CN111855634A - 用于乳制品中三聚氰胺检测的检测方法以及试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于乳制品中三聚氰胺检测的检测方法，包括如下步骤：(1)取预定体积的乳制品，加入萃取剂，混合均匀后离心或者静置分层；(2)取上层清液，与去离子水或二次蒸馏水混合均匀，再次离心或者静置分层，取下层清液为待测液；(3)取待测液与具有SERS活性的纳米溶胶混合均匀；(4)用拉曼光谱仪在400～2000cm‑1的范围内扫描测试样品，读取或者记录拉曼光谱测试结果。本发明还涉及一种基于上述方法的试剂盒。本发明检测方法和试剂盒，环保易得，成本低，易于操作和携带，有利于快速检测的普及推广。

Description

用于乳制品中三聚氰胺检测的检测方法以及试剂盒
技术领域
本发明涉及食品检测领域，特别是涉及一种用于乳制品中三聚氰胺检测的检测方法以及试剂盒。
背景技术
三聚氰胺是一种用于制造三聚氰胺树脂的原材料，进入人体会造成很大的危害，尤其是对泌尿系统的危害最为严重。由于三聚氰胺分子氮含量高达66％，被不法分子加入乳制品等蛋白质类食品中，用以提高产品的虚假蛋白质含量。
乳制品中三聚氰胺检测的一个难点在于前处理方法，其关系到三聚氰胺检测的检测效率和准确性。不同的检测手段，也要选择合适的前处理方法，才能获得准确的结果。
目前，常规检测三聚氰胺的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)和高效液相色谱-质谱-质谱联用技术(HPLC-MS-MS)，例如，国家批准发布的《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》(GB/T22388-2008)、《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》(GB/T22400-2008)、公开号为CN102680306A的中国专利《原料乳三聚氰胺检测快速前处理方法》。其前处理方法主要采用三氯乙酸、聚合硫酸铁等沉淀剂，对乳制品先沉淀再分离，获得液相色谱的待测液。虽然这些方法可以进行准确的定性及定量分析，但相关设备不便携带，只能在实验室进行检测，无法应用于现场快速检测需求。
国家批准发布的《出口液态乳中三聚氰胺快速测定拉曼光谱法》(SN/T2805-2011)，采用直接离心前处理的方法，离心后的溶液不澄清，存在一定量的蛋白，会干扰检测结果，且需要配置达14000r/min的高速离心机设备，也不便于现场快速检测。
针对拉曼检测法的乳制品的前处理方法仍是制约三聚氰胺快速准确检测的一个关键技术问题。
发明内容
基于此，有必要提出一种新的乳制品三聚氰胺检测的检测方法，以解决目前乳制品中三聚氰胺检测前处理复杂、检测限不高以及不环保等问题。
为决解上述问题，本发明提供了一种用于乳制品中三聚氰胺检测的检测方法，包括如下步骤：
(1)取预定体积的乳制品，加入萃取剂，混合均匀后离心或者静置分层；
(2)取上层清液，与去离子水或二次蒸馏水混合均匀，再次离心或者静置分层，取下层清液为待测液；
(3)取待测液与具有SERS活性的纳米溶胶混合均匀，得到测试样品；
(4)用拉曼光谱仪在400cm-1～2000cm-1的范围内扫描所述测试样品，读取或者记录拉曼光谱测试结果。
在其中一个实施方式中，所述萃取剂的体积与所述乳制品的体积比不小于3。
在其中一个实施方式中，所述萃取剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、正己烷和石油醚中的一种或多种。
在其中一个实施方式中，步骤(1)或者步骤(2)中，离心转速低于6000转，离心时间不超过2分钟。
在其中一个实施方式中，步骤(1)、步骤(2)或者步骤(3)中，所述混合采用漩涡震荡，时间为5s～20s。
在其中一个实施方式中，步骤(1)和步骤(2)的总时间不超过5分钟。
在其中一个实施方式中，所述拉曼光谱仪为便携式拉曼光谱仪或者微拉曼光谱仪。
在其中一个实施方式中，所述纳米溶胶的浓度范围为30mg/L～100mg/L。
在其中一个实施方式中，所述纳米溶胶为金溶胶或者银溶胶。
基于上述乳制品中三聚氰胺检测的方法，本发明还提出了一种用于乳制品中三聚氰胺检测的试剂盒，包括以下试剂：
(1)检测试剂A：金溶胶或者银溶胶；
(2)检测试剂B：萃取剂，所述萃取剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、正己烷和石油醚中的一种；
