CN111848739A - 一种抗菌肽lj-2及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗菌肽LJ‑2及其应用。所述抗菌肽LJ‑2的氨基酸序列如下：精氨酸‑精氨酸‑缬氨酸‑亮氨酸‑精氨酸‑异亮氨酸‑亮氨酸‑赖氨酸‑组氨酸‑组氨酸‑谷氨酰胺‑甘氨酸‑亮氨酸‑异亮氨酸‑精氨酸‑天冬酰胺‑亮氨酸‑亮氨酸，该抗菌肽LJ‑2对革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌都具有较好的抗菌活性，具有低溶血性、耐热、耐盐、耐酸碱、耐反复冻融。因此，本发明的抗菌肽LJ‑2在抗感染药物制备、畜牧业发展、人类疾病预防与治疗、食品防腐、洗涤剂、化妆品等领域中具有广阔的应用前景。

Description

一种抗菌肽LJ-2及其应用

技术领域

本发明属于抗菌肽研究技术领域，具体涉及一种抗菌肽LJ-2及其应用。

背景技术

抗生素类抗菌药物是人类和动物治疗感染性疾病最常用的一种药物，该药物的应用显著提高了人类的生活质量，挽救了无数人和动物的生命。但是随着传统抗生素的滥用，细菌对抗生素的耐药周期不断缩短，导致了近年来多种耐药菌泛滥成灾。由于细菌耐药性产生和变异的速度不断加快，而抗生素新药研发却十分缓慢。目前，严重的细菌耐药性加大了对人类和动物疫病防治的难度，已成为危害现代养殖业、食品安全和公共卫生安全的重大问题。因此，寻找新型抗菌药物成为解决抗生素耐药和残留的一种重要途径。抗菌肽是一种非常有前景的抗生素替代品。抗菌肽(Antimicrobial peptides，AMPs)又称为肽抗生素，是一种小分子多肽，具有抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗寄生虫、抗肿瘤、免疫调节、中和内毒素、信号转导等多种生物学活性。抗菌肽可由宿主基因编码产生，或可根据抗菌肽的特征进行人工改造与设计而获得。因分子量小、热稳定性好、水溶性好、抗菌谱广、不易产生耐药性等特性，抗菌肽被认为是抗生素的最佳替代品，是继传统抗生素之后的一类新型抗感染药物。

目前，抗菌肽的研究倍受人们的关注，成为免疫学、传染病学、微生物学、分子生物学、生物制药等领域的热点。国际上较权威的抗菌肽数据库APD3(http://aps.unmc.edu/AP/)已经收录3180条抗菌肽序列(截至2020年4月26日)。目前，已有许多抗菌肽制备成药物。抗菌肽的来源主要包括生物体分离鉴定和人工设计与改造。生物体分离鉴定可以获得许多天然来源的抗菌肽，但存在着耗时长、工作量大、产量低、多数肽的安全性或活性不够理想等缺点；抗菌肽的人工设计与改造是获得抗菌肽的快速、有效途径，已经成为抗菌肽开发与研究的一个重要方向。因此，获得结构简单、安全性高、稳定性高、抗菌活性高、制备容易的抗菌肽是抗菌肽开发研究中迫切的需求。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种抗菌肽LJ-2及其应用。该抗菌肽LJ-2对革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌都具有较好的抗菌活性，具有低溶血性、耐热、耐盐、耐酸碱、耐反复冻融。因此，本发明的抗菌肽LJ-2在抗感染药物制备、畜牧业发展、人类疾病预防与治疗、食品防腐、洗涤剂、化妆品等领域中具有广阔的应用前景。

本发明是通过以下技术方案实现的

一种抗菌肽LJ-2，所述抗菌肽LJ-2的氨基酸序列如下：精氨酸-精氨酸-缬氨酸-亮氨酸-精氨酸-异亮氨酸-亮氨酸-赖氨酸-组氨酸-组氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-精氨酸-天冬酰胺-亮氨酸-亮氨酸，如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，所述抗菌肽LJ-2有18个氨基酸残基，其分子量为2235.78Da，等电点为12.6，有5个带正电荷的氨基酸残基。

