CN111849821B

CN111849821B - 一种耐高温的餐厨垃圾油脂降解复配菌剂及其应用

Info

Publication number: CN111849821B
Application number: CN202010737378.5A
Authority: CN
Inventors: 柯霞; 孙嘉诚; 薛亚平; 周海岩; 邹树平; 郑裕国
Original assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Current assignee: Zhejiang University of Technology ZJUT
Priority date: 2020-07-28
Filing date: 2020-07-28
Publication date: 2022-08-02
Anticipated expiration: 2040-07-28
Also published as: CN111849821A

Abstract

本发明公开了一种耐高温的餐厨垃圾油脂降解复配菌剂及其应用，属于餐厨垃圾处理技术领域。所述复配菌剂包括：保藏号为CCTCC NO:M 2020177的特基拉芽孢杆菌ZJB19167、保藏号为CCTCC NO:M 2020279的嗜热球形脲芽胞杆菌ZJB20037和保藏号为CCTCC NO:M 2020280的索诺拉沙漠芽孢杆菌ZJB20038。该菌剂可以利用油脂作为唯一碳源生存，能在高油脂浓度、高环境温度的条件下正常生长，在55℃对橄榄油、大豆油、花生油、废烹饪油的油脂降解率能达到80％以上，将其应用于餐厨垃圾的微生物快速减量处理，应用前景良好。

Description

一种耐高温的餐厨垃圾油脂降解复配菌剂及其应用

技术领域

本发明涉及餐厨垃圾处理技术领域，具体涉及一种耐高温餐厨垃圾油脂降解复配菌剂及其应用。

背景技术

近年来，随着工业发展和城市化进程的加速，我国餐厨垃圾的产生量以每年10％以上的增长率增长。餐厨垃圾指食物在加工处理(包括烹煮)后所剩的部分或者消费食物的过程中产生的食物废料、食饮剩余物、食品加工废料以及各类油水混合物，是城市生活垃圾的主要组成部分。

传统的餐厨垃圾处理方法有填埋、焚烧、饲料等。由于温室气体排放和垃圾填埋场的限制，填埋已被禁止；餐厨垃圾中的水分含量高，焚烧会浪费大量能源并且可能产生二噁英；用于饲料则会导致较短的食物链，增加疾病传播风险。

我国餐厨垃圾油脂占比高，约占餐厨垃圾干重基质的25％～30％，其在餐厨垃圾中的含量会显著影响餐厨垃圾的粘度、降低降解过程中的物质交换并影响最终的处理效率，过度累积会产生大量的危害性废物，最终导致处理周期长、降解效率低等问题。废弃油脂因经150～160℃长时间油炸，脂肪酸成分被快速氧化，不饱和程度显著降低，该理化性质发生改变限制了废弃油脂的进一步利用。大量的废烹饪油在没有任何处理的情况下定期排入水沟，在水面形成一层油膜，阻止氧气扩散并进一步造成地下水污染，从而破坏生态系统的平衡。因此，亟需建立一种高效降解餐厨垃圾油脂组分的方法，从而为进一步提高餐厨垃圾减量化处理奠定基础。

目前，处理废烹饪油的途径有厌氧发酵、产生物柴油、生物降解等途径。微生物好氧堆肥就地减量技术近年来成为餐厨垃圾高效减量化处理的新举措。微生物好氧堆肥处理技术是在有氧条件下，利用好氧微生物对餐厨垃圾进行氧化、分解，实现高效降解，是一种传统好氧堆肥技术与外源微生物强化结合的现代堆肥技术。自然界的微生物种类繁多，能将复杂有机物转化为简单有机物，达到无害化的效果，且投资运行费用低、耗能少、操作简便、无二次污染。因此，餐厨垃圾废弃油的微生物处理技术越来越受到关注，因而筛选获得能高效降解餐厨垃圾废弃油脂的菌株显得尤为必要。

在餐厨垃圾好氧堆肥过程中发现，油脂组分的降解主要发生在堆肥的高温阶段。利用微生物分解有机物产生大量的热量，促进了降解过程中物质的交换速率，提高了油脂组分的溶解度。因此提高设备反应温度利于油脂组分的降解，在高温条件(45～55℃)下，通过加快微生物的新陈代谢，提高餐厨垃圾中有机物质的降解速度，可快速、高效地将餐厨垃圾降解成有机肥，同时还可以通过较高温度杀死大多数病原菌和寄生虫，实现垃圾的无害化和资源化。

