CN111848605A - 一种取代吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮化合物、其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用作ATR抑制剂的取代吡啶并[3,4‑b]吡嗪‑2(1H)‑酮化合物、其制备方法、药物组合物及其在治疗ATR激酶相关疾病中的用途。

Description

一种取代吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮化合物、其制备方法 和用途

技术领域

本发明涉及药物化学领域，并且具体地涉及一种用作ATR抑制剂的取代吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮化合物、其制备方法、药物组合物及其在治疗ATR激酶相关疾病中的用途。

背景技术

真核细胞基因组完整性由DNA损伤应答(DDR,DNADamage Response)的复杂信号转导通路及多个DNA修复机制保护。与该机制相关的蛋白例如直接识别异常DNA结构的蛋白与DNA双链断裂检查点相关的MRN(MRE11-Rad50-Nbs1)复合物，与单链DNA检查点相关的复制蛋白A(RPA,Replication Protein A)，还有募集并激活DDR通路上游的调节因子—共济失调毛细血管扩张突变基因和Rad3相关蛋白(ATR)。

ATR属于磷脂酰肌醇-3-激酶样激酶(PIKKs)家族，是DNA损伤检查点的重要成员。当受刺激后，ATR可被外源或内源DNA损伤和复制压力(如复制叉压力、DNA双链断裂和烷化剂等)激活，通过磷酸化多种底物(Chk1、WRN、SMARCAL1和FANCI等)，将DNA损伤信号传导到下游靶蛋白，启动应激系统：调节细胞周期进程，产生细胞周期阻滞，稳定复制叉，诱导DNA修复并且最终导致细胞存活或细胞凋亡程序。因此肿瘤细胞对DNA修复途径中ATR介导的损伤修复有着很大地依赖性。在约70％的肿瘤细胞中存在ATM以及P53等基因的突变，造成ATM-P53通路的修复功能受损，使得受损的肿瘤细胞更加依赖ATR-Chk1-cdc25通路传导DNA受损信号，该通路抑制细胞周期中的S或G2期，暂停细胞周期功能进行损伤修复，使细胞缓解复制应激压力，并且在去除应激源之后重新开始复制。

由于ATR通路促进细胞存活，因此开发ATR抑制剂可以抑制肿瘤细胞的修复功能、增强存在ATM-P53通路功能缺失的肿瘤细胞对DNA损伤修复抑制的敏感性，有助于解决化疗药物因损伤修复导致的耐药问题，可以用于治疗基因突变或化疗耐药的肿瘤患者。另外，由于ATR基因与细胞辐射敏感性相关，利用人工的方法进行ATR基因敲除或下调ATR基因的表达，或通过ATR抑制剂与放疗联用可以增强肿瘤患者对放疗的敏感性，例如可以用于治疗辐射抗拒导致的放疗失败的肿瘤患者。

目前已经报道了一些ATR抑制剂(例如WO2010073034、WO2016030320、WO2017121684、WO2017202748)，但本领域仍然亟需新的ATR抑制剂，特别是具有高活性以及其他优异性质的ATR抑制剂。

发明内容

在一方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：

其中：

R¹选自氢、C_1-6烷基和卤代C_1-6烷基；

R²选自C_1-6烷基、C_3-10环烷基、-(C_1-6亚烷基)-(C_3-10环烷基)、3-10元杂环基、-(C_1-6亚烷基)-(3-10元杂环基)、C_6-10芳基、-(C_1-6亚烷基)-(C_6-10芳基)、5-10元杂芳基和-(C_1-6亚烷基)-(5-10元杂芳基)，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-R^a、-C(O)-NR^aR^b、-N(R^b)-C(O)-R^a、-N(R^b)-C(O)-OR^a、-N(R^c)-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_m-R^a、-S(O)_m-NR^aR^b、-N(R^b)-S(O)_m-R^a、-N(R^b)-S(O)_m-OR^a、-N(R^c)-S(O)_m-NR^aR^b的取代基取代；

R³每次出现时各自独立地选自氢、C_1-6烷基、卤素、氰基、羟基和-O(C_1-6烷基)，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；

每个R^a各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_3-10环烷基、3-10元杂环基、C_6-10芳基和5-10元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；

每个R^b和R^c各自独立地选自氢和C_1-6烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；或

R^a、R^b连同与它们共同连接的氮原子共同形成4-7元杂环，所述杂环任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；

每个R^x各自独立地选自卤素、硝基、氰基、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、羟基、-O(C_1-6烷基)、-NH₂、-NH(C_1-6烷基)、-N(C_1-6烷基)₂、-C(O)-O(C_1-6烷基)、-C(O)-NH₂、-C(O)-NH(C_1-6烷基)、-C(O)-N(C_1-6烷基)₂、-S(O)_m-(C_1-6烷基)、-S(O)_m-NH(C_1-6烷基)、-S(O)_m-N(C_1-6烷基)₂；

m为0、1或2；

n为0、1或2。

在另一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体。

在又一方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物在制备用于预防或治疗ATR激酶相关疾病的药物中的用途。

在进一步的方面，本发明提供一种用于预防或治疗ATR激酶相关疾病的方法，所述方法包括向有此需要的个体给予式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物。

在另一方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药或者本发明的药物组合物，用于预防或治疗ATR激酶相关疾病。

在一些实施方案中，所述ATR激酶相关疾病为对ATR激酶抑制敏感或有响应的疾病。在进一步的实施方案中，所述ATR激酶相关疾病为肿瘤类病症，包括但不限于实体和血液恶性肿瘤。

在另一些实施方案中，本发明进一步提供包含另外的治疗方法的组合，所述另外的治疗方法包括但不限于：放射疗法、化疗疗法，免疫疗法或其组合。

具体实施方式

一般术语和定义

除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。提及本文中使用的技术意图指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员显而易见的技术的变化或等效技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。

术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。本领域技术人员应当理解，上述术语如“包括”涵盖“由…组成”的含义。

术语“约”是指在所述数值的±10％范围内，优选±5％范围内，更优选±2％范围内。

除非另有声明，浓度以重量计，比例(包括百分比)以摩尔量计。

术语“一个(种)或多个(种)”或者类似的表述“至少一个(种)”可以表示例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个(种)或更多个(种)。

当公开了数值范围的下限和上限时，落入该范围中的任何数值和任何包括的范围都被具体公开。特别地，本文公开的值的每个取值范围(以形式“约a至b”，或同等的，“大约a至b”，或同等的，“约a-b”)，应理解为表示涵盖于较宽范围中的每个数值和范围。

例如，表述“C_1-6”应理解为涵盖其中的任意亚范围以及每个点值，例如C_2-5、C_3-4、C₁-₂、C_1-3、C_1-4、C_1-5等，以及C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆等。例如，表述“C_3-10”也应当以类似的方式理解，例如可以涵盖包含于其中的任意亚范围和点值，例如C_3-9、C_6-9、C₆-₈、C_6-7、C_7-10、C_7-9、C_7-8、C_8-9等以及C₃、C₄、C₅、C₆、C₇、C₈、C₉、C₁₀等。又例如，表述“3-10元”应理解为涵盖其中的任意亚范围以及的每个点值，例如3-4元、3-5元、3-6元、3-7元、3-8元、3-9元、4-5元、4-6元、4-7元、4-8元、5-7元、5-8元、6-7元等以及3、4、5、6、7、8、9、10元等。还例如，表述“5-10元”也应当以类似的方式理解，例如可以涵盖包含于其中的任意亚范围和点值，例如5-6元、5-7元、5-8元、5-9元、5-10元、6-7元、6-8元、6-9元、6-10元、7-8元等以及5、6、7、8、9、10元等。

术语“烷基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指饱和的直链或支链烃基。如本文中所使用，术语“C_1-6烷基”指具有1-6个碳原子(例如1、2、3、4、5或6个碳原子)的饱和直链或支链烃基。例如“C_1-6烷基”可以是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基或正己基等。

术语“环烷基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指饱和的非芳族单环或多环(诸如双环)烃环(例如单环，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基；或双环，包括螺环、稠合或桥连系统(诸如双环[1.1.1]戊基、双环[2.2.1]庚基、双环[3.2.1]辛基或双环[5.2.0]壬基、十氢化萘基等)。例如，术语“C_3-10环烷基”指具有3-10个环碳原子(如3、4、5、6、7、8、9或10个)的环烷基。

术语“亚烷基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指饱和的直链或支链的二价烃基。例如，术语“C_1-6亚烷基”指具有1-6个碳原子的亚烷基，例如亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、1-甲基亚乙基、2-甲基亚乙基、甲基亚丙基或乙基亚丙基等。类似地，“C_1-2亚烷基”是指亚甲基或亚乙基。

