CN111807525A - 一种微生物底质改良剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种微生物底质改良剂，其原料质量份数组成为益生菌发酵菌粉20～30份、牡蛎粉30～50份、环糊精5～10份、高活性钙2～5份、羧甲基纤维素钠1～2份、沸石粉4～10份。本发明通过益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉、牡蛎粉、环糊精组合成的改底剂，能够快速分解池底的残饵、粪便，通过水质改良来防止养殖对象水体环境的恶化和病毒病的发生，从而让养殖对象少生病或不生病，减少发病率，提高养殖质量；利用好氧菌和厌氧菌微生物间的协同作用，有效吸附池底的氨氮、亚硝酸盐、藻毒素等物质，起到净化水质的作用；该发明生产工艺简单，生产成本低，便于规模化推广应用。

Description

一种微生物底质改良剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种微生物底质改良剂，尤其是一种益生菌混菌发酵制备具有显著改良水产养殖底质的益生菌发酵改良剂，属于微生物改良剂技术领域。
背景技术
近年来，随着集约化养殖模式的发展使得残饵、粪便和大量动植物残骸长期堆积在池塘底部，进而使得淤泥变厚、水质恶化、病害频发。池塘是水产动物生活栖息的场所，其环境条件的好坏将直接影响水产动物的成活率和生长速度。俗话说“养鱼先养水、养水先改底”，池塘底质好，则水质自然会好，因而改善底质是改善水质的基础，底质的好坏直接影响水质，水质的好坏是底质的表现形式。为了充分发挥底泥积极的生态功能，抑制其有害微生物的消极作用，改善底部微生态结构，必须定期进行池塘底质改良。
目前市面上常见的改底剂的主要作用原理是通过强氧化作用将底泥中的有机物进行氧化分解，其有效成分是二氧化氯、强氯精、过氧碳酸钠、过硫酸氢钾等氧化性较强的物质，这些产品对改善养殖池塘底部的环境有一定的作用，但存在明显的缺点:首先，产品从投入池塘到完全崩解的时间过短，一般不超过3个小时，这样使大部分有效成分溶解到水中，并随着水流的交换逐渐扩散到水的中上层，因此不能有效的分解池塘底泥中的有机物；其次，这类产品在生产过程中添加了大量的化学辅料，长期使用会使这些物质过多的积累，必将对养殖水体造成二次污染。
目前底质改良剂不断推陈出新，如专利201811246324.8公开了一种水产养殖池塘底质改良剂，包括质量分数如下的组分：复合微生物菌体0.05～0.3份；Al2O3@TiO2复合载体5～20份；石英粉3～10份，本发明加入石英粉与Al2O3@TiO2复合载体同时使用，对微生物菌体的吸附及传质效果更好，且多种有协同降解功能的菌种的混合使用，减少中间产物的积累，实现有机物的完全矿化；专利201711426392.8公开了一种用于水产养殖的水体补钙、除臭、改良池底的粉剂，按重量份数计包含以下组分：沸石粉50-80份、碳酸钙10-30份、高活性钙0.1-2份、氯化钙10-20份、复合芽孢杆菌0.01-0.2份以及过氧化钙0.1-3份；本发明通过沸石粉、碳酸钙、高活性钙、氯化钙、复合芽孢杆菌以及过氧化钙组合成的改底剂，能够快速分解池底的残饵、粪便，采用复合芽孢杆菌，能够有效吸附池底的氨氮、亚硝酸盐、藻毒素等有害物质，起到补钙除臭的作用，通过水质改良来防止养殖对象水体环境的恶化和病毒病的发生，从而让养殖对象少生病或不生病，减少发病率，提高养殖质量。但在目前的底质改良剂仍难以满足水产养殖的需要，仍存在改良效果仍需进一步提升、使用成本仍需进一步降低等技术弊端，亟需开发要一种新型的微生物底质改良剂，显著提高底质改良的技术效果，尤其是通过底质改良预防水产养殖动物疾病的发生。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明提供一种微生物底质改良剂，采用现代生物混菌发酵技术，显著提高底质改良的技术效果，并通过微生物的作用，净化活化水质，有效分解水中的粪便，进而有效的预防水产养殖动物疾病的发生。
本发明通过下述技术方案实现上述技术效果：
一种微生物底质改良剂，其原料质量份数组成为：益生菌发酵菌粉20～30份、牡蛎粉30～50份、环糊精5～10份、高活性钙2～5份、羧甲基纤维素钠1～2份、沸石粉4～10份。
优选的，一种微生物底质改良剂，其原料质量份数组成为：益生菌发酵菌粉22份、牡蛎粉42份、环糊精9份、高活性钙3份、羧甲基纤维素钠1.8份、沸石粉5份。
进一步的，上述益生菌发酵菌粉包括酿酒酵母、芽孢杆菌和乳杆菌混合菌剂的发酵菌粉。
进一步的，所述酿酒酵母购于广东省微生物菌种保藏中心，编号为GDMCC 2.167。
进一步的，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌中的一种或几种的混合菌剂。
优选的，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌均购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；编号分别为CGMCC1.2163、CGMCC1.0809和CGMCC1.2009。
进一步的，所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的一种或两种的混合菌，其中干酪乳杆菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；编号分别为CGMCC1.159；嗜酸乳杆菌购自广东省微生物菌种保藏中心，编号为GDMCC1.208
进一步的，所述益生菌发酵菌粉的制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