(3)检测试剂C：二次蒸馏水或去离子水。
本发明提出的用于乳制品中三聚氰胺检测的方法，所需试剂数量少，无毒绿色环保，且操作简单，易于普及，对乳制品中三聚氰胺的检测限可达0.1ppm，远低于国家规定的2.5ppm的检测标准，有利于更加精确的实现三聚氰胺的快速检测。本发明检测方法和试剂盒，成本低，易于操作和携带，有利于快速检测的普及推广。
附图说明
图1为本发明实施例1-3以及对比例1的拉曼测试结果图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明提供了一种用于乳制品中三聚氰胺检测的检测方法，包括如下步骤：
(1)取预定体积的乳制品，加入萃取剂，混合均匀后离心或者静置分层。
(2)取上层清液，与去离子水或二次蒸馏水混合均匀，再次离心或者静置分层，取下层清液为待测液。
(3)取待测液与具有SERS活性的纳米溶胶混合均匀。
(4)用拉曼光谱仪在400cm-1～2000cm-1的范围内扫描测试样品，读取或者记录拉曼光谱测试结果。
现有技术的前处理步骤复杂，有的需引入多种化学试剂，操作难度和成本均有所增加，而且易对三聚氰胺的检测结果产生干扰，有的还需要大型设备，也不便于携带或者成本过高。本发明的检测方法只含有一种环境友好的有机试剂和水，绿色安全且成本低。更重要的是，本发明的发明人在研究过程中惊奇的发现：通过本发明如此简单的前处理方法后得到的待测液，对其进行拉曼检测，检测信号强，检测限可以降低至0.1ppm～0.5ppm，远低于现有技术的1ppm以上的检测限。本发明的方案很适合三聚氰胺的快速高灵敏检测。
萃取剂用于直接萃取乳制品中的三聚氰胺分子。优选地，萃取剂为碳原子数小于8的疏水试剂。更优选地，萃取剂为碳原子数小于8的疏水试剂，且包括亲水基团和疏水基团。在一些实施方式中，萃取剂微溶于水。在一些具体实施方式中，萃取剂为碳原子数小于8的乙酸酯类疏水试剂。在一些具体实施方式中，萃取剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、正己烷和石油醚中的一种。在一些优选方式中，萃取剂可以选自两种或两种以上上述试剂的组合。萃取剂的体积与所述乳制品的体积比不小于3。
本发明步骤(1)、步骤(2)或者步骤(3)中的混合方式采用一般的摇晃震荡即可。优选采用漩涡震荡，时间为5s～20s。混合均匀后采用离心或者静置分层。在一个实施例方式中，分层方式采用离心处理，步骤(1)或者步骤(2)中的离心的转速不超过6000转，离心的时间不超过2分钟。本发明对离心的转速要求不高，可以使用便携式离心机。在另一个实施方式中，分层方式采用静置，静置时间不超过5分钟。
本发明提出的用于乳制品中三聚氰胺现场快速检测的方法，总时间可控制在不超过5分钟，所需仪器要求简单，所需试剂数量少，无毒绿色环保，且操作简单，易于普及。
在其中一个实施方式中，拉曼光谱仪为便携式拉曼光谱仪或者微拉曼光谱仪。
在其中一个实施方式中，纳米溶胶的浓度范围为30mg/L～100mg/L。纳米溶胶可选自金溶胶或者银溶胶。
基于上述乳制品中三聚氰胺检测的方法，本发明还提出了一种用于乳制品中三聚氰胺检测的试剂盒，包括以下试剂：(1)检测试剂A：金溶胶或者银溶胶；(2)检测试剂B：萃取剂，所述萃取剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、正己烷和石油醚中的一种；(3)检测试剂C：二次蒸馏水或去离子水。
在一些具体实施方式中，试剂盒还包括包装盒、PVC离心管、检测池。
下面结合具体实施例对本发明的用于乳制品中三聚氰胺检测的检测方法以及试剂盒进行进一步地说明。
待测乳制品的配置：
购买生牛乳和酸奶，通过国标GB/T22388-2008方法测定所含三聚氰胺小于0.1ppm。取四份生牛乳，分别添加一定量的三聚氰胺，使得四份生牛乳中的三聚氰胺含量分别为0.1ppm、1ppm、5ppm，依次定义为待测乳制品1、待测乳制品2、待测乳制品3。购买酸奶乳制品，向其中加入一定量的三聚氰胺，使得酸奶中的三聚氰胺含量分别为0.1ppm，定义为待测乳制品4。
纳米金溶胶的制备：
于100mL三颈烧瓶中加入质量浓度为1％的氯金酸水溶液10.81mL并稀释到100ml；将此溶液加热至沸，在不断回流和剧烈搅拌下加入浓度为1％的柠檬酸钠溶液，溶液逐渐由淡黄转变为酒红色，变色后开始计时，搅拌条件下保持体系沸腾状态15min，随后自然冷却至室温，得到金溶胶。
实施例1
