CN111777653B - 一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法，突破传统老旧的提取、吸附与结晶工艺，创新性的采用低温酸性醇溶液除杂、低温醇盐溶液粗结晶及活性炭吸附纯化工艺进行提取分离和纯化，为新橙皮苷的提取分离纯化工艺创新性研究给予理论和试验依据，也为该工艺的规模化生产提供了基础数据。本发明的方法是一种适合工业化大规模推广的生产方法，工艺过程可操作性强，无污染，成本低，含量和收率高，适宜于工业化生产。

Description

一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法

技术领域

本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法。

背景技术

新橙皮苷是一种二氢黄酮类化合物，其是由糖苷配体为3,5,7-三羟基-4-甲氧基黄酮与糖基配体为鼠李糖基β-1,2-葡萄糖的两个单元组成的糖苷。新橙皮苷显弱酸性，白色针状结晶，易溶于热水，溶于热乙醇，不溶于乙醚。在碱性溶液中通入二氧化碳也不析出。在强酸性条件下易发生水解二产生葡萄糖、橘皮素及鼠李糖。新橙皮苷具有清除自由基、促进胃动力、降血脂、抗动脉粥样硬化、保护神经系统、抗过敏、抗癌等活性，在医学方面有广泛的用途；同时新橙皮苷也是一种重要的中间体，能在一定的条件下转化为其衍生物新橙皮苷二氢查尔酮，而次化合物是一种安全的低热值甜味剂(甜度为蔗糖的1500-1800倍)，苦味抑制剂和风味调和剂，热稳定性好，应用pH范围广，在食品、饮料、制药和动物饲料行业广为使用。

由于新橙皮苷的结构复杂，难以通过全合成的方式制备。一般是通过从植物种提取与它结构类似的柚皮苷作为起始原料后，再通过化学合成法转化制备新橙皮苷，或者以来源广泛、价格低廉的橙皮苷向其同分异构体新橙皮苷的生物转化；或者直接从天然植物中提取新橙皮苷。

柚皮苷合成法需要用到大量的催化剂、譬如碱性催化剂、四氢吡咯催化剂和氨基酸催化剂等，橙皮苷生物转化法则需要葡萄糖基转移酶和鼠李糖-7-O-葡萄糖苷的共同作用下才能顺利转化为新橙皮苷。无论是柚皮苷合成法还是橙皮苷生物转化法，其对工艺条件的要求都非常苛刻，极易发生副反应而产生其他不可预知的物质，且参加反应的物质也可能残留在产品中而带来污染。目前这两种方法的工艺还不成熟，大规模化的工业化应用还有待于进一步的研究和优化。

相比柚皮苷合成和橙皮苷生物转化法，从天然植物直接提取更具有其无可比拟的优势，其原料来源广泛、产品纯天然，且在生物活性方面更具安全性和可靠性，更是前景十分广阔的获取方式。

CN201910192047.5公开了一种从枳实中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法，具体为粉碎、萃取、大孔树脂层析分离、乙醇解吸、分段收集、浓缩干燥后，即得柚皮苷和新橙皮苷。该方法乙醇浓度为以固定浓度，且乙醇浓度较高，极可能同时将柚皮苷及新橙皮苷，甚至其他杂质一次性被解吸下来，而直接导致解吸液中柚皮苷和新橙皮苷纯度不高。

CN109293721A公开了一种醇/水双水相体系制备柚子生理落果中新橙皮苷的方法，具体为破碎、磨粉、双水相萃取、碟片分离、上相液浓缩、水沉析晶、压滤后得粗品，而后热水溶解、膜过滤、超滤、冷却析晶、过滤、干燥后即得高纯度新橙皮苷，该工艺及其复杂，且使用到的异丙醇为致癌物，在双水相较高温度条件下更易挥发，从而被人体吸入，不适宜规模化生产。