术语“卤代”或“卤素”基团，在本文中单独或与其他基团组合使用时，表示F、Cl、Br或I。

术语“卤代烷基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指上文所述的烷基，其中一个或多个氢原子被卤素代替。例如，术语“卤代C_1-6烷基”指任选地被一个或多个(如1-3个)卤素取代的C_1-6烷基。本领域技术人员应当理解，当卤素取代基多于一个时，卤素可以相同也可以不同，并且可以位于相同或不同的C原子上。实例有例如CH₂F、CHF₂、CF₃、CCl₃、C₂F₅、C₂Cl₅、CH₂CF₃、CH₂Cl或CH₂CH₂CF₃等。

术语“杂环基”或“杂环”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有例如3-10个(适合地具有3-8个，更适合地具有3-6个)环原子的单环或双环的非芳香环体系(3-10元、3-8元、3-6元)，其中至少一个环原子(例如1或2个)是选自N、O和S的杂原子，且其余环原子是C。该环体系可以是饱和(也可以理解为相应的“杂环烷基”)或不饱和的(即在环内具有一个或多个双键和/或三键)。该术语还涵盖这样的情况，其中的C原子可以被(＝O)取代和/或环上的S原子可以被1个或2个(＝O)取代。杂环基的实例包括但不限于：环氧乙烷基、环硫乙烷基、环氮乙烷基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氧杂环戊烯基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、吡唑烷基、吡咯啉基、四氢吡喃基、哌啶基、吗啉基、1,4-噻噁烷基、1,4-二氧六环基、二噻烷基、硫代吗啉基、哌嗪基或三噻烷基等。

术语“芳基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指具有共轭π电子系统的全碳单环或稠合多环(如双环)芳族基团。如本文中所使用，术语“C_6-10芳基”指含有6-10个碳原子的芳族基团。其实例包括但不限于苯基和萘基。

术语“杂芳基”，在本文中单独或与其他基团组合使用时，指这样的芳族基团，其中一个或多个(如1、2或3个)环原子是选自N、O和S的杂原子，其余的环原子为C。杂芳基可以用环原子的数目表征。例如，5-10元杂芳基可以含有5-10个环原子(例如5、6、7、8、9或10个)环原子，特别是含有5、6、9、10个环原子。并且在每一种情况下，杂芳基可任选为进一步苯并稠合的。例如，杂芳基的实例有噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、吡嗪基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等，以及它们的苯并衍生物；或吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基等，以及它们的苯并衍生物。

术语“羟基”表示-OH。

术语“氰基”表示-CN。

术语“硝基”表示-NO₂。

术语“氨基”表示-NH₂。

术语“取代”和“取代的”指所指定的原子上的一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)氢被从所指出的基团的选择代替，条件是未超过所指定的原子在当前情况下的正常原子价并且所述取代形成稳定的化合物。取代基和/或变量的组合仅仅当这种组合形成稳定的化合物时才是允许的。

如果取代基被描述为“任选地…被取代”，则取代基可(1)未被取代，或(2)被取代。如果某个原子或基团被描述为任选地被取代基列表中的一个或多个取代，则该原子或基团上的一个或多个氢可被独立地选择的、任选的取代基替代。如果取代基被描述为“独立地选自”或“各自独立地为”，则各取代基互相独立地加以选择。因此，各取代基可与另一(其他)取代基相同或不同。例如，某个取代基或取代位置或者不同的取代基或取代位置具有可能相同或不同符号指代的R基团(例如但不限于R³、R^a、R^b、R^c、和/或R^x)的选择时，各个R之间独立地加以选择，即可以相同也可以不同。关于数值如m、n的选择也是如此。

除非指明，否则如本文中所使用，取代基的连接点可来自取代基的任意适宜位置。

当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一成环原子。

术语“芳香烃类”，如本文中单独或与其他术语组合使用时，指具有6-10个碳原子的全碳单环或稠合多环(如双环)芳香烃，其实例包括苯和萘，特别是苯。

如本文中所使用，术语“醇类”是指具有1-10个碳原子的醇，其实例包括但不限于甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、正戊醇、环己醇或其组合，特别是甲醇。

如本文中所使用，术语“酯类”是指具有3-10个碳原子的酯，其实例包括但不限于乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯或其组合，特别是乙酸乙酯。

如本文中所使用，术语“醚类”是指具有2-10个碳原子的醚。醚类溶剂的实例包括但不限于乙醚、异丙醚、四氢呋喃、二氧六环、甲基叔丁基醚或其组合，特别是四氢呋喃或1,4-二氧六环。

如本文中所使用，术语“酰胺类溶剂”是指N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二乙基甲酰胺或N-甲基吡咯烷酮，特别是N,N-二甲基甲酰胺。

本发明还包括所有药学上可接受的同位素标记的化合物，其与本发明的化合物相同，除了一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于在自然界中占优势的原子质量或质量数的原子替代。适合包含入本发明的化合物中的同位素的实例包括(但不限于)氢的同位素(例如氘(²H)、氚(³H))；碳的同位素(例如¹³C及¹⁴C)；氯的同位素(例如³⁷Cl)；碘的同位素(例如¹²⁵I)；氮的同位素(例如¹³N及¹⁵N)；氧的同位素(例如¹⁷O及¹⁸O)；磷的同位素(例如³²P)；及硫的同位素(例如³⁴S)。

术语“立体异构体”表示由于至少一个不对称中心形成的异构体。在具有一个或多个(例如一个、两个、三个或四个)不对称中心的化合物中，其可产生外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。特定个别分子也可以几何异构体(顺式/反式)存在。类似地，本发明的化合物可以两种或更多种处于快速平衡的结构不同的形式的混合物(通常称作互变异构体)存在。互变异构体的代表性实例包括酮-烯醇互变异构体、苯酚-酮互变异构体、亚硝基-肟互变异构体、亚胺-烯胺互变异构体等。应当理解，本发明的范围涵盖所有这样的以任意比例(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％)的异构体或其混合物。

本文中可使用实线(-)、实楔形

或虚楔形

描绘本发明的化合物的碳-碳键。使用实线以描绘键连至不对称碳原子的键欲表明，包括该碳原子处的所有可能的立体异构体(例如，特定的对映异构体、外消旋混合物等)。使用实或虚楔形以描绘键连至不对称碳原子的键欲表明，存在所示的立体异构体。当存在于外消旋混合物中时，使用实及虚楔形以定义相对立体化学，而非绝对立体化学。除非另外指明，否则本发明的化合物可以以立体异构体(其包括顺式及反式异构体、光学异构体(例如R及S对映异构体)、非对映异构体、几何异构体、旋转异构体、构象异构体、阻转异构体及其混合物)的形式存在。本发明的化合物可表现一种以上类型的异构现象，且由其混合物(例如外消旋混合物及非对映异构体对)组成。

本发明还涵盖本发明的化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其可为单一多晶型物或多于一种多晶型物的任意比例的混合物。

还应当理解，本发明的某些化合物可以游离形式存在用于治疗，或适当时，以其药学上可接受的衍生物形式存在。在本发明中，药学上可接受的衍生物包括但不限于，药学上可接受的盐、溶剂合物、N-氧化物、代谢物或前药，在将它们向需要其的患者给药后，能够直接或间接提供式(I)的化合物或其代谢物。因此，当在本文中提及“本发明的化合物”时，也意在涵盖化合物的上述各种衍生物形式。

本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐及碱加成盐。适合的酸加成盐由形成药学可接受盐的酸来形成。适合的碱加成盐由形成药学可接受盐的碱来形成。用于制备本发明的化合物的药学上可接受的盐的方法为本领域技术人员已知的。

如本文中所使用，术语“酯”意指衍生自本文所描述的化合物的酯，其包括生理上可水解的酯(可在生理条件下水解以释放游离酸或醇形式的本发明的化合物)。本发明的化合物本身也可以是酯。

本发明的化合物可以溶剂合物(优选水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。

本领域技术人员会理解，由于氮需要可用的孤对电子来氧化成氧化物，因此并非所有的含氮杂环都能够形成N-氧化物。本领域技术人员会识别能够形成N-氧化物的含氮杂环。本领域技术人员还会认识到叔胺能够形成N-氧化物。用于制备杂环和叔胺的N-氧化物的合成方法是本领域技术人员熟知的，包括用过氧酸如过氧乙酸和间氯过氧苯甲酸(mCPBA)、过氧化氢、烷基过氧化氢如叔丁基过氧化氢、过硼酸钠和双环氧乙烷(dioxirane)如二甲基双环氧乙烷来氧化杂环和叔胺。

在本发明的范围内还包括本发明的化合物的代谢物，即在给药本发明的化合物时体内形成的物质。化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过试验的方法进行表征。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、酶解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢物，包括通过使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间的方法制得的化合物。

