CN111802378B - 一种smile来源人角膜透镜的保护液以及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种SMILE来源人角膜透镜的保护液以及制备方法,该保护液的配方为每升含高分子抑制水肿剂17.1~60g/L,羟丙基甲基纤维素0.1~1g/L,聚乙烯基吡咯烷酮0.1~0.5g/L,重组人血清白蛋白0.1~5g/L,复合抗氧化剂0.006~3g/L,抗菌剂0.005~0.02g/L,缓冲液11.5~17g/L,注射用水1L。其中,高分子抑制水肿剂复配重组人血清白蛋白能够抑制角膜透镜的溶胀,羟丙基甲基纤维素和透明质酸钠在角膜透镜表面形成“氢键缔合”有效抑制角膜透镜的损伤延伸维持角膜透镜组织的胶原纤维结构和透明性,从而解决了SMILE手术取出的角膜透镜损伤难以继续利用的技术问题,具有非常重要的社会及经济价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种SMILE来源人角膜透镜的保护液以及制备方法。
背景技术
角膜病变是我国第二位致盲眼病,根据世界卫生组织统计,全球现约有6000万的角膜疾病患者,其中约500万为我国患者,并且每年全球新增角膜疾病患者多达15万人。目前,角膜移植仍然是恢复视力的主要手段,然而我国角膜材料严重匮乏,与庞大的需求相比,杯水车薪。虽然,如今已有两种脱细胞猪角膜产品被中国食药局批准,但其临床应用后存在移植物透明度不佳,视力恢复延迟等诸多问题。
飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术(Small Incision Lenticule Extraction,SMILE)是近年来角膜屈光手术领域最大的发展之一,其将分秒激光精准定位的立体切割技术用于近视及散光的矫正,具有极高的安全性、有效性、稳定性及可预测性。SMILE手术是在角膜基质层内特定深度切割出一定大小和厚度的角膜透镜,角膜透镜的直径一般为6.0~6.6mm,中央厚度为60~150μm,边缘厚度为10~30μm。这部分通过SMILE手术从角膜基质层内取出的组织我们称为“角膜透镜”。每年我国开展的SMILE手术约一百万台,SMILE来源的角膜透镜量非常丰富。研究表明,角膜透镜预期可用于矫正远视和近视、治疗老视,以及用于治疗圆锥角膜、角膜营养不良、角膜溃疡、角膜穿孔、边缘角膜变性(周边角膜的免疫性、非感染性疾病)、角膜基质变薄等角膜疾病,还可以利用其构建组织工程化生物角膜的载体等,应用前景广阔。
然而,SMILE手术取出的角膜透镜,可能由于激光原因或分离角膜透镜时受到钝性分离的牵引力略有所不同的原因,导致角膜透镜的边缘部位发生损伤,这种损伤随着时间的推移可能向角膜透镜中心部位蔓延,导致角膜透镜的溶胀,其胶原纤维结构发生改变,从而影响其透明性,继而影响其后期的应用。因此,以往SMILE手术中取出的角膜透镜这一“副产品”往往被拋弃,并未得到有效的利用。
发明内容
针对上述存在的问题及考虑到角膜透镜具有广泛的临床应用前景,本发明提供本发明提供一种SMILE来源人角膜透镜的保护液以及制备方法,将SMILE手术取出的角膜透镜经该保护液处理后,有效抑制角膜透镜的溶胀以及损伤,极大程度地维护和维持角膜透镜的胶原纤维结构和透明性。具体技术方案如下:
一种SMILE来源人角膜透镜的保护液,每升保护液的配方组分及含量如下:
高分子抑制水肿剂 17.1~60g/L,
羟丙基甲基纤维素 0.1~1g/L,
聚乙烯基吡咯烷酮 0.1~0.5g/L,
重组人血清白蛋白 0.1~5g/L,
复合抗氧化剂 0.006~3g/L,
抗菌剂 0.005~0.02g/L,
缓冲液11.5~17g/L,
注射用水 1L。
前述的SMILE来源人角膜透镜的保护液,所述高分子抑制水肿剂具体包括如下含量的组分:硫酸软骨素钠 15~30g/L,透明质酸钠 0.1~5g/L,右旋糖酐40 1~15g/L,右旋糖酐70 1~10g/L。
前述的SMILE来源人角膜透镜的保护液,所述重组人血清白蛋白医药级别的非动物源重组人血清白蛋白。
前述的SMILE来源人角膜透镜的保护液,所述复合抗氧化剂由维生素C、N-乙酰半胱氨酸和谷胱甘肽组成,各组分具体用量为:维生素C 0.002~1g/L,N-乙酰半胱氨酸0.002~1g/L,谷胱甘肽 0.002~1g/L。
