CN111825690A - 一种phd抑制剂的新晶型及其制备方法 - Google Patents

一种phd抑制剂的新晶型及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111825690A
CN111825690A CN201910308911.3A CN201910308911A CN111825690A CN 111825690 A CN111825690 A CN 111825690A CN 201910308911 A CN201910308911 A CN 201910308911A CN 111825690 A CN111825690 A CN 111825690A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sodium
degrees
dihydro
azaspiro
oxa
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910308911.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111825690B (zh
Inventor
殷惠军
褚国彪
王斌
屈磊磊
王秀娟
赵新
闫旭
王卓
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
National Institutes of Pharmaceutical R&D Co Ltd
Original Assignee
National Institutes of Pharmaceutical R&D Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by National Institutes of Pharmaceutical R&D Co Ltd filed Critical National Institutes of Pharmaceutical R&D Co Ltd
Priority to CN201910308911.3A priority Critical patent/CN111825690B/zh
Publication of CN111825690A publication Critical patent/CN111825690A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111825690B publication Critical patent/CN111825690B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Abstract

本发明涉及一种PHD抑制剂的新晶型及其制备方法。具体而言，本发明涉及1‑(6‑(7‑氧杂‑2‑氮杂螺[3.5]壬‑2‑基)嘧啶‑4‑基)‑4‑(1H‑1,2,3‑三唑‑1‑基)‑1,2‑二氢‑3H‑吡唑‑3‑酚钠的A晶型和B晶型。其通过将2‑(6‑(7‑氧杂‑2‑氮杂螺[3.5]壬‑2‑基)嘧啶‑4‑基)‑4‑(1H‑1,2,3‑三唑‑1‑基)‑1,2‑二氢‑3H‑吡唑‑3‑酮在有机溶剂中制成钠盐并析晶获得。其可以用于预防和/或治疗与PHD活性相关的疾病。

Description

一种PHD抑制剂的新晶型及其制备方法
技术领域
本发明涉及1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A晶型和B晶型及其制备方法，以及其在制备用于预防和/或治疗与PHD活性相关的疾病的药物中的用途。
背景技术
在低氧环境中，机体能够自发的发生低氧反应以维持机体的氧获得能力。1992年，Semenza等发现一种蛋白能够特异性结合于促红细胞生成素基因的低氧反应元件(HRE)，并影响某些基因的表达，该蛋白被称为低氧诱导因子(HIF)(Semenza GL等人,Mol.CellBiol.,1992,12,5447–5454)。HIF的靶基因十分广泛，能够影响机体造血功能、血管生成、铁离子转运、葡糖利用、抵抗氧化应激、细胞分化、细胞生存和凋亡、细胞外基质稳态以及肿瘤发生。HIF是α、β亚基组成的异质二聚体，α亚基属于功能性亚基，对细胞内氧浓度的变化非常敏感并受高度调控，有调节HIF活性的作用；β亚基是结构亚基，又称作芳基烃受体核转运蛋白(ARNT)，在细胞内稳定表达，其mRNA转录和蛋白的表达水平不受氧浓度变化的影响。HIF的α、β亚基都属于碱性螺旋-环-螺旋转录因子超家族成员。人类的HIFα有HIF-1α、HIF-2α、HIF-3α三种亚型。HIF-1α在体内呈普遍性分布，并在局部组织缺血或缺氧引发的血管生成过程中有重要作用，但是对铁代谢过程的影响较小；HIF-2α呈局限性分布，对肾组织EPO(促红细胞生成素)基因表达和合成的过程中有重要作用，此外，还通过上调十二指肠的细胞色素和二价金属转运体-1的表达提高铁在肠道的吸收，并且有降低肝杀菌肽表达的作用，在铁代谢过程中起主导作用；HIF-3α的结构与其他亚型不同，没有DNA结合区域，不能影响基因的表达。研究表明，HIF-3α可能在HIF介导的基因表达中有负调节的作用。因此，HIF-1α、HIF-2α在低氧反应过程中发挥一定的作用。一项HIF-1α、HIF-2α基因缺失的小鼠试验中，证实HIF-1α、HIF-2α在低氧反应过程中的必要性。而治疗慢性肾性贫血的化合物研发中，HIF-2α的变化较HIF-1α更重要。
2001年研究发现，HIF-PHD能够将O2和2-OG作为底物，特异性对HIFα脯氨酸残基进行羟基化，从而调节HIF的生物活性。HIF-PHD的催化循环反应在Fe2+与2-OG集中至PHD活性部位时启动。之后PHD与HIFα脯氨酸残基相互结合，用O2替换水分子完成羟基化。整个过程中抗坏血酸是必不可少的催化剂，Fe2+、O2、2-OG都是不可或缺的因素。
HIF-PHD拥有PHD1，PHD2，PHD3三个不同的亚型，表现出不同的组织分布，并选择性对HIFα亚型进行羟基化。PHD1表达稳定，并不会因为缺氧而被诱导，在体内氧平衡的维护中有一定的作用；PHD2在氧依赖调节HIFα活性的反应中扮演重要角色；常氧环境下PHD2、PHD3分别选择性作用于HIF-1α、HIF-2α，分别对HIF-1α第402、564位和HIF-2α第405、531位脯氨酸残基进行羟基化，羟化后的HIF-1α、HIF-2α能够与VHL E3泛素连接酶复合体结合而被泛素化，继而进入蛋白酶体内被降解。细胞处于低氧环境时，PHD2、PHD3活性因O2稀缺而受到抑制，未被降解的HIF-1α、HIF-2α进入细胞核与HIF-β结合，在p300/CBP的协同下作用于低氧反应元件(HRE)，促进相关基因(如EPO)的表达，提高蛋白水平，从而促进红细胞生成，纠正贫血症状。
在人类HIF-PHD系统相关基因缺陷研究中，涉及到pVHL(Von Hippel-Lindau肿瘤抑制基因产物，参与介导泛素化HIF的降解)突变、PHD缺失、HIF缺失情况下机体的变化。pVHL发生突变能够诱导人机体发生pVHL相关疾病，引起血管性肿瘤的发生；当pVHL的C端598位到T端发生突变，能够导致先天性红血球增多症。在一项因pVHL缺失而引发的肾癌患者中，研究发现HIF-1α也发生了突变，表明肾癌的发生发展与HIF-1α的突变也可能有一定关系。HIF-2α错义突变、PHD2发生突变的人群容易发生继发性红血球增多症，从而提高血栓发病率。
