CN111773226A - 噻吗洛尔或其盐在制备预防和/或治疗丛状血管瘤的药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及噻吗洛尔或其盐在制备预防和/或治疗丛状血管瘤的药物中的用途。本发明的噻吗洛尔或其盐治疗丛状血管瘤采用局部涂覆方式使用，没有任何创伤，使用简单，治疗耐受性良好，治愈率极高，愈后未见复发。

Description

噻吗洛尔或其盐在制备预防和/或治疗丛状血管瘤的药物中 的用途

相关申请的交叉引用

本申请要求2019年6月26日递交的中国专利申请201910593315.4的优先权。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及噻吗洛尔或其盐在制备预防和/或治疗丛状血管瘤的药物中的用途。

背景技术

丛状血管瘤(Tufted Angioma，TA)是一种罕见的良性血管性肿瘤，也称为血管母细胞瘤、增生性血管瘤、进行性毛细血管瘤。Wilson-Jones和Orkin首次报道。TA多见于儿童和青少年，5岁之前发病多见，25％出现在1岁之前，但也有成人报道病例，50岁以后发病不到10％。本病暂无性别差异和家族发病倾向。

TA的临床表现多样，皮损好发于颈部、背部和四肢。常表现为缓慢扩大的红色斑片或斑块，也可以表现为暗红色丘疹或结节，部分可以出现自发性疼痛或者触痛。皮损多数持续存在，甚至维持终身，部分患者可以出现进行性加重，甚至侵袭周围组织，但未见远处转移报道。婴儿期TA可以合并卡梅现象(KMP)，特征为血小板减少和消耗性凝血，严重者可以危及生命。组织病理可以表现为真皮浅层深层散在由紧密排列的不成熟毛细血管、血管内皮细胞和周细胞组成的小叶，圆形、卵圆形、细长形或不规则形，细胞小叶被正常的胶原组织分离，内皮细胞呈同心漩涡状排列，低倍镜下呈“炮弹样”外观，可见紧密排列的内皮细胞突入血管腔而使个别管腔闭塞，一些血管因内皮细胞小叶的陷入而呈现裂隙状或半月形，细胞无异型性。

本病治疗比较棘手，目前尚无公认的治疗指南。手术切除在部分患者有效，但易复发，并且大面积切除皮损手术比较困难，尤其对于儿童人群，创伤较大，给家人带来极大的心理压力和负担。近年来报道一些新的治疗方法，包括脉冲染料激光、大剂量系统应用糖皮质激素、阿司匹林、干扰素等，但疗效尚未确切，复发率高。

噻吗洛尔，分子式为C₁₃H₂₄N₄O₃S，化学名称为(S)-1-(叔丁基氨基)-3-[(4-吗啉基-1,2,5-噻二唑-3-基)氧]-2-丙醇，结构式如下：

噻吗洛尔目前主要以滴眼液的形式用于眼部疾病，也有用于高血压病、心绞痛、心动过速等疾病的。近年来，有人将噻吗洛尔用于婴儿血管瘤。然而，婴儿血管瘤和TA是两种完全不同的血管瘤。TA组织学中可见内皮细胞构成的小叶状结构，呈“炮弹样”，同时小叶结构嵌入纤维化背景中。在小叶周围可见细长裂缝样淋巴管结构，同时做一些淋巴管标记免疫染色阳性，如PROX-1，D2-40等，提示与婴儿血管瘤是两种不同的血管瘤，为此，国际血管瘤和脉管畸形研究学会(ISSVA)分类中已经明确将二者进行了单独分类。与婴儿血管瘤相比较，TA除了瘤体增殖，造成局部受压表现，还可以合并卡梅现象，即重度血小板减少和消耗性凝血，潜在危害较婴儿血管瘤大，治疗难度也较婴儿血管瘤大。就治疗方法而言，对于高危型婴儿血管瘤，首选的治疗是口服心得安，而对于丛状血管瘤，既往首选的治疗为手术切除病灶，但对于面积较大的病变手术切除存在极大的局限性。

因此，目前，急需寻找一种疗效好且副作用小、复发率低的治疗TA的方法。

发明内容

为了弥补现有技术中没有治疗TA的有效药物的缺陷。本申请的发明人在临床中选择了大量药物进行研究，结果意外地发现将通常用作滴眼液的噻吗洛尔涂覆于患处，治愈率极高，愈后未见复发，无瘢痕。

为此，本发明的一个目的是，提供噻吗洛尔或其盐在制备用于预防和/或治疗丛状血管瘤的药物中的用途。本发明的噻吗洛尔或其盐治疗丛状血管瘤采用局部涂覆方式使用，没有任何创伤，使用简单，治疗耐受性良好，治愈率极高，愈后未见复发，无瘢痕。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案来实现。

