CN111781355B - 用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质在制备诊断产品中的应用 - Google Patents

用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质在制备诊断产品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了用于检测淀粉样蛋白前体β‑分解酶1的物质在制备诊断产品中的应用，所述诊断产品具体为用于鉴别阿尔兹海默和晚期神经梅毒的产品。本发明的利用血浆中淀粉样蛋白前体β‑分解酶1浓度来鉴别阿尔兹海默病和晚期神经梅毒，操作方便、稳定性强、灵敏度高，能够利用本发明的技术检测出患者的病因，避免误诊，有助于对症治疗。

Description

用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质在制备诊断产品 中的应用
技术领域
本发明涉及用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质在制备诊断产品中的应用，所述诊断产品具体为用于鉴别阿尔兹海默和晚期神经梅毒的产品。
背景技术
阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,简称AD)主要临床表现为认知功能下降、精神症状和行为障碍、日常生活能力的逐渐下降等症状。
梅毒是由梅毒螺旋体侵入人体后引起的一种全身性、感染性疾病。神经梅毒的临床表现亦是复杂多变，症状无特异性，几乎包括神经病学中的所有各种症状与体征，可出现神经科、眼科、皮肤科、精神科等科相似的临床表现，因此对神经梅毒的误诊率高，如出现癫痫、智能障碍等可能被误诊。
因此，在老年人群中患有神经梅毒的患者与阿尔兹海默病的患者的临床表现出相似的症状，导致无法确诊真正的病因。因此，阿尔兹海默病和神经梅毒的正确诊断非常重要。目前并没有明确的方法来区分阿尔兹海默病和神经梅毒。
发明内容
本发明的目的是提供用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质在制备诊断产品中的应用，所述诊断产品具体为用于鉴别阿尔兹海默和晚期神经梅毒的产品。
本发明要求保护用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质在制备诊断产品中的应用，所述产品的功能为诊断或辅助诊断阿尔兹海默或晚期神经梅毒。以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值诊断为阿尔兹海默，如果血浆中的BACE1浓度小于等于阈值诊断为晚期神经梅毒。
本发明还保护用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质在制备诊断产品中的应用，所述产品的功能为鉴别或辅助鉴别阿尔兹海默患者和晚期神经梅毒患者。以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值诊断为阿尔兹海默患者，如果血浆中的BACE1浓度小于等于阈值诊断为晚期神经梅毒患者。
本发明还保护用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质在制备诊断产品中的应用，所述产品的功能为诊断或辅助诊断阿尔兹海默。以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值诊断为阿尔兹海默。
本发明还保护用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质在制备诊断产品中的应用，所述产品的功能为诊断或辅助诊断晚期神经梅毒。以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度小于等于阈值诊断为晚期神经梅毒。
本发明还保护用于检测血浆中淀粉样蛋白前体β-分解酶1浓度的物质和记载于判断标准的载体在制备诊断产品中的应用；所述产品的功能为鉴别或辅助鉴别阿尔兹海默患者和晚期神经梅毒患者；所述判断标准为：以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值判断为阿尔兹海默患者，如果血浆中的BACE1浓度小于等于阈值判断为晚期神经梅毒患者。
本发明还保护一种产品，包括用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质；所述产品的功能为诊断或辅助诊断阿尔兹海默或晚期神经梅毒。所述产品还包括记载有如下判断标准的载体：以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值诊断为阿尔兹海默，如果血浆中的BACE1浓度小于等于阈值诊断为晚期神经梅毒。
本发明还保护一种产品，包括用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质；所述产品的功能为鉴别或辅助鉴别阿尔兹海默患者和晚期神经梅毒患者。所述产品还包括记载有如下判断标准的载体：以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值诊断为阿尔兹海默患者，如果血浆中的BACE1浓度小于等于阈值诊断为晚期神经梅毒患者。
本发明还保护一种产品，包括用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质；所述产品的功能为诊断或辅助诊断阿尔兹海默。所述产品还包括记载有如下判断标准的载体：以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值诊断为阿尔兹海默。
本发明还保护一种产品，包括用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质；所述产品的功能为诊断或辅助诊断晚期神经梅毒。所述产品还包括记载有如下判断标准的载体：以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度小于等于阈值诊断为晚期神经梅毒。
本发明还保护一种产品，包括用于检测血浆中淀粉样蛋白前体β-分解酶1浓度的物质和记载于判断标准的载体；所述产品的功能为鉴别或辅助鉴别阿尔兹海默患者和晚期神经梅毒患者；所述判断标准为：以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值判断为阿尔兹海默患者，如果血浆中的BACE1浓度小于等于阈值判断为晚期神经梅毒患者。
以上任一所述检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质为检测血浆中淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质。
以上任一所述检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质为β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1、生物素标记的抗β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1抗体和过氧化物酶标记的链霉亲和素。
以上任一所述检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质为β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1检测试剂盒。