上述芽孢杆菌种子液的制备工艺为：将活化后的芽孢杆菌接种至种子培养基，所述种子培养基的组分为：葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母膏1%、硫酸镁0.01%、硫酸锰0.003%，pH6.5～7.0，在温度28～37℃、转速150～3000rpm条件下,培养16～24h，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
上述芽孢杆菌活化的工艺为：采用本领域常用培养基LB固体培养基，在温度28～37℃条件下,培养16～24h。
上述酵母菌种子液制备方法为：在无菌操作条件下，从酵母菌YDP斜面上用接种环挑取两环菌种，接种到500mL装300mLPDA液体培养基的三角瓶内，28℃～32℃，140r/min振荡培养24h后，然后按照上述工艺接种种子罐扩大培养制备酵母菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
最优的，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:1:2。
最优的，所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:3。
本发明还提供一种微生物底质改良剂的制备方法，具体包括如下步骤：
（1）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（2）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（3）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（4）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂。
本发明提供一种微生物底质改良剂，与现有技术相比，具有以下显著优势：
（1）本发明通过益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉、牡蛎粉、环糊精组合成的改底剂，能够快速分解池底的残饵、粪便，通过水质改良来防止养殖对象水体环境的恶化和病毒病的发生，从而让养殖对象少生病或不生病，减少发病率，提高养殖质量；
（2）本申请利用好氧菌（酿酒酵母、芽孢杆菌）和厌氧菌（干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌）共同发酵制备益生菌发酵菌剂，通过微生物间的协同作用，有效吸附池底的氨氮、亚硝酸盐、藻毒素等物质，起到净化水质的作用；同时，实验结果表明微生物间的协同作用对微生物改良剂的作用效果影响显著；
（3）本申请将牡蛎壳粉应用于饲料添加剂，牡蛎壳含大量2-10μm微孔结构,含有多种生物活性的氨基多糖及特性蛋白,具有较强的吸附能力,能容纳一定大小的分子，牡蛎壳粉与β-环糊精交联，能够很好的吸附和包裹益生菌、高活性钙、羧甲基纤维素钠和沸石粉，构建了稳定的微生物改良剂体系，提升了改良剂的作用效果，延长了饲料添加剂的作用时间；
（4）本申请微生物底质改良剂生产工艺简单，据统计生产成本较常规底质改良剂降低30%以上，便于规模化推广应用。
具体实施方式
在以下实施例中，芽孢杆菌种子液的制备工艺为：将活化后的芽孢杆菌接种至种子培养基，所述种子培养基的组分为：葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母膏1%、硫酸镁0.01%、硫酸锰0.003%，pH6.5～7.0，在温度28～37℃、转速150～3000rpm条件下,培养16～24h，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL；其中芽孢杆菌活化的工艺为：采用本领域常用培养基LB固体培养基，在温度28～37℃条件下,培养16～24h。
酵母菌种子液制备方法为：在无菌操作条件下，从酵母菌YDP斜面上用接种环挑取两环菌种，接种到500mL装300mLPDA液体培养基的三角瓶内，28℃～32℃，140r/min振荡培养24h后，然后按照上述工艺接种种子罐扩大培养制备酵母菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
所述酿酒酵母购于广东省微生物菌种保藏中心，编号为GDMCC2.167；所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌均购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；编号分别为CGMCC1.2163、CGMCC1.0809和CGMCC1.200；所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的一种或两种的混合菌，其中干酪乳杆菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；编号分别为CGMCC1.159；嗜酸乳杆菌购自广东省微生物菌种保藏中心，编号为GDMCC1.208
实施例1
一种微生物底质改良剂，制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
（6）配料：按益生菌发酵菌粉22份、牡蛎粉42份、环糊精9份、高活性钙3份、羧甲基纤维素钠1.8份、沸石粉5份比例精准配料；
（7）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（8）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（9）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（10）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂；