CN106810622B公开了一种从枳实中提取新橙皮苷及对枳实综合利用的方法，具体为枳实粉碎、热水浸提、浸提液浓缩、水沉、新橙皮苷沉淀物碱性溶解、调酸后重结晶，得到新橙皮苷。该工艺用到了强碱和强酸，极可能导致目标物质降解，甚至发生副反应而带来杂质，同时重结晶需要不低于80％高度乙醇，对有机溶剂要求过高，成本较高。

CN106220698A公开了一种从枳实中分离高纯度橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷和幸弗林的方法，具体为破碎、酶解、提取、膜分离、截留液浓缩调酸柚皮苷结晶、母液重结晶，即得高纯度新橙皮苷。该方法涉及到酶解，对酶解条件要求较为苛刻，难以规模化生产。同时由于新橙皮苷为柚皮苷的通过调酸冷却制得，可能会导致新橙皮苷也发生析晶而导致柚皮苷中含有大量的新橙皮苷，同时也导致新橙皮苷收率低。

CN201610539313.3公开了一种从枳实中提取高纯度新橙皮苷的方法，具体为粉碎、酶解、浸提、絮凝、纳滤、浓缩、干燥、醇相结晶、干燥，即得高纯度新橙皮苷。该方法涉及到酶解，对酶解条件要求较为苛刻，难以规模化生产。同时氯化铁和生石灰絮凝过程中会导致部分新橙皮苷也随之残留在絮凝沉淀中，而直接导致最终产品收率低。

CN105384787A公开了一种从柑橘小果、皮中提取橙皮苷和新橙皮苷的方法，具体为干燥、粉碎、过筛、乙醇水溶液渗漏、果胶酶酶解、过滤、滤液阳离子交换柱层析、流出液和水洗液上大孔吸附树脂、低碳醇梯度洗脱、高度醇盐析、碱性甲醇溶解、过滤、滤液调酸、重结晶后，抽滤干燥即得新橙皮苷。该工艺及其复杂、涉及到酶解、阳离子交换层析、大孔树脂层析、盐析、调酸调碱、重结晶等工序，难以实现产业化，且工艺步骤太多，极易造成产品收率低。

CN103224968A公开了一种没罚制备新橙皮苷的方法，具体为橙皮苷在金属离子作用下溶于水，在固定化鼠李糖苷酶作用下水解，得到橙皮素-7-葡萄糖苷和鼠李糖的混合物，该混合物在固定化鼠李糖转移酶的催化下，得到新橙皮苷。该方法对酶解条件极为苛刻，且对酶的活力和专一性要求极高，这就造成原辅料和工艺成本极高。且该工艺的目标产物转化率较低，难以规模化生产。

CN102617673B公开了一种从胡柚白皮层分离纯化柚皮苷和新橙皮苷的方法，具体为粉碎、超声辅助醇水浸提、浓缩、水溶解、大孔树脂吸附、冲洗、洗脱、高速逆流色谱分离、分别得到柚皮苷和新橙皮苷。该工艺需要使用氯仿-甲醇-正丁醇-水溶剂体系作为高速逆流色谱固定相，大量的有毒有害试剂极易造成产品残留，同时该工艺对设备要求极高，不适合规模化生产。

CN102477056A公开了一种新橙皮苷的提纯方法，具体为粉碎、回流提取、大孔树脂吸附、乙醇洗脱、超滤、结晶、丙酮回流、再结晶、干燥即得新橙皮苷。该工艺涉及到使用有机溶剂丙酮，极易造成产品残留，且超滤是在50-70％的高度醇水溶液中，对安全生产有较大隐患。

CN101293906A公开了一种提取高纯度新橙皮苷的方法，具体为溶剂回流浸提、乙酸乙酯盐析除杂、过滤得新橙皮苷粗品、在重结晶后即得高纯度新橙皮苷。该工艺使用到的乙酸乙酯具有低毒性，且具有刺激性气味，极易在最终产品残留，且该工艺只适合新橙皮苷含量＞1％的原料，对原料要求较为苛刻。