前述的SMILE来源人角膜透镜的保护液,所述抗菌剂为硫酸庆大霉素,其用量为0.005~0.02g/L。
前述的SMILE来源人角膜透镜的保护液,所述缓冲液的组分包括氯化钠、碳酸氢钠和4-羟乙基哌嗪乙磺酸,各组分具体用量为:氯化钠 5.5~7g/L,碳酸氢钠 1~3 g/L,4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES) 5~7 g/L。
前述的SMILE来源人角膜透镜的保护液,该保护液的pH值为6.8~7.6,离子渗透压值为270~360mOsmol/kg,外观为无色至微黄色澄明液体,且无悬浮物、无沉淀。
前述的SMILE来源人角膜透镜的保护液,其制备方法包括步骤如下:
步骤1:称量:按上述保护液配方量分别称取各组分;
步骤2:配制:将各组分按一定的顺序加入配制罐中,加温搅拌,获得保护液中间品;
步骤3:中间品检测:用盐酸和或氢氧化钠溶液调整护液中间品pH值为6.8~7.6,并取样进行外观和渗透压检测,检测若不符合则对中间品进行调节直至合格;
步骤4:除菌过滤:经检测或调节合格的护液中间品经预过滤后,再进行除菌过滤,获得合格的保护液;
步骤5:灌封:将除菌过滤后的保护液灌装到低硼硅安瓿瓶或中硼硅安瓿瓶,然后加塞轧盖后,即可获得SMILE来源人角膜透镜的保护液成品。
其中,步骤2所述的配制包括如下子步骤:
步骤2-1:第一批投料:于配置罐内预先加入总配制量40v/v%注射用水,控制水温至50℃,分别投入硫酸软骨素钠、透明质酸钠、右旋糖酐40、右旋糖酐70、碳酸氢钠和4-羟乙基哌嗪乙磺酸原料;然后补注射用水至总配制量的50v/v%,并搅拌50min;
步骤2-2:第二批投料:控制水温至30℃,投入维生素C、N-乙酰半胱氨酸和谷胱甘肽,再次补注射用水至总配制量的66v/v%,并搅拌10min;
步骤2-3:第三批投料:控制水温至25℃,投入硫酸庆大霉素和重组人血清白蛋白,补注射用水定容,并搅拌10min。
步骤4所述的除菌过滤使用的过滤器优选使用规格为0.2μm的PES过滤器。
本发明的作用原理及有益效果:
本发明保护液以硫酸软骨素钠、透明质酸钠、右旋糖酐40、右旋糖酐70组成高分子抑制水肿剂复配重组人血清白蛋白能够形成胶体体系,最大限度的抑制角膜透镜的溶胀;保护液中的聚乙烯基吡咯烷酮可对羟丙基甲基纤维素和透明质酸钠起到稳定分散的作用,使得羟丙基甲基纤维素和透明质酸钠均匀分布,在角膜透镜表面的“氢键缔合”极大化,能够有效抑制角膜透镜的损伤延伸,从而维持角膜透镜组织的胶原纤维结构和透明性。因此,经本发明保护液处理的角膜透镜,能够极大程度维护维持角膜透镜的胶原纤维结构和透明性,解决了SMILE手术取出的角膜透镜损伤,难以利用的技术问题,为SMILE来源的角膜透镜的应用提供了强有力的技术支持,具有非常重要的社会及经济价值。
附图说明
图1为角膜透镜组织外观图;
其中:
a为新鲜角膜透镜外观图,
b为经无菌等渗磷酸缓冲液处理的角膜透镜外观图,
c为经角膜透镜保护液处理的角膜透镜外观图;
图2为角膜透镜组织切片显微镜电镜图;
其中:
a为新鲜角膜透镜组织切片显微镜电镜图,
b为经无菌等渗磷酸缓冲液处理的角膜透镜组织切片显微镜电镜图,
c为经角膜透镜保护液处理的角膜透镜组织切片显微镜电镜图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合实施例,对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例1~4为配制SMILE来源人角膜透镜的保护液,实施例5为效果例。
实施例1
本实施例为配制一种SMILE来源人角膜透镜的保护液,该保护液配方组分及含量如下:
硫酸软骨素钠 15g/L,
透明质酸钠 0.1g/L,
右旋糖酐40 1g/L,
右旋糖酐70 1g/L,
羟丙基甲基纤维素 0.1g/L,
聚乙烯基吡咯烷酮 0.1g/L,
重组人血清白蛋白 0.1g/L
维生素C 0.002g/L,
N-乙酰半胱氨酸 0.002g/L,
谷胱甘肽 0.002g/L,
硫酸庆大霉素 0.005/L,
氯化钠 5.5g/L,
碳酸氢钠 1g/L,
4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES) 5g/L,
注射用水,1L。