一方面，本发明提供噻吗洛尔或其盐在制备用于预防和/或治疗丛状血管瘤的药物中的用途。

优选地，所述盐为马来酸噻吗洛尔。

优选地，所述马来酸噻吗洛尔的浓度为2-20mg/mL，优选为2-10mg/mL，更优选为2-5mg/mL，最优选为2.5mg/mL或5mg/mL。

优选地，所述丛状血管瘤为非消退性丛状血管瘤，即所述丛状血管瘤在临床观察中极少自行消退，并且随着疾病的进展会出现皮损面积扩大，部分患者伴有疼痛不适，影响患者的生活质量。

优选地，所述噻吗洛尔或其盐施用于哺乳动物，例如人，优选儿童患者。

优选地，所述噻吗洛尔或其盐以局部涂覆方式应用于患处。

另一方面，本发明还提供一种用于预防和/或治疗丛状血管瘤的药物组合物，该药物组合物以噻吗洛尔或其盐为活性成分。

优选地，所述盐为马来酸噻吗洛尔。

优选地，所述药物组合物为凝胶或软膏。

优选地，所述马来酸噻吗洛尔的浓度为2-20mg/mL，优选为2-10mg/mL，更优选为2-5mg/mL，最优选为2.5mg/mL或5mg/mL。

优选地，所述丛状血管瘤为非消退性丛状血管瘤，即所述丛状血管瘤在临床观察中极少自行消退，并且随着疾病的进展会出现皮损面积扩大，部分患者伴有疼痛不适，影响患者的生活质量。

与现有技术相比较，本发明采用局部涂覆治疗，局部治疗的副作用，例如局部瘙痒和皮肤瑕疵等很少。

附图简要说明

图1：示出实施例1中对患者局部外用0.5％(g/mL)(25mg/5mL)马来酸噻吗洛尔(TTM)治疗前后的临床表现和组织病理学发现。治疗前，右上肢TA表现为可见紫罗兰色斑块：(A)右上臂外侧；(B)右上臂内侧；(C)右侧肘窝；(D)苏木精-伊红染色(原始放大倍数100倍)；(E)免疫组化染色显示CD31阳性(200倍)；(F)免疫组织化学染色显示血管内皮生长因子阳性(200倍)。外用0.5％TTM治疗后皮损变化：治疗18个月后，病灶完全消失：(G)右上臂外侧，(H)右上臂内侧，和(I)右侧肘窝。

图2：示出实施例2中对患者局部外用0.5％(g/mL)(25mg/5mL)马来酸噻吗洛尔(TTM)治疗前后的临床表现和组织病理学发现。其中，治疗前，有环形紫罗兰色斑块(图2A)。治疗后，颈部病变的斑块明显变平，颜色变淡(图2B-C)。

图3为体外培养药物敏感实验结果。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明更详细地进行解释和说明，应当理解，所给出的实施例只是举例说明性的，其不以任何方式对本发明的范围构成任何限制。

实施例1

一名5岁女孩右臂上出现4年疼痛性紫癜性斑块病史。4年前，该患者在被蚊子叮咬后，她的父母在她右上臂外侧发现了红色丘疹。体格检查右上臂暗红色丘疹，融合为环状斑块(图1A-C)。在初始评估时进行的皮肤活组织检查显示，在真皮中层可见散在椭圆形的真皮小叶以典型的“炮弹”分布的血管内皮细胞增生性团块，周围可见裂隙(图1D)。免疫组织化学显示小叶内的内皮细胞CD31和VEGF染色阳性(图1E，F)，但GLUT-1呈阴性。患儿查血小板未见Kasabach-Merritt现象。最终的诊断为TA。

基于三磷酸腺苷-肿瘤化学敏感性测定的结果，使用0.5％马来酸噻吗洛尔湿敷(采用0.5％(g/mL)马来酸噻吗洛尔(0.5％TTM)滴眼液，购自武汉五景药业有限公司)的四层纱布湿润病变处，每天外用两次，持续18个月。皮损和相关疼痛消失(图1G-I)。虽然在湿敷区域偶尔发生湿疹但在外用润肤剂后明显改善，治疗耐受性良好，血液样本中未检测到噻吗洛尔。病变完全消退，停药随访12个月后未复发。

本病例说明马来酸噻吗洛尔对一些皮损面积大，选择治疗方法棘手的TA患儿有效。且临床使用过程中行自身对照试验：上述药物先外用上臂外侧皮损，明显好转，但其他部位未用药皮损仍有增殖，伴疼痛持续；之后患儿及家属充分同意后，上臂外侧，上臂内侧，以及肘窝处皮损全部外用上述药物，均得到明显的改善。该实施例说明皮损消退非自行消退，是药物起效作用的结果，即说明马来酸噻吗洛尔对TA有治疗作用。

