

步骤三、制备供试品溶液进行色谱分析，取掺假比例为12.1%的自制掺假党参饮片为供试品，粉碎成细粉，过60目筛，称取1.0g粉末，粉末中党参的质量为0.8699g，掺入银柴胡量0.1301g，将粉末置于50mL具塞三角瓶中，加入25mL甲醇，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，将滤液再次摇匀，滤液临用前用0.45μm微孔滤膜滤过，收集续滤液为供试品溶液；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到供试品溶液的色谱图；

步骤四，将步骤三所制备的供试品溶液色谱图与步骤一所制备的党参正品饮片的色谱图和步骤二所制备的银柴胡饮片的色谱图进行比较，判断供试品中掺假了银柴胡；

步骤五，测量步骤三所制备的供试品溶液色谱图中银柴胡成分的峰面积Y为51138nm²，计算出银柴胡的质量为0.1346g，与实际掺入银柴胡的质量相比较，存在1.7%的相对偏差。

实施例2

一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，它包括以下步骤：

步骤一、制备党参正品饮片溶液标准色谱，精密称定党参正品饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到党参正品标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到党参正品饮片的色谱图，如图1所示；

步骤二、制备银柴胡饮片参照饮片样品色谱图，精密称定银柴胡饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到银柴胡标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到银柴胡饮片的色谱图，如图2所示；

步骤三、制备供试品溶液进行色谱分析，取掺假比例为52.1%的自制掺假党参饮片为供试品，粉碎成细粉，过60目筛，称取1.0g粉末，粉末中党参的质量为0.4794g，掺入银柴胡量0.5206g，将粉末置于50mL具塞三角瓶中，加入25mL甲醇，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，将滤液再次摇匀，滤液临用前用0.45μm微孔滤膜滤过，收集续滤液为供试品溶液；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到供试品溶液的色谱图；

步骤四，将步骤三所制备的供试品溶液色谱图与步骤一所制备的党参正品饮片的色谱图和步骤二所制备的银柴胡饮片的色谱图进行比较，判断供试品中掺假了银柴胡；

步骤五，测量步骤三所制备的供试品溶液色谱图中银柴胡成分的峰面积Y为302127nm²，计算出银柴胡的质量为0.5443g，与实际掺入银柴胡的质量相比较，存在2.3%的相对偏差。

实施例3

一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，它包括以下步骤：

步骤一、制备党参正品饮片溶液标准色谱，精密称定党参正品饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到党参正品标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到党参正品饮片的色谱图，如图1所示；

步骤二、制备银柴胡饮片参照饮片样品色谱图，精密称定银柴胡饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到银柴胡标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到银柴胡饮片的色谱图，如图2所示；

步骤三、制备供试品溶液进行色谱分析，取掺假比例为76.1%的自制掺假党参饮片为供试品，粉碎成细粉，过60目筛，称取1.0g粉末，粉末中党参的质量为0.2392g，掺入银柴胡量0.7608g，将粉末置于50mL具塞三角瓶中，加入25mL甲醇，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，将滤液再次摇匀，滤液临用前用0.45μm微孔滤膜滤过，收集续滤液为供试品溶液；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到供试品溶液的色谱图；

步骤四，将步骤三所制备的供试品溶液色谱图与步骤一所制备的党参正品饮片的色谱图和步骤二所制备的银柴胡饮片的色谱图进行比较，判断供试品中掺假了银柴胡；

步骤五，测量步骤三所制备的供试品溶液色谱图中银柴胡成分的峰面积Y为444971nm²，计算出银柴胡的质量为0.7773g，与实际掺入银柴胡的质量相比较，存在1.1%的相对偏差。

实施例4

一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，它包括以下步骤：

步骤一、制备党参正品饮片溶液标准色谱，精密称定党参正品饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到党参正品标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到党参正品饮片的色谱图，如图1所示；

步骤二、制备银柴胡饮片参照饮片样品色谱图，精密称定银柴胡饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到银柴胡标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到银柴胡饮片的色谱图，如图2所示；

步骤三、制备供试品溶液进行色谱分析，取掺假比例为88.7%的自制掺假党参饮片为供试品，粉碎成细粉，过60目筛，称取1.0g粉末，粉末中党参的质量为0.1122g，掺入银柴胡量0.8878g，将粉末置于50mL具塞三角瓶中，加入25mL甲醇，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，将滤液再次摇匀，滤液临用前用0.45μm微孔滤膜滤过，收集续滤液为供试品溶液；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到供试品溶液的色谱图；