进一步地，上述的抗菌肽LJ-2在制备细菌感染药物中的应用。

进一步地，所述药物包含抗菌肽LJ-2，并混合有一种或一种以上医药上可接受的载体和/或添加物。

进一步地，所述的细菌包括革兰阳性菌、革兰阴性菌或/和真菌。

进一步地，所述的细菌包括革兰阳性菌包括金黄色葡萄球菌，所述的革兰阴性菌包括大肠杆菌、沙门菌，所述的真菌包括白色念珠菌。

进一步地，上述的抗菌肽LJ-2在制备饲料添加剂、消毒剂、防腐剂、洗涤剂或化妆品添加剂中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下积极有益效果

本发明的抗菌肽LJ-2由18个氨基酸残基组成，对革兰阳性菌(金黄色葡萄球菌)、革兰阴性菌(大肠杆菌、沙门菌)和真菌(白色念珠菌)都有抗菌活性，抗菌活性强，溶血性低，且有较好的耐热性、耐盐性、耐酸碱性和耐反复冻融。因此，本发明的抗菌肽LJ-2在抗感染药物制备、畜牧业发展、人类疾病治疗和预防等方面具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为本发明抗菌肽LJ-2的高效液相色谱图，

图2为本发明抗菌肽LJ-2的质谱图，

图3为抗菌肽LJ-2的等电点分析结果，

图4为抗菌肽LJ-2对大肠杆菌CVCC8099最小抑菌浓度测定结果，

图5为抗菌肽LJ-2对大肠杆菌临床耐药株A1最小抑菌浓度测定结果，

图6为抗菌肽LJ-2对大肠杆菌CVCC1568最小抑菌浓度测定结果，

图7为抗菌肽LJ-2对沙门菌CVCC3776最小抑菌浓度测定结果，

图8为抗菌肽LJ-2对金黄色葡萄球菌ATCC25923最小抑菌浓度测定结果，

图9为抗菌肽LJ-2对白色念珠菌ATCC10231最小抑菌浓度测定结果，

图10为抗菌肽LJ-2的溶血率测定结果，

图11为抗菌肽LJ-2的耐热性测定结果，

图12为抗菌肽LJ-2的耐盐性测定结果，

图13为抗菌肽LJ-2的酸碱稳定性测定结果，

图14为抗菌肽LJ-2的反复冻融稳定性测定结果。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明进行更加详细的说明，以便于对本发明技术方案的理解。但并不用于对本发明保护范围的限制。

实施例1

本发明所述的抗菌肽LJ-2的合成如下：

本发明所述的抗菌肽LJ-2采用自动多肽合成仪按照常规多肽固相化学合成法合成，合成方向为从C端到N端，其合成的详细步骤为：

a、溶涨树脂：将Fmoc-Leu-Wang resin树脂加入自动多肽合成仪反应器内，并加入二甲基甲酰胺DMF进行溶涨，1g Fmoc-Leu-Wang resinin树脂加入DMF的量约为12mL(DMF应完全浸没树脂)，溶涨时间为10～30min，溶涨可重复1～2次；

b、脱保护：树脂溶涨后，将储罐内20％哌啶(20％哌啶是将哌啶溶于二甲基甲酰胺DMF中配制而成的)加入到反应器内，浸没树脂(1g Fmoc-Leu-Wang resinin树脂需要加入20％哌啶约为10mL)，使溶涨后的树脂脱保护，时间约为30min，然后加入二甲基甲酰胺DMF进行洗涤；

c、缩合反应：接着按照抗菌肽LJ-2氨基酸序列的排序加入第二种氨基酸亮氨酸Fmoc-Arg，并加入缩合剂HCTU(6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯)和催化剂NMM(N-甲基吗啡啉)或DIEA(N,N二异丙基乙胺)进行缩合反应；反应结束后加入二甲基甲酰胺DMF进行反复洗涤，除去未反应的氨基酸；所述亮氨酸与Fmoc-Leu-Wang resinin树脂的摩尔比为5:1；所述缩合剂HCTU与亮氨酸Fmoc-Leu之间的摩尔比为1:1；所述催化剂NMM或DIEA与亮氨酸二者之间的摩尔比为4:1；