实施例2

一名2岁男孩颈部有四处暗红色结节，出生时即有，伴疼痛。之后，结节持续增殖，融合为具有环形边缘的紫罗兰色斑块(图2A)。活组织检查显示为典型的TA。

使用沾有0.5％(g/mL)马来酸噻吗洛尔(采用0.5％马来酸噻吗洛尔滴眼液，购自武汉五景药业有限公司)的四层纱布湿润病变处，每天两次，外用6个月。颈部皮损较前明显改善，皮损变平，颜色变暗(图2B-C)。治疗的耐受性好，无明显副作用。病变完全消退，停药随访12个月后未复发。

实施例3

为了进一步考察噻吗洛尔治疗TA的有效性。本申请的发明人收集了2014年10月-2018年10月儿童医院皮肤科就诊的11例丛状血管瘤(Tufted Angioma，TA)患儿。所有病例均为发生于皮肤的TA，均经过临床及病理确诊。所有患儿均采用马来酸噻吗洛尔局部外用治疗，取得了良好疗效。具体实验过程及结果如下：

一、材料和方法

1、一般资料：以2014年10月～2018年10月皮肤科就诊的11例丛状血管瘤患儿作为研究对象，其中男性9例，女性2例，年龄6月～10岁，病变部位位于头面颈部2例，四肢5例，躯干4例。所有患者中伴疼痛5例。

2、方法：医用纱布(要求4-6层)修剪至瘤体大小，0.5％(g/mL)(采用0.5％(g/mL)马来酸噻吗洛尔(0.5％TTM)滴眼液，购自武汉五景药业有限公司)马来酸噻吗洛尔滴眼液滴在修剪后的纱布上，要求完全浸湿但不往下滴液，将其湿敷在血管瘤上外用，用保鲜膜封包，每日两次，一次1小时，嘱家长每个20min打开保鲜膜，观察纱布是否湿润，如果纱布已经干燥，则需补充噻吗洛尔滴眼液，以保证1小时内药物持续作用。

3、随访：所有患儿均在治疗后3月、6月、12月门诊随访。随访内容包括：临床拍照片，采用视觉模拟评分法(visual analogue scale，VAS)评分，依据瘤体治疗前后的范围及颜色差异，从-10～+10给出分数，+表示体积增大、颜色变鲜亮或者充盈度增加，-表示体积减小、颜色变淡或变暗或者充盈度减小；局部瘤体多普勒超声检查，对比治疗前后瘤体大小、深度及血流分级的改善程度；记录不良事件，包括局部及全身不良反应；实验室检查包括心电图，记录心动过缓、P-R间期延长及方式传导阻滞的发生情况。

4、疗效及安全性评价：疗效评价包括VAS评分，局部B超测定瘤体大小或厚度较治疗前消退程度，家长自我测定瘤体大小较治疗前好转程度。评价结果采用国际通用的Achauer等所提示4级标准进行疗效评价：Ⅰ级：较治疗前好转≤25％；Ⅱ级：较治疗前好转26％～50％；Ⅲ级：较治疗前好转51％～75％；Ⅳ级：较治疗前好转＞75％。若VAS评分、超声测定结果及家长自我测定结果存在疗效等级差异，选取疗效等级中位数所在等级为最终疗效评定结果。此外若瘤体仍有生长则定为0级。0级及Ⅰ级评定为治疗无效，Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级评定为治疗有效。不良反应发生率为不良反应患者人数与总患者人数的比值。

5、统计学方法：应用SPSS22.0统计软件包进行统计分析。有序变量比较通过非参数检验方法：3组比较采用Kruskal-Wallis H检验；两组分类变量比较通过卡方检验方法采用四格表卡方检验；筛选影响因素选用非条件Logistic回归；P＜0.05为差异具有统计学意义。

二、疗效评价

本临床研究共随访丛状血管瘤患儿11例，随访时间12个月。全部患儿坚持外用噻吗洛尔，瘤体均停止增大，瘤体变软、变小。根据患儿在疗程3个月、6个月及12个月复诊时疗效评估资料进行统计学分析(表1)，各疗程组之间的疗效有差别(P＝0.01)，疗程及疗效呈正相关(P＝0.002)，即疗程越长，则治疗效果越好。

三、不良反应监测

本研究入组并完成12个月疗程的11例患儿中应用噻吗洛尔前即有1例出现瘤体部位湿疹，未影响治疗。不良反应中最常见的为湿疹，湿疹及总不良反应的发生率不随疗程的增加而升高。随访过程中患儿一般情况较好，未出现明显的腹泻、睡眠障碍、嗜睡、心率过缓、气急和哮喘等全身不良反应。治疗后复查心电图，均未见心动过缓、P-R间期延长及房室传导阻滞的发生。