鉴于HIF-PHD对HIF的降解过程的启动作用，HIF-PHD抑制剂能够提高HIF的水平，进而促进EPO、VEGF、iNOS、GLUT-1等靶基因的表达，达到治疗PHD活性相关疾病的作用。因此，PHD(脯氨酸羟化酶)抑制剂的治疗用途包括但不限于：治疗和/或预防心血管疾病，特别是心功能不全、冠心病、心绞痛、心肌梗塞、中风、动脉硬化、原发性、肺和恶性高血压和周围动脉闭塞性疾病；治疗和/或预防造血障碍，例如原发性贫血、肾性贫血和伴有肿瘤疾病的贫血(特别是化疗诱导的贫血)、感染(特别是HIV感染)，或者其它炎性疾病，例如类风湿性关节炎；用于由于失血导致的贫血、缺铁性贫血、维生素缺乏性贫血(例如，由于维生素B12缺乏或由于叶酸缺乏)、发育不全和再生障碍性贫血或者溶血性贫血的支持治疗，或者用于由于铁利用障碍(铁失利用性贫血)或者由于其它内分泌紊乱(例如，甲状腺功能减退)导致的贫血的支持治疗；治疗和/或预防在外科手术后与手术相关的局部缺血状态及其连续症状，特别是使用心肺机的心脏介入术(例如分流手术，心脏瓣膜移植)、颈动脉介入术、主动脉介入术和使用仪器开口或者穿透颅盖的介入术；在外科手术中以加速伤口愈合和缩短恢复时间为目的的一般性治疗和/或预防；治疗和/或预防癌症以及用于治疗和/或预防在癌症治疗过程中发生的健康状态的损伤，特别是使用细胞抑制剂、抗生素和放射治疗后；治疗和/或预防风湿性形式范围的疾病和其它被视为自身免疫疾病的疾病形式的疾病，特别是用于治疗和/或预防在这类疾病的药物治疗过程中发生的健康状态的损伤；治疗和预防急性和延长性脑局部缺血状态的连续症状(例如中风、分娩窒息)。
本发明人在申请号为201811237690.7的专利申请中记载了化合物2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮，其可以作为PHD抑制剂有效用于预防和/或治疗与PHD活性相关的疾病，其结构如下式(I)所示：
Figure BDA0002030788230000031
在进一步的研究中发现，该化合物的溶解性差，具有一定的吸湿性。这样的性质将产生制剂的活性成分含量不稳定，生产重现性差，储存过程中杂质含量增加，生物利用度低等诸多问题，不利于固体制剂的生产及应用。
在有机化学制药领域，多晶型在固体有机化合物中是一种普遍的现象，同一固体药物可因制备工艺不同、结晶条件的改变而得到不同晶型的晶体。同一药物的不同晶型在外观、溶解度、熔点、溶出度、生物利用度及疗效等方面可能会有显著的不同。优势的晶型有助于保证药物在制备和贮存过程中物理和化学性质的稳定性，减少毒性，提高生物利用度，增进治疗效果，改善药物粉末的压片性能等。因此对固体化合物进行晶型研究具有重要的意义。
发明内容
本发明人考察了式(I)化合物钠盐的各种结晶条件，并得到一系列结晶产物，对所得结晶产物进行了X射线粉末衍射和DSC检测，结果发现了可改善溶解性、吸湿性等性质，稳定性良好的新型结晶。
因此，本发明的目的是提供一种1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱包括位于4.543°±0.2°、9.101°±0.2°、12.705°±0.2°、16.174°±0.2°、17.728°±0.2°、22.944°±0.2°、26.85°±0.2°、29.828°±0.2°的2θ衍射角处的特征峰。
在一个实施方案中，根据本发明所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱包括位于4.543°±0.2°、9.101°±0.2°、12.705°±0.2°、13.451°±0.2°、16.174°±0.2°、17.728°±0.2°、18.663°±0.2°、20.593°±0.2°、22.944°±0.2°、26.850°±0.2°、29.828°±0.2°、31.658°±0.2°、37.324°±0.2°的2θ衍射角处的特征峰。
在另一个实施方案中，根据本发明所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱如图1所示。
本发明的另一个目的是提供一种1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶，其特征在于，使用Cu-Ka辐射得到的X射线粉末衍射图谱包括位于8.870°±0.2°、10.737；°±0.2°、16.300°±0.2°、18.863°±0.2°、19.63°±0.2°、23.719°±0.2°、28.463°±0.2°、29.093°±0.2°的2θ衍射角处的特征峰。
在一个实施方案中，根据本发明所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶，其特征在于，使用Cu-Ka辐射得到的X射线粉末衍射图谱包括位于8.870°±0.2°、10.737°±0.2°、12.051°±0.2°、13.606°±0.2°、14.099°±0.2°、16.300°±0.2°、18.863°±0.2°、19.631°±0.2°、20.947°±0.2°、21.641°±0.2°、22.775°±0.2°、23.719°±0.2°、24.423°±0.2°、26.745°±0.2°、28.463°±0.2°、29.093°±0.2°的2θ衍射角处的特征峰。
在另一个实施方案中，根据本发明所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶，其特征在于，使用Cu-Ka辐射得到的X射线粉末衍射图谱如图3所示。
本发明进一步提供一种制备根据本发明所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶的方法，所述方法包括以下步骤：
1)在碱性条件下，将2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮分散于有机溶剂中；加热下，优选于55℃-60℃，向其中滴加钠盐溶液，制得1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液；
2)将步骤1)得到的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液在室温搅拌析晶优选2小时，然后于0℃-10℃继续搅拌析晶优选2小时，过滤晶体；
3)将步骤2)得到的晶体干燥，得到1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的A型结晶的制备方法，其中，在步骤1)中，进一步通过加热优选在55℃-60℃将2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮溶解于有机溶剂中，热过滤，向滤液中滴加钠盐溶液。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的A型结晶的制备方法，其中，在步骤1)中，进一步将制得的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液保温优选15至30分钟。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的A型结晶的制备方法，其包括以下步骤：
1)在碱性条件下，将2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮分散于有机溶剂中，加热优选至55℃-60℃使溶液澄清，热过滤；加热下，优选于55℃-60℃，向滤液中滴加钠盐溶液，制得1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液，将该溶液保温优选15至30分钟；
