CN111820131A - 一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法 - Google Patents

一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法，一种蓝莓增殖培养基包括初代培养基和继代培养基，所述初代培养基包括基本培养基、0.8～1.2mg/L的ZT、0.08～0.12mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂，所述继代培养基包括基本培养基、0.4～0.6mg/L的ZT、0.04～0.06mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂，一种蓝莓的增殖培养方法，包括a)培养基的制备；b)诱导侧芽萌发和c)增殖培养，所制备的培养基，制作成本低廉，在使用时，培苗成活率达到了100％，分化率为市售培养基的1.5倍，培养周期短，组培苗在培养50天后可达到8cm左右，茎段粗壮，不但增加了组培苗的利用率，也增加了后续移栽的成活率，利用组培培养的方法，可以在短期内大大提高增殖系数。

Description

一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法
【技术领域】
本发明涉及蓝莓增殖的技术领域，特别是一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法的技术领域。
【背景技术】
蓝莓，属杜鹃花科，越橘属植物，起源于北美，是多年生灌木小浆果果树。由于蓝莓具有极高的经济价值和营养价值，因此备受人们的关注。蓝莓不仅含有果糖、纤维和维生素等营养元素，还富含抗氧化剂、叶酸和花色素苷等有助于清除人体内自由基，抑制及逆转人体衰老的化合物，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一。
伴随着蓝莓国际需求量的不断提升，世界蓝莓的栽培面积不断上升，人们对蓝莓苗木的需求量也逐年增加。我国人工栽培蓝莓起步较晚，总体规模较小，无法满足消费者日益增长的需求，还存在蓝莓组培苗细弱，分化率低，培养周期长，利用率不高，后续移栽成活率低的问题。因此，如何快速获得足够的蓝莓苗木，扩大蓝莓栽培面积，成为亟需解决的重要问题。
【发明内容】
本发明的目的就是解决现有技术中的问题，提出一种蓝莓增殖培养基及其增殖培养方法，解决了蓝莓组培苗细弱，分化率低，培养周期长，利用率不高，及后续移栽成活率低的问题。
为实现上述目的，本发明通过以下技术方案来实现：
一种蓝莓增殖培养基，包括初代培养基和继代培养基，所述初代培养基包括基本培养基、0.8～1.2mg/L的ZT、0.08～0.12mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂，所述继代培养基包括基本培养基、0.4～0.6mg/L的ZT、0.04～0.06mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂。
作为优选，所述基本培养基包括675～825mg/L的NH4NO3、445～545mg/L的K2SO4、570～690mg/L的KNO3、280～340mg/L的MgSO4·7H2O、125～155mg/L的KH2PO4、250～310mg/L的Ca(NO3)2·4H2O、175～215mg/L的Cacl2·2H2O、5～7mg/L的H3BO3、15～20mg/L的MnSO4·H2O、7.5～9.5mg/L的ZnSO4·7H2O、0.15～0.35mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.15～0.35mg/L的CuSO4·5H2O、35～40mg/L的Na2·EDTA、25～30mg/L的FeSO4·7H2O、80～120mg/L的肌醇、0.4～0.6mg/L的维生素B5、0.4～0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.8～1.2mg/L的盐酸硫胺素以及1.5～2.5mg/L的甘氨酸。
作为优选，所述初代培养基和继代培养基的PH均调节至5.0～5.3。
一种蓝莓的增殖培养方法，包括如下步骤：
