CN110007021A - 一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药材检测技术领域，具体涉及一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法，包括（1）色谱条件（2）对照品溶液的配制（3）供试品溶液的制备（4）测定等步骤，本发明提供的一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法，可同时测定三加皮药材中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A以及异绿原酸C 4种化学成分的含量，该检测方法简单、精确度高，稳定性好、重现性好，能更加全面、准确的评价三加皮的品质，有利于对该药材的质量进行有效控制，可为全面评价和控制三加皮药材质量提供依据。

Description

一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法

技术领域

本发明属于中药材检测技术领域，具体涉及一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法。

背景技术

三加皮，别名白竻根、刺三甲、风党竻等，为五加科植物白簕的根或根皮，植物拉丁名：Acanthopanax trifoliatus (L.)Merr.[Zanthaxylum trifoliatum L.]。白簕为攀缘状灌木，高1～7m，枝细弱铺散，老枝灰白色，新枝棕黄色，疏生向下的针刺，刺先端钩曲，基部扁平。叶互生，有刺或无刺，叶片椭圆状卵形至椭圆状长圆形，核果浆果状，扁球形，成熟时黑色；花期8～11月，果期9～12月。三加皮主产于广东、广西、云南、四川、贵州。白簕作为药食两用植物在我国已有上百年的历史，在《本草纲目》以及《神农本草经》中均有记载。白簕味苦、辛，性微寒，具有清热解毒、祛风逐湿、补中益气、坚筋等功效，内含酚类、总黄酮、总皂苷、挥发油、多糖、蛋白质、粗纤维、还原糖等化学成分。近年来，国内外主要对白簕进行药效物质基础深入研究，证明白簕具有抗氧化、抑菌、抗肿瘤等药用价值，具有广阔的应用前景。

三加皮为白簕的根或根皮，性味：味苦，辛，性凉，性状鉴别：根皮呈不规则筒状或片状，长2-7.5cm，厚0.5-1.5mm。外表面灰红棕色，有纵皱纹，皮孔类圆形或略横向延长；内表面灰褐色，有细纵纹。体轻质脆，折断面不平坦。气微香，味微苦、辛而涩。功能主治：清热解毒；祛风利湿；活血舒筋；主感冒发热；咽痛；头痛；咳嗽胸痛；胃脘疼痛；泄泻；痢疾；胁痛；黄疸；石淋；带下；风湿痹痛；腰腿酸痛；簕骨拘挛麻木；跌打骨折；痄腮；乳痈；疮疡肿毒；蛇虫咬伤。目前未见关于三加皮药材中所含有的多种化学成分含量测定方法的研究报道，限制了对三加皮药材的进一步开发利用。另外，没有对其药效成分进行定量检测，难以控制药材及其成方制剂的质量，无法保证临床用药的安全性和有效性。因此，若研究出一种方法能同时测定三加皮药材中多种化学成分，如绿原酸、异绿原酸A以及异绿原酸C等成分的含量，就能更较全面、准确的评价三加皮的品质，从而确保其临床疗效，对三加皮药材乃至其相关制剂的质量控制具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法，所述测定方法利用高效液相色谱(HPLC)，同时测定三加皮药材中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A以及异绿原酸C 4种化学成分的含量，所述检测方法简单、准确、重现性好，可为全面评价和控制三加皮（拉丁名：Acanthopanax trifoliatus (L.)Merr.[Zanthaxylum trifoliatum L.] ）药材质量提供依据。

为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法，所述方法是在同一色谱条件下，同时对三加皮药材中所含的绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A以及异绿原酸C 4种化学成分进行液相色谱含量测定，具体方法包括如下步骤：

（1）色谱条件：

采用Phenomenex Gemini C18色谱柱，250 mm×4.6mm，5μm，流动相为乙腈-体积百分含量为0.1%的磷酸水溶液，以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.1%的磷酸水溶液为流动相B，按下表1梯度洗脱的方式进行梯度洗脱：进样量5μL；流速1 mL/min；柱温30 ℃；检测波长：325 nm；

（2）对照品溶液的配制：

分别取绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A和异绿原酸C对照品适量，精密称定，加入甲醇分别制备成质量浓度为1.03 mg/mL、0.68 mg/mL、0.82 mg/mL以及0.81 mg/mL 的单一对照品储备液；另取上述对照品储备液适量，置于同一量瓶中，加甲醇稀释，配制成含绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A及异绿原酸C浓度分别为0.4208 mg/mL、0.0764 mg/mL、0.2229mg/mL以及0.1188 mg/mL 的混合对照品溶液，置于冰箱贮存，备用；