2)将步骤1)得到的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液在室温搅拌析晶优选2小时，然后于0℃-10℃继续搅拌析晶优选2小时，过滤晶体；
3)将步骤2)得到的晶体干燥，得到1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的A型结晶的制备方法，其中所述有机溶剂选自C1-C4醇、1,4-二氧六环、四氢呋喃、或其混合物，或者上述溶剂与水的混合物；优选C1-C4醇或C1-C4醇与水的混合物；所述C1-C4醇优选甲醇或乙醇。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的A型结晶的制备方法，其中所述有机溶剂为C1-C4醇与水的混合物，且C1-C4醇与水的体积比为15:1至50:1；优选15:1至30:1。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的A型结晶的制备方法，其中所述有机溶剂为甲醇与水的混合物，且甲醇与水的体积比为15:1至30:1。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的A型结晶的制备方法，其中所述碱性条件选自三乙胺、N,N-二异丙基、乙二胺、吡啶、氨水，优选三乙胺；其中所述钠盐选自碳酸氢钠、钠氢、碳酸钠、甲醇钠、乙醇钠、氢氧化钠、乙酸钠，优选氢氧化钠，所述氢氧化钠浓度优选为40％～45％。
本发明进一步提供一种制备根据本发明所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶的方法，所述方法包括以下步骤：
1)在碱性条件下，将2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮分散于有机溶剂中；加热下，优选于55℃-60℃，向其中滴加钠盐溶液，制得1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液；
2)将步骤1)得到的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液于0℃-15℃搅拌析晶优选12至20小时，过滤晶体；
3)将步骤2)得到的晶体干燥，得到1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的B型结晶的制备方法，其中，在步骤1)中，进一步通过加热优选在55℃-60℃将2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮溶解于有机溶剂中，热过滤，向滤液中滴加钠盐溶液。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的B型结晶的制备方法，其包括以下步骤：
1)在碱性条件下，将2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮分散于有机溶剂中，加热优选至55℃-60℃使溶液澄清，热过滤；加热下，优选于55℃-60℃，向滤液中滴加钠盐溶液，制得1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液；
2)将步骤1)得到的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液于0℃-15℃搅拌析晶优选12至20小时，过滤晶体；
3)将步骤2)得到的晶体干燥，得到1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的B型结晶的制备方法，其中所述有机溶剂选自C1-C4醇、1,4-二氧六环、四氢呋喃、或其混合物，或者上述溶剂与水的混合物；优选C1-C4醇或C1-C4醇与水的混合物；所述C1-C4醇优选甲醇或乙醇。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的B型结晶的制备方法，其中所述有机溶剂为C1-C4醇与水的混合物，且C1-C4醇与水的体积比为1:5至10:1；优选1:2至5:1。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的B型结晶的制备方法，其中所述有机溶剂为甲醇与水的混合物，且甲醇与水的体积比为1:2至5:1。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的B型结晶的制备方法，其中所述碱性条件选自三乙胺、N,N-二异丙基、乙二胺、吡啶、氨水，优选三乙胺；其中所述钠盐选自碳酸氢钠、钠氢、碳酸钠、甲醇钠、乙醇钠、氢氧化钠、乙酸钠，优选氢氧化钠，所述氢氧化钠的浓度优选为10％～45％。
本发明制备A型结晶或B型结晶的方法中使用的2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮为式(I)化合物，其可以通过本领域技术人员公知的逆合成方法，通过常规制备方法合成得到，特别地，其可以通过专利申请号201811237690.7中实施例6中记载的方法得到，具体详见本发明的实施例。另外，本发明使用的2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮可以为任意晶型或无定型形式。
本发明使用的C1-C4醇可以为任何本领域常见的直链或支链烷烃类醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、仲丁醇、叔丁醇、丙二醇、乙二醇等，优选甲醇或乙醇。
本发明用于形成1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的钠盐可以为任何本领域常见的可以与式(I)化合物反应成盐的钠盐，例如碳酸氢钠、钠氢、碳酸钠、甲醇钠、乙醇钠、氢氧化钠，优选氢氧化钠。
通过X射线衍射(XRD)和差式扫描热分析(DSC)以及热重分析(TGA)对本发明所述的A型结晶和B型结晶进行晶型测定和研究。
按照本发明的方法制备的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶和B型结晶具有良好的稳定性和生物利用度，可以有利地用作医药活性成分使用。
本发明另一方面提供包含根据本发明所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶或B型结晶作为活性成分以及药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明进一步提供根据本发明所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶或B型结晶或含有其的药物组合物在制备预防和/或治疗与PHD活性相关的疾病的药物中的用途，所述与PHD活性相关的疾病优选选自心血管疾病，特别是心功能不全、冠心病、心绞痛、心肌梗塞、中风、动脉硬化、原发性、肺和恶性高血压和周围动脉闭塞性疾病；慢性肾病；造血障碍，例如原发性贫血、肾性贫血和伴有肿瘤疾病的贫血(特别是化疗诱导的贫血)；感染(特别是HIV感染)或者其它炎性疾病，例如类风湿性关节炎；由于失血导致的贫血、缺铁性贫血、维生素缺乏性贫血(例如，由于维生素B12缺乏或由于叶酸缺乏)、发育不全和再生障碍性贫血或者溶血性贫血，由于铁利用障碍(铁失利用性贫血)或者由于其它内分泌紊乱(例如甲状腺功能减退)导致的贫血；在外科手术后与手术相关的局部缺血状态及其连续症状，特别是使用心肺机的心脏介入术(例如分流手术，心脏瓣膜移植)、颈动脉介入术、主动脉介入术和使用仪器开口或者穿透颅盖的介入术；外科手术的伤口愈合；癌症以及在癌症治疗过程中发生的健康状态的损伤，特别是使用细胞抑制剂、抗生素和放射治疗后，风湿性形式范围的疾病和其它被视为自身免疫疾病的疾病形式的疾病，特别是在这类疾病的药物治疗过程中发生的健康状态的损伤；急性和延长性脑局部缺血状态的连续症状(例如中风、分娩窒息)。