因此高温可以显著提高油脂的降解效果，并进一步提升餐厨垃圾微生物减量处理效果。目前，国内对于高温油脂高效降解菌剂的研究较为有限，因此筛选得到能够耐受环境高温的油脂降解菌剂，并实现餐厨垃圾废弃油脂的快速降解意义重大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够耐受环境高温的油脂降解菌剂，应用于餐厨垃圾废弃油脂的快速降解。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明从浙江工业大学的食堂泔水中筛选到若干个能在55℃下正常生长且具有油脂降解能力的菌株，进行复配，获得一种能够耐高温并且高效降解油脂的菌剂，该复配菌剂中包括：保藏号为CCTCC NO:M 2020177的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)ZJB19167、保藏号为CCTCC NO:M 2020279的嗜热球形脲芽胞杆菌(Ureibacillusthermosphaericus)ZJB20037和保藏号为CCTCC NO:M 2020280的索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus Sonorensis)ZJB20038。

进一步的，油脂降解复配菌剂还包括：保藏号为CCTCC NO:M 2020014的地衣芽孢杆菌ZJB19163。

进一步的，菌剂中特基拉芽孢杆菌ZJB19167、地衣芽孢杆菌ZJB19163、嗜热球形脲芽孢杆菌ZJB20037、索诺拉沙漠芽孢杆菌ZJB20038的质量之比为1～1.5∶1∶1∶1。

本发明还提供了上述油脂降解复配菌剂在降解油脂中的应用，所述油脂为食用油脂或废弃烹饪油脂。

所述食用油脂为橄榄油、大豆油、花生油、菜籽油中的一种或几种；所述废烹饪油脂来自餐厨垃圾，对油水混合物进行分离后得到的油脂。

进一步的，降解油脂的环境温度为45～55℃。高温条件增加了油脂的溶解度，有助于油脂快速降解，本发明提供的复配菌剂在55℃下能够正常生长并利用油脂作为碳源，快速降解油脂。另外，餐厨垃圾在常温条件下处理易滋生杂菌，产生有害物质，而在45℃以上的环境下，杂菌难以正常生长，本发明提供的复配菌剂具有耐高温的特性，可实现餐厨垃圾的高温无害化处理。

进一步的，所述油脂的质量浓度＞2％。研究表明，当油脂浓度为1％～2％时，复配菌剂对油脂的降解率达到80％以上；随着油脂浓度增加，虽然降解率有所下降，但是在单位时间内对油脂的利用能力显著提高，即降解速率显著提升。一般情况下，餐厨垃圾的油脂浓度在3％左右，本发明提供的复配菌剂不仅适合一般餐厨垃圾的油脂降解，也适用于高油餐厨垃圾。

本发明还提供了一种餐厨垃圾处理方法，包括：将所述的油脂降解复配菌剂接种到待处理餐厨垃圾中，进行通风搅拌发酵处理。

进一步的，所述的油脂降解复配菌剂的湿菌体加入量至少为待处理餐厨垃圾重量的1％。优选，菌剂接种量为：湿菌体与待处理高油餐厨垃圾的质量比为1～5∶100。

进一步的，发酵处理温度为28～55℃。所述菌剂能在55℃条件下正常降解餐厨垃圾油脂组分。

进一步的，发酵处理时间为24～72h。

本发明具备的有益效果：

本发明提供的复配菌剂可以高效降解餐厨垃圾油脂组分，该菌剂能在高油脂浓度、高环境温度的条件下正常生长，对橄榄油、大豆油、花生油、废烹饪油的油脂降解率能达到80％，处理效果显著，将其应用于餐厨垃圾的微生物快速减量处理，应用前景良好。

附图说明

图1为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)ZJB19167菌落在LB培养基上的生长形态(A)以及在油脂筛选培养基上的生长状态(B)。

图2为P-NP标准曲线。

图3为初筛所得七株菌对橄榄油和废烹饪油的降解率。

图4为不同菌株复配对废烹饪油的降解率。

图5为复配菌剂随着油浓度变化对橄榄油和废烹饪油的降解速率变化。

图6为复配菌剂随着时间变化对橄榄油和废烹饪油的降解率。

图7为复配菌剂在降解餐厨垃圾中粗脂肪的应用。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例中涉及的培养基：

LB培养基：酵母粉5g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠10g/L，溶剂为去离子水，pH值自然。121℃，灭菌20min。