CN1218953C公开了一种植物酸橙幼果中提取新橙皮苷的制备方法，具体为醇水溶液浸提、正丁醇萃取、乙醇回流后得粗品，然后重结晶即得高纯度新橙皮苷。该工艺使用到了正丁醇，正丁醇具有强烈的刺激性气味，不适合规模化生产；且重结晶需要使用大量高度乙醇，成本较高。

CN1272339C公开了一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法，具体为溶剂回流、浓缩、正丁醇萃取、减压浓缩、析出沉淀、甲醇或乙醇重结晶，即得纯度新橙皮苷。该工艺使用到了正丁醇，正丁醇具有强烈的刺激性气味，不适合规模化生产。

上述专利中对新橙皮苷的提取纯化方法基本上都是用常规的大孔树脂进行吸附分离纯化和高度醇进行重结晶，工艺相对都比较传统和老旧，有的工艺甚至使用了强酸强碱进行反复处理对设备耐酸碱性要求高。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法，本发明提供的制备方法简化工艺流程，进一步提高新橙皮苷的含量和收率，其制备方法工艺简单、操作性强，对设备要求低，是一种可实现规模化生产的纯天然高含量新橙皮苷的方法。

本发明提供了一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法，包括以下步骤：

A)将含有新橙皮苷的植物原料破碎后与冷酸性醇水溶液混合进行除杂，收集除杂渣；

B)将所述除杂渣与水混合进行浸提，得到浸提透过液；

C)将所述浸提透过液浓缩后，加入低级醇和盐进行低温结晶，得到粗结晶；

D)将所述粗结晶加水溶解后，搅拌冷却进行结晶，再加入吸附剂进行搅拌吸附；

E)将所述吸附剂装入层析柱，用冷水快速洗柱后，依次利用低温和高温的低级醇水溶液洗脱，单独收集洗脱液；

F)将洗脱液分别进行浓缩、干燥粉碎后，即得不同含量的纯天然新橙皮苷产品。

优选的，所述含有新橙皮苷的植物原料选自芸香科柑橘属植物中的枳实、枳壳、陈皮或酸橙；

所述破碎的粒度为4～30目。

优选的，所述冷酸性醇水溶液为-4～10℃、pH为1～4的含醇物质水溶液；

所述冷酸性醇水溶液中的酸选自盐酸、醋酸、硫酸、柠檬酸中的一种，醇选自乙醇、甲醇、异丙醇中的一种；

所述冷酸性醇水溶液中醇的体积分数为4～10％。

优选的，步骤A)中，所述含有新橙皮苷的植物原料与冷酸性醇水溶液的质量比为1：(6～20)；

所述除杂的方法为：用冷酸性醇水溶液对破碎后的含有新橙皮苷的植物原料淋洗或渗漏，然后过滤；所述过滤为布袋离心、板框压滤、挤压过滤或管式离心中的一种或多种组合。

优选的，所述除杂渣与水的质量比为1：(1～4)，水的温度为80～100℃，所述浸提次数为3～5次，每次浸提1～3h；

浸提完成后进行固液分离，得到浸提液，将所述浸提液趁热过陶瓷膜，得到浸提透过液；所述固液分离的方法为布袋离心、板框压滤、挤压过滤或管式离心中的一种或多种组合，所述陶瓷膜的截留分子量为2000～5000Da。