本文所述的“药学上可接受的”是其有用于制备通常是安全、既无生物学上的毒性又无其它不需要的毒性的，并且对于兽医使用和人类药物使用是可接受的药物组合物。
本文所述的“载体”是指与化合物一起施用的稀释剂、佐剂、或赋形剂。药学上可接受的载体可以是液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、菜籽油等。药学上可接受的载体也可以是生理盐水、阿拉伯树胶、明胶、淀粉糊、滑石粉、角蛋白、硅胶、尿素等。另外，还可以使用辅助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂等。
本领域技术人员能够理解，本发明的药物组合物可以根据具体的施用方式被配制成各种本领域熟知的制剂形式，例如口服剂型(粉剂、片剂、胶囊、软胶囊、液体药物、糖浆、酏丸、散剂、囊剂、粒剂)，或局部施用制剂(乳膏、软膏、洗剂、凝胶、香脂、膏药、糊剂、喷雾剂、气雾剂等等)，或注射制剂(溶液、悬浮剂、乳剂)。在本发明的药物组合物中，尤其可以提及的是适合于口服、胃肠外(静脉内或皮下)或鼻部给药的那些，例如，片剂或糖衣丸、舌下片、明胶胶囊、锭剂、栓剂、霜剂、软膏剂、皮肤凝胶、可注射制剂、可饮用的混悬液等。
根据本发明的药物组合物可以包含药学上可接受的载体、佐剂或稀释剂，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂例如：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂例如：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂例如：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂例如：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂例如，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等。本发明的组合物可以通过利用本领域任何已知方法制成，以使病人用药后能提供快速、持久或缓慢释放的活性成分。
本发明的药物组合物通过各种途径给药至个体动物如哺乳动物(大鼠、小鼠、驯化动物或人类)，所有的给药方式均是预期的，例如，给药可以是口服、局部、直肠给药或经静脉、肌肉内、经皮、鞘膜内、硬膜外或脑室内注射。
本发明活性成分的给药剂量可以根据个体的情况和重量、病情的性质和严重程度、药物形式、给药途径以及给药周期的不同而不同，其也可以由本领域技术人员进行选择。剂量可以在1-100mg/天之间改变，可以每天单次给药或每天分多次给药。
以下将结合附图和具体实施例进一步阐明本发明，但应理解其仅是举例说明的作用，并不以任何方式限制本发明的范围。
附图说明
图1显示本发明A晶型的X射线粉末衍射图谱。
图2显示本发明A晶型的DSC-TGA图谱。
图3显示本发明B晶型的X射线粉末衍射图谱。
图4显示本发明B晶型的DSC-TGA图谱。
具体实施方式
以下将结合实施例更详细地解释本发明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质和范围。
实验仪器
1、DSC-TGA谱
仪器型号：TA Instruments Q200MDSC
吹扫气：氮气
升温速率：10℃/分钟
温度范围：25℃到300℃
2、X射线衍射谱
仪器型号：Bruker D8advance diffractometer
射线：1.54nm KαX-射线
扫描方式：0.2秒/步，扫描范围：3°～40°。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Brukerdps300型核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用1100Series LC/MSD Trap(ESI)质谱仪(生产商：Agilent)。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自网化商城、北京耦合、Sigma、百灵威、易世明、上海书亚、伊诺凯、南京药石、安耐吉化学等公司。
实施例1：2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮(I)的制备
根据专利申请201811237690.7的实施例6制备式(I)化合物，具体如下：
Figure BDA0002030788230000121
步骤1：2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酸乙酯的合成(中间体1A)
将1H-1,2,3-三唑(100g，1.45mol)加入至1L反应瓶中，向其中加入乙酸乙酯(300mL)、DIPEA(252mL，1.45mol)，冰浴下搅拌3分钟。将溴乙酸乙酯(152mL，1.38mol)加入至200mL乙酸乙酯中，然后将其缓慢滴加入反应瓶中，滴加完毕后，室温搅拌过夜。反应完全后，过滤，滤液用水、饱和食盐水各洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到100g黄色油状物的标题产物，收率：44.3％。
步骤2：3-(二甲基氨基)-2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)丙烯酸乙酯的合成(中间体1B)
将2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)乙酸乙酯(100g，0.64mol)、DMA(100mL)加入单口瓶中，60℃搅拌反应1小时。反应结束后，将反应液冷却至室温，并减压浓缩至干，加300mL水、300mL二氯甲烷萃取，浓缩有机相至二氯甲烷基本无剩余，搅拌下加入400mL甲基叔丁基醚，室温搅拌1小时，过滤，得到62.2g淡黄色固体状的标题产物，收率：45.9％。
步骤3：4-氯-6-肼基嘧啶的合成(中间体1C)
将4,6-二氯嘧啶(10g，68mmol)、乙醇(350mL)加入至1L的反应瓶中，于室温滴加水合肼(6.05g，122mmol)，过程中发生混浊，补加乙醇(200mL)，滴加完毕后，室温搅拌12小时。反应完全后，过滤，滤饼用水、石油醚各洗涤两次，干燥，得6.3g黄色固体状的标题产物，收率65.6％。
步骤4：2-(4-氯嘧啶-2-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮的合成(中间体1D)
将4-氯-6-肼基嘧啶(5.19g，36.3mmol)、3-(二甲基氨基)-2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)丙烯酸乙酯(6.25g，29.7mmol)、乙醇(63mL)、TFA(1.37g，8.8mmol)依次加入至250mL反应瓶中，加热至回流搅拌12小时。将反应液冷却至室温，滴加二氧六环盐酸气40mL，滴加完毕后搅拌1小时，过滤。将滤饼加入至90mL乙醇中，加入25％的甲醇钠的甲醇溶液32mL，室温搅拌2小时，然后用1N的盐酸调PH至4-5，室温搅拌2小时。反应完全后，过滤，滤饼用乙醇洗涤一次，干燥，得6.9g黄色固体状的标题产物，收率：87.8％。