洗涤后所得产物按照步骤b同样方法进行脱保护、洗涤，依照上述步骤c同样方法依次加入Fmoc-Asn、Fmoc-Arg、Fmoc-Ile、Fmoc-Leu、Fmoc-Gly、Fmoc-Gln、Fmoc-His、Fmoc-His、Fmoc-Lys、Fmoc-Leu、Fmoc-Ile、Fmoc-Arg、Fmoc-Leu、Fmoc-Val、Fmoc-Arg和Fmoc-Arg进行缩合反应、洗涤，最后一个缩合反应、洗涤后，得到多肽产物；每次缩合反应、洗涤后所得产物均按照步骤b的方法进行脱保护、洗涤，然后加入下一个氨基酸进行缩合反应、洗涤(每次缩合反应中，所加入氨基酸与Fmoc-Leu-Wang resinin树脂的摩尔比均为5:1；所述缩合剂HCTU与每种所加氨基酸二者之间的摩尔比均为1:1；所述催化剂NMM或DIEA与每种所加氨基酸二者之间的摩尔比均为4:1)；

d、多肽产物的脱保护和裂解：在步骤c所得多肽产物中加入20％哌啶到反应器内，并浸没多肽产物(对1g树脂进行脱保护所用20％哌啶的量约为10mL)，使其对多肽产物进行脱保护；脱保护后，依次加入二甲基甲酰胺DMF、二氯甲烷DCM进行反复洗涤；洗涤后，加入三氟乙酸TFA进行裂解(对1g树脂进行裂解所用TFA的体积约为20mL)，使多肽从树脂上裂解下来；对裂解后的产物进行过滤(用砂心漏斗进行过滤)，得到滤液；

e、沉淀合成多肽：用冷乙醚对所得滤液进行洗涤、离心，以沉淀合成多肽，其过程为：在步骤d得到的滤液中加入其3倍体积的冷乙醚(预先保存于4℃)，密封后颠倒混匀，冰浴10min，在4000r/m下离心10min，弃上清液体，回收沉淀；用冷乙醚重悬沉淀，重复上述步骤三次，之后将所得沉淀干燥12～16h，得到合成肽粗品；

f、合成肽粗品的纯化：采用半制备型高效液相色谱仪P2000对合成肽粗品进行过柱纯化，收集纯度≥95％的馏分，即得到纯化后的抗菌肽LJ-2，其纯度≥95％。

半制备型高效液相色谱仪为P2000是由北京沃华创新科技有限公司提供，色谱柱为C18反相柱(4.6*250mm)，流动相A为0.1％的三氟乙酸乙腈溶液(0.1mL三氟乙酸溶于100mL乙腈溶液中)，流动相B为0.1％的三氟乙酸水溶液(0.1mL三氟乙酸溶于100mL去离子水中)，使用上述处理柱，上样后25min内，流动相A的比例由27％逐步调至52％，流动相B的比例由73％逐步调至48％，25.1min时，流动相A的比例变为100％，流动相B的比例变为0％，以1mL/min的流速进行30min的分离，检测波长为220nm，收集纯度≥95％的馏分(如附图1所示)；

本发明抗菌肽LJ-2的确认鉴定：

采用液相色谱质谱联用仪(Waters micromass ZQ-2000)测定所得产品抗菌肽的分子量，经测定：LJ-2分子量为2235.78Da(如附图2所示)。高效液相色谱条件：色谱柱为C18反相柱(4.6*250mm)，流动相A为0.1％的三氟乙酸乙腈溶液(0.1mL三氟乙酸溶于100mL乙腈溶液中)，流动相B为0.1％的三氟乙酸水溶液(0.1mL三氟乙酸溶于100mL去离子水中)，上样后25min内，流动相A的比例由25％逐步调至50％，流动相B的比例由75％逐步调至50％，25.1min时，流动相A的比例变为100％，流动相B的比例变为0％，以1mL/min的流速进行30min的分离，检测波长为220nm。质谱测定条件：采用正离子化模式，其毛细管电压为3.00KV，毛细管出口电压50V，碎裂电压为5V，干燥气流量为1.5L/min，干燥气温度为350℃，扫描范围为400～1900m/z。

实施例2

一种抗菌肽LJ-2，其氨基酸序列如下：

精氨酸-精氨酸-缬氨酸-亮氨酸-精氨酸-异亮氨酸-亮氨酸-赖氨酸-组氨酸-组氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-精氨酸-天冬酰胺-亮氨酸-亮氨酸(SEQ IDNO.1)。