优选的，步骤C)中，所述浓缩为真空浓缩，浓缩至所述浸提透过液的白利度为40～60brix；

所述低级醇选自乙醇、甲醇、异丙醇中的一种；

所述盐选自碱金属的氯化盐、硫酸盐、硝酸盐或碳酸盐中的一种，所述碱金属选自钾或钠

所述低级醇和盐的添加量为：使得浸提透过液中的低级醇体积分数为4～10％，盐质量分数为0.5～2％。

优选的，所述低温结晶的温度为-4～10℃，时间为6～24h。

优选的，步骤D)中，所述粗结晶与水的质量比为1：(5～10)，所述溶解的温度为60～95℃；

所述搅拌冷却的温度为4～10℃，时间为12～24h；

所述吸附剂选自活性炭或沸石中的一种，所述吸附剂的平均粒径为1mm～5mm；所述粗结晶与吸附剂的质量比为1：(3～10)，加入吸附剂搅拌吸附的时间为3～6h。

优选的，步骤E)中，所述层析柱的径高比1:3～6，所述冷水的温度为0～10℃，用量为0.8～2BV；

低级醇为乙醇、甲醇、异丙醇中的一种；

依次利用低温和高温的低级醇水溶液洗脱，单独收集洗脱液的方法为：

先用2.5～4BV、体积分数为4～10％的低级醇水溶液、以2～3BV/h的流速洗脱，柱温保持10～30℃，洗脱液单独收集，得到低温低级醇洗脱液；

再用2.5～4BV、体积分数为4～10％的低级醇水溶液、以0.5～2BV/h的流速洗脱，柱温保持60～80℃，洗脱液单独收集，得到高温低级醇洗脱液。

优选的，将洗脱液浓缩至白利度为40～60brix。

与现有技术相比，本发明提供了一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法，包括以下步骤：A)将含有新橙皮苷的植物原料破碎后与冷酸性醇水溶液混合进行除杂，收集除杂渣；B)将所述除杂渣与水混合进行浸提，得到浸提透过液；C)将所述浸提透过液浓缩后，加入低级醇和盐进行低温结晶，得到粗结晶；D)将所述粗结晶加水溶解后，搅拌冷却进行结晶，再加入吸附剂进行搅拌吸附；E)将所述吸附剂装入层析柱，用冷水快速洗柱后，依次利用低温和高温的低级醇水溶液洗脱，单独收集洗脱液；F)将洗脱液分别进行浓缩、干燥粉碎后，即得不同含量的纯天然新橙皮苷产品。本发明提供了一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法，突破传统老旧的提取、吸附与结晶工艺，创新性的采用低温酸性醇溶液除杂、低温醇盐溶液粗结晶及活性炭吸附纯化工艺进行提取分离和纯化，为新橙皮苷的提取分离纯化工艺创新性研究给予理论和试验依据，也为该工艺的规模化生产提供了基础数据。本发明的方法是一种适合工业化大规模推广的生产方法，工艺过程可操作性强，无污染，成本低，含量和收率高，适宜于工业化生产。

另外，本发明所涉及到的低级醇的百分含量低，最高不高于10％，相比传统工艺低级醇体积分数需要70％以上而言，本发明对低级醇含量要求极低，同时也大大降低了有机溶剂的使用量。本发明所涉及到的吸附剂为活性炭或沸石，相比传统价格高昂大孔树脂，本工艺吸附剂价格低廉。

结果表明，本发明方法所得产品，新橙皮苷纯度在98％以上，收率90％以上。

具体实施方式

本发明提供了一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法，包括以下步骤：

A)将含有新橙皮苷的植物原料破碎后与冷酸性醇水溶液混合进行除杂，收集除杂渣；

B)将所述除杂渣与水混合进行浸提，得到浸提透过液；

C)将所述浸提透过液浓缩后，加入低级醇和盐进行低温结晶，得到粗结晶；

D)将所述粗结晶加水溶解后，搅拌冷却进行结晶，再加入吸附剂进行搅拌吸附；

E)将所述吸附剂装入层析柱，用冷水快速洗柱后，依次利用低温和高温的低级醇水溶液洗脱，单独收集洗脱液；

F)将洗脱液分别进行浓缩、干燥粉碎后，即得不同含量的纯天然新橙皮苷产品。

本发明以含有新橙皮苷的植物为原料，所述含有新橙皮苷的植物原料选自芸香科柑橘属植物中的枳实、枳壳、陈皮或酸橙。在本发明中，优选枳实或枳壳。

本发明首先将原来破碎，在本发明中，所述破碎的方法包括但不限于研磨、粉碎机等方法。破碎可以提高原料表面积，进而提高其与溶媒的接触面积，有利于有效成分的溶出；同时粉碎过细不利于后续固液分离的实现。在本发明中，所述破碎的粒度为4～30目。