a)培养基的制备：在基本培养基内加入0.8～1.2mg/L的ZT、0.08～0.12mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.4～0.6mg/L的ZT、0.04～0.06mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂从而得到继代培养基；
b)诱导侧芽萌发：将蓝莓外植体进行清洗和消毒后，接种到步骤a)中所制备的初代培养基中进行诱导分化，得到蓝莓初代组培苗；
c)增殖培养：将步骤b)中所制备的蓝莓初代组培苗进行修剪后，接种到步骤a)中所制备的继代培养基中进行继代培养，得到蓝莓继代组培苗。
作为优选，所述步骤b)中，蓝莓外植体的诱导分化条件为前6～8天暗培养，温度为20～24℃，随后更改为光培养，光照强度为2500～3000lx，每日光照时长为10～14h，温度为23～27℃，总培养时长为35～45天。
作为优选，所述步骤c)中，蓝莓初代组培苗修剪至1.3～1.7cm。
作为优选，所述步骤c)中，蓝莓初代组培苗的继代培养条件为光培养，光照强度为2800～3200lx，每日光照时长为14～18h，温度为23～27℃，培养时长为40～60天。
本发明的有益效果：本发明所制备的培养基，制作成本低廉，在使用时，培苗成活率达到了100％，分化率为市售培养基的1.5倍，培养周期短，组培苗在培养50天后可达到8cm左右，茎段粗壮，不但增加了组培苗的利用率，也增加了后续移栽的成活率，利用组培培养的方法，可以在短期内大大提高增殖系数，缩短繁殖时间，并且保持品种的优良特性。
【具体实施方式】
实施例一：
a)培养基的制备：
在基本培养基内加入0.8mg/L的ZT(玉米素)、0.08mg/L的IBA(吲哚丁酸)、25mg/L的蔗糖以及5.5mg/L的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.4mg/L的ZT、0.04mg/L的IBA、25mg/L的蔗糖以及5.5mg/L的琼脂从而得到继代培养基。初代培养基和继代培养基均配置5L，灭菌备用。
其中，基本培养基包括675mg/L的NH4NO3、445mg/L的K2SO4、570mg/L的KNO3、280mg/L的MgSO4·7H2O、125mg/L的KH2PO4、250mg/L的Ca(NO3)2·4H2O、175mg/L的Cacl2·2H2O、5mg/L的H3BO3、15mg/L的MnSO4·H2O、7.5mg/L的ZnSO4·7H2O、0.15mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.15mg/L的CuSO4·5H2O、35mg/L的Na2·EDTA、25mg/L的FeSO4·7H2O、80mg/L的肌醇、0.4mg/L的维生素B5、0.4mg/L的盐酸吡哆醇、0.8mg/L的盐酸硫胺素以及1.5mg/L的甘氨酸。
初代培养基和继代培养基均采用母液配置方法，具体步骤如下：
①母液配置：
分别称取NH4NO3、K2SO4、KNO3、MgSO4·7H2O、KH2PO4、Ca(NO3)2·4H2O和Cacl2·2H2O，每个药品单独溶解，再混合加水定容，配置成20倍的母液1；分别称取H3BO3、MnSO4·H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O和CuSO4·5H2O，每个药品单独溶解，再混合加水定容，配置成100倍的母液2；分别称取Na2·EDTA和FeSO4·7H2O，先将FeSO4·7H2O溶解，再将Na2·EDTA煮沸溶解，然后将二者混合加水定容，配置成100倍的母液3；分别称取肌醇、维生素B5、盐酸吡哆醇、盐酸硫胺素和甘氨酸，每个药品单独溶解，再混合加水定容，配置成100倍的母液4；称取ZT，用95％的酒精溶解，再加水定容，配置成100倍的母液5；称取IBA，再加水定容，配置成200倍的母液6。
②培养基配置：
先将2L的水烧热，倒入琼脂煮沸，根据初代培养基和继代培养基的配方分别倒入一定量的母液1、母液2、母液3、母液4、母液5和母液6，再加入蔗糖，定容至5L。随后，使用PH剂和0.1mol/L的NaOH，调节PH至5.2。最后，将灌装好的培养基在115～125℃，130～132KPa的条件下，灭菌15～25min，冷却备用。其中，优选灭菌温度为121℃，灭菌压力131KPa，灭菌时间20min。
b)诱导侧芽萌发：