所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:1:2；所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:3。
实施例2
一种微生物底质改良剂，制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
（6）配料：按益生菌发酵菌粉30份、牡蛎粉30份、环糊精5份、高活性钙2份、羧甲基纤维素钠1份、沸石粉4份比例精准配料；
（7）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（8）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（9）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（10）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂；
所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:1:2；所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:3。
实施例3
一种微生物底质改良剂，制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
（6）配料：按益生菌发酵菌粉30份、牡蛎粉30份、环糊精5份、高活性钙2份、羧甲基纤维素钠1份、沸石粉4份比例精准配料；
（7）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（8）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（9）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（10）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂；
所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:1:2；所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:3。
实施例4
一种微生物底质改良剂，制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
（6）配料：按益生菌发酵菌粉22份、牡蛎粉42份、环糊精9份、高活性钙3份、羧甲基纤维素钠1.8份、沸石粉5份比例精准配料；
（7）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（8）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（9）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（10）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂；
所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的混合菌剂，其接种比例为1:2:1；所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌的混合菌剂，其接种比例为3:2。
实施例5
一种微生物底质改良剂，制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
（6）配料：按益生菌发酵菌粉22份、牡蛎粉42份、环糊精9份、高活性钙3份、羧甲基纤维素钠1.8份、沸石粉5份比例精准配料；
（7）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（8）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（9）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（10）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂；
所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌；所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:3。
实施例6
一种微生物底质改良剂，制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
（6）配料：按益生菌发酵菌粉22份、牡蛎粉42份、环糊精9份、高活性钙3份、羧甲基纤维素钠1.8份、沸石粉5份比例精准配料；
（7）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（8）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（9）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（10）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂；