然后，将将含有新橙皮苷的植物原料破碎后与冷酸性醇水溶液混合进行除杂。

其中，所述冷酸性醇水溶液为温度-4～10℃、pH为1～4的含醇物质水溶液，其中，所述冷酸性醇水溶液的温度优选为4℃；

所述冷酸性醇水溶液中的酸选自盐酸、醋酸、硫酸、柠檬酸中的一种，优选盐酸和醋酸，醇选自乙醇、甲醇、异丙醇中的一种，优选为乙醇；

所述冷酸性醇水溶液中醇的体积分数为4～10％，优选为6％。

步骤A)中，所述含有新橙皮苷的植物原料与冷酸性醇水溶液的质量比为1：(6～20)；

所述除杂的方法为：用冷酸性醇水溶液对破碎后的含有新橙皮苷的植物原料淋洗或渗漏，然后过滤；其中，所述淋洗或渗漏的时间优选为2～6h。

所述过滤为实现固液分离为目的，包括但不限于布袋离心、板框压滤、挤压过滤或管式离心中的一种或多种组合，优选为板框压滤和布袋离心。

新橙皮苷难溶于酸性水溶液及稀乙醇，且低温更不利于新橙皮苷的溶解，使其保留在原料中，故而酸性醇溶剂可以有效的在保证新橙皮苷不被溶出的溶蚀，将其他杂质溶出，而起到初步除杂的目的。

得到除杂渣后，将所述除杂渣与水混合进行浸提，得到浸提透过液。

所述除杂渣与水的质量比为1：(1～4)，水的温度为80～100℃，所述浸提次数为3～5次，每次浸提1～3h；本发明对所述浸提的方式并没有特殊限制，优选为淋洗、回流、渗漏、搅拌浸泡中的任意一种。

浸提完成后进行固液分离，得到浸提液，将所述浸提液趁热过陶瓷膜，得到浸提透过液；所述收集浸提液为实现固液分离为目的，包括但不限于布袋离心、板框压滤、挤压过滤或管式离心中的一种或多种组合，优选板框压滤和布袋离心；所述陶瓷膜的截留分子量为2000～5000Da。