本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药，其为自身可具有较小药理学活性或无药理学活性的本发明的化合物的某些衍生物当被给药至身体中或其上时可通过例如水解裂解转化成具有期望活性的本发明的化合物。通常这样的前药会是所述化合物的官能团衍生物，其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。关于前药的使用的其他信息可参见，例如，J.Rautio et al.,Nature Reviews Drug Discovery(2008)7,255-270和Prodrugs:Challenges and Rewards(V.Stella et al.ed.,Springer,2007)。

本发明还涵盖含有保护基的本发明的化合物。在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的，由此形成本发明的化合物的化学保护的形式。这可以通过常规的保护基实现，例如，在T.W.Greene&P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,2006中所述的那些保护基，这些参考文献通过援引加入本文。例如，杂芳环NH的保护基包括但不限于N,N’-二甲基磺酰基、对甲苯磺酰基、叔丁氧羰基(Boc)、叔丁基二甲基硅基(TBS)、苄基(Bn)、四氢吡喃-2-基(THP)，特别是THP。使用本领域已知的方法，在适当的后续阶段可以移除保护基。

本发明还涵盖本文所述化合物的制备方法。应当理解，本发明的化合物可使用下文描述的方法以及合成有机化学领域中已知的合成方法或本领域技术人员所了解的其变化形式来合成。优选方法包括(但不限于)下文所述那些。反应可在适于所使用的试剂和材料且适合于实现转化的溶剂或溶剂混合物中进行。本领域技术人员可以理解，当使用特定试剂时，可以直接使用商购的或合成制备的试剂，也可以对商购的或合成制备的试剂进行适当的进一步纯化、预处理或转化，其中转化的实例例如当使用特定的胺时，该特定的胺可以由其盐经过游离得到。

术语“活性成分”、“治疗剂”，“活性物质”或“活性剂”是指一种化学实体，它可以有效地治疗目标病症或病况的一种或多种症状。

本文中所使用的术语“有效量”(例如“治疗有效量”或“预防有效量”)是指给药后会在一定程度上实现预期效果的活性成分的量，例如缓解所治疗病症的一种或多种症状或预防病症或其症状的出现。

除非另外说明，否则如本文中所使用，术语“治疗”意指逆转、减轻、抑制这样的术语所应用的病症或病况或者这样的病症或病况的一种或多种症状的进展，或预防这样的病症或病况或者这样的病症或病况的一种或多种症状。

如本文所使用的“个体”包括人或非人动物。示例性人个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人个体(称为患者)或正常个体。本发明中“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类、家畜和/或驯化动物(例如绵羊、犬、猫、奶牛、猪等)。

如本文中所使用的，术语“室温”(RT)指约20至35℃，优选约25℃。

本发明的化合物

在一方面，本发明提供式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：

其中：

R¹选自氢、C_1-6烷基和卤代C_1-6烷基；

R²选自C_1-6烷基、C_3-10环烷基、-(C_1-6亚烷基)-(C_3-10环烷基)、3-10元杂环基、-(C_1-6亚烷基)-(3-10元杂环基)、C_6-10芳基、-(C_1-6亚烷基)-(C_6-10芳基)、5-10元杂芳基和-(C_1-6亚烷基)-(5-10元杂芳基)，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-R^a、-C(O)-NR^aR^b、-N(R^b)-C(O)-R^a、-N(R^b)-C(O)-OR^a、-N(R^c)-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_m-R^a、-S(O)_m-NR^aR^b、-N(R^b)-S(O)_m-R^a、-N(R^b)-S(O)_m-OR^a、-N(R^c)-S(O)_m-NR^aR^b的取代基取代；

R³每次出现时各自独立地选自氢、C_1-6烷基、卤素、氰基、羟基和-O(C_1-6烷基)，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；

每个R^a各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_3-10环烷基、3-10元杂环基、C_6-10芳基和5-10元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；

每个R^b和R^c各自独立地选自氢和C_1-6烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；或

R^a、R^b连同与它们共同连接的氮原子共同形成4-7元杂环，所述杂环任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；

每个R^x各自独立地选自卤素、硝基、氰基、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、羟基、-O(C_1-6烷基)、-NH₂、-NH(C_1-6烷基)、-N(C_1-6烷基)₂、-C(O)-O(C_1-6烷基)、-C(O)-NH₂、-C(O)-NH(C_1-6烷基)、-C(O)-N(C_1-6烷基)₂、-S(O)_m-(C_1-6烷基)、-S(O)_m-NH(C_1-6烷基)、-S(O)_m-N(C_1-6烷基)₂；

m为0、1或2；

n为0、1或2。

在一些实施方案中，R¹选自C_1-6烷基和卤代C_1-6烷基。在一优选的实施方案中，R¹为被一个或多个选自F和Cl的卤素取代的C_1-6烷基。在另一些优选的实施方案中，R¹为C_1-6烷基。在一些更优选的实施方案中，R¹为C_1-4烷基。在一些进一步优选的实施方案中，R¹为甲基。

在一些实施方案中，R²选自C_1-6烷基、3-10元杂环基、-(C_1-6亚烷基)-(3-10元杂环基)、C_6-10芳基、-(C_1-6亚烷基)-(C_6-10芳基)、5-10元杂芳基和-(C_1-6亚烷基)-(5-10元杂芳基)，其中所述烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-NR^aR^b、-N(R^b)-C(O)-R^a、-S(O)_m-R^a、-S(O)_m-NR^aR^b、-N(R^b)-S(O)_m-R^a的取代基取代。在一些优选的实施方案中，R²选自C_1-6烷基、3-10元杂环基、-(C_1-6亚烷基)-(3-10元杂环基)、-(C_1-6亚烷基)-(C_6-10芳基)和5-10元杂芳基，其中所述烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-NR^aR^b、-N(R^b)-C(O)-R^a、-S(O)_m-R^a、-S(O)_m-NR^aR^b、-N(R^b)-S(O)_m-R^a的取代基取代，其中杂环基或杂芳基含有1或2个选自N和O的杂原子，杂环基环原子中的C原子任选地被(＝O)取代。在一些更优选的实施方案中，R²选自C_1-4烷基、4-7元杂环基、-(C_1-4亚烷基)-(4-7元杂环基)、-(C_1-4亚烷基)-(C_6-10芳基)和5-6元杂芳基；其中所述烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_m-R^a和-S(O)_m-NR^aR^b的取代基取代；其中所述C_1-4烷基优选地选自甲基和乙基；其中所述杂环基优选地选自哌啶基、四氢吡喃基、氧杂环丁基、哌嗪基、吗啉基和吡咯烷酮基；其中所述芳基优选地为苯基，其中所述杂芳基优选地为吡唑基。在一些进一步优选的实施方案中，R²选自甲基、乙基、4-7元杂环基、-(C_1-4亚烷基)-(4-7元杂环基)、苄基、-亚乙基-苯基和吡唑基；其中所述4-7元杂环基选自哌啶基、四氢吡喃基、氧杂环丁基、哌嗪基、吗啉基和吡咯烷酮基；其中所述甲基、乙基、杂环基、苯基(包括苄基中的苯基)和吡唑基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_m-R^a和-S(O)_m-NR^aR^b的取代基取代。在另一些优选的实施方案中，R²选自甲基、乙基、吡唑基、哌啶基、四氢吡喃基、氧杂环丁基、-(C_1-4亚烷基)-哌嗪基、-(C_1-4亚烷基)-吗啉基、-(C_1-4亚烷基)-吡咯烷酮基、-(C_1-4亚烷基)-苯基、吡唑基，其中甲基、乙基、吡唑基、哌啶基、四氢吡喃基、氧杂环丁基、哌嗪基、吗啉基、吡咯烷酮基、苯基、吡唑基各自任选地被一个或多个选自氰基、C_1-4烷基、-O(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)₂、-C(O)-N(C_1-4烷基)₂、-S(O)_m-(C_1-4烷基)、-S(O)_m-N(C_1-4烷基)₂的取代基取代。在一些特别优选的实施方案中，R²选自3-10元杂环基和5-10元杂芳基，其中所述杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-NR^aR^b、-N(R^b)-C(O)-R^a、-S(O)_m-R^a、-S(O)_m-NR^aR^b、-N(R^b)-S(O)_m-R^a的取代基取代。在一些优选的实施方案中，R²选自3-10元杂环基和5-10元杂芳基，其中所述杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-NR^aR^b、-N(R^b)-C(O)-R^a、-S(O)_m-R^a、-S(O)_m-NR^aR^b、-N(R^b)-S(O)_m-R^a的取代基取代，其中杂环基或杂芳基含有1或2个选自N和O的杂原子，杂环基环原子中的C原子任选地被(＝O)取代。在一些更优选的实施方案中，R²选自4-7元杂环基和5-6元杂芳基，其中所述杂环基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_m-R^a和-S(O)_m-NR^aR^b的取代基取代；其中所述杂环基优选地选自哌啶基、四氢吡喃基、氧杂环丁基、哌嗪基、吗啉基和吡咯烷酮基，更优选地选自四氢吡喃基、氧杂环丁基和哌啶基，特别优选为四氢吡喃基；其中所述杂芳基优选地为吡唑基。