所述芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌和；所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:3。
实施例7
一种微生物底质改良剂，制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
（6）配料：按益生菌发酵菌粉22份、牡蛎粉42份、环糊精9份、高活性钙3份、羧甲基纤维素钠1.8份、沸石粉5份比例精准配料；
（7）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（8）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（9）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（10）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂；
所述芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌，所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:3。
实施例8
一种微生物底质改良剂，制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
（6）配料：按益生菌发酵菌粉22份、牡蛎粉42份、环糊精9份、高活性钙3份、羧甲基纤维素钠1.8份、沸石粉5份比例精准配料；
（7）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（8）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（9）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（10）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂；
所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:1:2；所述乳杆菌为干酪乳杆菌。
实施例9
一种微生物底质改良剂，制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
（6）配料：按益生菌发酵菌粉22份、牡蛎粉42份、环糊精9份、高活性钙3份、羧甲基纤维素钠1.8份、沸石粉5份比例精准配料；
（7）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（8）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（9）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（10）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂；
所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:1:2；所述乳杆菌为嗜酸乳杆菌。
实施例10
实验动物：南美白对虾；
地址：青岛贝宝海洋科技有限公司琅邪养殖基地；
实验组：采用空白作为对照组，分析实施例1-9及对比实施例1-2的微生物底质改良剂分别按照每亩200克的粉剂量，加水稀释每周一次全池泼洒；其中对比实施例1不含好氧发酵，其余同实施例1，对比实施例2不含厌氧发酵，其余同实施例1；养殖时间30d，测试结果如下表所示：
表1 南美白对虾养殖实验结果
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上述实验结果表明，实施例1微生物底质改良剂可以对水质COD具有显著的降解作用，说明了实施例1微生物底质改良剂可以显著的净化水质，并可有效降低水产养殖的缺钙症和应激反应发病率，与空白对照组相比差异极显著（P<0.01）；实施例2-3实验结果表明微生物底质改良剂的原料组成对改良剂的预防疾病和净化水质影响显著；实施例4实验结果表明发酵菌种的配伍比例对改良剂的预防疾病和净化水质影响显著；实施例5-7实验结果表明采用单一的芽孢杆菌发酵时会显著降低产品的预防疾病和净化水质技术效果，尤其是实施例7实验结果表明采用单一凝结芽孢杆菌发酵时并没有显著的提升作用，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌具有显著的协同增效作用，并取得了“1+1>2”的技术效果；实施例8-9实验结果表明干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌具有显著的协同增效作用。综合比较，实施例1为本发明最佳实施例。
实施例11
测定本发明产品对淡水养殖鲫鱼氨氮和亚硝酸盐的影响，实验方法同上。实验结果如表2所示：
表2 淡水养殖鲫鱼实验结果
Figure DEST_PATH_IMAGE004AAAAAA
上述实验结果表明，实施例1微生物底质改良剂可以对淡水鲫鱼养殖时可以显著降低养殖水质中的氨氮和亚硝酸盐氮含量，与对照组相比差异极显著（P<0.01）；实施例2-3实验结果表明微生物底质改良剂的原料组成会显著降低产品对水质的改善作用，水中氨氮和亚硝酸盐氮显著高于实施例1；实施例4实验结果表明改变底质改良剂的菌种配伍比例后，产品对水质的改良作用显著降低，尤其是对亚硝酸盐氮的改良作用影响极显著；实施例5-7实验结果表明采用单一的芽孢杆菌发酵时会显著降低产品的水质改良功效，说明了枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌间具有显著的协同增效作用；实施例8-9实验结果表明干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌同样具有显著的协同增效作用。综上，本发明产品对养殖水质具有显著的改良作用，可以显著降低养殖水中的氨氮和亚硝酸盐氮的含量，但改良效果受菌种组成及配伍比例影响显著，以实施例1为本发明最佳实施例。