富集培养基：酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠10g/L，废烹饪油10g/L，吐温-8012g/L，溶剂为去离子水，pH自然。115℃，灭菌30min。其中废烹饪油来自餐厨垃圾，并对油水混合物使用有机溶剂进行反复萃取，蒸干有机溶剂后得到纯净的废烹饪油。

驯化培养基：磷酸二氢钾1g/L，磷酸氢二钾1g/L，无水氯化钙0.02g/L，无水硫酸镁0.02g/L，无水氯化铁0.05g/L，硝酸铵1g/L，废烹饪油5g/L，溶剂为去离子水，pH值自然。121℃，灭菌20min。

油脂筛选培养基：硫酸铵2g/L、磷酸氢二钾1g/L、氯化钾0.5g/L、七水硫酸镁0.5g/L、硫酸亚铁0.01g/L、琼脂20g/L、废烹饪油乳化液12mL/L，溶剂为去离子水，pH自然。121℃灭菌20min。其中废烹饪油乳化液以废烹饪油与20g/L聚乙烯醇水溶液以体积比1:3的比例用高压匀浆机乳化(压强为0.4MPa)两次所得。

斜面培养基/纯化培养基(LB培养基)组成：酵母粉5g/L，蛋白胨10g/L、氯化钠10g/L、琼脂20g/L，溶剂为去离子水，pH值自然。121℃灭菌20min。

降解验证培养基：蔗糖20g/L，酵母粉20g/L，无水氯化钙0.1g/L，无水硫酸镁0.1g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，橄榄油/废烹饪油20g/L。115℃灭菌30min。

实施例1

菌株的筛选、纯化与保藏

1、取样富集

从浙江工业大学的食堂泔水桶中取样，将泔水与餐厨垃圾混合放置于阳光下5天，吸取2mL液体接种至含有100mL富集培养基的500mL三角摇瓶中，于37℃、150rpm的摇床上培养24h。

2、驯化

用三角纱布层过滤富集的样品，取10mL菌液接种于含5g/L废烹饪油的100mL驯化培养基，于35℃、150rpm的摇床上培养6d；取10mL驯化后的培养液接种于含10g/L废烹饪油的100mL驯化培养基，于40℃、150rpm的摇床上培养6d；以6d为一个周期，每个周期驯化完成后，取10mL培养液于新的驯化培养基中，每轮递加5g/L废烹饪油，温度上升5℃，直至于55℃、25g/L废烹饪油驯化完成。

3、稀释涂布

取1mL驯化后的菌液于9mL生理盐水中进行梯度稀释，分别取稀释10⁴-10⁷的稀释液100μL涂布于油脂筛选培养基平板上(图1)，并在37℃恒温培养箱中培养1-2d，以透明圈直径与菌落直径D/d来初步判定菌株的油脂降解能力。

驯化得到能在55℃下正常生长且具有油脂降解能力的菌株12株，见表1。挑选能力较优的A20、AJ1、B7、B23、L14、L22、31a进行复筛。

表1菌种初筛结果表

4、纯化保藏

用接种环挑取油脂筛选平板上周围出现明显透明圈的单菌落，在纯化培养基上划线纯化，直至显微镜下的细胞形态一致。挑取纯化后的单菌落于斜面培养基上，37℃培养1～2d，4℃冰箱保藏待用。

5、脂肪酶酶活力测定

采用对硝基苯酚(P-NP)法对初筛得到的菌株进行脂肪酶活力测定，进一步筛选出脂肪酶活力较高的菌株。在LB固体培养基上划线分离得到单菌落，接种至含2％橄榄油的降解培养基中，55℃，150r/min，培养72h。取发酵液4℃，8000r/min，离心10min，取上清测定酶活。

P-NP标准曲线绘制：将P-NP溶解于Tris-HCl溶液(0.05mol/L、pH8.0)，配制成1mg/mL的母液。再吸取1.0mL母液，用Tris-HCl溶液(0.05mol/L、pH8.0)定容至100mL，配制成10ug/mL的标准液。将标准液稀释成1ug/mL、2ug/mL、4ug/mL、6ug/mL、8ug/mL，使用酶标仪在405nm波长下对不同浓度标准液进行吸光度测定，并绘制吸光度-P-NP浓度的标准曲线(图2)。