其中,硫酸软骨素钠、透明质酸钠、右旋糖酐40、右旋糖酐70,组成高分子抑制水肿剂,其复配重组人血清白蛋白能够形成胶体体系,能够最大限度的抑制角膜透镜的溶胀。另外,聚乙烯基吡咯烷酮可对羟丙基甲基纤维素和透明质酸钠起到稳定分散的作用,使得羟丙基甲基纤维素和透明质酸钠均匀分布,在角膜透镜表面的“氢键缔合”极大化,能够有效抑制角膜透镜的损伤延伸,从而维持角膜透镜组织的胶原纤维结构和透明性。此外,本实施例中所述的重组人血清白蛋白是购自华北制药股份有限公司生物技术分公司生产的医药级别的非动物源重组人血清白蛋白,其不含任何动物源成分,不含内毒素、病毒或者支原体等不容易检测及除去的外源污染,能为角膜组织提供安全的血清介质环境。
本实施例所述的SMILE来源人角膜透镜的保护液,具体配制过程如下:
步骤1:称量:按上述保护液配方量分别称取各组分。
步骤2:配制:将称取的各组分分三批投料配制,
首先,于配置罐内预先加入总配制量40v/v%注射用水,控制水温至50℃,分别投入硫酸软骨素钠、透明质酸钠、右旋糖酐40、右旋糖酐70、碳酸氢钠和4-羟乙基哌嗪乙磺酸原料;然后补注射用水至总配制量的50v/v%,并搅拌50min;
其次,控制水温至30℃,投入维生素C、N-乙酰半胱氨酸和谷胱甘肽,再次补注射用水至总配制量的66v/v%,并搅拌10min;
最后,控制水温至25℃,投入硫酸庆大霉素和重组人血清白蛋白,补注射用水定容,并搅拌10min。
步骤3:中间品检测:用盐酸和或氢氧化钠溶液调整护液中间品pH值为6.8~7.6,并取样进行外观和渗透压检测,检测若不符合则对中间品进行调节,例如pH值不合格,则加入盐酸和或氢氧化钠溶液调整继续调整,直至合格。
步骤4:除菌过滤:经检测或调节合格的护液中间品使用孔径较大过滤器进行初步预过滤后,再使用规格为0.2μm的PES过滤器进行除菌过滤,从而获得品质合格的保护液。
步骤5:灌封:将除菌过滤后的保护液灌装到低硼硅安瓿瓶或中硼硅安瓿瓶,然后加塞轧盖后,即可获得成品SMILE来源人角膜透镜的保护液。
实施例2
本实施例也是配制一种SMILE来源人角膜透镜的保护液,该保护液配制方法与实施例1一致,其配方组分及含量如下:
硫酸软骨素钠 30g/L,
透明质酸钠 5g/L,
右旋糖酐40 15g/L,
右旋糖酐70 10g/L,
羟丙基甲基纤维素 1g/L,
聚乙烯基吡咯烷酮 0.5g/L,
重组人血清白蛋白 5g/L,
维生素C 1g/L,
N-乙酰半胱氨酸 1g/L,
谷胱甘肽 1g/L,
硫酸庆大霉素 0.02g/L,
氯化钠 7g/L,
碳酸氢钠 3g/L,
4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES) 7g/L,
注射用水 1L。
实施例3
本实施例同样是配制一种SMILE来源人角膜透镜的保护液,该保护液配制方法与实施例1一致,其配方组分及含量如下:
硫酸软骨素钠 20g/L,
透明质酸钠 1g/L,
右旋糖酐40 10g/L,
右旋糖酐70 5g/L,
羟丙基甲基纤维素 0.5g/L,
聚乙烯基吡咯烷酮 0.3g/L,
重组人血清白蛋白 1g/L,
维生素C 0.02g/L,
N-乙酰半胱氨酸 0.2g/L,
谷胱甘肽 0.3g/L,
硫酸庆大霉素 0.01g/L,
氯化钠 6g/L,
碳酸氢钠 2g/L,
4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES) 6g/L,
注射用水 1L。
实施例4
本实施例还是配制一种SMILE来源人角膜透镜的保护液,该保护液配制方法与实施例1一致,其配方组分及含量如下:
硫酸软骨素钠 25g/L,
透明质酸钠 1.5g/L,
右旋糖酐40 8g/L,
右旋糖酐70 4g/L,
羟丙基甲基纤维素 0.3g/L,
聚乙烯基吡咯烷酮 0.2g/L,
重组人血清白蛋白 1g/L,
维生素C 0.05g/L,
N-乙酰半胱氨酸 0.1g/L,
谷胱甘肽 0.15g/L,
硫酸庆大霉素 0.02g/L,
氯化钠 6.4g/L,
碳酸氢钠 2.2g/L,
4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES) 6.1g/L,
注射用水 1L。
实施例7 效果例