步骤四，将步骤三所制备的供试品溶液色谱图与步骤一所制备的党参正品饮片的色谱图和步骤二所制备的银柴胡饮片的色谱图进行比较，判断供试品中掺假了银柴胡；

步骤五，测量步骤三所制备的供试品溶液色谱图中银柴胡成分的峰面积Y为520143nm²，计算出银柴胡的质量为0.9000g，与实际掺入银柴胡的质量相比较，存在0.7%的相对偏差。

实施例5

一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，它包括以下步骤：

步骤一、制备党参正品饮片溶液标准色谱，精密称定党参正品饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到党参正品标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到党参正品饮片的色谱图，如图1所示；

步骤二、制备银柴胡饮片参照饮片样品色谱图，精密称定银柴胡饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到银柴胡标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到银柴胡饮片的色谱图，如图2所示；

步骤三、制备供试品溶液进行色谱分析，取掺假比例为94.1%的自制掺假党参饮片为供试品，粉碎成细粉，过60目筛，称取1.0g粉末，粉末中党参的质量为0.0590g，掺入银柴胡量0.9410g，将粉末置于50mL具塞三角瓶中，加入25mL甲醇，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，将滤液再次摇匀，滤液临用前用0.45μm微孔滤膜滤过，收集续滤液为供试品溶液；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到供试品溶液的色谱图；

步骤四，将步骤三所制备的供试品溶液色谱图与步骤一所制备的党参正品饮片的色谱图和步骤二所制备的银柴胡饮片的色谱图进行比较，判断供试品中掺假了银柴胡；

步骤五，测量步骤三所制备的供试品溶液色谱图中银柴胡成分的峰面积Y为559042nm²，计算出银柴胡的质量为0.9635g，与实际掺入银柴胡的质量相比较，存在1.2%的相对偏差。

上述实施例中所制备的5批不同掺假比例的掺有银柴胡的党参饮片样品，按照本发明所述方法计算得到的掺假量与实际掺假量相比较的结果见表3。

表3

从表3中可以看出，实际掺入的银柴胡掺假量（比例），与通过建立的二元一次线性方程中计算出来的银柴胡的掺假量非常相近，相对平均偏差小于3.0%，充分证明本发明所述的党参饮片中银柴胡的掺假量X与银柴胡成分A的峰面积Y存在的函数关系成立。

Claims (3)

1.一种党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，其特征在于：党参饮片中银柴胡的掺假量X与党参饮片色谱图中银柴胡成分的峰面积Y两个变量之间存在一次方函数关系，符合Lambert-Berr定律，建立的二元一次方程为：

式中：R²表示X与Y的线性离合程度，R²越大回归线性离合效果越好。

2.根据权利要求1所述的党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，其特征在于：所述党参饮片色谱图为选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，所得到的党参饮片的色谱图。

3.根据权利要求1或2所述的党参饮片中掺假银柴胡和掺假量的快速计算方法，其特征在于：它包括以下步骤：

步骤一、制备党参正品饮片溶液标准色谱，精密称定党参正品饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到党参正品标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到党参正品饮片的色谱图；

步骤二、制备银柴胡饮片参照饮片样品色谱图，精密称定银柴胡饮片0.8mg，置于10mL棕色容量瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，即得到银柴胡标准溶液，溶液浓度为0.58mg/mL；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到银柴胡饮片的色谱图；

步骤三、制备供试品溶液进行色谱分析，取掺假比例为12.1%-94.1%的掺假党参饮片为供试品，粉碎成细粉，过60目筛，称取1.0g粉末，置于50mL具塞三角瓶中，加入25mL甲醇，称定重量，选用功率300W，频率40Hz的超声处理30分钟，待溶液降至室温，再称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，将滤液再次摇匀，滤液临用前用0.45μm微孔滤膜滤过，收集续滤液为供试品溶液；选用高效液相色谱仪，选择色谱进样条件为流动相乙腈-0.2%磷酸梯度洗脱系统，流速为1.0mL/min，检测波长为285nm，进样体积10μL，进样，得到供试品溶液的色谱图；

步骤四，将步骤三所制备的供试品溶液色谱图与步骤一所制备的党参正品饮片的色谱图和步骤二所制备的银柴胡饮片的色谱图进行比较，判断供试品中是否掺假银柴胡；

步骤五，测量步骤三所制备的供试品溶液色谱图中银柴胡成分的峰面积Y，代入公式即可计算出党参饮片中银柴胡的掺假量X。

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