菌株酶活力测定：在10mL EP管中加入2.1mL Tris-HCl溶液、200uL棕榈酸对硝基苯酚酯(P-NPP)(7.5mmol/L，溶剂为甲醇)和100uL适当稀释的发酵上清液，置于37℃试管摇床振荡10min。反应结束后将EP管置于冰水浴中并加入100uL 0.1mol/L的硫酸锌溶液以终止反应，吸取反应液于0.45um水膜过滤后在405nm波长下测定吸光值(表2)。

酶活力定义：每分钟从底物P-NPP中释放1umol P-NP所需的酶量为1U，用U/mL表示。

表2各菌株脂肪酶活力结果表

6、降解率测定

将斜面保藏的菌株各挑取一环接入装有5mL LB液体培养基的试管中，37℃，150rpm培养15～20h，获得种子液；取1mL种子液转接至装有100mL LB液体培养基的500mL三角摇瓶中，37℃，150rpm培养15～20h，获得培养液。将培养液以2％的接种量接种于含有2％橄榄油/废烹饪油的100mL降解培养基中，55℃，150rpm反应3d。反应完成后，用50mL正己烷萃取反应液两次，收集有机溶剂-油层于已恒重的烧杯中，75℃烘箱蒸干正己烷，直至恒重，用分析天平称量重量，计算降解率(图3)。

7、筛选结果

通过平板透明圈初筛，脂肪酶活力复筛(表2)以及油脂降解率验证(图3)，最后获得具有较高油脂降解率的五个菌株，31a、B7、L22、B23、AJ1，分别进行斜面保藏和超低温冷冻保藏。

实施例2

所筛菌株的鉴定

1、菌落形态观察

用接种环少量挑取实施例1斜面保藏菌种，LB平板划线，37℃培养1～2d，观察菌落形态。

2、生理生化试验

利用Biolog(GENⅢ)自动微生物鉴定系统对菌株进行了94种表型测试，包括71种碳源利用情况检测以及23种化学敏感性检测：将菌株接种于BUG平板培养基(BIOLOGUNIVERSAL GROWTH AGAR)，37℃恒温培养2d，用无菌棉签将平板上的菌体洗下，与接种液(IF-A)混合，制成菌悬液，用浊度计调整至91％T/IF-A。用8孔电动加液器将菌悬液分别加在Biolog GENⅢ微孔鉴定板的各孔中，每孔100μL。将微孔鉴定板放在37℃培养箱中，分别在培养12h、24h、36h、48h后将其置于Biolog读数仪上读取结果。

3、分子生物学鉴定

模板准备：挑取单菌落于装有20μL无菌ddH₂O的EP管中，沸水煮10min，12000rpm离心1min，上清液作为DNA模板。以27F(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3')和1492R(5'-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3')为正向和反向引物，PCR扩增16S rDNA序列。

PCR扩增体系为(50μL)：引物27F和1492R各1μL，DNA模板1μL，ddH₂O 22μL，MasterMix酶25μL。

PCR反应条件：预变性95℃5min，变性95℃40s，退火37℃30s，延伸72℃2min，31个循环，72℃10min，4℃保存。

将所得序列在NCBI网站上用BLAST检索，选出与该序列相似性较高的rDNA序列，利用MEGA7软件Align by clustalw自动分析，按1000次重复产生邻近连接树(NJ系统发育树)，结果显示菌株31a(SEQ ID NO.1)与特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis 10b)同源性较高(99.92％)，菌株L22(SEQ ID NO.2)与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformisDSM 13)同源性较高(99.89％)，菌株B7(SEQ ID NO.3)与热球状脲芽孢杆菌(Ureibacillusthermosphaericus DSM 10633)同源性较高(100.00％)，菌株B23(SEQ ID NO.4)与索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus Sonorensis NRRL B-23154)同源性较高(99.42％)，菌株AJ1与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis FZB42)同源性较高(99.86％)。

4、鉴定结果

结合生理生化试验与分子生物学鉴定结果，判定菌株31a为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)，菌株L22为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，菌株B7为热球状脲芽孢杆菌(Ureibacillus thermosphaericus)，菌株B23为索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus Sonorensis)，菌株AJ1为莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。

其中菌株31a命名为特基拉芽孢杆菌ZJB19167，于2020年6月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2020177；菌株L22命名为地衣芽孢杆菌ZJB19163，于2020年1月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2020014；菌株B7命名为嗜热球状脲芽孢杆菌ZJB20037，于2020年7月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M2020279；菌株B23命名为索诺拉沙漠芽孢杆菌ZJB20038，于2020年7月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2020280。

