CN111777650A - 一种以混合胶束提取分离黄芩苷的方法 - Google Patents

一种以混合胶束提取分离黄芩苷的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种以混合胶束提取分离黄芩苷的方法，属于天然产物提取分离技术领域。本发明主要分为两个步骤，第一，利用非离子表面活性剂Genapol X‑080和双子型表面活性剂16‑5‑16形成的混合胶束有效提取黄芩苷。第二，利用“相似相溶”原理对胶束中的黄芩苷进行纯化和反萃取，再通过降温结晶得到黄芩苷固体。混合胶束对含有多羟基的黄芩苷具有更好的传递能力，相较于传统的溶剂提取方法，本发明中方法使用的有机溶剂和酸水含量更少，更符合绿色化学的宗旨。以本发明中的方法分离得到的黄芩苷纯度高达92.4％，具有较高实际应用价值。

Description

一种以混合胶束提取分离黄芩苷的方法
技术领域
本发明涉及一种以混合胶束提取分离黄芩苷的方法，属于天然产物提取分离技术领域。
背景技术
黄芩苷(BC)是一种黄酮类化合物，是黄芩的主要有效成分，具有广泛的生物活性和药理活性，如抗菌，抗炎，抗氧化，利尿，镇静，降压，免疫抑制等。近年来，对于黄芩苷的抗肿瘤作用的研究日益增多，研究表明黄芩苷能够抑制Huh-7、BEL-7402、HLF等细胞增殖，诱导BEL-7402、SMMC-7721、HepG-2细胞凋亡，同时也可辅助其他药物通过影响肿瘤细胞周期，上调促凋亡基因，改变线粒体膜的通透性组织DNA合成，诱导肿瘤细胞凋亡和自我吞噬的方法达到改善甚至治愈的效果。黄芩苷也被证明具有强大的抗病毒活性，论文Discovery ofbaicalin and baicalein as novel，natural product inhibitors of SARS-CoV-2 3CLprotease in vitro中表明研究人员发现黄芩苷和黄芩黄素是非共价、非多肽性的SARS-CoV-2 3CLpro抑制剂。目前，以黄芩苷为主要成分的药物已经被开发研制，例如用于治疗急慢性肝炎的黄芩苷片和黄芩苷胶囊，与穿心莲内酯连用的用于治疗急性上呼吸道感染和急性支气管炎的感咳双清胶囊。由此可见，黄芩苷具有较好的开发和应用前景，因此，对提取和纯化黄芩苷的方法开发具有现实意义。
尽管有很多优点，但黄芩苷(BC)的低水溶性的特性为提取分离带来了不少挑战。传统方法中，黄酮类化合物主要通过水提酸沉法，醇提酸沉法和超声波法提取。周芳等(黄芩总黄酮的提取与黄芩苷的分离，周芳，武汉工程大学硕士学位论文，2007年，53-55页)采用酸沉法对黄芩水提物进行纯化，第一次纯化后黄芩苷含量为39.98％，第二次纯化后黄芩苷含量为40.02％，第三次后也仅有43.17％。由此可见即使增加纯化次数也无法提高黄芩苷的含量。CN102002082A对酸沉法进行了改良，将水提滤液减压浓缩后加入3-5倍量低碳醇再次提取，减压浓缩后使用盐酸酸沉，同时需要静置8h，再以水和醇冲洗滤饼，得到含量为85％的黄芩苷。改良方法虽然提高了黄芩苷的含量但也浪费更多的有机溶剂，同时需要使用大量酸性液体对环境造成了不利的影响。
近年来出现了不少新的方法，但大多依赖于大型特定设备，例如高速逆流色谱法(Haitao Lu,Yue Jiang,Feng Chen.Journal of Chromatography A,1017(2003)：117-123)和超临界流体萃取法，此种方法虽然能有效减少酸性物质的使用但制备过程繁琐，耗费时间较长。因此，设计一种有效，快速，低有机溶剂消耗和环境友好的黄芩苷提取和分离纯化方法成为必要。
表面活性剂水性体系在提取和富集方面具有明显的优势，如低剂量，高提取效率，低成本，优良的富集效率和环境友好性。同时，表面活性剂溶液不仅可以用作一种萃取溶剂，还可以利用其浊点现象的性质来富集目标化合物，即浊点萃取。浊点萃取(CPE)是基于非离子表面活性剂水溶液产生的相行为，该非离子表面活性剂水溶液在温度升高后变浑浊。当温度升高到浊点温度以上时，就会发生相分离。表面活性剂是具有疏水和亲水基团的两亲性分子，可以修饰界面。较低浓度的两亲性分子可使表面张力降低，从而导致疏水性分子变成极性分子。当两亲分子处于或高于其临界胶束浓度(CMC)时，能够形成胶束，该胶束是基于包围水内核的极性有机溶剂的纳米级“油中水”结构，这些纳米结构热力学稳定性且拥有溶解生物活性化合物的能力。但目前并没有使用表面活性剂水性体系提取分离黄芩苷的研究。