在一些实施方案中，R³每次出现时各自独立地选自氢、C_1-4烷基、卤素、氰基、羟基和-O(C_1-4烷基)，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代。在一些优选的实施方案中，R³每次出现时各自独立地选自氢、C_1-4烷基和卤素。在一些更优选的实施方案中，R³为氢。

在一些实施方案中，每个R^a各自独立地选自氢、C_1-4烷基、C_3-7环烷基、4-7元杂环基、苯基和5-6元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、苯基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代。在一些优选的实施方案中，每个R^a各自独立地选自氢、C_1-4烷基和C_3-7环烷基，其中所述烷基和环烷基各自任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代。在一些更优选的实施方案中，每个R^a各自独立地选自氢和C_1-4烷基。在一些进一步优选的实施方案中，每个R^a各自独立地选自C_1-2烷基。在一些特别优选的实施方案中，R^a为甲基。

在一些实施方案中，每个R^b和R^c各自独立地选自氢和C_1-4烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代。在一些优选的实施方案中，每个R^b和R^c各自独立地选自C_1-2烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代。在一些特别优选的实施方案中，R^b和R^c为甲基，其中甲基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代。

在另一些实施方案中，R^a、R^b连同与它们共同连接的氮原子共同形成5-7元杂环。在一些优选的实施方案中，R^a、R^b连同与它们共同连接的氮原子共同形成5-6元杂环，所述杂环任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代。

在一些实施方案中，每个R^x各自独立地选自卤素、氰基、C_1-4烷基、卤代C_1-4烷基、羟基、-O(C_1-4烷基)、-NH₂、-NH(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)₂、-C(O)-O(C_1-4烷基)、-C(O)-NH₂、-C(O)-NH(C_1-4烷基)、-C(O)-N(C_1-4烷基)₂、-S(O)_m-(C_1-4烷基)、-S(O)_m-NH(C_1-4烷基)、-S(O)_m-N(C_1-4烷基)₂，其中卤代C_1-4烷基优选地为被一个或多个选自F和Cl的卤素取代的C_1-4烷基。在一些优选的实施方案中，每个R^x各自独立地选自卤素、氰基、C_1-4烷基、-O(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)₂、-C(O)-N(C_1-4烷基)₂、-S(O)_m-(C_1-4烷基)和-S(O)_m-N(C_1-4烷基)₂。在一些更优选的实施方案中，每个R^x各自独立地选自氰基、甲基、甲氧基、-N(CH₃)₂、-C(O)-N(CH₃)₂、-S(O)₂-CH₃和-S(O)_m-N(CH₃)₂。

在一些实施方案中，R²选自以下基团：

在另一些实施方案中，R²选自以下基团：

些特别的实施方案中，R²选自

在另一些特别的实施方案中，R²选自

在另一些特别的实施方案中，R²为

在一些实施方案中，m为2。

在另一些实施方案中，n为0或1。在一些优选的实施方案中，，n为0。

在另一方面，本发明提供式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：

其中R²如式(I)中所定义。

在又一方面，本发明提供化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物选自：

在另一方面，本发明提供化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物选自：

本发明的制备方法

本发明提供制备式(I)的化合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)使化合物I-1与INT-a反应得到化合物I-2

(2)由化合物I-2制备化合物I-3

(3)由化合物I-3制备化合物I-4

(4)由化合物I-4制备化合物I-5

(5)化合物I-5与INT-c反应得到化合物I

其中：R¹、R²、R³和n如上文所定义，Lg¹和Lg²各自独立地表示卤素离去基团(例如Cl、Br或I)，或者任选地被卤素取代的C_1-6烷基磺酸酯基离去基团(例如三氟甲磺酸酯基离去基团)；PG为氨基保护基；Hal表示卤素；在步骤(3)或步骤(4)中脱除氨基保护基PG。

在步骤(1)中，反应可以在溶剂中进行。在一些实施方案中，R²-NH₂为液体，I-1与R²-NH₂直接接触并反应。在一些实施方案中，步骤(1)在有机溶剂中进行。适合的有机溶剂包括但不限于乙腈、醚类溶剂(例如四氢呋喃、1,4-二氧六环等)、酰胺类溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等)、DMSO或其任意组合。在一些特别的实施方案中，步骤(1)在N,N-二甲基甲酰胺中进行。在另一些实施方案中，步骤(1)在碱存在下进行。适合的碱可以为有机碱或无机碱。适合的有机碱可以为DIPEA、三乙胺或吡啶等。适合的无机碱可以为磷酸钾、醋酸钾、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯或氢化钠等。在一些特别的实施方案中，步骤(1)在氢化钠存在下进行。在一些实施方案中，步骤(1)的反应温度为15至50℃。在一些示例性的实施方案中，步骤(1)的反应时间为2-8小时。

在一些实施方案中，步骤(2)通过以下方式实施：化合物I-2发生还原反应得到化合物I-3-1，化合物I-3-1与INT-d反应得到化合物I-3，如下图所示，其中R^f表示离去基团。

在另一些实施方案中，步骤(2)通过以下方式实施：化合物I-2与INT-d反应得到化合物I-3-1’，化合物I-3-1’发生还原反应得到化合物I-3，如下图所示，其中R^f表示离去基团。

在一些实施方案中，Rf选自H、卤素、硼酸基、硼酸酯基、取代的硅基、取代的金属基团或任选地被卤素取代的C_1-6烷基磺酸酯基。在一些优选的实施方案中，R^f为硼酸基或硼酸酯基。在更优选的实施方案中，R^f为硼酸酯基。在进一步优选的实施方案中，R^f为4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基。

在步骤(2)中，硝基还原反应可以在溶剂中进行。在一些实施方案中，步骤(2)的硝基还原反应在水、有机溶剂或其组合中进行。适合的有机溶剂包括但不限于醇类溶剂(例如甲醇、乙醇等)、酯类溶剂(例如乙酸乙酯等)或其任意组合。在一些特别的实施方案中，步骤(2)的硝基还原反应在甲醇中进行。在一些实施方案中，步骤(2)的硝基还原反应为氢化反应，其中反应在氢气氛和任选存在的催化剂条件下进行。适合的催化剂包括但不限于镍催化剂(例如雷尼镍等)和钯催化剂(例如钯碳等)，优选为雷尼镍。在另一些实施方案中，步骤(2)的硝基还原反应在还原试剂存在下进行，适合的还原试剂可以为铁粉、锌粉或连二亚硫酸钠等。在又一些实施方案中，步骤(2)的硝基还原反应采用还原试剂并任选地在催化剂存在下进行，适合的还原试剂例如可以选自水合肼、甲酸铵，适合的催化剂可以为雷尼镍或钯碳等。在一些实施方案中，步骤(2)的硝基还原反应的反应温度为20至80℃。在一些示例性的实施方案中，步骤(2)的硝基还原反应的反应时间为2-8小时。

在步骤(2)中，Lg²取代反应可以在溶剂中进行。在一些实施方案中，步骤(2)的Lg²取代反应在水、有机溶剂或其组合中进行。适合的有机溶剂包括但不限于烃类溶剂(例如取代或未取代的芳香烃类溶剂，例如甲苯等)、醚类溶剂(例如1,4-二氧六环等)、酰胺类溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等)或其任意组合。在一些特别的实施方案中，步骤(2)的Lg²取代反应在1,4-二氧六环中进行。在一些实施方案中，步骤(2)的Lg²取代反应在金属催化剂存在下进行。在一些优选的实施方案中，金属催化剂为钯催化剂，例如四三苯基膦钯、醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、1,2-双二苯基膦乙烷氯化钯和双(三苯基膦)二氯化钯等，优选[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯。在另一些实施方案中，步骤(2)的Lg²取代反应在碱存在下进行。适合的碱可以为有机碱或无机碱。适合的有机碱可以为DIPEA、三乙胺或吡啶等。适合的无机碱可以为磷酸钾、醋酸钾、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯或氢化钠等。在一些特别的实施方案中，步骤(2)的Lg²取代反应在碳酸钠或碳酸钾存在下进行。在一些实施方案中，步骤(2)的Lg²取代反应的反应温度为60至120℃。在一些示例性的实施方案中，步骤(2)的Lg²取代反应的反应时间为2-8小时。