实施例3

耐高温油脂降解菌剂的复配

1、培养液制备

将斜面保藏的五株菌挑取一环分别接入装有5mL LB液体培养基的试管中，37℃，150rpm培养15～20h，获得种子液；将种子液1mL转接至装有100mL LB液体培养基的500mL三角摇瓶中(多转接几瓶以备用)，37℃，150rpm培养15～20h，获得培养液。

2、不同菌株复配的降解能力

将菌株31a标记为1，菌株L22标记为2，菌株AJ1标记为3，菌株B23标记为4，菌株B7标记为5。共选定十种组合123、145、245、125、134、1234、1235、1245、1345、2345，按2％(以OD₆₀₀的吸光度为1.0计，稀释菌液体积比均为1)接种量将各组合菌液接入含有2％废烹饪油的降解验证培养基中，55℃，150rpm反应3d。用50mL正己烷萃取反应液两次，收集有机溶剂-油层于已恒重的烧杯中，75℃烘箱蒸干正己烷，直至恒重，用分析天平称量重量，计算降解率(图4)。

油脂降解率＝(A-B)/A×100％。

其中：

A：接种前废烹饪油质量，g；

B：反应后废烹饪油质量，g。

3、结果

在高温条件下降解能力较好的菌株组合有145、1345、1235、1245分别为71.14％、70.55％、68.79％、81.40％，其中1245降解率明显优于其它组合。选定31a特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)ZJB19167，L22地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ZJB19163，B7嗜热球形脲芽胞杆菌(Ureibacillus thermosphaericus)ZJB20037和B23索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus Sonorensis)ZJB20038作为耐高温菌株组合。

实施例4

复配菌剂在降解废烹饪油中的应用

1、培养液制备

将斜面保藏的四株菌挑取一环分别接入装有5mL LB液体培养基的试管中，37℃，150rpm培养15～20h，获得种子液；将种子液1mL转接至装有100mL LB液体培养基的500mL三角摇瓶中(多转接几瓶以备用)，37℃，150rpm培养15～20h，获得培养液。

2、降解速率随油浓度的变化

将降解培养基中的橄榄油/废烹饪油浓度分别改成10g/L(1％)、20g/L(2％)、40g/L(4％)、60g/L(6％)、80g/L(8％)，按照2％接种量分别接种组合菌株培养液于不同油浓度培养基中，55℃，150rpm反应3d。用50mL正己烷萃取反应液两次，收集有机溶剂-油层于已恒重的烧杯中，75℃烘箱蒸干正己烷，直至恒重，用分析天平称量重量，得到剩余油重，计算降解速率(图5)。

油脂降解速率(mg/h)＝(A-B)/72×1000。

其中：

A：接种前橄榄油/废烹饪油质量，g；

B：反应后橄榄油/废烹饪油质量，g。

3、降解率随时间的变化

按照2％接种量分别接种组合菌株培养液于含20g/L橄榄油/废烹饪油的降解验证培养基中，55℃，150rpm反应3d，于12h、24h、36h、48h、60h、72h分别测定生物量以及油脂降解率。用50mL正己烷萃取反应液两次，收集有机溶剂-油层于已恒重的烧杯中，75℃烘箱蒸干正己烷，直至恒重，用分析天平称量重量，计算降解率(图6)。

油脂降解率＝(A-B)/A×100％。

其中：

A：接种前橄榄油/废烹饪油质量，g；

B：反应后橄榄油/废烹饪油质量，g。

4、结果

复配菌剂在55℃下能够正常生长并利用油脂作为碳源。对20g/L的橄榄油和废烹饪油降解能力分别达到79.12％和78.16％，对80g/L的橄榄油和废烹饪油降解能力分别达到49.73％和52.18％，可应用于高温条件的餐厨垃圾油脂降解中，是一种高效的耐高温油脂降解菌剂。

实施例5

复配菌剂在降解餐厨垃圾中粗脂肪的应用

1、培养液制备

同实施例4

2、餐厨垃圾预处理

收集浙江工业大学精弘食堂餐厨垃圾，使用粉碎机(FSJ-N05A6)粉碎。

实验组：将均质的餐厨垃圾(含油量约为6g/100g湿重)称取100g(湿重)于500mL摇瓶中，按2％接种量加入组合菌株培养液，55℃，150rpm反应3d。

对照组：将均质的餐厨垃圾(含油量约为6g/100g湿重)称取100g(湿重)于500mL摇瓶中，55℃，150rpm反应3d。

3、粗脂肪含量测定方法

称量空浸提杯质量(m₁)，浸提杯中倒入50ml石油醚(沸点为30～60℃)，搭好装置(脂肪测定仪SOX406)，称取一定质量的样品(n)，置于滤纸筒中，使滤纸筒浸于石油醚中，打开冷凝水，打开加热器，设置温度40℃，时间150min。加热完毕后，拧上旋塞，以50℃使石油醚挥发，30min后取出浸提杯，75℃烘箱20min，取出浸提杯并称量质量(m₂)。