发明内容
[技术问题]
传统方法中，黄酮类化合物主要通过水提酸沉法，醇提酸沉法和超声波法提取，这些分离方法的分离效果都不太好，对上述传统方法进行改良的方法虽然提高了黄芩苷的分离产率但也浪费更多的有机溶剂，同时需要使用大量酸性液体对环境造成了不利的影响。近年来出现的高速逆流色谱法和超临界流体萃取法，虽然能有效减少酸性物质的使用但依赖于大型特定设备，制备过程繁琐，耗费时间较长。目前并没有使用表面活性剂水性体系提取分离黄芩苷的方法。
[技术方案]
针对上述问题，本发明提供了一种以混合胶束提取分离黄芩苷的方法，本发明中混合非离子表面活性剂Genapol X-080和双子型表面活性剂16-5-16作为萃取剂，利用超声辐射的空化作用和材料表面的破裂，加速黄芩苷转移并溶解在溶液中。由于黄芩苷含有多个羟基，电子云密度高易于与Gemini 16-5-16以离子对的形式存在，并进入非离子表面活性剂Genapol X-080形成的胶束。因此，利用由非离子表面活性剂Genapol X-080和Gemini16-5-16形成的混合胶束对目标化合物进行有效萃取。之后加入反萃取剂对黄芩苷进行反萃取，浓缩结晶干燥后得到黄芩苷颗粒。
本发明提供了一种以混合胶束提取分离黄芩苷的方法，所述方法的具体步骤如下：
(1)原料预处理：将干燥的黄芩根药材粉碎过筛，获得干燥黄芩根粉末；
(2)萃取剂的制备：将非离子表面活性剂Genapol X-080和双子型表面活性剂16-5-16添加至溶剂中搅拌均匀，得到萃取剂；
(3)黄芩根粉末与萃取剂混合：称取步骤(1)中的干燥黄芩根粉末，向其中加入萃取剂，充分混合后离心，得到上清液A；
(4)黄芩苷的预浓缩：将无机盐加入上清液A，在40-60℃的温度下萃取10-30min，使其分层，取分层后的液体离心并弃下层液体，得到预浓缩物B；
(5)反萃取和纯化：在步骤(4)所得预浓缩物B中加入反萃取剂，均化，在40-60℃的温度下反萃取15-30min，离心，弃去上层胶体部分，得到C；
(6)将C浓缩结晶或酸性沉淀后干燥得到固体D，即为分离得到的黄芩苷。
在本发明一种实施方式中，步骤(1)中所述过筛为过60目筛。
在本发明一种实施方式中，步骤(2)中所述溶剂为体积浓度为0-20％乙醇水溶液。
在本发明一种实施方式中，所述步骤(2)中非离子表面活性剂Genapol X-080的浓度为5％-15％(w/v)，即每100mL溶剂中含有5-15g表面活性剂Genapol X-080；双子型表面活性剂16-5-16的浓度为0.01％-0.05％(w/v)，即每100mL溶剂中含有0.01-0.05g表面活性剂16-5-16。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述充分混合的方法为搅拌10～60min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述充分混合的方法为进行超声处理，超声的时间为5-90min，超声的温度为30-50℃，超声的功率为25-60kHz。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述离心是使用离心机以8000-10000r/min的转速离心5-10min，得到上清液A。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中的无机盐为氯化钠、柠檬酸钠、酒石酸钠、硫酸镁中的任意一种。
在本发明的一种实施方式中，所述步骤(4)中的无机盐的添加量为0.1％-5％(w/v)，即每100mL上清液A加入0.1-5g无机盐。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中所述离心是使用离心机以8000-10000r/min的转速离心1-3min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中所述弃下层液体的方式为：利用注射器吸取下层液体并弃去。
在本发明的一种实施方式中，步骤(5)中所述反萃取剂为己烷、异丙醇、Ca(OH)2溶液、NaOH溶液中的任意一种。
在本发明的一种实施方式中，步骤(5)中所述反萃取剂为Ca(OH)2溶液或NaOH溶液时，添加量为预浓缩物B的15％-50％(m/m)；所述反萃取剂为异丙醇或己烷时，添加量为预浓缩物B的15％-35％(m/m)。