选取5～7月份的生长健壮的无病虫害的蓝莓枝条，去除叶片，用自来水加2～5滴洗洁精，洗去表面的灰尘，再流水冲洗干净。转到超净工作台，用75％的酒精消毒20～40s后，用无菌水冲洗干净，再用Hgcl2浸泡7～10min。在此过程中，轻轻摇晃瓶子，最后用无菌水冲洗干净备用。接着，在超净工作台中将清洗和消毒后的蓝莓外植体接种到步骤a)中所制备的初代培养基中进行诱导分化，每瓶种1颗单芽茎段，得到蓝莓初代组培苗。
蓝莓枝条选用浙江蓝美技术股份有限公司的蓝美1号。蓝美1号含有落叶性和常绿性多型物种基因，果早熟，可避梅雨，而花比“奥尼尔”晚开，有利于躲晩霜，自交结实性优，果形比野生蓝莓大，产量高，适宜在我国多种不同生态区域产业化栽种，抗灾害气候性优良。
蓝莓外植体的诱导分化条件为前7天暗培养，温度为22℃，随后更改为光培养，光照强度为2500～3000lx，每日光照时长为12h，温度为25℃，总培养时长为40天。
c)增殖培养：
将步骤b)中所制备的蓝莓初代组培苗进行修剪后，在超净工作台中接种到步骤a)中所制备的继代培养基中进行继代培养，每瓶种10颗，得到蓝莓继代组培苗。
蓝莓初代组培苗修剪至1.5cm，蓝莓初代组培苗的继代培养条件为光培养，光照强度为3000lx，每日光照时长为16h，温度为25℃，培养时长为50天。
实施例二：
在基本培养基内加入1mg/L的ZT、0.1mg/L的IBA、30mg/L的蔗糖以及6.5mg/L的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.5mg/L的ZT、0.05mg/L的IBA、30mg/L的蔗糖以及6.5mg/L的琼脂从而得到继代培养基，初代培养基和继代培养基均配置5L，灭菌备用。
其中，基本培养基包括750mg/L的NH4NO3、495mg/L的K2SO4、633mg/L的KNO3、308mg/L的MgSO4·7H2O、142mg/L的KH2PO4、278mg/L的Ca(NO3)2·4H2O、195mg/L的Cacl2·2H2O、6.2mg/L的H3BO3、16.9mg/L的MnSO4·H2O、8.6mg/L的ZnSO4·7H2O、0.25mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.25mg/L的CuSO4·5H2O、37.3mg/L的Na2·EDTA、27.8mg/L的FeSO4·7H2O、100mg/L的肌醇、0.5mg/L的维生素B5、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、1mg/L的盐酸硫胺素以及2mg/L的甘氨酸。
其他同实施例一。
实施例三：
在基本培养基内加入1.2mg/L的ZT、0.12mg/L的IBA、35mg/L的蔗糖以及7.5mg/L的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.6mg/L的ZT、0.06mg/L的IBA、35mg/L的蔗糖以及7.5mg/L的琼脂从而得到继代培养基，初代培养基和继代培养基均配置5L，灭菌备用。
其中，基本培养基包括825mg/L的NH4NO3、545mg/L的K2SO4、690mg/L的KNO3、340mg/L的MgSO4·7H2O、155mg/L的KH2PO4、310mg/L的Ca(NO3)2·4H2O、215mg/L的Cacl2·2H2O、7mg/L的H3BO3、20mg/L的MnSO4·H2O、9.5mg/L的ZnSO4·7H2O、0.35mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.35mg/L的CuSO4·5H2O、40mg/L的Na2·EDTA、30mg/L的FeSO4·7H2O、120mg/L的肌醇、0.6mg/L的维生素B5、0.6mg/L的盐酸吡哆醇、1.2mg/L的盐酸硫胺素以及2.5mg/L的甘氨酸。
其他同实施例一。
实施例四、
将实施例二所制备的培养基与市售的培养基作为对比，分别进行蓝莓增殖试验，每组抽5瓶，每瓶种植标准为18株，结果如下表：
1、成活率＝成活颗数/种植颗数*100％
成活率(％) 1 2 3 4 5
普通培养基 80 94 100 94 80
实施例二培养基 100 100 100 100 100
2、芽分化数：每瓶瓶苗里成活的株数
分化数(株) 1 2 3 4 5
普通培养基 19 18 20 19 21
实施例二培养基 27 28 31 26 30
3、培养50天后苗高度对比
高度(cm) 1 2 3 4 5
普通培养基 5 7 7 6 7
实施例二培养基 7 8 9 8 8