该抗菌肽LJ-2含有18个氨基酸残基，其分子量为2235.78Da，等电点为12.6。所述抗菌肽LJ-2带正电荷，可吸引细菌表面的负电荷。

本实施例抗菌肽LJ-2是采用自动多肽合成仪按照常规多肽固相化学合成法合成，最终合成抗菌肽LJ-2经半制备型高效液相色谱仪进行纯化分析处理，其纯度≥95％。

本发明所得抗菌肽LJ-2产品的鉴定：

(1)分子量的测定：采用分析型液相色谱质谱联用仪(Waters micromass ZQ-2000)测定所得抗菌肽LJ-2的分子量，经测定，其分子量为2235.78Da，结果如附图2所示。

具体的检测条件为：①色谱条件为：色谱柱为C18反相柱(4.6*250mm)，流动相A为0.1％的三氟乙酸乙腈溶液(0.1mL三氟乙酸溶于100mL乙腈溶液中)，流动相B为0.1％的三氟乙酸水溶液(0.1mL三氟乙酸溶于100mL去离子水中)，上样后25min内，流动相A的比例由25％逐步调至50％，流动相B的比例由75％逐步调至50％，25.1min时，流动相A的比例变为100％，流动相B的比例变为0％，以1mL/min的流速进行30min的分离，检测波长为220nm。②质谱测定条件：采用正离子化模式，其毛细管电压为3.00KV，毛细管出口电压50V，碎裂电压为5V，干燥气流量为1.5L/min，干燥气温度为350℃，扫描范围为400～1900m/z。

(2)氨基酸序列结构测定：采用自动氨基酸测序仪测定抗菌肽LJ-2的氨基酸序列结构。经测定，抗菌肽LJ-2含有18个氨基酸残基，其氨基酸序列为：精氨酸-精氨酸-缬氨酸-亮氨酸-精氨酸-异亮氨酸-亮氨酸-赖氨酸-组氨酸-组氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-精氨酸-天冬酰胺-亮氨酸-亮氨酸。

(3)等电点分析：打开DNAStar软件中的EditSeq，打开file，点击“new”中的“newprotein”，输入抗菌肽LJ-2的氨基酸序列，另存为pro格式的文档。然后再打开DNAStar软件中的Protean，打开file，点击“open”，选择刚保存为pro格式的文档，点击“打开”，选择“Analysis”中的“Titration Curve”，即可以获得等电点数据，结果见图3。经测定，本发明抗菌肽LJ-2的等电点为12.6。

实施例3

该实施例为抗菌肽LJ-2的性能分析：

3.1抗菌肽LJ-2的抑菌活性分析

采用琼脂平板扩散法测定抗菌肽LJ-2的抑菌活性，其受试微生物菌株为：大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌，大肠杆菌CVCC1568和沙门菌CVCC3776购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心，大肠杆菌CVCC8099、金黄色葡萄球菌ATCC25923和白色念珠菌ATCC10231购自南京便诊生物科技有限公司，大肠杆菌临床耐药株为自行分离鉴定(李杰,杭柏林,董萌萌,等.猪源耐药性大肠杆菌的分离与鉴定[J].中国猪业,2018,13(12):42-46,50)。

将上述受试微生物(1×10⁶CFU/mL)分别稀释于50℃的底层培养基(TSB 0.3g，超纯的琼脂糖0.1g，加超纯水至10ml，pH 7.4)中，倒灭菌平板，凝固，用打孔器打孔(孔径约5mm)，酒精灯稍加热进行封底，用移液器向每孔中加入15μL抗菌肽(1mg/mL)，每个平板包括阳性对照和阴性对照。阳性对照：庆大霉素针对革兰阴性菌和革兰阳性菌，硫酸铜针对真菌；阴性对照：PBS缓冲液。将平板静置1h，使测试液扩散入琼脂糖中。然后，再添加上层覆盖培养基(TSB 0.3g，超纯的琼脂糖0.1g，加超纯水至10ml，pH 7.4，50℃左右)。将培养平板在37℃倒置培养过夜，然后记录孔周边的透明圈的直径，每个菌种重复测定三次，计算平均值。

表1抗菌肽LJ-2的抑菌活性分析结果

注：A表示其所用的阳性对照药物不是庆大霉素，而是抗菌肽BSN-37(一种类Bac5抗菌肽，专利申请号：201710643182.8)。

由表1抗菌活性检测结果显示，本发明的抗菌肽LJ-2对大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有较高或较好的抗菌活性，而且对临床耐药的大肠杆菌(李杰,杭柏林,董萌萌,等.猪源耐药性大肠杆菌的分离与鉴定[J].中国猪业,2018,13(12):42-46,50.)也有较高的抗菌活性。因此，本发明的抗菌肽LJ-2可望在制备治疗动物和人细菌性疾病的药物方面有着很好的应用前景，同时，根据已知抗菌肽的一般特性，抗菌肽LJ-2在饲料添加剂、消毒剂、防腐剂、洗涤剂或化妆品添加剂等方面有良好的应用愿景。