其中粗脂肪含量(％湿重)＝(m₂-m₁)/150×100

分别称取对照组与空白组反应12h～72h的样品进行粗脂肪含量测定，所得结果如图7。

4、结果

对粉碎后的餐厨垃圾取样进行粗脂肪含量的测定，得到粗脂肪含量约为24.98g/100g干重，7.50g/100g湿重。实验组在反应3d后餐厨垃圾中的粗脂肪含量为9.96g/100g，降解率达到60.12％；对照组在反应3d后餐厨垃圾中的粗脂肪含量为23.61g/100g，降解率为5.49％。

序列表

<110> 浙江工业大学

<120> 一种耐高温的餐厨垃圾油脂降解复配菌剂及其应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1438

<212> DNA

<213> 特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis)

<400> 1

gcggctgcta tactgcagtc gagcggacag atgggagctt gctccctgat gttagcggcg 60

gacgggtgag taacacgtgg gtaacctgcc tgtaagactg ggataactcc gggaaaccgg 120

ggctaatacc ggatggttgt ttgaaccgca tggttcaaac ataaaaggtg gcttcggcta 180

ccacttacag atggacccgc ggcgcattag ctagttggtg aggtaacggc tcaccaaggc 240

aacgatgcgt agccgacctg agagggtgat cggccacact gggactgaga cacggcccag 300

actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccgcaatgg acgaaagtct gacggagcaa 360

cgccgcgtga gtgatgaagg ttttcggatc gtaaagctct gttgttaggg aagaacaagt 420

accgttcgaa tagggcggta ccttgacggt acctaaccag aaagccacgg ctaactacgt 480

gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc ggaattattg ggcgtaaagg 540

gctcgcaggc ggtttcttaa gtctgatgtg aaagcccccg gctcaaccgg ggagggtcat 600

tggaaactgg ggaacttgag tgcagaagag gagagtggaa ttccacgtgt agcggtgaaa 660

tgcgtagaga tgtggaggaa caccagtggc gaaggcgact ctctggtctg taactgacgc 720

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actccgcctg gggagtacgg tcgcaagact gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca 900

caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac 960

atcctctgac aatcctagag ataggacgtc cccttcgggg gcagagtgac aggtggtgca 1020

tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct 1080

tgatcttagt tgccagcatt cagttgggca ctctaaggtg actgccggtg acaaaccgga 1140

ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga cctgggctac acacgtgcta 1200

caatggacag aacaaagggc agcgaaaccg cgaggttaag ccaatcccac aaatctgttc 1260

tcagttcgga tcgcagtctg caactcgact gcgtgaagct ggaatcgcta gtaatcgcgg 1320

atcagcatgc cgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt cacaccacga 1380

gagtttgtaa cacccgaagt cggtgaggta acctttagga gccagccgcc gagttatc 1438

<210> 2

<211> 1486

<212> DNA

<213> 地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)