在步骤(3)中，反应可以在溶剂中进行。在一些实施方案中，步骤(3)在有机溶剂中进行。适合的有机溶剂可以为甲苯、二氯甲烷、乙腈、1,4-二氧六环等溶剂或其任意组合。在一些特别的实施方案中，步骤(3)在甲苯和二氯甲烷的组合溶剂中进行。在一些实施方案中，步骤(3)在碱存在下进行。适合的碱可以为有机碱或无机碱。适合的有机碱可以为DIPEA、三乙胺或吡啶等。适合的无机碱可以为磷酸钾、醋酸钾、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯或氢化钠等。在一些特别的实施方案中，步骤(3)在DIPEA存在下进行。在一些实施方案中，步骤(3)的反应温度为-78℃至120℃。在一些示例性的实施方案中，步骤(3)的反应时间为2-12小时。在一些实施方案中，R^e为Cl或-O(C_1-2烷基)。在一些特别的实施方案中，INT-b选自草酰氯和草酰氯单酯，尤其是草酰氯和草酰氯单乙酯。在另一些特别的实施方案中，INT-b为草酸单酯，优选为草酸单乙酯。

在步骤(4)中，反应可以在存在或不存在溶剂的条件下进行。在一些实施方案中，步骤(4)在不存在溶剂的条件下进行。在一些实施方案中，步骤(4)在卤化试剂存在下进行。适合的卤化试剂包括但不限于磷卤化合物，例如三氯氧磷、三溴氧磷等，优选三氯氧磷。在另一些实施方案中，步骤(4)在碱存在下进行。适合的碱可以为有机碱或无机碱。适合的有机碱可以为DIPEA、三乙胺或吡啶等。适合的无机碱可以为磷酸钾、醋酸钾、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯或氢化钠等。在一些特别的实施方案中，步骤(4)在DIPEA存在下进行。在一些实施方案中，步骤(4)的反应温度为50℃至120℃。在一些示例性的实施方案中，步骤(4)的反应时间为2-12小时。

氨基保护基PG的脱除在步骤(3)或步骤(4)中进行。在一些实施方案中，在步骤(3)中脱除氨基保护基PG，化合物I-4中的R⁴为H。在另一些实施方案中，化合物I-4中的R⁴为PG，相应地在步骤(4)中脱除氨基保护基PG。在一些示例性的实施方案中，PG为THP。

在步骤(5)中，反应可以在溶剂中进行。适合的溶剂包括但不限于乙腈、醚类溶剂(例如四氢呋喃、1,4-二氧六环等)、酰胺类溶剂(例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等)、DMSO或其任意组合。在一些特别的实施方案中，步骤(5)在N,N-二甲基甲酰胺中进行。在另一些实施方案中，步骤(5)在碱存在下进行。适合的碱可以为有机碱或无机碱。适合的有机碱可以为DIPEA、三乙胺或吡啶等。适合的无机碱可以为磷酸钾、醋酸钾、碳酸氢钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯或氢化钠等。在一些特别的实施方案中，步骤(5)在DIPEA存在下进行。在一些实施方案中，步骤(5)的反应温度为50℃至120℃。在一些示例性的实施方案中，步骤(5)的反应时间为2-12小时。

本发明制备方法的起始原料可来自商业来源或可按照已知方法制备。

本领域技术人员应当理解，根据期望获得的产物结构，可省略以上路线中的一个或多个步骤。本领域技术人员也可根据需要适当地调整反应步骤的顺序，以及增加或省略保护/脱保护反应步骤。

本发明的式(II)化合物可参考上述实施方案中类似的方法合成。

药物组合物、制剂和试剂盒

本发明还提供一种药物组合物，其包含式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物(例如水合物)、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体，并可以任选地进一步包含一种或多种用于治疗ATR激酶相关疾病的第二治疗剂。

本发明的进一步的目的在于提供一种制备本发明的药物组合物的方法，所述方法包括将式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、或者它们的混合物与一种或多种药学上可接受的载体组合。该方法还可以进一步包括混合一种或多种用于治疗ATR激酶相关疾病的第二治疗剂。

本发明中“药学上可接受的载体”是指与活性成分一同给药的稀释剂、辅剂、赋形剂或媒介物，并且其在合理的医学判断的范围内适于接触人类和/或其它动物的组织而没有过度的毒性、刺激、过敏反应、并发症或其它问题，并且具有合理的益处/风险比。

在本发明的药物组合物中可使用的药学上可接受的载体包括但不限于无菌液体，例如水和油，包括那些石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当所述药物组合物通过静脉内给药时，水是示例性载体。还可以使用生理盐水和葡萄糖及甘油水溶液作为液体载体，特别是用于注射液。所述组合物还可以视需要包含少量的湿润剂、乳化剂、润滑剂、稳定剂或pH缓冲剂等。口服制剂可以包含标准载体。

药物组合物可以以任意形式施用，只要其实现预防、减轻、防止或者治愈人类或动物患者的症状。例如，可根据给药途径制成各种适宜的剂型。

当口服用药时，所述药物组合物可制成任意口服可接受的制剂形式，包括但不限于片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、口服溶液剂、口服混悬剂和口服乳剂等。其中，片剂使用的载体例如乳糖、玉米淀粉等，并可以任选地与以下物质组合压制成片剂：粘合剂，例如阿拉伯胶或明胶；崩解剂，例如交联羧甲纤维素钠、交联聚维酮；润滑剂，例如硬脂酸镁等。胶囊剂使用的稀释剂例如乳糖、干燥玉米淀粉等。口服混悬剂则通常是将活性成分与适宜的乳化剂和悬浮剂混合使用。任选地，以上口服制剂形式中还可加入一些甜味剂、芳香剂或着色剂。

当经皮或局部施用时，所述药物组合物可制成适当的软膏、洗剂或搽剂形式，其中活性成分可以悬混或溶解于一种或多种载体中。软膏制剂可使用的载体包括但不限于：矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、乳化蜡和水；洗剂或搽剂可使用的载体包括但不限于：矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、吐温60、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。

所述药物组合物还可以注射剂形式用药，包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。其中，可使用的载体和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的非挥发油也可用作溶剂或悬浮介质，如单甘油酯或二甘油酯。

在另一些实施方案中，本发明的化合物或药物组合物的施用可以与另外的治疗方法组合。例如，放疗和化疗能够通过损伤细胞DNA而杀灭肿瘤细胞，但肿瘤细胞能够激活DNA损伤修复机制，从而对此类抗癌疗法产生抗性。ATR抑制剂与放化疗或免疫疗法联用，能提高放化疗或免疫疗法治疗癌症的有效性。因此，所述另外的治疗方法可以选自，但不限于：放射疗法、化疗疗法、免疫疗法，或其组合。可以是在另外的治疗方法实施前、实施期间或实施后施用本发明的药物组合物。另外的治疗方法的实施与本发明的化合物或药物组合物的施用可以同时进行，也可以前后紧密连接地进行，也可以相隔一段时间进行，其施用的方式与顺序可以根据具体治疗情况进行选择和调整。

本发明的另一方面还涉及一种药物制剂，其包含式(I)的化合物、其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、或它们的混合物作为活性成分，或者本发明的药物组合物。在一实施方案中，所述制剂的形式为固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气态制剂。

本发明的进一步的目的在于提供一种制品，例如以试剂盒形式提供。本文所用的制品意图包括但不限于药盒和包装。本发明的制品包含：(a)第一容器；(b)位于第一容器中的药物组合物，其中所述组合物包含：第一治疗剂，包括：式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药、或者它们的混合物；和(c)包装说明书，其说明所述药物组合物可用于治疗肿瘤类病症(如前文所定义)。在另一实施方案中，所述包装说明书说明所述药物组合物可与第二治疗剂联用以治疗肿瘤类病症。所述制品可进一步包含：(d)第二容器，其中组分(a)和(b)位于所述第二容器内，而组分(c)位于所述第二容器之内或之外。位于第一和第二容器内意味着各容器将物品保留在其边界之内。

所述第一容器为用于容纳药物组合物的容器。此容器可用于制备、储存、运输和/或独立/批量销售。第一容器意图涵盖瓶、罐、小瓶、烧瓶、注射器、管(例如用于乳膏制品)，或者用于制备、容纳、储存或分配药物产品的任何其它容器。

所述第二容器为用于容纳所述第一容器和任选包装说明书的容器。所述第二容器的实例包括但不限于盒(例如纸盒或塑料盒)、箱、纸箱、袋(例如纸袋或塑料袋)、小袋和粗布袋。所述包装说明书可经由扎带、胶水、U形钉或别的粘附方式物理粘附于所述第一容器的外部，或者其可放在所述第二容器的内部，而无需与所述第一容器粘附的任何物理工具。或者，所述包装说明书位于所述第二容器的外面。当位于所述第二容器的外面时，优选的是所述包装说明书经由扎带、胶水、U形钉或别的粘附方式物理粘附。或者，其可邻接或接触所述第二容器的外部，而无需物理粘附。