3.2抗菌肽LJ-2的最小抑菌浓度(MIC)测定

受试微生物菌株为大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌。大肠杆菌CVCC1568和沙门菌CVCC3776购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心，大肠杆菌CVCC8099、金黄色葡萄球菌ATCC25923和白色念珠菌ATCC10231购自南京便诊生物科技有限公司，大肠杆菌临床耐药株为自行分离鉴定(李杰,杭柏林,董萌萌,等.猪源耐药性大肠杆菌的分离与鉴定[J].中国猪业,2018,13(12):42-46,50.)。

将受试菌株在TSB液体培养基中扩大培养，测菌液的OD₆₀₀值。当OD值在0.6-0.8时，将菌液在6000r/min条件下离心10min，弃去上清，收集菌体沉淀，将菌体沉淀用等体积的PBS缓冲液(0.01M)重悬；再用TSB培养基将细菌悬液稀释到2×10⁶CFU/mL(大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌)，真菌悬液稀释到2×10⁴CFU/mL(白色念珠菌)。用去离子水稀释抗菌肽LJ-2样品，使其浓度为1.5625-400μg/mL。在96孔细胞培养板中，每孔分别添加50μL不同浓度的抗菌肽LJ-2和50μL稀释的细菌溶液，每个浓度重复三孔，置于37℃培养16-18h，然后混匀每孔中的溶液，测定其OD₆₀₀值，以OD值突然变化对应的抗菌肽LJ-2浓度为其MIC，结果见图4、图5、图6、图7、图8和图9。

由图4、图5、图6、图7、图8和图9可知，抗菌肽LJ-2对大肠杆菌CVCC8099的最小抑菌浓度(MIC)为50μg/mL，对大肠杆菌临床耐药株的最小抑菌浓度(MIC)为25μg/mL，对大肠杆菌CVCC1568的最小抑菌浓度(MIC)为50μg/mL，对沙门菌CVCC3776的最小抑菌浓度(MIC)为50μg/mL，对金黄色葡萄球菌ATCC25923的最小抑菌浓度(MIC)为100μg/mL，对白色念珠菌ATCC10231的最小抑菌浓度(MIC)均为50μg/mL。结果表明，该抗菌肽LJ-2对常见的细菌的最小抑菌浓度均达到微克级。由此说明，本发明的抗菌肽LJ-2具有极强的抗菌活性。

3.3抗菌肽LJ-2的溶血性分析

取新鲜兔血液，用3.8％柠檬酸钠抗凝，将抗凝血经3000r/min离心10min，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤沉淀3次，至上清为无色、透明，再用PBS配制2％红细胞。用PBS将抗菌肽LJ-2的浓度调整为1.5625-400μg/mL，加入等体积的红细胞悬液。以PBS为阴性对照，以1％Tritonx-100为阳性对照，37℃作用1h，1200r/min离心5min，将上清液依次加入96孔板，用酶标仪测540nm处的OD值。然后根据计算公式溶血率(％)＝(检测孔OD值-阴性孔OD值)/(阳性孔OD值-阴性孔OD值)×100％计算抗菌肽LJ-2的溶血率，其结果见图10。

由图10可知，在200μg/mL[高于最小抑菌浓度(MIC)]的浓度条件下，抗菌肽LJ-2的溶血率仍低于5％，说明抗菌肽LJ-2有较好的安全性，临床应用前景较大。

3.4抗菌肽LJ-2的耐热性分析

将浓度为1mg/mL的抗菌肽LJ-2溶液分别置于0℃、20℃、40℃、60℃、80℃、100℃条件下作用1h；然后按3.1中抑菌活性分析的方法对6种不同温度下处理后的抗菌肽LJ-2溶液进行抑菌活性分析，受试微生物菌株为大肠杆菌CVCC8099，结果见图11。