一种用于乳制品中三聚氰胺检测的检测方法，包括以下步骤：
a.取100μL待测乳制品1，在待测乳制品1中加入500μL乙酸乙酯，漩涡震荡10秒混匀，随后4000转离心2分钟，溶液分层；
b.取300μL上层清液，加入500μL去离子水，漩涡震荡10秒混匀，随后4000转离心2分钟，溶液分层；
c.选用激光光源发射波长为785nm的便携式拉曼仪进行检测，其步骤为：
(1)取步骤b中得到的溶液下层清液300μL于2mL检测池中，加入150μL金溶胶(浓度为50mg/L)，轻微摇晃2s；
(2)仪器参数设置：激光能量选择500mw，积分时间选择1s；
(3)扫描：用拉曼光谱仪在400～2000cm-1的范围内，以8cm-1的分辨率扫描测试样品，读取或者记录拉曼光谱测试结果，并由仪器自动判断给与结果。
实施例2
使用实施例1相同的方法对待测乳制品2进行检测。
实施例3
使用实施例1相同的方法对待测乳制品3进行检测。
实施例4
使用实施例1相同的方法对待测乳制品4进行检测。经过检测，通过本发明的前处理及检测方法，对酸奶中三聚氰胺的检测限可达0.1ppm。
实施例5
一种用于乳制品中三聚氰胺检测的试剂盒，包括：金溶胶、乙酸乙酯、二次蒸馏水。
实施例6
一种用于乳制品中三聚氰胺检测的试剂盒，包括：金溶胶、正己烷、去离子水。
实施例7
一种用于乳制品中三聚氰胺检测的试剂盒，包括：银溶胶、乙酸乙酯、二次蒸馏水。
对比例1
直接取生牛乳作为待测液，按照实施例1的方法进行检测。
图1为实施例1-3以及对比例1的测试结果，由图1可以看出，在本发明的检测方法下，获得了非常明显的拉曼信号，表明本发明的检测方法可用于乳制品中三聚氰胺的快速检测。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种用于乳制品中三聚氰胺检测的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取预定体积的乳制品，加入萃取剂，混合均匀后离心或者静置分层；
(2)取上层清液，与去离子水或二次蒸馏水混合均匀，再次离心或者静置分层，取下层清液为待测液；
(3)取待测液与具有SERS活性的纳米溶胶混合均匀，得到测试样品；
(4)用拉曼光谱仪在400cm-1～2000cm-1的范围内扫描所述测试样品，读取或者记录拉曼光谱测试结果。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述萃取剂的体积与所述乳制品的体积比不小于3。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述萃取剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、正己烷和石油醚中的一种。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)或者步骤(2)中，离心转速低于6000转，离心时间不超过2分钟。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)、步骤(2)或者步骤(3)中，所述混合采用漩涡震荡，时间为5s～20s。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)的总时间不超过5分钟。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述拉曼光谱仪为便携式拉曼光谱仪或者微拉曼光谱仪。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述纳米溶胶的浓度范围为30mg/L～100mg/L。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述纳米溶胶为金溶胶或者银溶胶。
10.一种用于乳制品中三聚氰胺检测的试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：
(1)检测试剂A：金溶胶或者银溶胶；
(2)检测试剂B：萃取剂，所述萃取剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、正己烷和石油醚中的一种；
(3)检测试剂C：二次蒸馏水或去离子水。
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