（3）供试品溶液的制备：

将三加皮干燥根及根皮打粉过4号筛制得粗粉，取三加皮粗粉0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50%的甲醇60mL，密塞，称定质量，超声（功率200 W，频率40 kHz）提取45 min，放至室温，再次称重，用体积浓度为50% 的甲醇补足减失重量，摇匀，过滤，取续滤液25mL置蒸发皿中，挥干，并用体积浓度为50%的甲醇溶解并定容于5mL的容量瓶中，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液，即得；

（4）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪，照上述的色谱条件测定，记录色谱图，测得峰面积值，按外标法以峰面积计算，即得。

本发明一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法的方法学验证情况如下：

1、系统适用性试验

分别取混合对照品溶液、样品液（三加皮产地：防城港）及空白对照溶液，在本发明一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法限定的色谱条件下测定，实验结果显示：对照品色谱中与样品色谱在相同保留时间处都有特征色谱峰，而空白对照液中无相应峰，拖尾因子在适宜范围，均在0.95～1.05之间，说明样品中其他成分对绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A及异绿原酸C共4个主要成分的测定无干扰，色谱柱理论塔板数以大于3000计为6800，结果见图1和图2。

2、线性范围考察

分别精密取混合对照品溶液，加体积浓度为50%的甲醇溶液稀释，制备得分别含绿原酸浓度分别为：0.0126、0.0379、0.0632、0.0885、0.1138、0.1391 mg/mL ；秦皮乙素浓度分别为：0.0007、0.0022、0.0037、0.0051、0.0066、0.0080 mg/mL ；异绿原酸A浓度分别为：0.0144、0.0432、0.0720、0.1009、0.1297、0.1585 mg/mL ；异绿原酸C浓度分别为：0.0035、0.0104、0.0174、0.0243、0.0312、0.0382 mg/mL 的6个不同浓度混合对照品溶液，采用自动进样器，按本发明中所限定的色谱条件进行测定，记录相应色谱峰的峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），相应峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得到回归方程及线性相关系数(r)，结果见表2。

3、精密度试验

取混合对照品溶液，按本发明中所限定的色谱条件测定，连续进样6次，分别测定绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A及异绿原酸C峰面积的RSD值分别为0.34%、0.33%、1.04%、0.34%，显示仪器精密度良好。

4、稳定性试验

取三加皮粗粉（产地：防城港），按本发明供试品溶液的制备方法进行制备供试品溶液，在本发明中所限定的色谱条件下测定，分别在0、2、4、8、12、24h依次测定绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A及异绿原酸C的峰面积，其峰面积的RSD值分别为0.34%、0.33%、1.04%、0.34%，显示供试品溶液在24h内稳定。

5、重复性试验

精密称取同一批三加皮（产地：防城港）6份，按本发明供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按本发明中所限定的色谱条件测定，结果绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A及异绿原酸C的平均含量分别为：0.9999mg/g、0.5059 mg/g、0.1175 mg/g、0.0323 mg/g，RSD分别为1.26%、1.74%、1.91%、1.42 %，显示该方法的重复性良好。

6、回收率试验

取同一批三加皮（产地：防城港）（绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A及异绿原酸C的平均含量分别为0.5999、0.0356、0.7054、0.1945 mg/g）约0.5g，共6份，精密称定，分别精密加入绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A及异绿原酸C对照品各0.6000 mg、0.0370 mg、0.7060 mg及0.1900 mg。按本发明中供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按本发明中所限定的色谱条件测定，测定各峰面积，计算各成分的平均各加样回收率分别为96.6%、102.4%、99.1%、97.1%、及97.7%，RSD值分别为0.17%、1.9%、035%及0.15%，表明该方法准确度良好，见表3。

本发明的有益效果为：

本发明提供的一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法，可同时测定三加皮药材中绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A以及异绿原酸C 4种化学成

分的含量，所述检测方法简单、精确度高，稳定性好、重现性好，能更加全面、准确的评价三加皮的品质，有利于对该药材的质量进行有效控制，有助于提高该药材使用的安全性和稳定性，为科学评价和有效控制三加皮药材的内在质量提供可靠方法，可为全面评价和控制三加皮药材质量提供依据。