由图11可知，随着温度的升高，抗菌肽LJ-2对大肠杆菌的抗菌活性逐渐降低，但经高温(80℃和100℃)的处理，抗菌肽LJ-2仍具有较好的抗菌活性。由此表明，抗菌肽LJ-2具有较好的耐热性能。

3.5抗菌肽LJ-2的耐盐稳定性分析

将浓度为2mg/mL的抗菌肽LJ-2溶液分别与等量的生理性浓度左右的氯化钠(NaCl，150mM)、氯化钾(KCl，5mM)、氯化镁(MgCl₂，1mM)、氯化钙(CaCl₂，5mM)、三氯化铁(FeCl₃，4μM)和硫酸铜(CuSO₄，25μM)进行混合，置于37℃，作用1h，然后按上述的琼脂平板扩散法测定抗菌肽LJ-2的抑菌活性，受试微生物为大肠杆菌CVCC8099。

由图12可知，经上述几种生理浓度的盐处理后，抗菌肽LJ-2对大肠杆菌的抗菌活性没有发生显著下降。这表明，抗菌肽LJ-2具有较好的耐盐性能。

3.6抗菌肽LJ-2的耐酸碱稳定性分析

将浓度为2mg/mL的抗菌肽LJ-2溶液分别与等量的pH值为4、5、6、7、8、9、10的灭菌水溶液(用1M盐酸和1M氢氧化钠调节)，进行混合，置于37℃，作用1h，然后按上述的琼脂平板扩散法测定抗菌肽LJ-2的抑菌活性，受试微生物为大肠杆菌CVCC8099。

由图13可知，经上述不同pH溶液处理后，抗菌肽LJ-2对大肠杆菌的抗菌活性在酸性区和碱性区虽均有降低，但其仍保留有较好的抗菌活性。这表明，抗菌肽LJ-2具有较好的耐酸碱的性能。

3.7抗菌肽LJ-2的反复冻融稳定性分析

将浓度为1mg/mL的抗菌肽LJ-2溶液分别在室温条件下反复冻融4、6、8、10、12、14次，然后按上述的琼脂平板扩散法测定抗菌肽LJ-2的抑菌活性，受试微生物为大肠杆菌CVCC8099。

由图14可知，经反复冻融，抗菌肽LJ-2对大肠杆菌的抗菌活性随着冻融次数的增加有所降低，但其仍保留有较好的抗菌活性。这表明，抗菌肽LJ-2具有较好的耐反复冻融的性能。

综上所述，本发明抗菌肽LJ-2产品呈低溶血性、抗菌谱广，有良好的耐热、耐盐、耐酸碱、耐反复冻融的特性，对革兰阴性菌、革兰阳性菌和真菌都具有高效的抗菌作用。所以，本发明产品抗菌肽LJ-2在制备治疗革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌所致疾病的药物中能够得到较好的应用，而且，还可用于制备饲料添加剂、消毒剂、防腐剂、洗涤剂或化妆品添加剂。

SEQUENCE LISTING

<110> 河南科技学院

<120> 一种抗菌肽LJ-2及其应用

<130> 1

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 18

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 抗菌肽

<400> 1

Arg Arg Val Leu Arg Ile Leu Lys His His Gln Gly Leu Ile Arg Asn

1 5 10 15

Leu Leu

Claims (7)

1.一种抗菌肽LJ-2，其特征在于，所述抗菌肽LJ-2的氨基酸序列如下：精氨酸-精氨酸-缬氨酸-亮氨酸-精氨酸-异亮氨酸-亮氨酸-赖氨酸-组氨酸-组氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-精氨酸-天冬酰胺-亮氨酸-亮氨酸，如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的抗菌肽LJ-2，其特征在于，所述抗菌肽LJ-2有18个氨基酸残基，其分子量为2235.78Da，等电点为12.6，有5个带正电荷的氨基酸残基。

3.权利要求1或2所述的抗菌肽LJ-2在制备细菌感染药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物包含抗菌肽LJ-2，并混合有一种或一种以上医药上可接受的载体和/或添加物。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的细菌包括革兰阳性菌、革兰阴性菌或/和真菌。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述革兰阳性菌包括金黄色葡萄球菌，所述的革兰阴性菌包括大肠杆菌、沙门菌，所述的真菌包括白色念珠菌。

7.权利要求1或2所述的抗菌肽LJ-2在制备饲料添加剂、消毒剂、防腐剂、洗涤剂或化妆品添加剂中的应用。

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