表1丛状血管瘤患儿不同疗程组疗效等级资料

实施例4体外培养药物敏感实验

本实施例采用生物荧光法检测三磷酸腺苷(ATP)，对TA组织细胞进行药物处理后的细胞活性测定。

1、材料与方法

1.1研究对象

从图1B中圈出部分手术获取新鲜病变组织。

1.2试剂及仪器

试剂ATP标准品；RPMI1640、McCoys5A培养基(Gibco)；琼脂糖(Serva)；荧光素、荧光素酶(BoehringerMannheim)；4％三氯醋酸溶液(TCA)、ATP检测中和液、反应液等自制；药物普萘洛尔、噻吗洛尔、雷帕霉素、伊曲康唑。研究中，参照上述药物在人体血液中血药浓度峰值，分别为：普萘洛尔200ng/mL、雷帕霉素20ng/mL、伊曲康唑500ng/mL、噻吗洛尔0.35～0.46ng/mL(滴眼吸收)。所有原料药物配置6个检测浓度模拟药物在血浆中的代谢浓度，分别为人体血液中血药浓度峰值的400％、200％、100％、50％、25％和12.5％；每个浓度设置三个平行孔，取平均值；建立无药物对照(M0，仅培养基和病变组织，不含药物)和仅培养基对照(MI)。其中噻吗洛尔的浓度梯度为800ng/mL、400ng/mL、200ng/mL、100ng/mL、50ng/mL和25ng/mL。

仪器：液闪计数仪等。

1.3ATP生物荧光液闪测法将待测液100μL、中和液200μL、含荧光素、荧光素酶的反应混合液300μL和反应缓冲液4mL加入闪烁瓶中，于液闪计数仪中检测1分钟计数值。

1.4ATP标准品的检测

ATP标准品系列浓度10-9、10-8、10-7、10-6、10-5mol/mL，与等量4％TCA溶液混匀，取100μL进行测定。作出标准曲线。

1.5检测

从图1B中圈出部分手术获取新鲜病变组织；对病变处组织标本进行充分解剖和分离，并去除标本表面的结缔组织、纤维、脂肪和红细胞，尽可能纯化血管内皮细胞，然后对其目标组织细胞悬浮液进行浸泡、消化、孵育，之后制备成目标细胞匀浆；加入含有胎牛血清和抗生素的1640培养基及上述药物(上述6个检测浓度)；培养3～5天，期间观察细胞生长情况；然后用三磷酸腺苷提取试剂从悬浮液中提取三磷酸腺苷，再加入荧光素酶-荧光素试剂进行荧光检测。用荧光扫描仪测量上述标本在560nm波长处的荧光强度，它代表了目前三磷酸腺苷的水平和存活细胞的数量。记录数据并进行评估，计算三个平行孔的平均值。结合MI和M0，对结果进行全面分析(M0,没有任何药物，只有培养基和病变组织，其测试结果显示细胞增殖和自然凋亡的情况)。考虑到研究所测试的药物均为非细胞毒性药物，不具有细胞杀灭活性，因此作为抑制药物很难达到50％(IC50)甚至90％(IC90)的抑制率。于是我们设定在一定浓度下，当抑制率达到20％时可以认为是有效的，并采用总生长抑制率(TGI，各试验浓度下生长抑制率百分比的总和)来比较不同药物之间的差异。

1.6结果结果如图3所示。

图3的结果显示噻吗洛尔高度敏感，即药物湿敷时，最接近湿敷浓度的药物浓度为800ng/mL时，对血管内皮细胞抑制最强。

Claims (10)

1.噻吗洛尔或其盐在制备用于预防和/或治疗丛状血管瘤的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述盐为马来酸噻吗洛尔。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述马来酸噻吗洛尔的浓度为2-20mg/mL，优选为2-10mg/mL，更优选为2-5mg/mL，最优选为2.5mg/mL或5mg/mL。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其特征在于，所述丛状血管瘤为非消退性丛状血管瘤。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其特征在于，所述噻吗洛尔或其盐施用于哺乳动物，例如人，优选儿童患者。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其特征在于，所述噻吗洛尔或其盐以局部涂覆方式应用于患处。

7.一种用于预防和/或治疗丛状血管瘤的药物组合物，该药物组合物以噻吗洛尔或其盐为活性成分。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，所述盐为马来酸噻吗洛尔。

9.根据权利要求7或8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为凝胶或软膏；

优选地，所述马来酸噻吗洛尔的浓度为2-20mg/mL，优选为2-10mg/mL，更优选为2-5mg/mL，最优选为2.5mg/mL或5mg/mL。

10.根据权利要求7至9中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述丛状血管瘤为非消退性丛状血管瘤。

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