所述包装说明书为商标、标签、标示等，其列举了与位于所述第一容器内的药物组合物相关的信息。所列出的信息通常由管辖待销售所述制品的区域的管理机构(例如美国食品与药品管理局)决定。优选所述包装说明书具体列出了所述药物组合物获准用于的适应症。所述包装说明书可由任何材料制成，可从所述材料上读取包含于其中或其上的信息。优选所述包装说明书为可印刷材料(例如纸、塑料、卡纸板、箔、胶粘纸或塑料等)，其上可形成(例如印刷或施涂)所需信息。

治疗方法和用途

本发明的另一目的在于提供一种预防或治疗ATR激酶相关疾病的方法，所述方法包括向有此需要的个体给药有效量的式(I)的化合物或其药学可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、代谢物或前药、或者它们的混合物，或者本发明的药物组合物。

根据本发明的一些实施方案，可使用本发明的化合物进行预防或治疗的ATR激酶相关疾病为对ATR激酶抑制敏感或有响应的疾病。在进一步的实施方案中，所述ATR激酶相关疾病为肿瘤类病症，包括但不限于实体和血液恶性肿瘤。在进一步的实施方案中，所述肿瘤类病症包括但不限于乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌和细支气管肺泡癌)和前列腺癌，以及胆管癌、骨癌、膀胱癌、头和颈癌、肾癌、肝癌、胃肠组织癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、皮肤癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、宫颈癌和外阴癌，以及白血病(包括慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和慢性骨髓性白血病(CML))、多发性骨髓瘤和淋巴瘤。在特别的实施方案中，所述肿瘤类疾病为结肠癌或肺癌。

在一些优选的实施方案中，所述疾病为癌症。在进一步优选的实施方案中，本发明的化合物可以与放化疗或免疫疗法联用以预防或治疗癌症。

可调整给药方案以提供最佳所需响应。例如，以注射剂形式用药时，可给药单次推注、团注和/或连续输注，等等。例如，可随时间给药数个分剂量，或可如治疗情况的急需所表明而按比例减少或增加剂量。要注意，剂量值可随要减轻的病况的类型及严重性而变化，且可包括单次或多次剂量。一般地，治疗的剂量是变化的，这取决于所考虑的事项，例如：待治疗患者的年龄、性别和一般健康状况；治疗的频率和想要的效果的性质；组织损伤的程度；症状的持续时间；以及可由各个医师调整的其它变量。要进一步理解，对于任何特定个体，具体的给药方案应根据个体需要及给药组合物或监督组合物的给药的人员的专业判断来随时间调整。可以通过临床领域的普通技术人员容易地确定所述药物组合物的施用量和施用方案。例如，本发明的组合物或化合物可以以分剂量每天4次至每3天给药1次，给药量可以是例如0.01～1000mg/次。可以以一次或多次施用需要的剂量，以获得需要达到的结果。也可以以单位剂量形式提供本发明的药物组合物。

有益效果

本发明提供一类新型的高活性ATR抑制剂，能够实现下述至少一种技术效果：

(1)对ATR激酶的高抑制活性。

(2)优异的物理化学性质(例如溶解度、物理和/或化学稳定性)。

(3)优异的药物代谢动力学性质(例如良好的生物利用度、合适的半衰期和作用持续时间)。

(4)优异的安全性(较低的毒性和/或较少的副作用，较宽的治疗窗)等。

实施例

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

化合物的结构是通过核磁共振(¹H NMR)或质谱(MS)来确定的。¹H NMR是用JEOLEclipse 400核磁仪测定，测定溶剂为氘代甲醇(CD₃OD)、氘代氯仿(CDCl₃)或六氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移(δ)以10^-6(ppm)作为单位给出。MS的测定采用Agilent(ESI)质谱仪，生产商：Agilent，型号：Agilent 6120B。

采用制备高效液相色谱仪纯化时，采用的仪器型号为Agilent 1260，色谱柱：Waters SunFire Prep C18OBD(19mm×150mm×5.0μm)。制备型高效液相色谱仪的制备方法如下：

色谱柱温：25℃；流速：20.0mL/min；检测波长：214nm；洗脱梯度：(0min：10％(v/v)A，90％(v/v)B；16.0min：90％(v/v)A，10％(v/v)B)；流动相A：乙腈；流动相B：0.05％碳酸氢铵水溶液。

薄层色谱硅胶板(TLC)使用Merck产的铝板(20×20cm)，薄层层析分离纯化采用的规格是烟台产GF 254(1mm厚)。

反应的监测采用薄层色谱法(TLC)或LC-MS，使用的展开剂体系有：二氯甲烷和甲醇体系，正己烷和乙酸乙酯体系，石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节或者加入三乙胺等进行调节。

微波反应使用Biotage Initiator+(400W,RT～300℃)微波反应器。

柱层析一般使用200～300目硅胶为载体。洗脱剂的体系包括：二氯甲烷和甲醇体系，石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺进行调节。

以下实施例中无特殊说明，反应的温度为室温(20℃至35℃)。

本发明所使用的试剂购自Acros Organics、Aldrich Chemical Company、特伯化学等公司。

在常规的合成法以及本发明的化合物和中间体合成例中，各缩写的意思如以下所示：

缩写	含义
		DIPEA	二异丙基乙基胺
THP	四氢吡喃-2-基
		DMSO	二甲基亚砜

制备实施例

实施例1：(R)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-甲基吗啉基)-5-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮(化合物1-1)

第一步：2-氯-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-硝基吡啶-4-胺的制备

将1-甲基吡唑-4-胺盐酸盐(4.01g，30.05mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(80mL)，室温下分批次加入氢化钠(3.45g，90.16mmol，60％)后维持室温搅拌30分钟，加入2,4-二氯-3-硝基吡啶(8.7g，45.08mmol)，维持室温搅拌5小时。将反应液缓慢倒入冰水(200mL)中，用乙酸乙酯萃取4次，合并有机相，以饱和氯化钠水溶液洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，剩余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝4/1至1/4，体积比)，得到本步骤的标题化合物(6.0g，收率：80.0％)。

MS m/z(ESI):254.1[M+H]⁺。

第二步：2-氯-N⁴-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3,4-二胺的制备

将2-氯-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-硝基吡啶-4-胺(6.0g，23.66mmol)溶于甲醇(100mL)，加入雷尼镍(0.6g)，通入氢气维持室温搅拌6小时。过滤，将滤液减压浓缩，剩余物加入石油醚/乙酸乙酯(1/2，体积比，150mL)搅拌均匀，静置后过滤，收集滤饼并减压蒸除残余溶剂，得到本步骤的标题化合物(4.7g，收率：88.8％)。

MS m/z(ESI):224.1[M+H]⁺。

第三步：N⁴-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(1-(四氢吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)吡啶-3,4-二胺的制备

将2-氯-N⁴-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-3,4-二胺(0.6g，2.68mmol)和1-四氢吡喃-2-基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡唑(1.49g，5.37mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)，加入碳酸钠(853mg，8.05mmol)，氮气保护下加入[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(196mg，0.268mmol)。加完后，微波加热至110℃反应2小时。反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，剩余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1，体积比)，得到本步骤的标题化合物(0.8g，收率：79.1％)。

MS m/z(ESI):340.2[M+H]⁺。

第四步：1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2,3(1H，4H)-二酮的制备

将N⁴-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(1-(四氢吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)吡啶-3,4-二胺(0.6g，1.77mmol)和DIPEA(457mg，3.54mmol)溶于甲苯(27mL)和二氯甲烷(3mL)的混合溶液，冷却至-75℃，缓慢滴加草酸单乙酯(362.05mg，2.65mmol)。加完后，缓慢恢复至室温搅拌12小时，再升温至110℃搅拌6小时。将反应液减压浓缩，剩余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1，体积比)，得到本步骤的标题化合物(320mg，收率：58.5％)。

MS m/z(ESI):310.1[M+H]⁺。

第五步：3-氯-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮的制备

将1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2,3(1H，4H)-二酮(300mg，1.0mmol)置于50mL单口瓶，依次加入三氯氧磷(20mL)和DIPEA(375mg，2.91mmol)，加完后，升温至120℃搅拌5小时。将反应液减压浓缩，剩余物加入水(10mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)搅拌10分钟。用二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到本步骤的标题化合物(310mg棕色固体，粗品直接用于下一步反应)。

MS m/z(ESI):328.1[M+H]⁺。

第六步：(R)-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-3-(3-甲基吗啉基)-5-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮的制备

将3-氯-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(1H-吡唑-5-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮(200mg，0.6mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)，加入DIPEA(236mg，1.83mmol)和(R)-3-甲基吗啉(123mg，1.22mmol)，加完后升温至120℃搅拌5小时。将反应液减压浓缩，剩余物用制备高效液相色谱仪纯化，得到标题化合物(25mg黄色固体，收率：10.4％)。