新橙皮苷易溶于热水，固采用热水浸提目标成分，固液分离可实现绝大部分提取渣，陶瓷膜则能进一步除去颗粒杂质及大分子物质，实现进一步的除杂纯化目的。

得到浸提透过液后，将所述浸提透过液浓缩，然后加入低级醇和盐进行低温结晶，得到粗结晶；

在本发明中，所述浓缩为真空浓缩，浓缩至所述浸提透过液的白利度为40～60brix；

所述低级醇选自乙醇、甲醇、异丙醇中的一种；

所述盐选自碱金属的氯化盐、硫酸盐、硝酸盐或碳酸盐中的一种，所述碱金属选自钾或钠

所述低级醇和盐的添加量为：使得浸提透过液中的低级醇体积分数为4％～10％，盐质量分数为0.5％～2％。

所述低温结晶的温度为-4～10℃，优选为4℃，时间为6～24h。

粗结晶的收集方法为实现固液分离为目的，包括但不限于布袋离心、板框压滤、挤压过滤或管式离心中的一种或多种组合，最优选板框压滤和布袋离心。

低级醇的盐溶液更容易促进新橙皮苷结晶的形成。

然后，将所述粗结晶加水溶解后，搅拌冷却进行结晶，再加入吸附剂进行搅拌吸附；

在本发明中，所述粗结晶与水的质量比为1：(5～10)，所述溶解的温度为60～95℃；所述搅拌冷却的温度为4～10℃，时间为12～24h；

所述吸附剂选自活性炭或沸石中的一种，所述吸附剂的平均粒径为1mm～5mm；所述粗结晶与吸附剂的质量比为1：(3～10)，加入吸附剂搅拌吸附的时间为3～6h。

所述搅拌吸附时的温度优选为4～10℃。

加热复溶后粗结晶，再经过冷却过程中不断搅拌并持续一段时间，一方面可以确保结晶完全，同时可以确保达到晶体晶型均匀，浸提细腻，比表面积大，便于后续活性炭等吸附剂的吸附。且吸附剂以性状为颗粒的最佳，便于后续装柱以及洗柱洗脱。

然后，将吸附了结晶的吸附剂装入层析柱，用冷水快速洗柱后，依次利用低温和高温的低级醇水溶液洗脱，单独收集洗脱液。

在本发明中，所述层析柱的径高比1:3～6，所述冷水的温度为0～10℃，用量为0.8～2BV；所述冷水快速洗柱的流速为0.5～2.5BV/h。

低级醇为乙醇、甲醇、异丙醇中的一种；

依次利用低温和高温的低级醇水溶液洗脱，单独收集洗脱液的方法为：

先用2.5～4BV、体积分数为4～10％的低级醇水溶液、以2～3BV/h的流速洗脱，柱温保持10～30℃，洗脱液单独收集，得到低温低级醇洗脱液；

再用2.5～4BV、体积分数为4～10％的低级醇水溶液、以0.5～2BV/h的流速洗脱，柱温保持60～80℃，洗脱液单独收集，得到高温低级醇洗脱液。

低温低级醇水溶液可以在溶解水溶性和脂溶性杂质的同时，也能洗脱掉部分被吸附的其他颗粒性杂质，而目标成分新橙皮苷则由于依然保持晶体状态而被吸附剂吸附，从而起到除杂的目的。

高温低级醇水溶液可以将目标物质新橙皮苷晶体溶解，并让其随着洗脱剂而进入洗脱液中，其他依然保持颗粒状的杂质则依然停留在吸附剂上，从而且起到了再次纯化的作用。

最终，将洗脱液分别进行浓缩、干燥粉碎后，即得不同含量的纯天然新橙皮苷产品。即低温产品和高温产品。其中低温产品含量较低(低温的主要作用是洗掉杂质)，高温产品较高，也是目标产品。两个产品可以作为不同规格(含量)的产品，根据需求提供不同的规格，或者是拼配不同含量的产品。

所述的浓缩为以除去洗脱液中的水分为目的，包括但不限于真空浓缩和膜浓缩，浓缩至白利度为40～60brix。

所述的干燥为以除去水分为目的，包括但不限于真空干燥、微波干燥、带式干燥、鼓风干燥中的一种。

本发明突破现有老旧的传统工艺，从原料的提取、吸附、分离及结晶等入手，创新性的采用低温酸性醇溶液除杂、低温醇盐溶液粗结晶及活性炭吸附纯化工艺进行提取分离和纯化，同时进一步提高新橙皮苷的含量和收率，为新橙皮苷的提取分离纯化工艺创新性研究给予理论和试验依据，也为该工艺的规模化生产提供了基础数据。

本发明方法的有益效果如下：

一、本发明方法提供了一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法，突破传统老旧的提取、吸附与结晶工艺，创新性的采用低温酸性醇溶液除杂、低温醇盐溶液粗结晶及活性炭吸附纯化工艺进行提取分离和纯化，为新橙皮苷的提取分离纯化工艺创新性研究给予理论和试验依据，也为该工艺的规模化生产提供了基础数据。