<400> 2

cctgttcctc ttcggcggct ggctccaaaa ggttacctca ccgacttcgg gtgttacaaa 60

ctctcgtggt gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcggcatgct 120

gatccgcgat tactagcgat tccagcttca cgcagtcgag ttgcagactg cgatccgaac 180

tgagaacaga tttgtgggat tggcttagcc tcgcggcttc gctgcccttt gttctgccca 240

ttgtagcacg tgtgtagccc aggtcataag gggcatgatg atttgacgtc atccccacct 300

tcctccggtt tgtcaccggc agtcacctta gagtgcccaa ctgaatgctg gcaactaaga 360

tcaagggttg cgctcgttgc gggacttaac ccaacatctc acgacacgag ctgacgacaa 420

ccatgcacca cctgtcactc tgcccccgaa ggggaagccc tatctctagg gttgtcagag 480

gatgtcaaga cctggtaagg ttcttcgcgt tgcttcgaat taaaccacat gctccaccgc 540

ttgtgcgggc ccccgtcaat tcctttgagt ttcagtcttg cgaccgtact ccccaggcgg 600

agtgcttaat gcgtttgctg cagcactaaa gggcggaaac cctctaacac ttagcactca 660

tcgtttacgg cgtggactac cagggtatct aatcctgttc gctccccacg ctttcgcgcc 720

tcagcgtcag ttacagacca gagagtcgcc ttcgccactg gtgttcctcc acatctctac 780

gcatttcacc gctacacgtg gaattccact ctcctcttct gcactcaagt tccccagttt 840

ccaatgaccc tccccggttg agccgggggc tttcacatca gacttaagaa accgcctgcg 900

cgcgctttac gcccaataat tccggacaac gcttgccacc tacgtattac cgcggctgct 960

ggcacgtagt tagccgtggc tttctggtta ggtaccgtca aggtgccgcc ctattcgaac 1020

ggtacttgtt cttccctaac aacagagttt tacgatccga aaaccttcat cactcacgcg 1080

gcgttgctcc gtcagacttt cgtccattgc ggaagattcc ctactgctgc ctcccgtagg 1140

agtctgggcc gtgtctcagt cccagtgtgg ccgatcaccc tctcaggtcg gctacgcatc 1200

gtcgccttgg tgagccgtta cctcaccaac tagctaatgc gccgcgggtc catctgtaag 1260

tggtagctga aagccacctt ttatgattga accctgcggg tccatccagc ctccggtatt 1320

aaccccgggt tcccggagtt tccccgtctt tccgggaggg ttcccacgtg gtactccccc 1380

gtccgccgct gacctaaggg aaccagctcc cgtcggtccg ctcgacttgc atggtttaag 1440

cacgccgcca gcgttcgtct gagcgggggt ctaaatttaa aatacc 1486

<210> 3

<211> 1427

<212> DNA

<213> 嗜热球形脲芽孢杆菌(Ureibacillus thermosphaericus)

<400> 3

tgcaagtcga gcgaaccaat tgaaagccta gctttcatga ggttagcggc ggacgggtga 60

gtaacacgtg ggtaacctgc cctatagact gggataactc gcggaaacgc gtgctaatac 120

cggataacac atcaaagtgc atgctttgat gttgaaagat ggttctgcta tcactatagg 180

atgggcccgc ggcgcattag cttgttggtg gggtaacggc ctaccaaggc gacgatgcgt 240

agccgacctg agagggtgat cggccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg 300

gaggcagcag tagggaatct tccacaatgg gcgaaagcct gatggagcaa cgccgcgtga 360

gcgaagaagg tcttcggatc gtaaagctct gttgtaaggg aagaacaagt gcagtagtaa 420

ctggctgcac cttgacggta ccttactaga aagccacggc taactacgtg ccagcagccg 480

cggtaatacg taggtggcaa gcgttgtccg gaattattgg gcgtaaagcg cgcgcaggcg 540

gtctcttaag tctgatgtga aagcccccgg cttaaccggg gagggtcatt ggaaactggg 600

agacttgagt gcaggagagg gaagcggaat tccatgtgta gcggtgaaat gcgtagagat 660

atggaggaac accagtggcg aaggcggctt cctggcctgt aactgacgct gaggcgcgaa 720

agcgtgggga gcaaacagga ttagataccc tggtagtcca cgccgtaaac gatgagtgct 780

aagtgttagg gggtttccac cccttagtgc tgcagctaac gcattaagca ctccgcctgg 840

ggagtacggt cgcaagactg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga 900

gcatgtggtt taattcgaag caacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca tcccgctgac 960

cgctatggag acatagcctt cccttcgggg acagcggtga caggtggtgc atggttgtcg 1020

tcagctcgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg agcgcaaccc ttgtccttag 1080

ttgccatcat tcagttgggc actctaagga gactgccgta caaatacgga ggaaggtggg 1140

gatgacgtca aatcatcatg ccccttatga cctgggctac acacgtgcta caatggacgg 1200

tacaaacggt cgcgaagtcg cgagacggag ccaatccgaa aaaaccgttc tcagttcgga 1260

ttgcaggctg caactcgcct gcatgaagcc ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcatgc 1320

cgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt cacaccacga gagtctgtaa 1380

cacccgaagt cggtgaggta accctttcgg gagccagccg ccgaagg 1427

<210> 4

<211> 1433

<212> DNA

<213> 索诺拉沙漠芽孢杆菌(Bacillus Sonorensis)