步骤5：2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮的合成(化合物I)
将2-(4-氯嘧啶-2-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮(5g，0.019mol)、7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷草酸盐(南京药石科技股份有限公司)(3.6g，0.010mol)、DMSO 50mL、碳酸钾(5.8g，0.42mol)依次加入至250mL反应瓶中，加热100℃至110℃搅拌8小时。反应完全后，冷却至室温，浓缩至干，用乙酸调pH至4-5，过滤，干燥，得到3.4g微黄色固体状的标题产物，收率：51％，纯度：98％。
MS:m/z＝355.2[M+H]+。
1H NMR(300MHz,DMSO):δppm 1.89(m,4H),3.70(m,4H),4.02(m,4H),6.97(s,1H),7.84(s,1H),8.02(s,1H),8.32(s,1H),8.42(s,1H)。
实施例2：1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠(II)的A晶型的制备
Figure BDA0002030788230000141
将实施例1制得的2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮(I)(10g)加入到100ml甲醇和5ml水的混合溶液中，然后加入三乙胺(3.14g)。将混合物升温至60℃，搅拌至溶液澄清，热过滤。将滤液升温至60℃，搅拌下滴加45％NaOH水溶液(3.0g)。滴加完毕，保温30分钟，关闭加热自然降温至室温。室温搅拌析晶2小时，然后降温至0℃继续析晶2小时，过滤，滤饼在50℃减压干燥5小时，得微黄色固体(4.0g)，收率38％。
该结晶样品的X射线衍射图谱见图1，X射线衍射数据见下表1。DSC-TGA图谱见图2，其显示该晶型不经熔融直接分解。将此晶型定义为A晶型。
表1晶型A的2theta值与强度的对应值
Figure BDA0002030788230000142
Figure BDA0002030788230000151
实施例3：1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠(II)的A晶型的制备
将实施例1制得的2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮(I)(10g)加入到100ml甲醇和6.7ml水中，升温至60℃，滴加45％NaOH水溶液(7.5g)。滴加完毕，保温15分钟，关闭加热自然降温至室温。室温搅拌析晶2小时，然后降温至10℃继续析晶2小时，过滤，滤饼在55℃减压干燥5小时，得微黄色固体(6.9g)，收率65％。
其XRD图谱经研究比对，确定产物为A晶型。
实施例4：1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠(II)的A晶型的制备
将实施例1制得的2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮(I)(10g)加入到100ml甲醇和3.3ml水中，然后加入三乙胺(3.0g)升温至55℃，滴加40％NaOH水溶液(3.4g)。滴加完毕，保温20分钟，关闭加热自然降温至室温。室温搅拌析晶2小时，然后降温至10℃继续析晶2小时，过滤，滤饼在60℃减压干燥5小时，得微黄色固体(7.2g)，收率69％。
其XRD图谱经研究比对，确定产物为A晶型。
实施例5：1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠(II)的B晶型的制备
将实施例1制得的2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮(I)(42g)加入甲醇420ml和水420ml中，搅拌升温至60℃。搅拌下，向其中滴加三乙胺12g，继续搅拌至澄清，趁热过滤。滤液升温至60℃，搅拌下缓慢滴加10％NaOH溶液(105g)。滴加完毕后，降温至15℃，搅拌12小时析晶。过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，60℃减压干燥，得微黄色固体25g，收率57.2％。
该结晶样品的X射线衍射图谱见图3，X射线衍射数据见下表2。DSC-TGA图谱见图4，其显示有尖锐的热溶吸收峰242.2℃。将此晶型定义为B晶型。
表2晶型B的2theta值与强度的对应值
强度％ 2theta
48.3 8.87
32.1 10.737
100 16.3
35.8 18.863
51.8 19.631
31.4 23.719
52.3 28.463
39.7 29.093
实施例6：1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠(II)的B晶型的制备
将实施例1制得的2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮(I)(10g)加入甲醇100ml和水200ml中，搅拌升温至60℃。搅拌下缓慢滴加45％NaOH溶液(5.5g)。滴加完毕后，降温至0℃，搅拌12小时析晶。过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，60℃减压干燥，得微黄色固体5.4g，收率51.2％。
其XRD图谱经研究比对，确定产物为B晶型。
实施例7：1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠(II)的B晶型的制备
将实施例1制得的2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮(I)(10g)加入甲醇100ml和水500ml中，然后加入三乙胺(3.0g)，搅拌升温至55℃。搅拌下缓慢滴加25％NaOH溶液(5.4g)。滴加完毕后，降温至0℃，搅拌20小时析晶。过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，60℃减压干燥，得微黄色固体4.5g，收率42.7％。
其XRD图谱经研究比对，确定产物为B晶型。
实施例8：1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠(II)的B晶型的制备
将实施例1制得的2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮(I)(10g)加入甲醇100ml和水20ml中，然后加入三乙胺(3.0g)，搅拌升温至55℃，搅拌下缓慢滴加45％NaOH溶液(3.1g)。滴加完毕后，降温至15℃，搅拌12小时析晶。过滤，滤饼用少量甲醇洗涤，60℃减压干燥，得微黄色固体6.64g，收率62.3％。
其XRD图谱经研究比对，确定产物为B晶型。
实施例9：引湿性试验