MS m/z(ESI):393.2[M+H]⁺

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.33(s,1H),8.22(d,J＝5.6Hz,1H),8.01(s,1H),7.62(s,1H),7.59(s,1H),7.26(s,1H),6.67(d,J＝5.6Hz,1H),5.03(s,1H),4.54(s,1H),3.99(s,1H),3.96(s,3H),3.76-3.69(m,2H),3.59-3.55(m,1H),3.49-3.42(m,1H),1.37(d,J＝6.8Hz,3H)。

实施例2：(R)-3-(3-甲基吗啉基)-5-(1H-吡唑-5-基)-1-(四氢吡喃-4-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮(化合物13-1)

第一步：2-氯-3-硝基-N-(四氢吡喃-4-基)吡啶-4-胺的制备

将2,4-二氯-3-硝基吡啶(2.5g，12.95mmol)和碳酸钾(3.6g,25.91mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)，室温下加入4-氨基四氢吡喃(1.3g，12.95mmol)，维持室温搅拌12小时。用乙酸乙酯稀释反应液，加水洗1次，饱和氯化钠溶液洗1次，收集有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到本步骤的标题化合物(3.8g，收率：80.0％)。

MS m/z(ESI):258.1[M+H]⁺。

第二步：3-硝基-2-(1-(四氢吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-N-(四氢吡喃-4-基)吡啶-4-胺的制备

将2-氯-3-硝基-N-(四氢吡喃-4-基)吡啶-4-胺(2.5g，7.76mmol)、1-四氢吡喃-2-基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡唑(2.9g，10.09mmol)、碳酸钾(2.2g，15.52mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(579mg，0.78mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)和水(1mL)的混合溶剂，抽换氮气3次，氮气球保护下，加热至100℃搅拌12小时。过滤，将滤液减压浓缩，剩余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：甲醇/乙酸乙酯＝1/5，体积比)，得到本步骤的标题化合物(1.8g，收率：56％)。

MS m/z(ESI):374.2[M+H]⁺。

第三步：2-(1-(四氢吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-N⁴-(四氢吡喃-4-基)吡啶-3,4-二胺的制备

将3-硝基-2-(1-(四氢吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-N-(四氢吡喃-4-基)吡啶-4-胺(2.3g，4.82mmol)溶于乙醇(10mL)，加入10％钯碳(300mg)，氢气氛围下搅拌8小时。过滤，滤液减压浓缩得到本步骤的标题化合物(1.6g，收率：79.1％)。

MS m/z(ESI):344.2[M+H]⁺。

第四步：5-(1-(四氢吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-(四氢吡喃-4-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2,3(1H,4H)-二酮的制备

将2-(1-(四氢吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-N⁴-(四氢吡喃-4-基)吡啶-3,4-二胺(1.5g，3.93mmol)和DIPEA(7.7g，58.97mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，冷却至0℃，缓慢滴加草酰氯(2.0g，15.72mmol)。加完后，缓慢恢复至室温搅拌8小时。冰浴下，加甲醇淬灭反应，反应液减压浓缩，剩余物经硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1，体积比)，得到本步骤的标题化合物(1.2g，收率：76.8％)。

MS m/z(ESI):398.2[M+H]⁺。

第五步：3-氯-5-(1H-吡唑-5-基)-1-(四氢吡喃-4-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮的制备

将5-(1-(四氢吡喃-2-基)-1H-吡唑-5-基)-1-(四氢吡喃-4-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2,3(1H,4H)-二酮(600mg，1.36mmol)和三乙胺(139mg，1.36mmol)溶于甲苯(15mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，缓慢加入三氯氧磷(425mg，2.72mmol)。加完后，升温至100℃搅拌1小时。将反应液减压浓缩。冰浴下，小心加饱和碳酸氢钠中和至pH＝7～8后，以二氯甲烷萃取3次，合并有机相，饱和氯化钠溶液洗1次，以无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到本步骤的标题化合物(400mg黑色液体，粗品直接用于下一步反应)。

MS m/z(ESI):332.1[M+H]⁺。

第六步：(R)-3-(3-甲基吗啉基)-5-(1H-吡唑-5-基)-1-(四氢吡喃-4-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮的制备

将3-氯-1-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-5-(1H-吡唑-3-基)吡啶并[3,4-b]吡嗪-2(1H)-酮(350mg，粗品)溶于DMSO(10mL)，加入(R)-3-甲基吗啉(261mg，2.53mmol)。加完后升温至80℃搅拌2小时。冷却后，向反应液中加饱和碳酸氢钠溶液，以二氯甲烷萃取3次，收集有机相，饱和氯化钠溶液洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩，剩余物经制备高效液相色谱仪纯化，得到标题化合物(25mg黄色固体，收率：10.0％)。

MS m/z(ESI):397.2[M+H]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:13.28(s,1H),8.35(d,J＝6.0Hz,1H),7.69(d,J＝6.0Hz,1H),7.59(s,1H),7.21(s,1H),4.95-4.87(m,2H),4.43(s,1H),4.00-3.96(m,3H),3.73(s,2H),3.62-3.53(m,3H),3.45-3.38(m,1H),2.72(dt,J＝11.2,6.8Hz,2H),1.66(d,J＝11.2Hz,2H),1.34(d,J＝6.8Hz,3H)。

生物学实验例

实验例1：ATR(共济失调毛细血管扩张症Rad3相关蛋白)体外酶学活性抑制实验

实验系统：

激酶：Recombinant full-length human ATR/ATRIP,Active

底物：FAM-RAD17

实验参数：

ATP浓度：Km条件下的ATP浓度

化合物和激酶预孵育时间：室温10分钟

测试仪器：Caliper ZE ReaderII

测试地点：ChemPartner，试剂及缓冲液均由ChemPartner公司提供

实验步骤：

本实验采用Caliper mobility shift assay(基于微流体芯片技术的迁移率检测技术)测定化合物对ATR激酶的抑制活性。实验步骤如下：用Echo移液系统(Echo550,LABCYTE)移取0.06μl的化合物样品(用DMSO溶解并稀释成不同的测试浓度)到384孔反应板中，加入10μl的2x ATR激酶(Cat#14-953,Eurofins)溶液(用1x激酶反应缓冲液稀释,50mMHEPES,pH 7.5，0.0015％Brij-35，1M MnCl2，ATR激酶反应终浓度为15nM)室温孵育10min。加入10μl的2x FAM-RAD17底物(Cat#514318，吉尔生化)和ATP(Cat#A7699-1G，Sigma)缓冲液(用1x激酶反应缓冲液稀释FAM-RAD17和ATP,底物终浓度为5μM，ATP终浓度为0.2μM)启动反应。在28℃反应一定时间后加入40μl含有EDTA的终止液(100mM HEPES,pH 7.5，0.015％Brij-35，0.2％Coating Reagent#3，50mM EDTA)终止反应。将反应板放入Caliper仪器(EZReader II，Perkin Elmer)上测试并收集转化率(conversion)数据。

数据处理：

计算化合物各浓度组的相对抑制活性，抑制率＝(max-conversion)/(max-min)*100％；“max”为未加化合物的空白对照组的转化率，“min”为低对照(无酶对照)组的转化率，“conversion”为化合物测试组的转化率。运用XLFit excel add-in version 5.4.0.8统计软件拟合曲线并计算得到IC₅₀数据。

实验结果：

按照上述方法测定化合物对ATR活性的抑制作用，结果如表1中所示。

表1.化合物对ATR酶活抑制实验结果

化合物编号	IC<sub>50</sub>(nM)
		1-1	396
13-1	147

结论：

在ATR酶活抑制实验中，本发明的化合物表现出较强的抑制活性。

实验例2：化合物对NCI-H23(人非小细胞肺癌细胞)细胞增殖活性抑制实验

实验系统：

细胞名称/制造商：NCI-H23/南京科佰

试剂盒名称/制造商：CellTiter-

Luminescent Cell Viability Assay,Promega

实验参数：

细胞数量：5000细胞/孔

铺板培养基：NCI-H23:1640+10％FBS

加药培养基：NCI-H23:1640+10％FBS

化合物孵育条件：37℃，5％CO₂

孵育时间：48小时

检测温度：室温

酶标仪：BMG PHERAstar FS，检测方法：Luminescent

实验步骤：

将细胞培养在含有10％胎牛血清的培养基中，放置在37℃，5％CO₂培养条件下进行培养。向96孔板中铺入适量细胞，培养箱中过夜培养，使细胞附着贴壁。次日，移除培养基，加入含有预先稀释化合物的完全培养基，37℃孵育48小时。第三天向每孔中加入检测试剂CellTiter-GLo，化学发光检测各孔的相对发光单位(RLU)。