以上任一所述检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质具体可为欧蒙医学实验诊断股份公司的货号为EQ 6541-9601-L的试剂盒。
以上任一所述晚期神经梅毒患者为晚期神经梅毒患者中发生麻痹性痴呆的患者。
以上任一所述晚期神经梅毒患者为晚期神经梅毒患者中发生麻痹性痴呆的患者(萎缩型)。
本发明的利用血浆中淀粉样蛋白前体β-分解酶1浓度来鉴别阿尔兹海默病和晚期神经梅毒，操作方便、稳定性强、灵敏度高，能够利用本发明的技术检测出患者的病因，避免误诊，有助于对症治疗。
附图说明
图1为AD患者和晚期神经梅毒患者的血浆中的BACE1浓度。
图2为血浆BACE1鉴别AD和AFGP受试者工作曲线。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。室温为18-25℃。淀粉样蛋白前体β-分解酶1(又称为β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1)，用BACE1表示。
用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的试剂盒，为欧蒙医学实验诊断股份公司的β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1检测试剂盒(批号为E170206BP，货号为EQ 6541-9601-L)。试剂盒包括如下组件：包被有抗体的96孔微孔板、校准品1(β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1，冻干粉)、校准品2(β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1，冻干粉)、校准品3(β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1，冻干粉)、校准品4(β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1，冻干粉)、校准品5(β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1，冻干粉)、校准品6(β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1，冻干粉)、质控品1(β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1，冻干粉)、质控品2(β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1，冻干粉)、生物素标记的抗β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1抗体、过氧化物酶标记的链霉亲和素、10倍浓缩的清洗缓冲液、色原/底物液(TMB/H2O2)、终止液(0.5M硫酸)。
清洗缓冲液：取10倍浓缩的清洗缓冲液，用蒸馏水稀释至10倍体积。校准品溶液：将标准品溶于500μl蒸馏水。质控品溶液：将质控品溶于500μl蒸馏水。
实施例、
患者：广州市惠爱医院(广州医科大学附属脑科医院)已经确诊的住院病人，均为知情同意的志愿者，其中阿尔兹海默病患者22例(用AD表示，Alzheimer’s disease)，晚期神经梅毒患者中发生麻痹性痴呆的患者(萎缩型)54例(用AFGP表示，Atrophy form ofgeneral paresis)。
1、采用真空抗凝管抽取患者的肘静脉血，混匀后3500rpm离心10min，收集血浆，即为待测血浆样本，-80℃保存。
2、取包被有抗体的96孔微孔板，每孔加入100μl生物素标记的抗β-淀粉样蛋白前体蛋白切割酶1抗体和15μl供试样本，室温孵育180分钟。供试样本为校准品、质控品或待测血浆样本。每种供试样本设置2个复孔。
3、完成步骤2后，取所述96孔微孔板，弃除上清，用清洗缓冲液清洗5次(每次每孔300μl，每次30-60秒)，然后将96孔微孔板倒置在吸水纸上拍打，以去除残存的清洗缓冲液。
4、完成步骤3后，取所述96孔微孔板，每孔滴加100μl过氧化物酶标记的链霉亲和素，室温孵育30分钟。
5、完成步骤4后，取所述96孔微孔板，弃除上清，用清洗缓冲液清洗5次(每次每孔300μl，每次30-60秒)，然后将96孔微孔板倒置在吸水纸上拍打，以去除残存的清洗缓冲液。
6、完成步骤5后，取所述96孔微孔板，每孔滴加100μl色原/底物液，室温避光孵育30分钟。
7、完成步骤6后，取所述96孔微孔板，每孔滴加100μl终止液，30分钟以内进行比色(比色前轻轻振动微孔板以使液体均匀扩散，450nm比色，参考波长620-650nm)。
Y＝(A-D)/((1+(X/C)B)G)+D；
A＝0.071；B＝1.180；C＝54844.503；D＝15.405；G＝0.591；
X表示450nm的OD值；Y表示BACE1浓度，单位为pg/ml。
chi2＝0.005,RMS＝0.021,r2＝0.998。chi2是指卡方值，RMS是root meansquare。
AD患者和AFGP患者的血浆中的BACE1浓度见图1。AD患者血浆中的BACE1浓度为751.41±213.19pg/ml，AFGP患者血浆中的BACE1浓度为536.71±348.41pg/ml。AD患者血浆中的BACE1浓度大于AFGP患者，P＜0.01。
以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值判断为AD患者，如果血浆中的BACE1浓度小于等于阈值判断为AFGP患者。
灵敏度＝Tp/(Tp+Fn)。特异度＝Tn/(Fp+Tn)。准确度＝Tn+Tp/n。Tn(truenegative)为15例。Tp(true positive)为42例。Fn(false negative)为12例。Fp(falsepositive)为7例。血浆BACE1鉴别AD和AFGP受试者工作曲线分析见图2。血浆BACE1浓度具有一定的诊断准确性。曲线下面积(Area Under Curve,AUC)为0.76，95％置信区间的上限为0.87，95％置信区间的下限为0.65。灵敏度为78％，特异度为68％，准确度为75％。

Claims (2)

1.用于检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质在制备诊断产品中的应用，所述产品的功能为鉴别或辅助鉴别阿尔兹海默患者和晚期神经梅毒患者；
所述检测淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质为检测血浆中淀粉样蛋白前体β-分解酶1的物质；以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值诊断为阿尔兹海默患者，如果血浆中的BACE1浓度小于等于阈值诊断为晚期神经梅毒患者。
2.用于检测血浆中淀粉样蛋白前体β-分解酶1浓度的物质和记载有判断标准的载体在制备诊断产品中的应用；所述产品的功能为鉴别或辅助鉴别阿尔兹海默患者和晚期神经梅毒患者；所述判断标准为：以665.59pg/ml为阈值，如果血浆中的BACE1浓度大于阈值判断为阿尔兹海默患者，如果血浆中的BACE1浓度小于或等于阈值判断为晚期神经梅毒患者。
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