附图说明

图1为混合对照品溶液的HPLC色谱图；

图2为三加皮（产地：防城港）样品液的HPLC色谱图；

图3为10批三加皮药材的HPLC 图谱叠加图。

具体实施方式

实施例1

一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法，所述方法是在同一色谱条件下，同时对三加皮药材中所含的绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A以及异绿原酸C 4种化学成分进行液相色谱含量测定，具体方法包括如下步骤：

（1）色谱条件：

采用Phenomenex Gemini C18色谱柱，250 mm×4.6mm，5μm，流动相为乙腈-体积百分含量为0.1%的磷酸水溶液，以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.1%的磷酸水溶液为流动相B，按下表1梯度洗脱的方式进行梯度洗脱：进样量5μL；流速1 mL/min；柱温30 ℃；检测波长：325 nm；

（2）对照品溶液的配制：

分别取绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A和异绿原酸C对照品适量，精密称定，加入甲醇分别制备成质量浓度为1.03 mg/mL、0.68 mg/mL、0.82 mg/mL以及0.81 mg/mL 的单一对照品储备液；另取上述对照品储备液适量，置于同一量瓶中，加甲醇稀释，配制成含绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A及异绿原酸C浓度分别为0.4208 mg/mL、0.0764 mg/mL、0.2229mg/mL以及0.1188 mg/mL 的混合对照品溶液，置于冰箱贮存，备用；

（3）供试品溶液的制备：

将三加皮干燥根及根皮打粉过4号筛制得粗粉，取三加皮粗粉0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50%的甲醇60mL，密塞，称定质量，超声（功率200 W，频率40 kHz）提取45 min，放至室温，再次称重，用体积浓度为50%的甲醇补足减失重量，摇匀，过滤，取续滤液25mL置蒸发皿中，挥干，并用体积浓度为50%的甲醇溶解并定容于5mL的容量瓶中，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液，即得；

（4）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪，照上述的色谱条件测定，记录色谱图，测得峰面积值，按外标法以峰面积计算，即得。

按照本发明一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法对10批不同产地的三加皮药材中所含的绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A以及异绿原酸C 4种化学成分的含量进行测定分析， 分别精密称取不同产地的三加皮样品粗粉0.5g，制备成供试品溶液，进样测定峰面积，按外标法以峰面积计算各成分含量，结果见图3和下表4。

上述可见，采用本发明一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法，操作简单，检测效率高，采用该方法对不同产地的三加皮药材进行检测，能够快速准确的检测出不同产地的三加皮药材中所含的绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A以及异绿原酸C 4种化学成分的含量，从而有利于对三加皮药材的质量进行判定。

Claims (2)

1.一种同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法，其特征在于，所述方法是在同一色谱条件下，同时对三加皮药材中所含的绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A以及异绿原酸C4种化学成分进行液相色谱含量测定，具体方法包括如下步骤：

（1）色谱条件：

采用Phenomenex Gemini C18色谱柱，250 mm×4.6mm，5μm，流动相为乙腈-体积百分含量为0.1%的磷酸水溶液，以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.1%的磷酸水溶液为流动相B，按下表1梯度洗脱的方式进行梯度洗脱：进样量5μL；流速1 mL/min；柱温30 ℃；检测波长：325 nm；

（2）对照品溶液的配制：

分别取绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A和异绿原酸C对照品适量，精密称定，加入甲醇分别制备成质量浓度为1.03 mg/mL、0.68 mg/mL、0.82 mg/mL以及0.81 mg/mL 的单一对照品储备液；另取上述对照品储备液适量，置于同一量瓶中，加甲醇稀释，配制成含绿原酸、秦皮乙素、异绿原酸A及异绿原酸C浓度分别为0.4208 mg/mL、0.0764 mg/mL、0.2229mg/mL以及0.1188 mg/mL 的混合对照品溶液，置于冰箱贮存，备用；

（3）供试品溶液的制备：

将三加皮干燥根及根皮打粉过4号筛制得粗粉，取三加皮粗粉0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50%的甲醇60mL，密塞，称定质量，超声提取45 min，放至室温，再次称重，用体积浓度为50%的甲醇补足减失重量，摇匀，过滤，取续滤液25mL置蒸发皿中，挥干，并用体积浓度为50%的甲醇溶解并定容于5mL的容量瓶中，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液，即得；

（4）测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪，照上述的色谱条件测定，记录色谱图，测得峰面积值，按外标法以峰面积计算，即得。

2.根据权利要求1所述的同时测定三加皮药材中多种化学成分含量的方法，其特征在于，步骤（3）供试品溶液的制备中超声提取的功率为200 W，超声波频率为40 kHz。