数据处理：

利用不含细胞的培养基的CellTiter-Glo获得背景值。

细胞活率＝(样品RLU-背景RLU)/(溶媒RLU-背景RLU)*100％，

最大抑制率＝100％-细胞活率_最大浓度，

按照四参数模型拟合曲线，计算化合物的半数抑制浓度(IC₅₀)。

实验结果：

按照上述方法测定化合物对NCI-H23(人非小细胞肺癌细胞)细胞增殖活性抑制，结果如表2中所示。

表2化合物对NCI-H23细胞增殖活性抑制结果

结论：

本发明的化合物对NCI-H23具有较强的细胞增殖抑制活性。

Claims (15)

1.式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：

其中：

R¹选自氢、C_1-6烷基和卤代C_1-6烷基；

R²选自C_1-6烷基、C_3-10环烷基、-(C_1-6亚烷基)-(C_3-10环烷基)、3-10元杂环基、-(C_1-6亚烷基)-(3-10元杂环基)、C_6-10芳基、-(C_1-6亚烷基)-(C_6-10芳基)、5-10元杂芳基和-(C_1-6亚烷基)-(5-10元杂芳基)，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-R^a、-C(O)-NR^aR^b、-N(R^b)-C(O)-R^a、-N(R^b)-C(O)-OR^a、-N(R^c)-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_m-R^a、-S(O)_m-NR^aR^b、-N(R^b)-S(O)_m-R^a、-N(R^b)-S(O)_m-OR^a、-N(R^c)-S(O)_m-NR^aR^b的取代基取代；

R³每次出现时各自独立地选自氢、C_1-6烷基、卤素、氰基、羟基和-O(C_1-6烷基)，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；

每个R^a各自独立地选自氢、C_1-6烷基、C_3-10环烷基、3-10元杂环基、C_6-10芳基和5-10元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；

每个R^b和R^c各自独立地选自氢和C_1-6烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；或

R^a、R^b连同与它们共同连接的氮原子共同形成4-7元杂环，所述杂环任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；

每个R^x各自独立地选自卤素、硝基、氰基、C_1-6烷基、卤代C_1-6烷基、羟基、-O(C_1-6烷基)、-NH₂、-NH(C_1-6烷基)、-N(C_1-6烷基)₂、-C(O)-O(C_1-6烷基)、-C(O)-NH₂、-C(O)-NH(C_1-6烷基)、-C(O)-N(C_1-6烷基)₂、-S(O)_m-(C_1-6烷基)、-S(O)_m-NH(C_1-6烷基)、-S(O)_m-N(C_1-6烷基)₂；

m为0、1或2；

n为0、1或2。

2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R¹选自C_1-6烷基和卤代C_1-6烷基；优选地，R¹选自C_1-6烷基，优选C_1-4烷基，更优选甲基。

3.权利要求1或2的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R²选自C_1-6烷基、3-10元杂环基、-(C_1-6亚烷基)-(3-10元杂环基)、C_6-10芳基、-(C_1-6亚烷基)-(C_6-10芳基)、5-10元杂芳基和-(C_1-6亚烷基)-(5-10元杂芳基)，其中所述烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-NR^aR^b、-N(R^b)-C(O)-R^a、-S(O)_m-R^a、-S(O)_m-NR^aR^b、-N(R^b)-S(O)_m-R^a的取代基取代；优选地，R²选自C_1-6烷基、3-10元杂环基、-(C_1-6亚烷基)-(3-10元杂环基)、-(C_1-6亚烷基)-(C_6-10芳基)和5-10元杂芳基，其中所述烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-NR^aR^b、-N(R^b)-C(O)-R^a、-S(O)_m-R^a、-S(O)_m-NR^aR^b、-N(R^b)-S(O)_m-R^a的取代基取代，其中杂环基或杂芳基含有1或2个选自N和O的杂原子，杂环基环原子中的C原子任选地被(＝O)取代；更优选地，R²选自C_1-4烷基、4-7元杂环基、-(C_1-4亚烷基)-(4-7元杂环基)、-(C_1-4亚烷基)-(C_6-10芳基)和5-6元杂芳基，其中所述烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自卤素、氰基、-R^a、-OR^a、-NR^aR^b、-C(O)-NR^aR^b、-S(O)_m-R^a和-S(O)_m-NR^aR^b的取代基取代；进一步优选地，R²选自甲基、乙基、吡唑基、哌啶基、四氢吡喃基、氧杂环丁基、-(C_1-4亚烷基)-哌嗪基、-(C_1-4亚烷基)-吗啉基、-(C_1-4亚烷基)-吡咯烷酮基、-(C_1-4亚烷基)-苯基、吡唑基，其中甲基、乙基、吡唑基、哌啶基、四氢吡喃基、氧杂环丁基、哌嗪基、吗啉基、吡咯烷酮基、苯基、吡唑基各自任选地被一个或多个选自氰基、C_1-4烷基、-O(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)₂、-C(O)-N(C_1-4烷基)₂、-S(O)_m-(C_1-4烷基)、-S(O)_m-N(C_1-4烷基)₂的取代基取代。

4.权利要求1-3中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R³每次出现时各自独立地选自氢、C_1-4烷基、卤素、氰基、羟基和-O(C_1-4烷基)，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；优选地，R³每次出现时各自独立地选自氢、C_1-4烷基和卤素；更优选地，R³为氢。

5.权利要求1-4中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中每个R^a各自独立地选自氢、C_1-4烷基、C_3-7环烷基、4-7元杂环基、苯基和5-6元杂芳基，其中所述烷基、环烷基、杂环基、苯基和杂芳基各自任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；优选地，每个R^a各自独立地选自氢、C_1-4烷基和C_3-7环烷基，其中所述烷基和环烷基各自任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；更优选地，每个R^a各自独立地选自氢和C_1-4烷基，优选C_1-2烷基，特别是甲基；

每个R^b和R^c各自独立地选自氢和C_1-4烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代；优选地，每个R^b和R^c各自独立地选自C_1-2烷基，特别是甲基；或

R^a、R^b连同与它们共同连接的氮原子共同形成5-7元杂环，优选5-6元杂环，所述杂环任选地被一个或多个选自R^x的取代基取代。

6.权利要求1-5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中每个R^x各自独立地选自卤素、氰基、C_1-4烷基、卤代C_1-4烷基、羟基、-O(C_1-4烷基)、-NH₂、-NH(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)₂、-C(O)-O(C_1-4烷基)、-C(O)-NH₂、-C(O)-NH(C_1-4烷基)、-C(O)-N(C_1-4烷基)₂、-S(O)_m-(C_1-4烷基)、-S(O)_m-NH(C_1-4烷基)、-S(O)_m-N(C_1-4烷基)₂；优选地，每个R^x各自独立地选自卤素、氰基、C_1-4烷基、-O(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)₂、-C(O)-N(C_1-4烷基)₂、-S(O)_m-(C_1-4烷基)和-S(O)_m-N(C_1-4烷基)₂；更优选地，每个R^x各自独立地选自氰基、甲基、甲氧基、-N(CH₃)₂、-C(O)-N(CH₃)₂、-S(O)₂-CH₃和-S(O)_m-N(CH₃)₂。

7.权利要求1-6中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中R²选自以下基团：

8.权利要求1-7中任一项的式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药：

其中R²如权利要求1-7中任一项所定义。

9.化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物选自：

10.化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，其中所述化合物选自：

11.一种药物组合物，其包含权利要求1-10中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药以及一种或多种药学上可接受的载体。

12.权利要求1-10中任一项的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体、多晶型物、溶剂合物、N-氧化物、同位素标记的化合物、代谢物或前药，或者权利要求11的药物组合物在制备用于治疗ATR激酶相关疾病的药物中的用途。

13.权利要求12的用途，其中所述ATR激酶相关疾病为肿瘤类病症，包括实体和血液恶性肿瘤。

14.一种制备权利要求1-10中任一项的化合物的方法，所述方法包括：

(1)使化合物I-1与INT-a反应得到化合物I-2

(2)由化合物I-2制备化合物I-3

(3)由化合物I-3制备化合物I-4

(4)由化合物I-4制备化合物I-5

(5)化合物I-5与INT-c反应得到化合物I

其中：R¹、R²、R³和n如权利要求1-10中任一项所定义，Lg¹和Lg²各自独立地表示卤素离去基团，或者任选地被卤素取代的C_1-6烷基磺酸酯基离去基团；PG为氨基保护基；Hal表示卤素；在步骤(3)或步骤(4)中脱除氨基保护基PG。

15.权利要求14的方法，其中：

步骤(2)通过以下方式实施：

或

步骤(2)通过以下方式实施：

其中R^f表示离去基团。