在本发明的一种实施方式中，步骤(5)所述均化的条件为：超声功率30～50kHz下超声5-10min或机械搅拌10-30min。
在本发明的一种实施方法中，步骤(6)中浓缩结晶针对于步骤(5)中使用的反萃取剂为异丙醇或己烷；若步骤(5)中使用的反萃取剂为Ca(OH)2溶液或NaOH溶液时，需要使用6mol/L HCl将PH调至5，静置30min，8000-10000r/min离心后，在真空干燥箱中60℃干燥12h。
在本发明的一种实施方式中，利用分析型高效液相色谱仪检测步骤(6)所得黄芩苷的纯度，流动相为甲醇(B)-0.3％(v/v)甲酸水溶液(A)，流速为1ml/min，柱温为35℃，检测波长为283nm。
在本发明的一种实施方式中，所述流动相甲醇(B)-0.3％(v/v)甲酸水溶液(A)的比例为：0-10min，40-45％B；10-12min，45-50％B；12-18min，50-60％B；20-23min，61％B；23-28min，61-65％B，28-30min，65-100％B。
本发明提供了一种混合胶束，所述混合胶束中包含权非离子表面活性剂GenapolX-080和双子型表面活性剂16-5-16。
本发明提供了上述分离方法分离得到的黄芩苷。
本发明提供了上述分离方法在分离黄酮类化合物中的应用。
本发明提供了上述分离方法在制备含黄芩苷的药物中的应用。
[有益效果]：
(1)本发明中提供的混合表面活性剂可以显著改变离子强度并扩大萃取范围，与单表面活性剂胶束相比，非离子表面活性剂和双子表面活性剂形成的混合胶束由于其理化特性更为灵活可促进萃取效率的提高。在本发明的反应中由于黄芩苷含有多个羟基，电子云密度高，易于与Gemini 16-5-16以离子对的形式存在，进入非离子表面活性剂GenapolX-080形成的胶束。因此，利用由非离子表面活性剂Genapol X-080和Gemini 16-5-16形成的混合胶束能够对黄芩苷进行有效萃取。
(2)本发明在分离过程中添加无机盐作为萃取剂，无机盐能够有效降低非离子表面活性剂的浊点温度，促进相分离的完成。
(3)本发明根据“相似相溶”的原理，利用黄芩苷更易溶于反萃取溶剂中，对于胶束中的黄芩苷进行有效的反萃取。
附图说明
图1为黄芩苷标准品的分析型高效液相色谱图。
图2为黄芩苷高效液相色谱的标准曲线。
图3为实施例1中分离得到的黄芩苷样品的分析型高效液相色谱图。
图4为实施例2中分离得到的黄芩苷样品的分析型高效液相色谱图。
图5为实施例3中分离得到的黄芩苷样品的分析型高效液相色谱图。
图6为实施例4中分离得到的黄芩苷样品的分析型高效液相色谱图。
图7为实施例5中分离得到的黄芩苷样品的分析型高效液相色谱图。
图8为实施例6中分离得到的黄芩苷样品的分析型高效液相色谱图。
图9为实施例7中分离得到的黄芩苷样品的分析型高效液相色谱图。
图10为对比例1中分离得到的黄芩苷样品的分析型高效液相色谱图。
图11为对比例2中分离得到的黄芩苷样品的分析型高效液相色谱图。
图12为对比例3中分离得到的黄芩苷样品的分析型高效液相色谱图。
具体实施方式
下面实施例可以使本领域技术人员全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
高效液相色谱检测：以下实施例和对比例中均采用高效液相色谱检测产物的纯度。具体地检测条件如下：
流动相条件：甲醇(B)-0.3％(v/v)甲酸水溶液(A)的比例为：0-10min，40-45％B；10-12min，45-50％B；12-18min，50-60％B；20-23min，61％B；23-28min，61-65％B，28-30min，65-100％B。
检测波长：283nm；
进样量：20μl；
Figure BDA0002603173150000051
利用高效色谱标准曲线计算黄芩苷含量的方法为：取适量黄芩苷标准品，图1为黄芩苷标准品的分析型高效液相色谱图，用无水甲醇配置黄芩苷标准品溶液，溶液梯度为25mg/g，50mg/g，100mg/g，200mg/g，400mg/g，以标准品溶液为横坐标，对应的色谱峰面积为纵坐标做黄芩苷标准品曲线，所得标准曲线如图2所示，拟合得到y＝0.78704x-6.09971，其中x为黄芩苷的浓度，y为峰面积。根据此标准曲线和高效液相色谱图中的峰面积便可计算黄芩苷的含量。
【实施例1】