本发明所制备的培养基，制作成本低廉，在使用时，培苗成活率达到了100％，分化率为市售培养基的1.5倍，培养周期短，组培苗在培养50天后可达到8cm左右，茎段粗壮，不但增加了组培苗的利用率，也增加了后续移栽的成活率，利用组培培养的方法，可以在短期内大大提高增殖系数，缩短繁殖时间，并且保持品种的优良特性。
上述实施例是对本发明的说明，不是对本发明的限定，任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种蓝莓增殖培养基，其特征在于：包括初代培养基和继代培养基，所述初代培养基包括基本培养基、0.8～1.2mg/L的ZT、0.08～0.12mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂，所述继代培养基包括基本培养基、0.4～0.6mg/L的ZT、0.04～0.06mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂。
2.如权利要求1所述的一种蓝莓增殖培养基，其特征在于：所述基本培养基包括675～825mg/L的NH4NO3、445～545mg/L的K2SO4、570～690mg/L的KNO3、280～340mg/L的MgSO4·7H2O、125～155mg/L的KH2PO4、250～310mg/L的Ca(NO3)2·4H2O、175～215mg/L的Cacl2·2H2O、5～7mg/L的H3BO3、15～20mg/L的MnSO4·H2O、7.5～9.5mg/L的ZnSO4·7H2O、0.15～0.35mg/L的Na2MoO4·2H2O、0.15～0.35mg/L的CuSO4·5H2O、35～40mg/L的Na2·EDTA、25～30mg/L的FeSO4·7H2O、80～120mg/L的肌醇、0.4～0.6mg/L的维生素B5、0.4～0.6mg/L的盐酸吡哆醇、0.8～1.2mg/L的盐酸硫胺素以及1.5～2.5mg/L的甘氨酸。
3.如权利要求1所述的一种蓝莓增殖培养基，其特征在于：所述初代培养基和继代培养基的PH均调节至5.0～5.3。
4.一种蓝莓的增殖培养方法，其特征在于包括如下步骤：
a)培养基的制备：在基本培养基内加入0.8～1.2mg/L的ZT、0.08～0.12mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂从而得到初代培养基，在基本培养基内加入0.4～0.6mg/L的ZT、0.04～0.06mg/L的IBA、25～35mg/L的蔗糖以及5.5～7.5mg/L的琼脂从而得到继代培养基；
b)诱导侧芽萌发：将蓝莓外植体进行清洗和消毒后，接种到步骤a)中所制备的初代培养基中进行诱导分化，得到蓝莓初代组培苗；
c)增殖培养：将步骤b)中所制备的蓝莓初代组培苗进行修剪后，接种到步骤a)中所制备的继代培养基中进行继代培养，得到蓝莓继代组培苗。
5.如权利要求4所述的一种蓝莓的增殖培养方法，其特征在于：所述步骤b)中，蓝莓外植体的诱导分化条件为前6～8天暗培养，温度为20～24℃，随后更改为光培养，光照强度为2500～3000lx，每日光照时长为10～14h，温度为23～27℃，总培养时长为35～45天。
6.如权利要求4所述的一种蓝莓的增殖培养方法，其特征在于：所述步骤c)中，蓝莓初代组培苗修剪至1.3～1.7cm。
7.如权利要求4所述的一种蓝莓的增殖培养方法，其特征在于：所述步骤c)中，蓝莓初代组培苗的继代培养条件为光培养，光照强度为2800～3200lx，每日光照时长为14～18h，温度为23～27℃，培养时长为40～60天。
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Denomination of invention: The invention relates to a blueberry proliferation medium and a proliferation culture method thereof

Effective date of registration: 20220316

Granted publication date: 20210305

Pledgee: Shaoxing Bank Co.,Ltd. Zhuji sub branch

Pledgor: Zhejiang LanMei Technology Co.,Ltd.

Registration number: Y2022980002651