二、本发明方法所得产品，新橙皮苷纯度在98％以上，收率90％以上。

三、本发明所涉及到的低级醇的百分含量低，最高不高于10％，相比传统工艺低级醇体积分数需要70％以上而言，本工艺对低级醇含量要求极低，同时也大大降低了有机溶剂的使用量。

四、本发明所涉及到的吸附剂为活性炭或沸石，相比传统价格高昂大孔树脂，本工艺吸附剂价格低廉。

五、本发明的方法是一种适合工业化大规模推广的生产方法，工艺过程可操作性强，无污染，成本低，含量和收率高，适宜于工业化生产。

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的新橙皮苷的制备方法进行说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。

本发明实施所使用的枳实和枳壳由湖南华诚生物资源股份有限公司提供，其中枳实和枳壳中的新橙皮苷(干重)含量分别为10.95％和8.38％。本发明实施例所使用的原料或化学试剂，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。

对本发明采用的测试方法说明如下：

1、新橙皮苷的含量测定：高效液相色谱法(外标法)

(1)试剂与仪器

仪器：日本岛津高效液相色谱10A，赛多利斯十万分之一电子分析天平，KQ2200DB超声清洗器，50棕容量瓶。

试剂：甲醇(HPLC Grad)，磷酸，超纯水，新橙皮苷对照品。

(2)色谱条件

色谱柱：Kromasil,4.6*250mm

流动相：乙腈：水(用磷酸调PH为3)＝0.25：0.75

流速：1ml/min

洗脱方式:等度洗脱

检测波长：283nm

进样量：10μl

柱温：30℃

(3)样品处理

标准液的配置：准确称取新橙皮苷对照品适量，分别配制成约0.2mg/ml标准样品。

供试品的配制：准确称取供试品适量，于50ml容量瓶中，加入适量甲醇，超声30min，冷却，定容。

外标一点法含量计算：

A样：样品品的峰面积

C标：标准品溶液的浓度(mg/ml)

A标：标准品的峰面积

m：样品称样量(mg)

实施例1

新橙皮苷产品的制备：

1、除杂：将50kg枳实破碎至粒度为过8目筛网后，分三次共加入500kg、pH为3(盐酸)、乙醇体积分数为5％的4℃冷酸性乙醇水溶液，每次搅拌淋洗4h，布袋离心后，收集除杂渣；

2、浸提：将得到的除杂渣，分三次共加入500kg、85℃的热水，每次搅拌浸提2h，趁热布袋离心后，过截留分子量为3000Da的陶瓷膜，收集浸提透过液；

3、粗结晶：将得到的浸提透过液浓缩至50.3brix后,依次加入乙醇和氯化钠，致使浸提乙醇体积分数为6％、盐浓度为1％，而后置于低温，保持4℃结晶10h，然后通过布袋离心后，收集粗结晶；

4、吸附：将粗结晶用100kg、80℃热水复溶，持续搅拌并冷却至5℃，并保持搅拌状态结晶16h，然后加入60Kg、4目的颗粒活性炭进行在5℃条件下搅拌吸附4h；

5、洗脱：将吸附有结晶活性炭装入径高比为1:4的层析柱中，用4℃、2BV冷水以2BV/h的流速，快速洗柱后，用3BV、10℃、体积分数为5％的乙醇水溶液以1BV/h流速进行洗脱，单独收集洗脱液Ⅰ；然后再用3BV、70℃、体积分数为5％的乙醇水溶液以1BV/h流速进行洗脱，单独收集洗脱液Ⅱ；

6、浓缩干燥：将洗脱液分别浓缩后进行干燥和粉碎，即分别得到不同含量的新橙皮苷产品。

经检测计算得到：新橙皮苷产品的重量和纯度分别0.66kg、78.30％；4.49kg、99.40％。总收率为90.96％。

其中，总收率为两个产品的折纯含量之和除以原料折纯。

实施例2～3和对比例1～3

按照实施例1的方法，改变工艺参数，进行试验，具体工艺参数见表1表1工艺参数和结果

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以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种纯天然高含量新橙皮苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A)将含有新橙皮苷的植物原料破碎后与冷酸性醇水溶液混合进行除杂，收集除杂渣，所述冷酸性醇水溶液为-4～10℃、pH为1～4的含醇物质水溶液；