(1)原料预处理：使用中药粉碎机将干燥的黄芩根粉碎，过60目筛，获得干燥黄芩根粉末；
(2)萃取剂的制备：将10g非离子表面活性剂Genapol X-080加入100mL去离子水中，将0.01g双子型表面活性剂16-5-16加入100mL去离子水中，在室温下搅拌均匀，得到萃取剂；
(3)黄芩根粉末与萃取剂混合：称取1g步骤(1)中干燥的黄芩根粉末，10ml步骤(2)中的萃取剂，混合，在室温下搅拌30min，使用离心机以8000r/min的转速离心10min，得到上清液A1；
(4)黄芩苷的预浓缩：取5％(w/v)氯化钠的加入上清液A1中(5g氯化钠/100mL上清液A1)，在45℃恒温水浴锅中萃取15min，使其分层，取分层后的液体，使用离心机以8000r/min离心2min，利用注射器吸取下层液体，弃去，得到预浓缩物B1；
(5)反萃取和纯化：向步骤(4)所得预浓缩物B1中加入500μL己烷，加入磁子，使用机械搅拌均化15min，在54℃恒温水浴中反萃取15min，使用离心机以8000r/min离心2min，弃去上层胶体部分，得到C1；将C1旋转蒸发结晶后放入真空干燥箱60℃烘干12h，得到固体D1。
取固体D1加入甲醇溶液，配置成浓度为10μg/ml溶液，利用高效液相色谱检测，图3为本实施例中分离得到的黄芩苷样品D1的分析型高效液相色谱图。计算出D1的纯度为85％。
【实施例2】
(1)原料预处理：与实施例1中的步骤(1)相同；
(2)萃取剂的制备：将12g非离子表面活性剂Genapol X-080加入100mL去离子水中，将0.01g双子型表面活性剂16-5-16加入100mL去离子水中，在室温下搅拌均匀，得到萃取剂；
(3)～(5)与实施例1中的(3)～(5)相同，得到固体D2。
取固体D2加入甲醇溶液，配置成浓度为10μg/ml溶液，利用高效液相色谱检测，图4为本实施例中分离得到的黄芩苷样品D2的分析型高效液相色谱图。计算出D2的纯度为86.4％。
【实施例3】
(1)原料预处理：与实施例2中的步骤(1)相同；
(2)萃取剂的制备：将12g非离子表面活性剂Genapol X-080加入100mL去离子水中，将0.03g双子型表面活性剂16-5-16加入100mL去离子水中，在室温下搅拌均匀，得到萃取剂；
(3)～(5)与实施例2中的(3)～(5)相同，得到固体D3。
取固体D3加入甲醇溶液，配置成浓度为10μg/ml溶液，利用高效液相色谱检测，图5为本实施例中分离得到的黄芩苷样品D3的分析型高效液相色谱图。计算出D3的纯度为92.1％。
【实施例4】
(1)～(2)与实施例3中的步骤(1)～(2)相同；
(3)混合溶解：称取1g步骤(1)中干燥的黄芩根粉末，10ml步骤(2)中的萃取剂，混合，在室温下搅拌30min，在40kHz的超声功率下超声45min后离心，离心是使用离心机以8000r/min的转速离心10min，得到上清液A4；
(4)～(5)与实施例3中的(4)～(5)相同，得到固体D4。
取固体D4加入甲醇溶液，配置成浓度为10μg/ml溶液，利用高效液相色谱检测，图6为本实施例中分离得到的黄芩苷样品D4的分析型高效液相色谱图。计算出检测D4的纯度为92.4％。
【实施例5】
(1)～(4)与实施例4中的步骤(1)～(4)相同；
(5)反萃取和纯化：向步骤(4)所得预浓缩物B3中加入800μL己烷，加入磁子，使用机械搅拌均化15min，在45℃恒温水浴中反萃取15min，使用离心机以8000r/min离心2min，弃去上层胶体部分，得到C5；将C5旋转蒸发结晶后放入真空干燥箱60℃烘干12h，得到固体D5。
取固体D5加入甲醇溶液，配置成浓度为10μg/ml溶液，利用高效液相色谱检测，图7为本实施例中分离得到的黄芩苷样品D5的分析型高效液相色谱图。计算出检测D5的90.6％。
【实施例6】
(1)～(3)与实施例1中的步骤(1)～(2)相同，得到上清液A6；
(4)黄芩苷的预浓缩：取2％(w/v)柠檬酸钠加入上清液A6(2g柠檬酸钠/100mL上清液A6)，在45℃恒温水浴锅中萃取15min，使其分层，取分层后的液体使用离心机以8000r/min离心2min，利用注射器吸取下层液体，弃去，得到预浓缩物B6；
(5)与实施例1中的步骤(5)相同，得到固体D6。
取固体D6加入甲醇溶液，配置成浓度为10μg/ml溶液，利用高效液相色谱检测，图8为本实施例中分离得到的黄芩苷样品D6的分析型高效液相色谱图。计算出检测D6的纯度为91.6％。