依据中国药典2010年版二部附录XIX J检测实施例3制得的A晶型和实施例6得的B晶型和实施例1制得的化合物(I)的引湿性。具体方法如下：取干燥的玻璃称量瓶(外径为50mm，高15mm)于前一天置于适宜的25℃±1℃恒温干燥器内，精密称重(m0)，取样品适量，精密称重(m1)，平铺于上述称量瓶内，样品厚度约为1mm；将称量瓶敞口，并与瓶盖同置于恒温恒湿条件下24小时，盖好称量瓶盖子，精密称量(m2)，计算增重百分率。增湿重百分率(％)＝(m2-m1-m0/m1)×100％。
依据药物引湿性试验指导原则，实验条件为：25℃±1℃，考察各种相对湿度下引湿性。各样品引湿性结果如下表所示。
表4
Figure BDA0002030788230000181
结论：在相对湿度80％±2％下，计算所得晶型A吸湿增重为0.89％，晶型B吸湿增重为0.35％，按照药典规定引湿性增重的界定标准，属于略有引湿性。式(I)化合物增重3.24％。可见，本发明的A晶型和B晶型吸湿性较式(I)化合物均有显著的改善，进而有助于化合物的稳定性。
实施例10：稳定性研究
将实施例3制得的A晶型和和实施例5制得的B晶型样品适量放入培养皿中，摊成小于5mm的薄层，暴露在高温105℃±2℃、高湿92.5％±2％、或可见光照4500±500lx，紫外光强度不低于0.7W.h/m2。在暴露或辐射之后得到样品，并采用Waters Aquicty Arc液相色谱仪HPLC测杂质含量。检测条件如下表5所示。
表5 HPLC检测条件
Figure BDA0002030788230000191
试验结果如下表6所示。
表6本发明晶型的稳定性结果
Figure BDA0002030788230000192
结论：本发明的A晶型和B晶型在高温、高湿和光照10天或20天条件下，杂质含量无明显变化，说明本发明A晶型和B晶型具有优异的稳定性。
实施例11：本发明晶型在SD大鼠体内药代动力学评价
对雄性7周龄SD大鼠(斯贝福(北京)生物技术有限公司)静脉注射(I.V.)或口服(P.O.)给予实施例1制得的式(I)化合物、实施例2制得的A晶型或实施例5制得的B晶型，静脉注射剂量为1mg/kg，口服剂量为5mg/kg。静脉给药(1mg/kg；0.2mg/ml)配制方法：称取2.4mg化合物，悬浮于12ml生理盐水中，混匀。口服给药(5mg/kg；0.5mg/ml)配制方法：称取7mg化合物，悬浮于14ml0.5％CMC-Na中，混匀。
静脉注射分别于给药后0、0.083、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00和24.00时进行眼眶采血；口服给药分别于给药后0、0.167、0.333、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00和24.00时进行眼眶采血。血液经肝素钠(Sigma)抗凝，于4℃，3500rpm离心10分钟，获取血浆并在-20℃保存直至测试。
取血浆样品50μL于1.5mL EP管中，涡旋1分钟充分混匀。涡旋后加入0.2mL乙腈，涡旋剧烈震荡1分钟，16000rpm离心10分钟。移取上清液0.2mL于0.22μM有机膜(Cleman)中过滤后加入进样小瓶中，经LC/MS(Waters，Waters UPLC I Class、TQ-S micro)分析得出血药浓度，并通过DAS软件3.0分析药代动力学参数。
药代动力学参数如下表7所示。
表7本发明晶型的药代动力学参数
Figure BDA0002030788230000201
结论：本发明A晶型和B晶型的生物利用度明显高于式(I)化合物。
实施例12：本发明化合物对Balb/C小鼠EPO(促红细胞生成素)水平的影响
采用小鼠单次口服给药后4小时检测血浆中EPO水平的变化来检测药物活性。
动物：Balb/C小鼠，雄性，18-20g；购于北京市维通利华实验动物技术有限公司，SPF级；动物生产许可证号：SCXK(京)2016-0011；发证单位：北京市科学技术委员会。
分组：正常对照组(0.5％CMC-Na溶媒组)；实施例2制得的A晶型组(0.88mg/kg)和实施例5制得的B晶型组(0.88mg/kg)；每组5只动物。
样品配制：将本发明晶型混悬于溶媒0.5％CMC-Na中。
动物购进后适应性喂养5-7天后用于试验，动物单次口服给药4小时后，经异氟烷麻醉3分钟，通过眼眶静脉丛采血法采血(0.5ml/只)，肝素钠(sigma)抗凝。3500rpm/分离心10分钟，分离血浆，保存于-20℃备用。
检测指标与方法：采用EPO ELISA试剂盒(P137645，R&D System)和酶标仪(Cytation 3，BioTek)，测定小鼠血浆EPO水平。
表8所示了本发明实施例2制得的A晶型和实施例5制得的B晶型于0.88mg/kg剂量下对小鼠分泌EPO的作用。其中，A代表>1000pg/mL，B代表500-100pg/mL，C代表<500pg/mL。
表8本发明晶型对小鼠EPO水平的提升
组别 EPO水平(pg/mL)
正常对照组 215
A晶型 B
B晶型 B
结论：本发明晶型显著提升Balb/C小鼠血浆的EPO水平，说明本发明晶型可显著促进Balb/C小鼠EPO的表达。

Claims (23)

1.一种1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱包括位于4.543°±0.2°、9.101°±0.2°、12.705°±0.2°、16.174°±0.2°、17.728°±0.2°、22.944°±0.2°、26.85°±0.2°、29.828°±0.2°的2θ衍射角处的特征峰。
2.根据权利要求1所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱包括位于4.543°±0.2°、9.101°±0.2°、12.705°±0.2°、13.451°±0.2°、16.174°±0.2°、17.728°±0.2°、18.663°±0.2°、20.593°±0.2°、22.944°±0.2°、26.850°±0.2°、29.828°±0.2°、31.658°±0.2°、37.324°±0.2°的2θ衍射角处的特征峰。
3.根据权利要求1或2所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱如图1所示。
4.一种1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱包括位于8.870°±0.2°、10.737；°±0.2°、16.300°±0.2°、18.863°±0.2°、19.63°±0.2°、23.719°±0.2°、28.463°±0.2°、29.093°±0.2°的2θ衍射角处的特征峰。
5.根据权利要求4所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱包括位于8.870°±0.2°、10.737°±0.2°、12.051°±0.2°、13.606°±0.2°、14.099°±0.2°、16.300°±0.2°、18.863°±0.2°、19.631°±0.2°、20.947°±0.2°、21.641°±0.2°、22.775°±0.2°、23.719°±0.2°、24.423°±0.2°、26.745°±0.2°、28.463°±0.2°、29.093°±0.2°的2θ衍射角处的特征峰。
6.根据权利要求4或5所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶，其特征在于，其X射线粉末衍射图谱如图3所示。
7.一种制备根据权利要求1至3中任一项所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶的方法，所述方法包括以下步骤：