B)将所述除杂渣与水混合进行浸提，得到浸提透过液；

C)将所述浸提透过液浓缩后，加入低级醇和盐进行低温结晶，得到粗结晶，所述盐选自碱金属的氯化盐、硫酸盐、硝酸盐或碳酸盐中的一种；

D)将所述粗结晶加水溶解后，搅拌冷却进行结晶，再加入吸附剂进行搅拌吸附，所述搅拌冷却的温度为4～10℃，所述吸附剂选自活性炭或沸石中的一种；

E)将所述吸附剂装入层析柱，用冷水快速洗柱后，依次利用低温和高温的低级醇水溶液洗脱，单独收集洗脱液；

F)将洗脱液分别进行浓缩、干燥粉碎后，即得不同含量的纯天然新橙皮苷产品。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述含有新橙皮苷的植物原料选自芸香科柑橘属植物中的枳实、枳壳、陈皮或酸橙；

所述破碎的粒度为4～30目。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述冷酸性醇水溶液中的酸选自盐酸、醋酸、硫酸、柠檬酸中的一种，醇选自乙醇、甲醇、异丙醇中的一种；

所述冷酸性醇水溶液中醇的体积分数为4～10％。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤A)中，所述含有新橙皮苷的植物原料与冷酸性醇水溶液的质量比为1：(6～20)；

所述除杂的方法为：用冷酸性醇水溶液对破碎后的含有新橙皮苷的植物原料淋洗或渗漏，然后过滤；所述过滤为布袋离心、板框压滤、挤压过滤或管式离心中的一种或多种组合。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述除杂渣与水的质量比为1：(1～4)，水的温度为80～100℃，所述浸提次数为3～5次，每次浸提1～3h；

浸提完成后进行固液分离，得到浸提液，将所述浸提液趁热过陶瓷膜，得到浸提透过液；所述固液分离的方法为布袋离心、板框压滤、挤压过滤或管式离心中的一种或多种组合，所述陶瓷膜的截留分子量为2000～5000Da。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤C)中，所述浓缩为真空浓缩，浓缩至所述浸提透过液的白利度为40～60brix；

所述低级醇选自乙醇、甲醇、异丙醇中的一种；

所述碱金属选自钾或钠；

所述低级醇和盐的添加量为：使得浸提透过液中的低级醇体积分数为4～10％，盐质量分数为0.5～2％。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述低温结晶的温度为-4～10℃，时间为6～24h。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤D)中，所述粗结晶与水的质量比为1：(5～10)，所述溶解的温度为60～95℃；

所述搅拌冷却的温度为4～10℃，时间为12～24h；

所述吸附剂的平均粒径为1mm～5mm；所述粗结晶与吸附剂的质量比为1：(3～10)，加入吸附剂搅拌吸附的时间为3～6h。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤E)中，所述层析柱的径高比1:3～6，所述冷水的温度为0～10℃，用量为0.8～2BV；

低级醇为乙醇、甲醇、异丙醇中的一种；

依次利用低温和高温的低级醇水溶液洗脱，单独收集洗脱液的方法为：

先用2.5～4BV、体积分数为4～10％的低级醇水溶液、以2～3BV/h的流速洗脱，柱温保持10～30℃，洗脱液单独收集，得到低温低级醇洗脱液；

再用2.5～4BV、体积分数为4～10％的低级醇水溶液、以0.5～2BV/h的流速洗脱，柱温保持60～80℃，洗脱液单独收集，得到高温低级醇洗脱液。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将洗脱液浓缩至白利度为40～60brix。