【实施例7】
(1)～(4)与实施例1中的步骤(1)～(4)相同，得到预浓缩物B7；
(5)反萃取和纯化：向步骤(4)所得预浓缩物B7中加入1.5mL PH＝9的NaOH溶液，加入磁子使用机械搅拌均化15min，在54℃恒温水浴中反萃取15min，使用离心机以8000r/min离心离心2min，弃去上层胶体部分，得到C7；使用6mol/L盐酸调节C7的PH＝5后，静置30min，使用离心机以8000r/min离心2min，放入真空干燥箱60℃烘干12h，得到固体D7。
取固体D7加入甲醇溶液，配置成浓度为10μg/ml溶液，利用高效液相色谱检测，图9为本实施例中分离得到的黄芩苷样品D7的分析型高效液相色谱图。计算出检测D7的纯度为80.4％。
【对比例1】
(1)与实施例1中的步骤(1)相同；
(2)萃取剂的制备：将20g非离子表面活性剂Genapol X-080加入100mL去离子水中，0.01双子型表面活性剂16-5-16加入100mL去离子水中，在室温下搅拌均匀，得到萃取剂；
(3)～(5)与实施例1中的步骤(3)～(5)相同，得到固体d1。
取固体d1加入甲醇溶液，配置成浓度为10μg/ml溶液，利用高效液相色谱检测，图10为本对比例中分离得到的黄芩苷样品d1的分析型高效液相色谱图。计算出检测d1的纯度为74％。
【对比例2】
(1)与实施例1中的步骤(1)相同；
(2)萃取剂的制备：将10g非离子表面活性剂Genapol X-080加入100mL去离子水中，，在室温下搅拌均匀，得到萃取剂；
(3)～(5)与实施例1中的步骤(3)～(5)相同，得到固体d2。
取固体d2加入甲醇溶液，配置成浓度为10μg/ml溶液，利用高效液相色谱检测，图11为本对比例中分离得到的黄芩苷样品d2的分析型高效液相色谱图。计算出d2的纯度为34.2％。
【对比例3】
(1)取1g黄芩根粉末向其中加入10ml 70％(v/v)乙醇，回流提取1.5h，抽滤。滤渣中加入8ml 70％(v/v)乙醇回流提取1.5h，再次抽滤。合并两次滤液，旋转蒸发，得浸膏。
(2)取0.8g黄芩粗提物粗膏，溶于5ml水中，上样HPD100大孔树脂(40g)，分别用4倍体积水、3倍体积50％(v/v)乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥，得到黄芩苷样品d3。
(3)取干燥后黄芩苷样品加入适量甲醇，配置成10μg/ml溶液，利用高效液相色谱检测，图12为本对比例中分离得到的黄芩苷样品d3的分析型高效液相色谱图。计算出d3纯度为39.72％。
通过对比例与实施例的比较可以发现，本发明的利用混合胶束萃取分离纯化黄芩苷的方法相较仅使用一种表面活性剂，分离效果更优。与传统的醇分离的方法相比，本发明有效的减少了有机溶剂以及酸性液体的使用，不仅提高了黄芩苷纯度同时有效缩减了提取时间，同时降低了提取温度。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种以混合胶束提取分离黄芩苷的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：
(1)原料预处理：将干燥的黄芩根药材粉碎过筛，获得干燥黄芩根粉末；
(2)萃取剂的制备：将非离子表面活性剂Genapol X-080和双子型表面活性剂16-5-16添加至溶剂中搅拌均匀，得到萃取剂；
(3)黄芩根粉末与萃取剂混合：称取步骤(1)中的干燥黄芩根粉末，向其中加入萃取剂，充分混合后离心，得到上清液A；
(4)黄芩苷的预浓缩：将无机盐加入上清液A，在40-60℃的温度下萃取10-30min，使其分层，取分层后的液体离心并弃下层液体，得到预浓缩物B；
(5)反萃取和纯化：在步骤(4)所得预浓缩物B中加入反萃取剂，均化，在40-60℃的温度下反萃取15-30min，离心，弃去上层胶体部分，得到C；
(6)将C浓缩结晶或酸性沉淀后干燥得到固体D，即为分离得到的黄芩苷。
2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述溶剂为体积浓度为0-20％的乙醇水溶液。
3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中非离子表面活性剂Genapol X-080的浓度为：每100mL溶剂中含有5-15g表面活性剂Genapol X-080，双子型表面活性剂16-5-16的浓度为：每100mL溶剂中含有0.01-0.05g表面活性剂16-5-16。