以上实施例仅用于说明本发明的技术方案，而非对其进行限制；尽管参照前述实施例对被发明进行了详细的说明，但对于本领域的普通技术人员来说，依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而对这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明所要求保护的技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种微生物底质改良剂，其特征在于原料质量份数组成为：益生菌发酵菌粉20～30份、牡蛎粉30～50份、环糊精5～10份、高活性钙2～5份、羧甲基纤维素钠1～2份、沸石粉4～10份。
2.根据权利要求1所述的一种微生物底质改良剂，其特征在于所述底质改良剂原料质量份数组成为：益生菌发酵菌粉22份、牡蛎粉42份、环糊精9份、高活性钙3份、羧甲基纤维素钠1.8份、沸石粉5份。
3.根据权利要求1所述的一种微生物底质改良剂，其特征在于所述益生菌发酵菌粉包括酿酒酵母、芽孢杆菌和乳杆菌混合菌剂的发酵菌粉；所述酿酒酵母购于广东省微生物菌种保藏中心，编号为GDMCC 2.167；所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌中的一种或几种的混合菌剂。
4.根据权利要求3所述的一种微生物底质改良剂，其特征在于所述所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌均购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；编号分别为CGMCC1.2163、CGMCC1.0809和CGMCC1.2009。
5.根据权利要求3所述的一种微生物底质改良剂，其特征在于所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的一种或两种的混合菌，其中干酪乳杆菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；编号分别为CGMCC1.159；嗜酸乳杆菌购自广东省微生物菌种保藏中心，编号为GDMCC1.208。
6.根据权利要求1所述的一种微生物底质改良剂，其特征在于所述益生菌发酵菌粉的制备工艺具体包括如下步骤：
（1）发酵液制备：按照质量百分比麸皮2%、豆粕2%、蛋白胨1%、玉米浆1%、磷酸二氢钾0.02%、磷酸氢二钾0.01%、硫酸镁0.02%、氯化钙0.01%，余量比为水的比例配制液体发酵液，调节pH至6.5～7.0；
（2）好氧发酵：接种酿酒酵母和芽孢杆菌种子液，接种量分别为1.5%、4%，控制发酵温度28～37℃，转速150～300rpm；在此发酵条件下发酵24h；
（3）厌氧发酵：好氧发酵结束后，接种乳杆菌菌粉，接种量为3%，发酵温度28～37℃，控温厌氧发酵12h；
（4）低温浓缩：厌氧发酵结束后对发酵液进行低温浓缩；
（5）吸附干燥：浓缩后用0.5倍质量比的麸皮吸附，在40～60℃鼓风干燥机中干燥，水分控制在8～10%，即得益生菌发酵菌粉。
7.根据权利要求6所述的一种微生物底质改良剂，其特征在于所述芽孢杆菌种子液的制备工艺为：将活化后的芽孢杆菌接种至种子培养基，所述种子培养基的组分为：葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母膏1%、硫酸镁0.01%、硫酸锰0.003%，pH6.5～7.0，在温度28～37℃、转速150～3000rpm条件下,培养16～24h，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL；所述芽孢杆菌活化的工艺为：采用本领域常用培养基LB固体培养基，在温度28～37℃条件下,培养16～24h；所述酵母菌种子液制备方法为：在无菌操作条件下，从酵母菌YDP斜面上用接种环挑取两环菌种，接种到500mL装300mLPDA液体培养基的三角瓶内，28℃～32℃，140r/min振荡培养24h后，然后按照上述工艺接种种子罐扩大培养制备酵母菌种子液，要求种子液的有效活菌数≥109cfu/mL。
8.根据权利要求7所述的一种微生物底质改良剂，其特征在于所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:1:2。
9.根据权利要求7所述的一种微生物底质改良剂，其特征在于所述乳杆菌为干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌的混合菌剂，其接种比例为2:3。
10.根据权利要求1所述的一种微生物底质改良剂，其特征在于所述微生物底质改良剂的制备方法具体包括如下步骤：
（1）制备牡蛎粉颗粒，先将牡蛎壳粉进行超声震荡，分别形成40～80nm的颗粒；
（2）将牡蛎粉加入质量比10倍的去离子水，然后加入环糊精，搅拌分散均匀，得到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（3）将益生菌发酵菌粉、高活性钙、羧甲基纤维素钠、沸石粉按比例加入到牡蛎粉与环糊精的混合溶液；
（4）混合后在60～65℃下加热、超声振荡1～2h后，冷却、过滤、低温真空烘干，得到微生物底质改良剂。
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