任意取实施例1~4配制的保护液对收集SMILE来源人角膜透镜进行处理,同时采用无菌等渗磷酸缓冲液处理相同来源的来源人角膜透镜作为对比。分别处理4h后,再用无菌等渗磷酸缓冲液反复冲洗后,进行外观和组织切片指标检测;外观指标检测为将角膜透镜置于自然光或日光灯下,目力观察其外观;组织切片指标检测为将冲洗后的角膜透镜浸泡在4%多聚甲醛进行超微结构-组织切片观察。结果如图1和图2所示:
外观检测显示,经角膜透镜保护液处理的角膜透镜外观均为中央平整、光滑、透明、无水肿和浑浊现象,与新鲜角膜透镜外观无差异;而经无菌等渗磷酸缓冲液处理的角膜透镜出现水肿、增厚和浑浊。而显微镜下观察显示,经纤维蛋白胶保护处理的角膜透镜无增厚和水肿,并且胶原纤维排列整齐、紧密,与新鲜角膜透镜外观无显著差异;而未经胶原蛋白胶处理的角膜透镜有水肿现象,角膜透镜中央厚,角膜纤维结构松散、规则性较差。
对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的。此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非只包含一个的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (5)
1.一种SMILE来源人角膜透镜的保护液,其特征在于:该保护液的配方及每升组分含量如下:
高分子抑制水肿剂 17.1~60g/L,
羟丙基甲基纤维素 0.1~1g/L,
聚乙烯基吡咯烷酮 0.1~0.5g/L,
重组人血清白蛋白 0.1~5g/L,
复合抗氧化剂 0.006~3g/L,
抗菌剂 0.005~0.02g/L,
缓冲液11.5~17g/L,
注射用水 1L;
其中,
所述高分子抑制水肿剂具体包括如下含量的组分:硫酸软骨素钠 15~30g/L,透明质酸钠 0.1~5g/L,右旋糖酐40 1~15g/L,右旋糖酐70 1~10g/L;
所述重组人血清白蛋白医药级别的非动物源重组人血清白蛋白;
所述复合抗氧化剂由维生素C、N-乙酰半胱氨酸和谷胱甘肽组成,各组分具体用量为:维生素C 0.002~1g/L,N-乙酰半胱氨酸 0.002~1g/L,谷胱甘肽 0.002~1g/L;
所述缓冲液的组分包括氯化钠、碳酸氢钠和4-羟乙基哌嗪乙磺酸,各组分具体用量为:氯化钠 5.5~7g/L,碳酸氢钠 1~3 g/L,4-羟乙基哌嗪乙磺酸 5~7 g/L。
2.根据权利要求1所述的SMILE来源人角膜透镜的保护液,其特征在于:所述抗菌剂为硫酸庆大霉素,其用量为0.005~0.02g/L。
3.根据权利要求1所述的SMILE来源人角膜透镜的保护液,其特征在于:该保护液的pH值为6.8~7.6,离子渗透压值为270~360mOsmol/kg,外观为无色至微黄色澄明液体,且无悬浮物、无沉淀。
4.一种根据权利要求1~3任意一项所述的SMILE来源人角膜透镜的保护液制备方法,其特征在于:包括步骤如下:
步骤1:称量:按上述保护液配方量分别称取各组分;
步骤2:配制:将各组分按一定的顺序加入配制罐中,加温搅拌,获得保护液中间品;具体包括如下子步骤:
步骤2-1:第一批投料:于配置罐内预先加入总配制量40v/v%注射用水,控制水温至50℃,分别投入硫酸软骨素钠、透明质酸钠、右旋糖酐40、右旋糖酐70、碳酸氢钠和4-羟乙基哌嗪乙磺酸原料;然后补注射用水至总配制量的50v/v%,并搅拌50min;
步骤2-2:第二批投料:控制水温至30℃,投入维生素C、N-乙酰半胱氨酸和谷胱甘肽,再次补注射用水至总配制量的66v/v%,并搅拌10min;
步骤2-3:第三批投料:控制水温至25℃,投入硫酸庆大霉素和重组人血清白蛋白,补注射用水定容,并搅拌10min;
步骤3:中间品检测:用盐酸和或氢氧化钠溶液调整护液中间品pH值为6.8~7.6,并取样进行外观和渗透压检测,检测若不符合则对中间品进行调节直至合格;
步骤4:除菌过滤:经检测或调节合格的护液中间品经预过滤后,再进行除菌过滤,获得合格的保护液;
步骤5:灌封:将除菌过滤后的保护液灌装到低硼硅安瓿瓶或中硼硅安瓿瓶,然后加塞轧盖后,即可获得SMILE来源人角膜透镜的保护液成品。
5.根据权利要求4所述的SMILE来源人角膜透镜的保护液制备方法,其特征在于:步骤4中,所述除菌过滤使用的过滤器为规格为0.2μm的PES过滤器。
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