4.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，步骤(4)中的无机盐为氯化钠、柠檬酸钠、酒石酸钠、硫酸镁中的任意一种。
5.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的无机盐的添加量为：每100mL上清液A加入0.1-5g无机盐。
6.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，步骤(5)中所述反萃取剂为己烷、异丙醇、Ca(OH)2溶液、NaOH溶液中的任意一种。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(6)中浓缩结晶针对于步骤(5)中使用的反萃取剂为异丙醇或己烷；若步骤(5)中使用的反萃取剂为Ca(OH)2溶液或NaOH溶液，使用6mol/L HCl将pH调至5，静置30min，8000-10000r/min离心后，在真空干燥箱中60℃干燥12h。
8.一种混合胶束，其特征在于，所述混合胶束中包含权利要求1中所述的非离子表面活性剂Genapol X-080和双子型表面活性剂16-5-16。
9.权利要求1～7任一项所述方法在分离黄酮类化合物中的应用。
10.权利要求1～7任一项所述方法在制备含黄芩苷的药物中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113533557A (zh) * 2021-06-24 2021-10-22 上海容圣生命科技有限公司 超声辅助浊点萃取土茯苓有效成分的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104910225A (zh) * 2015-05-12 2015-09-16 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 从黄芩中提取黄芩苷的方法
CN106188259A (zh) * 2016-07-14 2016-12-07 浙江工业大学 一种反胶束分离纯化大豆凝集素的方法
CN107626220A (zh) * 2016-07-19 2018-01-26 丁观军 一种促进黄酮或苷类化合物溶解的方法及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104910225A (zh) * 2015-05-12 2015-09-16 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 从黄芩中提取黄芩苷的方法
CN106188259A (zh) * 2016-07-14 2016-12-07 浙江工业大学 一种反胶束分离纯化大豆凝集素的方法
CN107626220A (zh) * 2016-07-19 2018-01-26 丁观军 一种促进黄酮或苷类化合物溶解的方法及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HAIQUN ZHANG ET AL.: "Preparation,optimization,characterization and cytotoxicity in vitro of Baicalin-loaded mixed micelles", 《JOURNAL OF COLLOID AND INTERFACE SCIENCE》 *
张媛 等: "黄芩苷的提取工艺及剂型研究进展", 《中国药房》 *
徐洁 等: "四种表面活性剂对姜黄素和黄芩苷的增溶作用", 《中国药剂学杂志》 *
龚盛昭 等: "表面活性剂对黄芩苷微波萃取的影响", 《日用化学工业》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113533557A (zh) * 2021-06-24 2021-10-22 上海容圣生命科技有限公司 超声辅助浊点萃取土茯苓有效成分的方法

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