<400> 4

gatagcttcg gcggctggct ccaaaggtta cctcaccgac ttcgggtgtt acaaactctc 60

gtggtgtgac gggcggtgtg tacaaggccc gggaacgtat tcaccgcggc atgctgatcc 120

gcgattacta gcgattccag cttcacgcag tcgagttgca gactgcgatc cgaactgaga 180

acagatttgt gggattggct tagcctcgcg gcttcgctgc cctttgttct gcccattgta 240

gcacgtgtgt agcccaggtc ataaggggca tgatgatttg acgtcatccc caccttcctc 300

cggtttgtca ccggcagtca ccttagagtg cccaactgaa tgctggcaac taagatcaag 360

ggttgcgctc gttgcgggac ttaacccaac atctcacgac acgagctgac gacaaccatg 420

caccacctgt cactctgccc ccgaagggga agccctatct ctagggttgt cagaggatgt 480

caagacctgg taaggttctt cgcgttgctt cgaattaaac cacatgctcc accgcttgtg 540

cgggcccccg tcaattcctt tgagtttcag tcttgcgacc gtactcccca ggcggagtgc 600

ttaatgcgtt tgctgcagca ctaaagggcg gaaaccctct aacacttagc actcatcgtt 660

tacggcgtgg actaccaggg tatctaatcc tgttcgctcc ccacgctttc gcgcctcagc 720

gtcagttaca gaccagagag tcgccttcgc cactggtgtt cctccacatc tctacgcatt 780

tcaccgctac acgtggaatt ccactctcct cttctgcact caagttcccc agtttccaat 840

gaccctcccc ggttgagccg ggggctttca catcagactt aagaaaccgc ctgcgcgcgc 900

tttacgccca ataattccgg acaacgcttg ccacctacgt attaccgcgg ctgctggcac 960

gtagttagcc gtggctttct ggttaggtac cgtcaaggtg ccgccctatt cgaacggtac 1020

ttgttcttcc ctaacaacag agttttacga tccgaaaacc ttcatcactc acgcggcgtt 1080

gctccgtcag actttcgtcc attgcggaag attccctact gctgcctccc gtaggagtct 1140

gggccgtgtc tcagtcccag tgtggccgat caccctctca ggtcggctac gcatcgtcgc 1200

cttggtgagc cgttacctca ccaactagct aatgcgccgc gggtccatct gtaagtggta 1260

gctaaaagcc accttttatg attgaaccat gcggttcaat caagcatccg gtattagccc 1320

cggtttcccg gagttatccc agtcttacag gcaggttacc cacgtgttac tcacccgtcc 1380

gccgctgacc taagggagca agctcccgtc ggtccgctcg actgcatgat agc 1433

Claims

1.一种耐高温的油脂降解复配菌剂，其特征在于，所述油脂降解复配菌剂组成为：保藏号为CCTCC NO: M 2020177的特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis) ZJB19167、保藏号为CCTCC NO: M 2020014的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) ZJB19163、保藏号为CCTCC NO: M 2020279的嗜热球形脲芽胞杆菌(Ureibacillus thermosphaericus)ZJB20037和保藏号为CCTCC NO: M 2020280的索诺拉沙漠芽孢杆菌(BacillusSonorensis) ZJB20038。

2.如权利要求1所述的耐高温的油脂降解复配菌剂，其特征在于，菌剂中特基拉芽孢杆菌ZJB19167、地衣芽孢杆菌ZJB19163、嗜热球形脲芽孢杆菌ZJB20037、索诺拉沙漠芽孢杆菌ZJB20038的质量之比为1~1.5∶1∶1∶1。

3.如权利要求1-2任一项所述的耐高温的油脂降解复配菌剂在降解油脂中的应用，其特征在于，所述油脂为食用油脂或废弃烹饪油脂。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，降解油脂的环境温度为45~55℃。

5.一种餐厨垃圾处理方法，其特征在于，包括：将权利要求1-2任一项所述的耐高温的油脂降解复配菌剂接种到待处理餐厨垃圾中，进行通风搅拌发酵处理。

6.如权利要求5所述的餐厨垃圾处理方法，其特征在于，菌剂接种量为：湿菌体与待处理餐厨垃圾的质量比为1~5∶100。

7.如权利要求5所述的餐厨垃圾处理方法，其特征在于，发酵处理温度为28~55℃。

8.如权利要求5所述的餐厨垃圾处理方法，其特征在于，发酵处理时间为24 ~72 h。