1)在碱性条件下，将2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮分散于有机溶剂中；加热下，优选于55℃-60℃，向其中滴加钠盐溶液，制得1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液；
2)将步骤1)得到的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液在室温搅拌析晶优选2小时，然后于0℃-10℃继续搅拌析晶优选2小时，过滤晶体；
3)将步骤2)得到的晶体干燥，得到1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，在步骤1)中，进一步通过加热优选在55℃-60℃将2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮溶解于有机溶剂中，热过滤，向滤液中滴加钠盐溶液。
9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其中，在步骤1)中，进一步将制得的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液保温优选15至30分钟。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的制备方法，其中所述有机溶剂选自C1-C4醇、1,4-二氧六环、四氢呋喃、或其混合物，或者上述溶剂与水的混合物；优选C1-C4醇或C1-C4醇与水的混合物；所述C1-C4醇优选甲醇或乙醇。
11.根据权利要求7至10中任一项所述的制备方法，其中所述有机溶剂为C1-C4醇与水的混合物，且C1-C4醇与水的体积比为15:1至50:1；优选15:1至30:1。
12.根据权利要求7至11中任一项所述的制备方法，其中所述有机溶剂为甲醇与水的混合物，且甲醇与水的体积比为15:1至30:1。
13.根据权利要求7至12中任一项所述的制备方法，其中所述碱性条件选自三乙胺、N,N-二异丙基乙二胺、吡啶、氨水，优选三乙胺；其中所述钠盐选自碳酸氢钠、钠氢、碳酸钠、甲醇钠、乙醇钠、氢氧化钠、乙酸钠，优选氢氧化钠，所述氢氧化钠浓度优选为40％～45％。
14.一种制备根据权利要求4至6中任一项所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶的方法，所述方法包括以下步骤：
1)在碱性条件下，将2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮分散于有机溶剂中；加热下，优选于55℃-60℃，向其中滴加钠盐溶液，制得1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液；
2)将步骤1)得到的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠溶液于0℃-15℃搅拌析晶优选12至20小时，过滤晶体；
3)将步骤2)得到的晶体干燥，得到1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶。
15.根据权利要求14所述的制备方法，其中，在步骤1)中，进一步通过加热优选在55℃-60℃将2-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酮溶解于有机溶剂中，热过滤，向滤液中滴加钠盐溶液。
16.根据权利要求14或15所述的制备方法，其中所述有机溶剂选自C1-C4醇、1,4-二氧六环、四氢呋喃、或其混合物，或者上述溶剂与水的混合物；优选C1-C4醇或C1-C4醇与水的混合物；所述C1-C4醇优选甲醇或乙醇。
17.根据权利要求14至16中任一项所述的制备方法，其中所述有机溶剂为C1-C4醇与水的混合物，且C1-C4醇与水的体积比为1:5至10:1；优选1:2至5:1。
18.根据权利要求14至17中任一项所述的制备方法，其中所述有机溶剂为甲醇与水的混合物，且甲醇与水的体积比为1:2至5:1。
19.根据权利要求14至18中任一项所述的制备方法，其中所述碱性条件选自三乙胺、N,N-二异丙基、乙二胺、吡啶、氨水，优选三乙胺；其中所述钠盐选自碳酸氢钠、钠氢、碳酸钠、甲醇钠、乙醇钠、氢氧化钠、乙酸钠，优选氢氧化钠，所述氢氧化钠浓度优选为10％～45％。
20.一种药物组合物，其含有根据权利要求1至3中任一项所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶作为活性成分以及药学上可接受的载体。
21.一种药物组合物，其含有根据权利要求4至6中任一项所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶作为活性成分以及药学上可接受的载体。
22.根据权利要求1至3中任一项所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的A型结晶或根据权利要求20所述的药物组合物在制备预防和/或治疗与PHD活性相关的疾病的药物中的用途，所述与PHD活性相关的疾病优选选自心血管疾病，特别是心功能不全、冠心病、心绞痛、心肌梗塞、中风、动脉硬化、原发性、肺和恶性高血压和周围动脉闭塞性疾病；慢性肾病；造血障碍，例如原发性贫血、肾性贫血和伴有肿瘤疾病的贫血(特别是化疗诱导的贫血)；感染(特别是HIV感染)或者其它炎性疾病，例如类风湿性关节炎；由于失血导致的贫血、缺铁性贫血、维生素缺乏性贫血(例如，由于维生素B12缺乏或由于叶酸缺乏)、发育不全和再生障碍性贫血或者溶血性贫血，由于铁利用障碍(铁失利用性贫血)或者由于其它内分泌紊乱(例如甲状腺功能减退)导致的贫血；在外科手术后与手术相关的局部缺血状态及其连续症状，特别是使用心肺机的心脏介入术(例如分流手术，心脏瓣膜移植)、颈动脉介入术、主动脉介入术和使用仪器开口或者穿透颅盖的介入术；外科手术的伤口愈合；癌症以及在癌症治疗过程中发生的健康状态的损伤，特别是使用细胞抑制剂、抗生素和放射治疗后，风湿性形式范围的疾病和其它被视为自身免疫疾病的疾病形式的疾病，特别是在这类疾病的药物治疗过程中发生的健康状态的损伤；急性和延长性脑局部缺血状态的连续症状(例如中风、分娩窒息)。
23.根据权利要求4至6中任一项所述的1-(6-(7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬-2-基)嘧啶-4-基)-4-(1H-1,2,3-三唑-1-基)-1,2-二氢-3H-吡唑-3-酚钠的B型结晶或根据权利要求21所述的药物组合物在制备预防和/或治疗与PHD活性相关的疾病的药物中的用途，所述与PHD活性相关的疾病优选选自心血管疾病，特别是心功能不全、冠心病、心绞痛、心肌梗塞、中风、动脉硬化、原发性、肺和恶性高血压和周围动脉闭塞性疾病；慢性肾病；造血障碍，例如原发性贫血、肾性贫血和伴有肿瘤疾病的贫血(特别是化疗诱导的贫血)；感染(特别是HIV感染)或者其它炎性疾病，例如类风湿性关节炎；由于失血导致的贫血、缺铁性贫血、维生素缺乏性贫血(例如，由于维生素B12缺乏或由于叶酸缺乏)、发育不全和再生障碍性贫血或者溶血性贫血，由于铁利用障碍(铁失利用性贫血)或者由于其它内分泌紊乱(例如甲状腺功能减退)导致的贫血；在外科手术后与手术相关的局部缺血状态及其连续症状，特别是使用心肺机的心脏介入术(例如分流手术，心脏瓣膜移植)、颈动脉介入术、主动脉介入术和使用仪器开口或者穿透颅盖的介入术；外科手术的伤口愈合；癌症以及在癌症治疗过程中发生的健康状态的损伤，特别是使用细胞抑制剂、抗生素和放射治疗后，风湿性形式范围的疾病和其它被视为自身免疫疾病的疾病形式的疾病，特别是在这类疾病的药物治疗过程中发生的健康状态的损伤；急性和延长性脑局部缺血状态的连续症状(例如中风、分娩窒息)。
CN201910308911.3A 2019-04-17 2019-04-17 一种phd抑制剂的新晶型及其制备方法 Active CN111825690B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910308911.3A CN111825690B (zh) 2019-04-17 2019-04-17 一种phd抑制剂的新晶型及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910308911.3A CN111825690B (zh) 2019-04-17 2019-04-17 一种phd抑制剂的新晶型及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111825690A true CN111825690A (zh) 2020-10-27
CN111825690B CN111825690B (zh) 2022-09-27

Family

ID=72915538

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910308911.3A Active CN111825690B (zh) 2019-04-17 2019-04-17 一种phd抑制剂的新晶型及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111825690B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101631785A (zh) * 2006-10-26 2010-01-20 拜耳先灵制药股份公司 用于治疗心血管和血液病的取代的二氢吡唑啉酮
CN102015685A (zh) * 2008-04-23 2011-04-13 拜耳先灵制药股份公司 作为hif-脯氨酰基-4-羟化酶抑制剂的取代的二氢吡唑啉酮类化合物
WO2018232227A1 (en) * 2017-06-15 2018-12-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Treatment of neurodegeneration via reprogramming metabolism by inhibiting phd

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101631785A (zh) * 2006-10-26 2010-01-20 拜耳先灵制药股份公司 用于治疗心血管和血液病的取代的二氢吡唑啉酮
CN102015685A (zh) * 2008-04-23 2011-04-13 拜耳先灵制药股份公司 作为hif-脯氨酰基-4-羟化酶抑制剂的取代的二氢吡唑啉酮类化合物
WO2018232227A1 (en) * 2017-06-15 2018-12-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Treatment of neurodegeneration via reprogramming metabolism by inhibiting phd

Also Published As

Publication number Publication date
CN111825690B (zh) 2022-09-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018201896B2 (en) Salts of an Epidermal Growth Factor Receptor Kinase Inhibitor
WO2021129824A1 (zh) 新型K-Ras G12C抑制剂
EP2949647B1 (en) Deuterated phenyl amino pyrimidine compound and pharmaceutical composition containing same
WO2022017533A1 (zh) 用作cdk7激酶抑制剂的化合物及其应用
KR20220164068A (ko) 프롤릴 하이드록실라제 억제제 [(4-하이드록시-1-메틸-7-페녹시-아이소퀴놀린-3-카보닐)-아미노]-아세트산의 결정형
US8946249B2 (en) Compound, certain novel forms thereof, pharmaceutical compositions thereof and methods for preparation and use
EP2640718B1 (de) Substituiertes natrium-1h-pyrazol-5-olat
JP2019526605A (ja) 置換２−ｈ−ピラゾール誘導体の結晶形、塩型及びその製造方法
CN111825690B (zh) 一种phd抑制剂的新晶型及其制备方法
CN111825689B (zh) 一种二氢吡唑啉酮类化合物的晶型及其制备方法
WO2022063333A1 (zh) 一种嘧啶甲酰胺类化合物及其应用
WO2022143695A1 (zh) 磺酰胺类抑制剂及其制备方法和应用
CN112689635B (zh) 一种1,7-萘啶类衍生物及其制备方法和用途
EP4155304A1 (en) Compound used as ret kinase inhibitor and application thereof
CN116783183A (zh) 作为vhl抑制剂用于治疗贫血和癌症的1-(2-(4-环丙基-1h-1,2,3-三唑-1-基)乙酰基)-4-羟基-n-(苄基)吡咯烷-2-甲酰胺衍生物
JP2022517396A (ja) Ｅｇｆｒ阻害剤の塩、結晶形及びその製造方法
WO2021143922A1 (zh) 一种溴区结构域蛋白抑制剂的晶型、盐型及其制备方法
CN111559982B (zh) 2-(2-取代-4-羟基嘧啶-5-甲酰胺基)乙酸类化合物及其制备方法与用途
CN109694380B (zh) 二氢吡唑啉酮类化合物及其制备方法和医药用途
WO2021092892A1 (zh) 喹啉或喹唑啉类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用
TW202412778A (zh) 一種脯氨醯羥化酶抑制劑及其用途
JP5975122B2 (ja) ［（４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２，５，６−テトラヒドロ−３−ピリジニル）カルボニル］グリシン化合物の結晶形及びそれらの製造方法
TW202408510A (zh) Ｃｄｋ抑制劑及其磷酸鹽的多晶型、其製備方法、包含其的醫藥組合物及其用途
KR20240021239A (ko) Cdk 키나아제 억제제로 사용되는 화합물 및 이의 용도
CN114560813A (zh) 一种苯并咪唑类mk2变构抑制剂及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant